MS培养基母液配制

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MS培养基母液的配制与保存

MS培养基母液的配制与保存

MS培养基母液的配制与保存一、目的要求1、通过MS培养基母液的配制,掌握配制与保存培养基母液的基本技能。

2、掌握培养基各种母液的保存方法。

二、仪器与用具1、仪器:各类天平、磁力搅拌器、冰箱等。

2、用具:烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签等。

3、试剂:95%酒精,0.1-1 NaOH,0.1-1NHCl,配制MS培养基所需的各种无机物、有机物,蒸馏水。

三、方法步骤(一)母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液,一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。

优点:(1)保证各物质成分的准确性。

(2)便于配置时快速移取。

(3)便于低温保藏。

1、MS大量元素母液(10X)称10升量溶解在1升蒸馏水中。

配1升培养基取母液100ml。

2、MS微量元素母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。

配1升培养基取母液10ml。

注意:CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量(0.25 mgX10 =2.5 mg)或100倍量(25 mg)称取后,定容于100ml水中,每次取10ml或1ml,(即含0.25 mg的量),加入到母液中。

3、MS铁盐母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。

配1升培养基取母液10ml。

注意配制时,应将两种成分分别溶解在少量蒸馏水中,其中EDTA盐较难完全溶解,可适当加热。

混合时,先取一种置容量瓶(烧杯)中,然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡,至产生深黄色溶液,最后定容,保存在棕色试剂瓶中。

4、MS有机物母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。

配1升培养基取母液10ml。

5、生长调节剂单独配制,浓度为1-5 mg/ml(书中为0.5 -1mg/ml),一般配成4 mg/ml 。

配制培养基母液时注意事项:①一些离子易发生沉淀,可先用少量蒸馏水溶解,在按配方顺序依次混合;②配制母液时必须用蒸馏水或重蒸馏水;③药品应用化学纯或分析纯;④溶解生长素时,可用少量0.5 –1N的NaOH 或95%酒精溶解,溶解分裂素类用0.5 –1N的HCl加热溶解。

MS培养基母液配方

MS培养基母液配方

MS培养基母液配方1、大量元素母液(10倍,1 L)NH4NO316.5 g KH2PO4 1.7 g(单独溶解后混匀)KNO319 g CaCl2·2H2O 4.4 g(单独溶解后混匀)MgSO4·7H2O 3.7 g(单独溶解后混匀)2、微量元素母液(200倍,1 L)KI 0.166 g Na2MoO4·2H2O 0.05 gH3BO3 1.24 g CuSO4·5H2O 0.005 gMnSO4·4H2O 4.46 g CoCl2·6H2O 0.005 gZnSO4·7H2O 1.72 g3、铁盐母液(200倍,500 mL;定容后调pH至5.5,加热至90℃左右螯合15~30 min)EDTA二钠(Na2·EDTA·7H2O) 3.73 gFeSO4·7H2O 2.78 g4、有机母液①(200倍,500 mL)盐酸硫胺素(VB1)0.01 g烟酸0.05 g盐酸吡哆醇(VB6)0.05 g5、有机母液②(200倍,500 mL)肌醇10.0 g6、有机母液③(200倍,500 mL)甘氨酸0.2 g7、植物激素1)0.1mg/mL 的6-BA溶液:取25mg的6-BA,用少量1N的盐酸溶解,再加蒸馏水定容至250mL。

2)0.1mg/mL NAA:取25mg的NAA可溶于热水中或用少量95%乙醇或少量1N的NaOH溶解后,再加水定容至250mL。

3)2,4-D:2,4-二氯苯氧乙酸,相对分子量为221.0,用乙醇做助溶剂,cas号为94-75-7,分子式为,C8H6Cl2O30.2mg/mL 的2,4-D溶液:40mg 2,4-D,用少量95%乙醇溶解后,再用蒸馏水定容至200ml。

组织培养实验MS培养基及配制注意事项

组织培养实验MS培养基及配制注意事项

一、MS培养基母液的配制注意:1.除CaCl2·2H2O单独配制外,大量元素按照使用时高10倍的数值称取,将各种化合物称量后,分别用少量水在不同的容器内充分溶解,然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液,加适量蒸馏水,用玻璃棒搅拌促溶,倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,置小口瓶中保存,贴上标签注明化合物名称(或编号),浓缩倍数,配制日期和配制者姓名,CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。

2.微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取,分别将各种化合物称量除铁盐(FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外,其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后,定容在1000ml容量瓶中,置小口瓶中保存,贴上标签。

3.铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,调PH至5.5加水定容至1000ml,置于小口瓶中,贴上标签。

4.有机物母液配制,按母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量外,其余分别称量后,溶解,定容在500ml容量瓶中,置于小口瓶中保存,贴上标签。

5.母液最好在2~4℃的冰箱中贮存,特别是有机类物质,贮存时间不宜过长,无机盐母液最好在一个月内用完,如发现有霉菌和沉淀产生,就不能再使用。

A.制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的(分析纯)。

B.称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。

二、培养基配制和灭菌一.养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积(CC)×——————————母液浓缩倍数(二)各种母液按顺序编号排列A.大量元素;B.CaCl2.2H2O;C.微量元素;D.铁盐;E.有机物;F.生长素萘乙酸(NAA):配制0.5mg/ml的NAA称取50mg , NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml;G..细胞分裂素、激动素(KT)配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。

MS培养基配制

MS培养基配制

培养基的配制植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。

MS培养基的配制包括以下步骤。

培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液。

这样每次使用时,取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液。

现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用。

大量元素(母液Ⅰ) mg/LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸400以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。

上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。

其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。

母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O 分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。

各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。

MS培养基及配制注意事项

MS培养基及配制注意事项
1. 制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准 要求,化学药品必须是高纯度的(分析纯)。
2. 称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。 .生长调节剂母液配制:
为了操作方便,节约时间,生长调节剂也可如同配制母液一样,先配 成原液,这样配制培养基时只要稍加计算,按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水,可用少量不同的溶剂先溶解,萘乙酸 (NAA),吲哚乙酸(IAA),赤霉素(GA3),2,4-D等生长素和玉米 素(ZT)可先用少量95%酒精溶解,然后加水,如溶解不完全再加热。 激动素(KT)和6-苄基嘌呤(BA)可溶于少量1mol/L的盐酸中,叶酸 需用少量稀氨水溶解。 称取50mg生长调节物质,溶解后,在100ml的容量瓶中定容,配制的母 液每毫升则含有生长调节物质0.5mg,配制后一般要求在低温(0~4℃) 保存,配制培养基时如每升(1000ml)需添加的生长调节剂物质为 0.5mg时,则取1ml母液即可。
2.无菌操作可按以下步骤进行:
(1)在接种3天前用甲醛熏蒸接种室,并于接种前3小时打开其内紫外 线灯进行杀菌; (2)在接种前20分钟,打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯; (3)接种员先洗净双手,在缓冲间换好专用实验服,并换穿拖鞋等; (4)上工作台后,用酒精棉球搽拭双手,特别是指甲处。然后搽拭工 作台面; (5)先用酒精棉球搽拭接种工具,再将镊子和剪刀从头至尾过火一 遍,然后反复过火尖端处,对培养皿要过火烤干; (6)接种时,接种员双手不能离开工作台,不能说话、走动和咳嗽 等; 材料吸干后,一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀,对材料进行适当的切 割。(如叶片切成0.5cm2的小块;茎切成含有一个节的小段。微茎尖要 剥成只含1-2片叶原基)在接种过程中要经常灼烧接种器械,防止交叉 污染。

MS培养基配方

MS培养基配方

MS培养基母液的配制:20×MS大量元素(1 L):38 g KNO3,33 g NH4NO3,8.8 g CaCl2·2H2O,7.4 gMgSO4·7H2O,3.4 g KH2PO4。

200×MS微量元素(1 L):0.166 g KI,1.24 g H3BO3,4.46 g MnSO4·4H2O,1.72 g ZnSO4·7H2O,0.05 g Na2MoO4·2H2O,0.005 g CuSO4·5H2O,0.005 g CoCl2·6H2O。

200×MS维生素和氨基酸(1 L):20 g肌醇,0.1 g烟酸,0.1 g盐酸吡哆醇(VB6),0.02 g盐酸硫胺素(thiamine hydrochloride, VB1),0.4 g甘氨酸。

200×MS铁盐(1 L):5.56 g FeSO4· 7H2O,7.46 g Na2EDTA· 2H2O,先溶于500 mL ddH2O,加热,调pH至5.5,定容至1 L。

注意:配制大量元素母液时,为避免产生沉淀,要用纯度高的重蒸馏水溶解,药品采用分析纯。

化学药品先以少量重蒸馏水充分溶解后然后混合,混合时需注意边搅拌边混合。

CaCl2·2H2O要在最后单独加入,在溶解CaCl2·2H2O 时,蒸馏水需加热沸腾,除去水中的CO2,以防沉淀。

配制铁盐母液时,FeSO4和Na2-EDTA 应分别加热溶解后混合,并置于磁力搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20-30 min),调pH值至5 .5,室温放置冷却后,再冷藏。

使用上述配好的母液,按照稀释倍数,配制基础MS培养液:1×MS大量元素,1×MS微量元素,1×MS维生素和氨基酸,1×MS铁盐,蔗糖30 g/L,定容后调节pH至5.8,高温高压灭菌。

MS培养基母液的配制与保存

MS培养基母液的配制与保存

仪器与用具1、仪器:各类天平、磁力搅拌器、冰箱;2、用具:烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签;3、试剂:95%酒精,0.1-1N NaOH,0.1-1NHCl,配制MS培养基所需的各种无机物、有机物,蒸馏水。

方法步骤(一)母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液,一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。

优点:(1)保证各物质成分的准确性。

(2)便于配置时快速移取。

(3)便于低温保藏。

1、MS大量元素母液(10X)称10升量溶解在1升蒸馏水中。

配1升培养基取母液100ml。

化学药品1升量10升量①NH4NO31650 mg/L 16.5g②KNO31900 mg/L 19.0g③CaCl2·2H2O440 mg/L 4.4g④MgSO4·7H2O370 mg/L 3.7g⑤KH2PO4170 mg/L 1.7g2、MS微量元素母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。

配1升培养基取母液10ml。

化学药品1升量10升量①MnSO4·4H2O(MnSO4·H2O)22.3 mg/L(21.4 mg/L)223mg②ZnSO4·7H2O8.6 mg/L 86mg③CoCl2·6H2O0.025mg/L 0.25mg④CuSO4·5H2O0.025 mg/L 0.25mg⑤Na2MoO4·2H2O0.25 mg/L 2.5mg⑥KI 0.83 mg/L 8.3 mg⑦H3BO36.2 mg/L 62 mg注意:CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量(0.25 mgX10=2.5 mg)或100倍量(25 mg)称取后,定容于100ml水中,每次取10ml或1ml(即含0.25 mg 的量)加入到母液中。

3、MS铁盐母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。

配1升培养基取母液10ml。

MS培养基配制方法-new

MS培养基配制方法-new

MS 培养基一、大量元素母液1:大量A母液2:大量B母液3:Fe盐注:配制顺序如下1。

称取3。

73 g Na2—EDTA•2H2O溶解于200 ml去离子水中,并置于70℃预热(A);2. 称取2.78 g FeSO4•7H2O溶解于200 ml去离子水中(B);3. 将B缓慢倒入A中混合,边倒边搅动,置于70 ℃水浴锅中螯合2 h;4. 冷却后定容至1 L。

二、微量元素母液4:微量三、有机物质母液5:有机(不含肌醇)℃注:配固体培养基可在调pH后加适量Agar或Phytagel;肌醇也可加入有机母液。

四、抗生素和激素母液试剂名称配制方法母液浓度Amp(氨苄青霉素) 双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Km(卡那霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Str(链霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Cb(羧苄青霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌250 mg/ ml 6-BA (6-苄基嘌呤) 1M NaOH或盐酸溶解,双蒸水定容,高压灭菌 1 mg/ ml NAA(萘乙酸) 1M NaOH溶解,双蒸水定容,高压灭菌 1 mg/ ml IAA 95% 乙醇溶解,双蒸水定容,过滤灭菌 1 mg/ ml五、乙酰丁香酮(Acetone—syringone,AS)称取196。

2 mg AS用10 ml DMSO溶解,母液浓度100 mM,-20℃避光保存,工作浓度100 ~200 μM六、MS溶液的混合5种母液分别依次加入到800 ml蒸馏水中,混匀后加入肌醇、蔗糖和能高压灭菌的激素(6-BA和NAA),定溶至1000 ml,用1M NaOH调pH至5.8。

最后加Phytagel (Sigma)4.4g或Agar 10g。

灭菌完后,在培养基凝固前加入AS或抗生素及不能高压灭菌的激素(IAA).。

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