实验二 植物组织培养培养基母液的配制
植物组织培养MS培养基配方
植物组织培养MS培养基配方（一）母液配制与保存配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。
为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。
母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。
基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍）1大量元素配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。
倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。
2微量元素母液在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。
倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。
3铁盐母液由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。
配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。
先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。
4有机物母液按表4中的量分别称取各种有机物，分别溶解后，用蒸馏水或去离子水定容于1000mL，放入细口瓶配成1 mg/ml 。
各100 ml。
6-苄基腺嘌呤（6-BA）用0.5 N的HCl加热溶解。
萘乙酸（NAA）用少量无水乙醇溶解，再加蒸馏水。
培养基母液的配制方法
培养基母液的配制方法一、实验目的1.了解无菌操作2.掌握培养基母液的配制方法二、实验原理配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
三、实验器材和药品器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。
药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。
四、实验步骤1、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。
到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。
配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。
表1 MS培养基大量元素母液制备注意：(1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。
为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。
特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。
(2)CaCl2·2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2·2H2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。
培养基母液的配制方法
培养基母液的配制方法一、实验目的1.了解无菌操作2.掌握培养基母液的配制方法二、实验原理配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
三、实验器材和药品器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。
药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、 MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。
四、实验步骤1、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。
到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。
配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。
表1 MS培养基大量元素母液制备注意：(1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。
为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。
特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。
(2)CaCl2·2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2·2H2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。
培养基母液的配制
培养基母液的配制植物在自然状态下生长时，具有完整的营养体，是属于自养型的，很多营养物质可以自制，对外界营养条件的要求比较简单,而在离体条件下生长的植物器官、组织和整体植物不同，属于异养型,要求的营养条件十分复杂,因此在人工合成养基的组成和制备上必须全面考虑，满足供应。
一、实验目的配制培养基母液是植物组织培养的基本技术。
当需要连续和大量配制培养基时,如果每次都称量药品、溶解并定容，工作将十分繁琐，因此需要将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成适当的浓缩液。
要求拿握植物组织培养培养基母液的配制方法。
二、实验材料仪器冰箱、电子天平(0.0001g)容量瓶: 1000 ml, 500ml、250 ml、100 ml、25 ml广口储液瓶: 500 ml、250ml、50 ml、25 ml烧杯: 1000ml、500ml 、250m、100ml 、50 ml.数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺、标签纸、胶水、记号笔药品50%酒精、95%酒精、1N盐酸(1N盐酸(HC1)的配制:取浓盐酸825ml,加入蒸馏水1000ml,即为IN的HCI)、1 N Na0H(1N氢氧化钠(或氢氧化钾)的配制:称40 gNa0H (或氢氧化钾57.1g)加入蒸馏水100ml ,即为1N的Na0H( IN的K0H)几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品、蒸馏水三、实验步骤按照培养基配方，把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类，每一类中各种药品分别称量。
如Ms培养基各种母液的配制步骤如下:1、大量元素母液:包括用量较大的几种化合物，按表中排列顺序，将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解,然后按照顺序混合在一-起。
如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容。
最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。
在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃棒以减少误差。
定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养基需吸取该母液100 m或502、微量元素母液:因用量少,为了称量精确和方便,常配成100倍或100倍的母液,即每种药品扩大100倍或者1000倍。
培养基母液的配制方法
培养基母液的配制方法一、实验目的1.了解无菌操作2.掌握培养基母液的配制方法二、实验原理配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
三、实验器材和药品器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。
药品：NH4NO、KNO3CaCI2 •2H2O MgS04・ 7H2Q KH2PO、KI、H3BO3MnSO44H2O ZnSO4•7H2ONa2MoO4?H2O CuSO45H2OCoCI2 •6H2OFeSO4 7H2O Na2-EDTA・ 2H2O肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇（维生素B6）、盐酸硫胺素（维生素B1）、甘氨酸。
四、实验步骤1 、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中,即为10倍的大量元素母液。
到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。
配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。
表1 MS培养基大量元素母液制备注意:(1)配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+ SO42-、Mg 2+和H2PO4-等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。
为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。
特别应将Ca2+、SO42—、Mg2十和H2PO4 一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。
(2)CaCI2 • 2H2O 要在最后单独加入，在溶解 CaCI2 • 2H2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的 CO2以防沉淀。
另外，CaCI2 • 2H2O 放 入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。
2、微量元素母液的配制MS 培养基的微量元素无机盐由7种化合物(除Fe )组成。
培养基母液配制
培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质, 配制成较浓的母液（母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍）, 贮存在冰箱中备用, 以后配制培养基时根据用量量取。
由于培养基成分较多, 如果每配制一次即进行多次称量（不少成分用量较微）, 不仅会造成较大的误差, 而且会增加工作量, 因而配制母液可使培养基配制方便准确。
配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍, 倍数不宜过高。
MS培养基母液及培养基配方法参考表2。
大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存, 以免长期贮存发生沉淀。
若将全部大量成分配在一起时, 为防止在混合时发生沉淀, 须在各药品充分溶解后, 按表中化合物出现顺序混合, 氯化钙最后加入, 以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后, 在1000 ml容量瓶中定容, 然后移入磨口瓶中, 贴上标签, 置于普通冰箱（4℃）贮存。
微量元素母液配制时, 由于培养基中微量元素用量甚微, 浓度为~l, 所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。
一般将微量元素分别称量溶解, 定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中, 但也有将KI分别配制, 单独贮存在棕色瓶中。
配好后, 贴上标签, 贮存于4℃冰箱。
培养基中的铁盐母液一般单独配制。
目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。
称取Na2-EDTA g, FeSO4 ·2H2O g, 分别溶解（可加热）, 然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。
转入细口瓶, 贴上标签, 4℃冰箱中保存。
氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时, 母液浓度通常为原培养基配方的50倍（或100）。
常用氨基酸和维生素为水溶性物质, 可用蒸馏水溶解, 但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解, 然后用重蒸馏水定容。
配制好后, 转入细口瓶, 贴上标签, -20℃（或4℃）冰箱中保存。
植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要, 灵活设计其浓度, 一般为、、、或1 mg/l。
植物组织培养实验指导
植物组织培养实验指导2012.3附录培养基母液的配制一、实验目的：掌握培养基母液配制的方法。
二、实验原理：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。
另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。
三、实验器具与药品：电子分析天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。
配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。
植物生长调节物质，2,4-D, NAA, 6-BA等。
四、培养基母液的配制过程首先，按下表“MS培养基母液的配制”，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后，分别进行药品称取和母液配制。
母液种类成分规定用量ml/L 扩大倍数称取量mg母液定容体积ml配1LMS培养基吸取量ml大量元素KNO3NH4NO3MgSO4·7H2OKH2PO4CaCl2·2H2O 190016503701704402038000330007400340088001000 50微量元素MnSO4·4H2OZnSO4·7H2OH3BO322.38.66.2 10002230086006200 1000 1KINa2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O 0.830.250.0250.0258302502525铁盐Na-EDTAFeSO4·7H2O 37.327.8 10037302780 1000 10维生素和氨基酸烟酸甘氨酸Vit.B1Vit.B6肌醇0.52.00.10.51001002510052550001000 10（1）MS大量元素母液的配制按照MS培养基配方的用量扩大20倍，将大量元素配制成20倍的母液。
植物组培母液实验报告
一、实验目的1. 理解植物组织培养母液在植物细胞培养中的重要作用。
2. 掌握植物组织培养母液的配置、保存及使用方法。
3. 通过实验验证不同植物组织培养母液对植物细胞生长和分化效果的影响。
二、实验材料1. 材料：拟南芥叶片、MS培养基、琼脂糖、葡萄糖、琼脂、植物激素（生长素、细胞分裂素、赤霉素等）。
2. 仪器：无菌操作台、超净工作台、显微镜、移液器、培养箱、冰箱、天平等。
三、实验方法1. 植物组织培养母液的配置（1）称取一定量的MS培养基母液，加入去离子水溶解，配制成一定浓度的母液。
（2）将母液加入适量的琼脂糖，溶解后倒入培养皿中，制成固体培养基。
（3）将固体培养基放入培养箱中，于适宜温度下固化。
2. 植物细胞培养（1）将拟南芥叶片表面消毒后，剪成小块，接种到固体培养基上。
（2）将培养皿放入培养箱中，于适宜温度下培养。
（3）观察细胞生长和分化情况，记录实验数据。
3. 植物组织培养母液对细胞生长和分化效果的影响（1）将不同浓度的植物激素加入植物组织培养母液中，制成实验组。
（2）将对照组和实验组进行对比，观察细胞生长和分化情况。
（3）记录实验数据，分析不同植物组织培养母液对细胞生长和分化效果的影响。
四、实验结果与分析1. 植物组织培养母液的配置成功配制了不同浓度的植物组织培养母液，并制作了固体培养基。
2. 植物细胞培养在适宜的条件下，拟南芥叶片细胞在固体培养基上成功生长和分化。
3. 植物组织培养母液对细胞生长和分化效果的影响实验结果表明，不同浓度的植物组织培养母液对细胞生长和分化效果有显著影响。
（1）生长素浓度对细胞生长和分化有促进作用，但过高浓度会导致细胞死亡。
（2）细胞分裂素浓度对细胞生长和分化有促进作用，但过高浓度会导致细胞分化不良。
（3）赤霉素浓度对细胞生长和分化有促进作用，但过高浓度会导致细胞畸形。
五、实验结论1. 植物组织培养母液在植物细胞培养中起着重要作用，其浓度和成分对细胞生长和分化效果有显著影响。
母液配制
植物组织培养母液配置一、实验目的学习配置培养基的母液，掌握配制方法，了解母液存储方法二、实验原理配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。
三、实验器材、试剂1器材电子天平烧杯（50ml 100ml 500ml 1000ml）量筒（1000ml 100ml 25ml）容量瓶（100 500 1000）2试剂NH4NO3,KNO3,KH2P O4,CaCl2·2H2O,MgSO4·7H2O,FeSO47H2ONa2-EDTA,MnSO4·4H2O,ZnSO4·7H2O,H3BO3,KI,Na2MoO4·2H2OCuSO4·5H2O,CoCl2·6H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水四、实验步奏：一、母液的配置1、MS大量元素母液的配制一般将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。
按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 、KNO3 ,KH2PO4 、MgSO4.7H2O 、CaCl2.2H2O的量，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至1000ml，转入1000ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期，置于冰箱中保存备用。
2、MS微量元素母液的配制一般将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。
按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O 、H2BO3 、NaMoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O扩大100倍的量，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至1000ml，转入1000ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期，置于冰箱中保存备用。
母液的配制实训报告
一、实验目的1. 掌握母液配制的基本原理和操作流程。
2. 熟悉MS培养基母液、微量元素母液等不同类型母液的配制方法。
3. 了解母液在植物组织培养中的重要作用。
4. 培养实验操作技能和严谨的科学态度。
二、实验原理母液是植物组织培养中常用的一种浓缩溶液，将培养基中的各种成分按照一定比例配制成高浓度的储备液。
在配制培养基时，只需按比例稀释母液即可，这样可以简化操作、减少误差，提高实验效率。
三、实验材料与仪器1. 材料：MS培养基各成分试剂、植物生长调节剂（如2，4-D、6-BA、IAA、NAA 等）、洗涤剂、蒸馏水等。
2. 仪器：电子天平、药匙、玻璃棒、称量纸、吸水纸、滴管、洗瓶、标签纸、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量杯、量筒、移液管、移液枪、洗耳球、电炉、冰箱等。
四、实验步骤1. 大量元素母液的配制（1）按照MS培养基配方的需要量，将各种化合物称量扩大10倍。
（2）用电子天平称取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。
（3）完全溶解后，按表4-1顺序依次混合已溶解的化合物。
（4）将混合液转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
（5）将配制好的大量元素母液转移至棕色试剂瓶中，贴上标签，置于冰箱中保存。
2. 微量元素母液的配制（1）按照微量元素母液的配方，将各种化合物称量扩大10倍。
（2）用电子天平称取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。
（3）完全溶解后，将混合液转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
（4）将配制好的微量元素母液转移至棕色试剂瓶中，贴上标签，置于冰箱中保存。
3. 生长调节物质母液的配制（1）按照生长调节物质母液的配方，将各种化合物称量扩大10倍。
（2）用电子天平称取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。
（3）完全溶解后，将混合液转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
（4）将配制好的生长调节物质母液转移至棕色试剂瓶中，贴上标签，置于冰箱中保存。
五、实验结果与分析1. 本实验成功配制了MS培养基的大量元素母液、微量元素母液和生长调节物质母液。
培养基母液的制备
学习和掌握培养基母液的配制方法。
在配制培养基前，为了使用方便和用量 准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、 有机物质、激素类分别配制成比培养基配方 需要量大若干倍的母液。当配制培养基时， 只需要按预先计算好的量吸取母液即可。
二、实验器材
电光分析天平（感量为0.0001g）、
5、 激素母液配制
植物组织培养中使用的激素种类及含量需要 根据不同的研究目的而定。一般激素母液的配制 的终浓度以1mg/ml为好，需要注意的是：
（１）配制生长素类：例如IAA、NAA、2.4-D、 IBA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解， 或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容 到一定的浓度。
3、微量Ⅲ—铁盐母液的配制
铁盐不是都需要单独配成母液，如 柠檬酸铁，只需和微量元素一起配成母 液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和 乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独 配成母液。这种螯合物使用起来方便， 又比较稳定，不易发生沉淀。配制方法 同上，直接用蒸馏水加热搅拌溶解。
表4 MS铁盐母液的配制
(配制100mL)
25
表3 MS培养基微量Ⅱ的配制
(配制100mL)
序号 1 2 化合物名称 CuSO4· 2O 5H CoCl2· 2O 6H 培养基浓度（mg/L） 0.025 0.025 扩大1000倍浓度 25 25
注意：使用电子分析天平时注意不要把
药品撒到称盘上，用完以后，用吸耳球将天
平内的脏物清理干净。
扭力天平（感量为0.01g）、台秤（感量
0.5g）、烧杯（500ml、100ml、50ml）、
容 量 瓶 （ 1000ml 、 100 ml 、 50 ml 、 25
植物组织培养实验之具体配置
（八）接着，左手拿培养瓶，将培养容器口外壁在靠近酒精灯外焰处转燎 数秒，以将其可能带有的微生物等固定于原处；在酒精灯焰附近处，用 右手拇指与食指配合将瓶塞打开，并将其夹于左手无名指与最小指之间； 再将培养瓶口在酒精灯焰上轻转灼烧灭菌；以右手拇指与食指配合，用 大镊子夹紧一外植体准确送入培养容器，并将其轻轻地半插入固体培养 基；将大镊子在95%乙醇中浸蘸一下，在酒精灯焰上灼烧灭菌之后放回原 处，以便待冷却后下一操作再用；将培养瓶口及瓶塞分别在酒精灯焰上 小心地轻转灼燎数秒；盖好瓶塞，旋紧，将其置于超净工作台的适当位 置。
→
贮
mg/L
FeSO4 7H2O Na2 EDTA 2H2O
配制100倍浓度贮备液100mL.
备
液
III
27.8
37.3
4 、 有 机 成 分 → 贮 备 液 IV mg/L
肌醇
100
烟酸
0.5
盐酸硫胺素(VB1)
0.1
盐酸吡哆醇
0.5
甘氨酸
2
配制100倍浓度贮备液100mL.
二，常用生长调节剂
• 6-BA：1mg/mL(溶于少量1N盐酸后以蒸馏水 定容）。
20 min）。 • （五）将灭过菌的装有培养基的培养容器从高压灭菌器中取出，置于平台上
冷却，备用。
三、作业：
• 在进行根再生诱导培养基设计时，应注意哪些问 题？
感谢下 载
（三）充分混匀后，用0.1 mol/L的NaOH和0.1 mol/L的HCl调节培 养基的pH至5.8。定容至500 mL。
（四）将培养基分装到所选用的培养容器中，每个容器的装量不 超过其最大容量的1/3。拧紧瓶盖。
（五）将装有培养基的培养容器置高压灭菌器中高压灭菌（120℃， 20 min）。灭菌结束后从高压灭菌器中取出，置于平台上冷却， 备用。
药用植物组培技术之一---配制母液
组织培养 技术
植物组织培养：
• 在无菌和人为控制外因条件下，将离体器官、组 织、细胞、胚胎或原生质体培养在人工配制的培养基 上，使其脱分化产生愈伤组织，进而分化出器官并长 成完整植株的方法。
组织培养 技术
组织培养 技术
实验一 培养基母液的制作
实验目的：
• （一）掌握培养基的化学组成；掌握MS培养基的配方组 成；
• • 主要是生长素和细胞分裂素，有时用GA3，ABA。
a. 生长素类： 诱导细胞分裂和根的分化
组织培养 技术
1）吲哚类：IAA（吲哚乙酸）、 IBA（吲哚丁 酸）、IPA（吲哚丙酸） 2）萘酸类： NAA（萘乙酸） 3）苯氧羧酸类：2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、 2,4,5-T（ 2,4,5-三氯苯氧乙酸）、 2,4,5-TP （ 2,4,5-三氯苯氧丙酸）等。
b、悬浮剂 Ficoll（聚蔗糖）
组织培养 技术
（三）、培养基的配制 试验课上讲
1.贮备液（母液）的配制 为什么要配制母液？
1）、方便 2）、准确（有些成分量太小）
以MS培养基配制为例，包括大量元素、微量元素、铁盐、 有机物质、生长调节物质母液。
组织培养 技术
组织培养 技术
组织培养 技术
组织培养 技术
组织培养 技术
如何控制植物细胞分化
• 分裂素/生长素的比例是控制芽和根形成的 一个重要条件
• 比例高时——产生芽,比例低时——产生根
组织培养 技术
c.赤霉素（GA3） 1、诱导茎的细胞伸长，对矮生型植物恢复成高生型特别有效， 对根无效 2、对生长素和细胞分裂素的活性有增效作用
注：不耐热，应采用过滤灭菌加入
组织培养技术实验药用植物组织培养技术实验一培养基母液配制实验二诱导愈伤培养基配制和灭菌实验三外植体接种技术实验四接种效果观察分化培养基配制实验五分化接种组织培养技术在无菌和人为控制外因条件下将离体器官组织细胞胚胎或原生质体培养在人工配制的培养基上使其脱分化产生愈伤组织进而分化出器官并长成完整植株的方法
植物组织培养的培养基配制实验设计
武汉生物工程学院
植物细胞工程学——郑传益制作
*如果需要添加相关激素，为方便实验 操作，同样可以扩倍配制激素母液使用
武汉生物工程学院 植物细胞工程学——郑传益制作
培养基配制
培养基配制准备： 量筒、移液管、烧杯、蔗糖、琼脂、天平、电热炉、 玻璃棒、铁架台、锥形漏斗（带橡胶管）、搪瓷杯、 PH试纸、培养皿
注意事项： 1.培养基熔化后要趁热定容，否则培养基低温琼脂 将凝固，造成营养成分浓度不均。 2.对PH要求较严的目标培养物，调解pH时最好用 电子pH计，以保证精确度。pH试纸的误差较大，要 小心调节。可以将pH调到比最适值小约0.2，因为培 养基在灭菌后，pH将变大。
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母液配制
表4
1升母液 每升培 母液 培养基浓 母液扩 中药品 养基取 化合物 类别 度(mg/L) 大倍数 称取量 母液的 (mg) 量(ml) 甘氨酸 2 400 有 盐酸硫胺素 0.4 80 VI 机 盐酸吡哆素 0.5 200倍 100 5 物 烟酸 0.5 100 肌醇 100 20000
化合物 CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O H3BO3 KI MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O
培养基 浓度 (mg/L)
0.025 0.025 6.2 0.83 22.3 8.6 0.25
微 II 量 元 素
1升母液 每升培 母液扩 中药品 养基取 大倍数 称取量 母液的 (mg) 量(ml) 25 25 6200 1000倍 830 1 22300 8600 250
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培养基配制
操作步骤 1.根据配方要求，用量筒或移液管从各母液中分别 取出所需用量，放入同一烧杯中并将称取好的蔗糖 和琼脂放在一边备用； 2.将称取好的琼脂加入盛有加热后的（沸腾后停止 加热）蒸馏水约300ml的搪瓷杯中溶解，并不断搅 拌，直至溶液呈透明状； 3.将1.烧杯中的试剂和蔗糖加入至溶解好的琼脂溶 液中，边加热边搅拌，定容至1000mL； 4.调节PH； 5.分装标记后封装灭菌。
植物组织培养MS培养基配方
植物组织培养MS培养基配方（一）母液配制与保存配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。
为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。
母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。
基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍）1大量元素配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。
倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。
2微量元素母液在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。
倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。
3铁盐母液由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。
配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。
先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。
4有机物母液按表4中的量分别称取各种有机物，分别溶解后，用蒸馏水或去离子水定容于1000mL，放入细口瓶配成1 mg/ml 。
各100 ml。
6-苄基腺嘌呤（6-BA）用0.5 N的HCl加热溶解。
萘乙酸（NAA）用少量无水乙醇溶解，再加蒸馏水。
培养基母液的配制
主题二 培养基及其制备
任务二培养基母液配制
知识回顾
水
N、P、K 大量元素
活性物质 （植物激素）
培养基
无机盐
Ca、Mg、S
微量元素 糖 维生素 Fe、Mn、Zn 、B 、Cu 、Mo
支持物质
有机物质
肌醇 氨基酸 有机添加物
任务二培养基母液配制中浓度问题 及相关计算
知识回顾
相当于土壤，提供离体器官生长所需要的营养、环境和活性物质 与土壤相比较，培养基缓冲性能很小，所以要求培养基各成分浓度精确
母液
母液1
成分
NH4NO3 KNO3 CaCl.2H2O MgSO4.7H2O KH2PO4.
浓缩倍数
10
浓度g/L
16.5 19 4.4 3.7 1.7
配制母液 毫升数
各成分的质量（g）
1000
母液2
KI H3BO4 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2.MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O
表2-1（P20）大量元素20倍浓缩液NH4NO3 浓度为 33000 mg/L表示1L培养基中质量为33000mg，即33g. CuSO4.5H2O0.05mg/L表示1L培养基中质量为0.05mg，即 10－5 g。
什么是培养基母液？
母液：即贮备液，指培养基配制时欲配制液的 浓缩液，一般母液配成比所需浓度放大10-100 倍。 这样不但可以保证各物质成分称量的精准性及 配制时的快速移取，而且浓缩液体积小便于低 温保藏。 母液配制时比所需浓度放大X倍，在配制培养 基时按配制培养基的体积（V升）的V/X吸取 母液即可。
0.86
培养基母液配制
培养基母液的配制（一）激素母液由于多数生长调节物质难溶于水，因此配法各不相同，激素母液可以在2~4℃冰箱中保存。
在配制药品前，应准备好一定容积的小烧杯、玻璃棒，用纯净水冲洗干净方可使用：1、IAA、IBA、GA3、ZT可先用少量95%酒精溶解，再加水定容，摇匀后贮于试剂瓶中，贴上标签。
2、2,4-D、KT、可用少量10%的Noah溶解，再加水定容。
3、6-BA可用少量1mol/LHCl溶解后，再加水定容。
4、NAA可溶于热水或少量95%酒精中，再加水定容至一定体积。
5、1mg/ml的2.4-D的配制：称取0.1g2,4-D，用少量1mol/LNaOH 溶解，然后定容到100ml容量瓶中。
6、1mg/ml的6BA的配制：称取0.1g6-BA，用少量1mol/LNaOH 溶解，然后定容到100ml容量瓶中。
7、1mg/ml的NAA的配制：称取0.1gNAA，用少量95%酒精助溶，然后定容到100ml容量瓶中。
8、1mol/L的HCl的配制：量取83.3ml盐酸加水稀释定容至1L。
（一般、组培室用量少，配制500ml即可，即：称取盐酸41.65ml 稀释定容至500ml。
配制盐酸时。
需要带口罩、戴手套。
）9、10%的NaOH的配制：称取10gNaOH，加少量纯净水溶解，然后定容到100ml容量瓶中。
10、HgCl2 的配制：称量1g的HgCl2，加热水后进行溶解定容至1L。
二、培养基配制配错培养基造成的危害比组培技术中其他任何失误都大。
因此，配制培养基和称取其他成分必须绝对小心。
为了降低配错培养基的风险，最好准备一张纸，详细地写出配制培养基过程中所需的成分和配置步骤。
每配完一种成分或配完一种母液，划掉相应的记录。
1、一般而言，分化配方的配制：除萱草琼脂为5.5g/L外，其它植物为琼脂5g/L。
白糖为30g/L。
母液粉为4.74g/L。
用自己配制的母液配培养基时，大量母液（1号）50ml/L，微量（2~5号为5 ml/L）。
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微量元素母液： 元素母液： 因用量少，为了称量精确和方便,常配成 100倍或1000 倍的母液，即每种药品扩大l00倍或者l000倍。逐个溶解， 混合在一起成为微量元素母液，每配1 L N6培养基需吸取 该母液10 ml或者1 ml。 铁盐： 铁盐： 在N6培养基中需要单独配制，它是由硫酸亚铁 （FeSO4•7H2O）2.78 g和乙二氨四乙酸二钠（Na2-EDTA） 3.73 g，分别溶解，混合后，用酒精灯加热半小时以上， 冷却后定容至1 L。冰箱过夜贮藏无结晶析出，否则重新 配制。每配l升N6培养基需加该铁盐母液5 ml。 有机物质： 有机物质： 主要指氨基酸，维生素类物质。它们大都是扩大1000 倍，分别称量，分别定容和储存，配制培养基时按需要的 量加入。
2、如药品所带结晶水不同，应进行换算。 3、称量必需准确，一般用1-4/万的分析天平称量，特别如微 量元素及激素等，但有些药品不影响基本反应过程的如 蔗糖、琼脂等可用1/100粗天平称取。 4、所用的水必须纯净，一般用全玻璃蒸馏器二次蒸馏的重 蒸水或者达到一定标准的无离子水。 5、制备好的浓缩液应保存于冰箱中，储备液配置量要依据 使用频度而定，一般所制备的储备液最好于1-2个月内使 用完，不宜过长时间保存。
各种母液配制好后，要贴好标签，注明 母液的名称，配制1 L培养基需要的吸取量、 母液配制的日期，然后放入冰箱中储存。 一般无机物质的母液在冰箱中可保存半年 以上，有机物质的母液保存时间在半年以 内，但若发现有沉淀或霉变，应立即重新 配制。
三、注意事项 1、药品的质量问题： 为了避免杂质及有害物质对组织培养的影响，必须注 意药品质量， 国内药品采用国际上通用标准，分为： 一级，即保证试剂、优质纯试剂Guaranteed Reagent, GR级； 二级，即分析纯试剂，Analytical Reagent, AR级； 三级，即化学纯试剂，Chemical Pure, CP级； 四级，即实验试剂，Laboratory Reagent, LR级。 各级均有一定的杂质含量限制范围，其它特殊用的试 剂也有特殊的标记，如光谱纯、层析用、组织培养用等。 植物组织培养一般用分析纯级试剂。
一、实验目的 掌握植物组织培养培养基母液的配置过程。 二、实验材料 仪器 冰箱、天平（0.0001g） 容量瓶: 1000 ml, 500 ml、250 ml、100 ml、25 ml 广口储液瓶：500 ml、250 ml、50 ml、25 ml 烧杯：1000 ml 、500 ml 、250 ml、100 ml 、50 ml 数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺 标签纸、胶水
药品 50 %酒精、95 %酒精、1 mol/L盐酸、1 mol/L NaOH 几种常用的培养基所需的大量元素、微量元 素、有机物、激素、铁盐等药品 蒸馏水
三、实验步骤 按照培养基配方，把大量元素、微量元素、铁盐、有 机物、植物激素分类，每一类中各种药品分别称量。如 MS培养基各种母液的配制步骤如下： 大量元素母液： 大量元素母液： 包括用量较大的几种化合物，按表中排列顺序,将每种 药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解，然后按照顺 序混合在一起。如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应 单位定容，最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。在定 容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃搅棒以减少误差。定容 后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养 基需吸取该母液l00 ml或50 ml。
实验二 植物组织培养培养基 植物组织培养培养基 组织培养 母液的配制
简 介
植物在自然状态下生长时，具有完整的营养 体，是属于自养型的，很多营养物质可以 自制，对外界营养条件的要求比较简单， 而在离体条件下生长的植物器官、组织和 整体植物不同，属于异养型，要求的营养 条件十分复杂，因此在人工合成培养基的 组成和制备上必须全面考虑，满足供应。