实验一 植物组织培养基母液配制的若干关键环节
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验一：培养基的配制学院：风景园林院学号：131001226 姓名：张晟菓一、实验目的1. 掌握植物组织培养实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、实验原理鉴于微生物种类及代谢类型的多样性，用于培养微生物的培养基的种类也很多。
培养基的配置的程序有器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，以及培养基的无菌检查等。
此次配制400mL MS培养基。
三、实验材料1.药品：激素：BA 1.0L（200mg/L）NAA 0.2L（200mg/L）母液：MS1（大量元素）20mL——浓缩20倍MS2（微量元素）2mL——浓缩200倍MS3（铁盐）2mL——浓缩200倍；MS4（维生素和氨基酸）2mL——浓缩200倍琼脂：2.2g蔗糖：12g（3%）无菌水2.玻璃器皿：移液管、试管、烧杯、量筒、玻璃棒、培养皿3.仪器设备：电子天平4.其他物品：药匙、滤纸、称量纸、pH计、记号笔、棉花等四、实验步骤1.玻璃器皿清洗：将试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中，用毛刷刷洗，然后用自来水和蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
晾干后备用。
2.量取母液：MS1（20mL），MS2（2mL），MS3（2mL），MS4（2mL）；加激素：BA（1.0mL），NAA（0.2mL）；加蔗糖：12g。
3.加水定容至400mL。
4.搅匀后用pH计、烧碱溶液及硫酸溶液调pH值至5.8。
5.加琼脂2.2g，用电磁炉加热溶解并搅拌5-6分钟，冒泡即可拿出。
6.趁热分装，包扎，贴标签。
五、实验结果培养基配置完成。
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告学院：生命科学技术学院班级：11生物技术(制品)学号：**********姓名：**植物组织培养实验报告实验一植物组织培养母液的配制一、实验目的1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。
2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。
二、实验原理培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。
大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。
无机盐类由大量元素和微量元素组成。
大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。
微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。
培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。
有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。
培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。
培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。
蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。
在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。
一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。
肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。
常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。
③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。
培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。
其中最为常见的为酵母提取物。
琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。
植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。
实验一 培养基的配制与灭菌
铁盐
有机物质 2,4-D
200倍液
100倍液 1.0 mg/ml
5 ml
10ml 1ml
——
5 ml
10ml ——
5 ml
10ml 1ml
NAA
KT 蔗糖
1.0 mg/ml
1.0 mg/ml 30 g
0.2ml
1.0ml 30 g
——
—— 30 g
0.1ml 30 g
琼脂
pH值
8g
5.8
8g
5.8
8g
五、作业要求：完成实验报告，回答下面的思考题 1、根据以下所给母液浓度、蔗糖和琼脂量，配制烟草愈伤组织诱 导和培养的培养基（MS1），按MS配方（Murashige and Skoog, 1962）计算各种母液吸取量或药品的直接称量量。 2、简述高压蒸气灭菌的步骤；培养基采用高压蒸气灭菌应注意哪 些事项？
药品名称
母液倍或母 液浓度 （mg/ml）
配制1 L培养基 配制0.25 L培养基所需母液量(ml) 所需母液量(ml) 或质量（g） 或直接称量量（g） MS 1 MS 2 MS 3
大量元素 微量元素 铁盐 有机物质 2,4-D NAA KT 蔗糖 琼脂 pH值
10倍液 100倍液 200倍液 100倍液 1.0 mg/ml 1.0 mg/ml 1.0 mg/ml 30 g 8g 5.8
5.8
——
5.8
1）在烧杯内放入一定量的蒸馏水，用量筒或移液枪按上述表 格内配方加入各种母液及激素。 2）加入蔗糖30g，待蔗糖溶解后（可搅拌）加水定容至1L。 3）调节PH值，用酸度计测量PH值至5.8，常用1mol/l的HCl或 NaOH调整。 4）在MS1和MS2中加入琼脂8g，加热溶解，溶解过程中不断 搅拌，加热时烧杯口上盖上锡箔纸，防止水分过度蒸发。 5）分装：将配好的培养基及时分装到小三角瓶中，防止凝固 ，每瓶约30ml-40ml（约覆盖瓶底），分装时不要沾壁口。 6）封口：用封口膜将将三角瓶封口。
植物组织培养基母液的配制
植物组织培养基母液的配制
植物组织培养基是培养植物细胞、组织和器官的基础培养介质。
配制
植物组织培养基的母液可以按照以下步骤进行：
1. 准备所需的化学品和试剂，包括无机盐、有机添加剂、维生素和其
他辅助物质。
这些化学品可以根据不同的植物种类和培养目的进行选择。
2. 称取所需的化学品，并依次加入无菌蒸馏水中。
搅拌溶解，直到所
有化学品完全溶解。
3. 调节pH值。
使用pH计测量溶液的pH值，如果需要，可以使用酸
或碱来调节pH值，直到达到所需的pH范围。
4. 向溶液中添加琼脂糖或琼脂糖替代物，作为凝胶剂。
溶解并搅拌直
到完全溶解。
5. 过滤溶液，以去除悬浮固体和杂质。
使用无菌滤纸或滤器进行过滤。
6. 灭菌。
将过滤后的溶液装入无菌烧瓶或容器中，使用高压灭菌器或
自动压力锅进行灭菌，通常在121℃高压下灭菌20-30分钟。
7. 灭菌后，将培养基倒入无菌培养瓶中，密封并保存在冰箱中或低温
环境中。
以上是植物组织培养基母液的配制步骤，具体的操作和配方可以根据
不同的要求和实验目的进行调整。
植物组织培养实验指导
植物组织培养实验指导2013.3附录培养基母液的配制（实验老师准备）一、实验目的：掌握培养基母液配制的方法。
二、实验原理：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。
另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。
三、实验器具与药品：电子分析天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。
配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。
植物生长调节物质，2,4-D, NAA, 6-BA等。
四、培养基母液的配制过程首先，按下表“MS培养基母液的配制”，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后，分别进行药品称取和母液配制。
（1）MS大量元素母液的配制按照MS培养基配方的用量扩大20倍，将大量元素配制成20倍的母液。
配制时先用量筒量取蒸馏水800ml，放入1000ml的烧杯中，依次分别称取KNO3 38g; NH4NO3 33g, MgSO4·7H2O 7.4g, KH2PO4 3.4g, CaCl2·2H2O 8.8g，按顺序先后倒入烧杯中，用玻璃棒搅动，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入1000ml的容量瓶，用蒸馏水定容至1000ml,然后，倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
配制培养基时每升MS培养基吸取该母液量为50ml。
（2）MS微量元素母液的配制将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍，用电子天平分别依次称取MnSO4·4H2O 22.3g，ZnSO4·7H2O 8.6g , H3BO3 6.2g，KI 0.83g，Na2MoO4·2H2O 0.25g，CuSO4·5H2O 0.025g，CoCl2·6H2O 0.025g，并用重蒸水逐个溶解，待全部溶解用容量瓶定容后，装入1000ml倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
培养基母液配制中的若干关键环节
培养基母液配制中的若干关键环节培养基母液,也叫浓缩贮备液.它是以培养基配方配制成的高倍的浓缩液,不同组分母液,它的浓缩倍数不同,一般最低为10倍,高的有50倍、100倍、200倍,甚至1000倍.母液是一个方法比较简便、用量比较准确且被广泛采用的配制方法.本文就如何掌握培养基母液配制的操作要领作一阐述,以供参考.以MS培养基为例,其母液的配制包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、氨基酸、植物生长调节物质和有机附加物等种类.（见表1）1大量元素和微量元素母液的配制按规定用量,称取所需的各种药品,在配制时为减少工作量,可以把几种药品（如大量元素或微量元素）配在同一母液中（见表1）.但由于各种药品的混合,可能发生反应,生成沉淀物,以致母液失效.为避免类似现象发生,在大量元素、微量元素和维生素及氨基酸的母液配制时，可采用如下2种做法加以解决：①将要配在同一母液的大量元素、微量元素和维生素及氨基酸等化合物,按“表1”所列药品的先后顺序溶解药品,待前一种药品完全溶解后再加入后一种化学药品，以此类推；②使每种成份分别完全溶解,再把它们彼此混合.2铁盐母液的配制铁盐的成份含硫酸亚铁（FeSO4-7H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA）.这两种化合物的溶解和混合较为严格,必须按如下方法配制,否则将会产生沉淀.该方法是：分别溶解FeSO4-7H2O和Na2-EDTA,加热并不断搅拌,使之完全溶解,冷却，将2种溶液混合,调PH至5.5,用蒸溜水加至所需容积,棕色瓶保存于冰箱之中.3植物生长调节物质母液的配制植物生长调节物质是培养基的重要组分之一,一般是植物激素类物质,如生长素类的IAA、IBA、NAA,赤霉素类的GA3,细胞分裂素类的2,4-D、KT和6-BA等.由于大多数生长调节物质难溶于水,因此配制方法也各不相同：①IAA,IBA和GA3先用少量95%酒精溶解,再加水定容，摇匀后贮于试剂瓶中、贴上标签后，存放在冰箱中；②NAA可用热水或少量95%酒精溶解,再加水定容至所需容积；③2,4-D可溶于少许0.1mol-L-1的NaOH溶液中,然后加水定容；④KT和6-BA可用少量0.1mol•L-1的HCl溶解,再加水定容；⑤玉米素先溶于少量95%酒精中,然后加水定容.植物生长调节物质浓度通常用ppm（mg•ml-1）和mo l•L-1表示,在配制母液时，常以ppm较为方便,一般配制成0.5ppm的母液,这个浓度既便于计算,也可避免冷藏时形成结晶.4有机附加物母液的配制在植物组织培养时,培养基中往往要加入一些有机附加物,如椰子汁,以促进组织培养活性.由于椰子汁的活性成分是耐热的,在配制时,要先把由果实中采集到的汁液加热煮沸以除去其中的蛋白质,过滤,然后置塑料瓶中贮存于的-20℃的低温冰箱内.MS培养基配制中的五点注意1母液配制必须严格分类配制高浓度的母液是植物组织培养的基本功。
实验1 培养基母液的配制
实验1、培养基母液的配制一、实验目的1、了解植物组织与细胞培养基的基本类型和组成。
2、掌握植物组织与细胞培养基各种母液的配制方法。
二、实验原理离体植物组织和细胞的生长、分化所需要的营养物质都是由培养基供给。
基本培养基通常包括大量元素、微量元素、有机物以及糖和水，完全培养基是在基本培养基的基础上，附加植物生长调节剂、椰乳、香蕉汁、番茄汁等天然提取物。
迄今为止，基本培养基的配方已有几百种，但较常用的有一二十种，如MS、White、N6、B5等。
实验用的培养基一般是先配成10-100倍的母液，用时再按配方配制培养基。
二、实验用品1、实验器材：冰箱、电炉、电子天平、移液管、量筒、烧杯（1000mL、500mL、50mL）、容量瓶、玻璃棒、试剂瓶（1000mL）、标签纸等。
2、实验试剂：MS培养基配方中的19种试剂，2,4-D，KT，NaOH，HCl，95%乙醇，HgCl2，次氯酸钠，蒸馏水等。
三、实验方法1、大量元素母液的配制按表1-1计算并称取各试剂，用蒸馏水依次溶解，最后定容到1000mL，即为10倍的大量元素母液，倒入试剂瓶，贴好标签，保存于4℃冰箱里。
表1-1 MS培养基大量元素母液试的配制注意1: ①称取量的值（mg）=规定量(mg/L)×扩大倍数×母液体积(L)②每称量一种试剂，都要在备注栏中相应的部分做好标记，比如写上日期和划出“√”。
注意2：①为避免沉淀现象发生，应将Ca 2+、SO42-、Mg 2+和H 2PO 4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合；②CaCl 2·2H 2O 要在最后单独加入，在溶解CaCl 2·2H 2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO 2，以防沉淀。
另外，CaCl 2·2H 2O 放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。
③如遇沉淀，缓慢加入（注意搅拌）1mol/L 的Hcl 将其溶解。
2、微量元素母液的配制按表1-2计算并用分析天平称取各试剂，用蒸馏水依次溶解，最后定容到1000mL ，即为100倍的微量元素母液，倒入试剂瓶，贴好标签，保存于4℃冰箱里。
组织培养实验-MS培养基及配制注意事项
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 组织培养实验-MS培养基及配制注意事项一、 MS 培养基母液的配制注意：1．除 CaCl22H2O 单独配制外，大量元素按照使用时高 10 倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在 500ml 烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl22H2O 配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩 100 倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（ FeSO47H2O 和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，母液成分 1 倍培养基用量浓缩倍数称取量（mg）母液体积（ml）配制 1 升培养基吸取量（ml）编号种类 1 大量元素KNO3 1900 10 19000 1000 100 NH4NO3 1650 10 16500 MgSO4 7H2O 370 10 3700 KH2PO4 170 10 1700 2 CaCl2 2H2O 440 10 4400 1000 100 3 微量元素 MnSO4 4H2O 22.3 100 2230 1000 10 ZnSO4 7H2O 8.6 100 860 H3BO3 6.2 100 620 KI 0.83 1000830 1000 1 Na2MoO4 7H2O 0.25 1000250 CuSO4.5H2O 0.025 100025 CoCL2.6H2O 0.025 100025 4 铁盐 Na2-EDTA 37.3 100 3730 1000 10 FeSO4.4H2O 27.8 100 2780 5 有机物甘氨酸 2.0 50 100 500 10 盐酸吡哆醇（VB6） 0.5 50 251 / 8盐酸硫铵素（VB1） 0.1 50 5 烟酸 0.5 50 25 6 肌醇 100 50 5000 500 10 定容在 1000ml 容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
培养基母液的配置
培养基母液与培养基的配置摘要：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
关键词：培养基母液常用培养基植物激素1.常用培养基种类，培养基母液的各种成分的量以及配置过程1.1常用培养基：MS培养基MS培养基是目前使用最普遍的培养基。
其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。
由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。
MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。
MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。
因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。
和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。
B5培养基与其他培养基相比，它的主要特点是含有较低的铵，而铵这一营养成分可能对有些培养基有抑制生长的作用。
当愈伤组织和悬浮培养中对B5培养基与MS培养基进行对比培养试验时，发现有些植物的愈伤组织和细胞培养物在MS培养基上平内的脏物清理干净。
3.3在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成FeS04和Na2-EDTA鳌合不彻底，此时若将其冷藏，FeSO4会结晶析出。
为避免此现象发生，配制铁盐母液时，FeSO4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20 - 30 min)，调pH值至5 .5，室温放置冷却后，再冷藏。
3.4由于维生素母液营养丰富，因此贮藏时极易染菌。
被菌类污染的维生素母液，有效浓度降低，并且易给后期培养造成伤害，不宜再用。
避免此现象发生的方法是:配制母液时用无菌重蒸馏水溶解维生素，并贮存在棕色无菌瓶中，或缩短贮藏时间。
豌豆植物组织培养实验报告
植物组织培养课程实验报告班级：09生物制品班学号：2009192004姓名：冯旭豌豆植物组织培养实验报告目的要求通过实验掌握植物组织培养中的无菌操作技术。
学习培养基的配制及灭菌，掌握植物外植体表面消毒的常规方法。
实验原理植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整的植株的过程。
植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。
这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。
实验一组织培养基母液的配制一、仪器及药品冰箱、天平（0.0001g）容量瓶: 1000 ml, 500 ml、250 ml广口储液瓶：500 ml烧杯： 500 ml 、250 ml、100 ml 、50 ml玻璃搅棒、大药勺、小药勺、标签纸、胶带、铅笔几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、铁盐、镁盐、钙盐、肌醇、蒸馏水二、方法和步骤：按照培养基配方,把大量元素、微量元素、铁盐、镁盐、钙盐、有机物、植物激素分类,每一类中各种药品分别称量,MS培养基各种母液的配制步骤如下：大量元素母液：包括用量较大的几种化合物有硝酸钾、硝酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙。
将每种药品的用量扩大50倍，分别称取，分别溶解，然后按照顺序混合在一起。
转入500mL容量瓶中，最后加上蒸馏水，用少量蒸馏水洗涤三次，比把它也转入容量瓶中，然后定容至500毫升。
定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养基需吸取该母液10 ml。
微量元素母液：因用量少，为了称量精确和方便,常配成 100倍的母液。
含有碘化钾、硼酸、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴，逐个溶解，混合在一起成为微量元素母液，每配1 L MS培养基需吸取该母液5 ml。
植物组培1-培养基配制
植物组织培养-培养基配制一 、【实验目的】1、掌握培养基的配制，灭菌等基本实验操作技术二 、【实验原理】植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。
而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。
植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。
三、【实验仪器和试剂】仪器：培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，棉线，接种箱或超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸试剂：乙醇、2 ，4 – D （生长素类似物）、次氯酸钠、6- 苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ）、MS 培养基、0.1 mol/L NaOH与 0.1 mol/L HCl 四、【实验步骤及内容】培养基的配制用于配制培养基的水最好是三蒸水。
所用的各种化学药品：分析纯级别的试剂，避免药品的交叉污染和混杂。
配制培养基最方便的方法是预先配制好不同组分的培养基母液，存放在2～4℃冰箱内，使用时按比例稀释配用即可。
1、 MS培养基的配制1）按照配方配制培养基时,先将储存母液按顺序摆放好，根据欲配制的总体积，量取各种不同体积的母液，加入2，4-D(2mg/L)，先加三蒸水至大约400ml2）称取加入蔗糖(浓度3%)，调节pH至5.7-5.83）加入琼脂（8-9g/L）加热搅拌溶解，沸腾后立即端离火源（第一个大气泡从缸底上升顶破泡沫层），分装在100ml的三角培养瓶中（一般以容器的1/3～1/4体积为宜），拧紧瓶盖。
4）培养基的pH值直接影响培养物对离子的吸收，过酸或过碱不仅影响到培养材料的生长，而且还影响到琼脂的凝固。
植物细胞工程实验 (1)
植物细胞工程实验一 培养基母液的制备一、实验目的与意义学习和掌握培养基母液的配制方法。
在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。
二、实验器材电子天平（称量为0.0001g ）、电子天平（称量为0.01g ）、烧杯（500ml 、100ml 、50ml ）、容量瓶（1000ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、细口瓶（1000 ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、药勺、玻璃棒、电炉。
三、实验药品NH 4NO 3、KNO 3、CaCl 2·2H 2O 、MgSO 4·7H 2O 、KH 2PO 4、KI 、 H 3BO 3、 MnSO 4·4H 2O 、 ZnSO 4·7H 2O 、 Na 2MoO 4·2H 2O 、CuSO 4·5H 2O 、CoCl 2·6H 2O 、FeSO 4·7H 2O 、Na 2-EDTA·2H 2O 、肌醇 、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B 6)、盐酸硫胺素(维生素B 1)、甘氨酸。
四、实验步骤每种母液均配制500ml ，各成分的质量如下： 1、大量元素母液的配制表1 MS 培养基大量元素母液制备序号 药品名称培养基浓度（mg/L ）扩大20称量(mg)备注1 NH 4NO 3 1650 16500 蒸馏水定容至500ml2 KNO3 1900 19000 3 CaCl 2·2H 2O 440 44004 MgSO 4·7H 2O 370 37005 KH 2PO 41701700各成分按照表1培养基浓度含量扩大20倍，用称量为0.01g 的电子天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到500ml 的容量瓶中，即为20倍的大量元素母液。
母液的配制实训报告
一、实验目的1. 掌握母液配制的基本原理和操作流程。
2. 熟悉MS培养基母液、微量元素母液等不同类型母液的配制方法。
3. 了解母液在植物组织培养中的重要作用。
4. 培养实验操作技能和严谨的科学态度。
二、实验原理母液是植物组织培养中常用的一种浓缩溶液，将培养基中的各种成分按照一定比例配制成高浓度的储备液。
在配制培养基时，只需按比例稀释母液即可，这样可以简化操作、减少误差，提高实验效率。
三、实验材料与仪器1. 材料：MS培养基各成分试剂、植物生长调节剂（如2，4-D、6-BA、IAA、NAA 等）、洗涤剂、蒸馏水等。
2. 仪器：电子天平、药匙、玻璃棒、称量纸、吸水纸、滴管、洗瓶、标签纸、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量杯、量筒、移液管、移液枪、洗耳球、电炉、冰箱等。
四、实验步骤1. 大量元素母液的配制（1）按照MS培养基配方的需要量，将各种化合物称量扩大10倍。
（2）用电子天平称取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。
（3）完全溶解后，按表4-1顺序依次混合已溶解的化合物。
（4）将混合液转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
（5）将配制好的大量元素母液转移至棕色试剂瓶中，贴上标签，置于冰箱中保存。
2. 微量元素母液的配制（1）按照微量元素母液的配方，将各种化合物称量扩大10倍。
（2）用电子天平称取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。
（3）完全溶解后，将混合液转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
（4）将配制好的微量元素母液转移至棕色试剂瓶中，贴上标签，置于冰箱中保存。
3. 生长调节物质母液的配制（1）按照生长调节物质母液的配方，将各种化合物称量扩大10倍。
（2）用电子天平称取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。
（3）完全溶解后，将混合液转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
（4）将配制好的生长调节物质母液转移至棕色试剂瓶中，贴上标签，置于冰箱中保存。
五、实验结果与分析1. 本实验成功配制了MS培养基的大量元素母液、微量元素母液和生长调节物质母液。
母液的制备及培养基的配制、灭菌
实验一母液的制备及培养基的配制、灭菌一、目的要求通过掌握培养基对母液制备及常用培养基的配制和灭菌方法，为植物组织培养准备合适的营养条件。
二、实验内容学习母液和培养基的配制，灭菌的方法。
三、实验原理植物材料培养要获得成功，并正常生长，培养基的组成成分是一个决定性因素，不同植物要求不同的培养基，因此，在进行大量工作之前，对不同培养基应进行分析、比较、试验，选择一个符合试验材料需要的适宜培养基。
大多数植物组织培养所用的培养基由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成。
四、实验仪器与材料高压灭菌锅、冰箱、普通及精密天平、电炉、铝锅、玻璃器皿（烧杯、量微、容量瓶、移液管、试剂瓶、三角瓶、漏斗），化学试剂(CaCl2·2H2O，KNO3，MgSO4·7H2O，NH4NO3，KH2PO4，Na2—EDTA，FeSO4·7H2O，MgSO4·4H2O，Zn SO4·7H2O，H3BO3，KI，NaMoO4·2H2O，CuSO4·5H2O，CoCl2·6H2O，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，肌醇，蔗糖，琼脂，若干种生长调节物质及天然复合物，HCL,NaOH,酒精)，以及称量纸、药匙、玻璃棒、精密度纸，瓶盖用纸，线绳或橡皮筋、铅笔、标签纸。
五、方法和步骤1、母液的配制母液的配制是按所使用药品的类别，而分别配成大量元素、微量元素、维生素和铁盐等。
配制母液时特别要注意无机盐成分在一起，可能产生的化学反应，如Ca2+和SO2-4,Ca2+,Mg2+和PO3-4一起溶解后，会产生硫酸钙或磷酸钙的不溶物沉淀，因此不能配在一起作母液贮存，应分别配制和保存。
配制母液时要用双重蒸馏水等纯度较高的水，药品应采用化学纯或分析纯级，药品的称量及定容都要准确，各种药品先以少量蒸馏水使其充分溶解，然后按培养基上的排列顺序混合。
现以Murashige和Skoog(1962)培养基为例叙述如下：根据各种药品的特点，母液可配成4种。
植物组织培养实验指导
实验一培养基母液的配制一、目的要求通过对MS培养基母液的配制，学习掌握培养基母液配制方法。
二、说明在配制培养基时，为了取用方便和提高各种药品称量的准确性，往往先把各组成成分按其需用量配成扩大一定倍数的浓缩液，即母液贮存备用，用时稀释。
配制母液时，一般按药品的种类和性质分别配制，单独保存或几种混合保存。
如把所有大量元素配在一起，配成大量元素母液，把微量元素放在一起配成微量元素母液，以及单一的维生素、铁盐、植物激素等母液。
母液扩大的倍数主要取决于用量的多少，用量大的扩大的倍数宜低，反之则高，但要注意过高浓度和不恰当的混合会引起沉淀，影响培养效果。
三、仪器和药品电子天平1/1000、1/10000。
药品按MS培养基配方准备。
激素按需要准备。
四、方法和步骤一）、大量元素母液：因大量元素用量大，为避免过高浓度的混合液会发生沉淀，一般配成10倍的母液。
根据所选培养基配方，按大量元素在表中排列顺序，以其10倍用量用1/1000天平逐个称出，按次序加入盛有蒸馏水的烧杯中，并搅拌。
注意每种溶解后，再加下一种。
原则上应注意把Ca2+与SO4-PO4错开，以免产生沉淀，最后加蒸馏水定容至刻度，此即大量元素母液。
配培养基时，每配一升，取母液100ml。
二）、微量元素母液：微量元素因用量小，为称量方便及精确，常配成100倍或1000倍的母液，即将每一种微量元素化合物的量扩大100倍或1000倍，分别称量、溶解、定容，方法向上。
配1升培养基取母液10ml或1ml。
本实验配成100倍。
三）、铁盐铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母液即可。
目前常用的铁盐为FeSO4· 7H20，由于在使用过程中容宜产生Fe（OH）3沉淀，一般先将其配成螯合物。
常配成100倍称取FeSO4· 7H2O，Na2-EDTA，分别加热溶解，然后混合、定容，或混合后加热，至呈黄色，定容。
每配制1升用10ml。
植物组织培养母液的配制与保存
植物组织培养母液的配制与保存植物组织培养母液的配制与保存目的熟练掌握植物组织培养中各种成分或成分组的母液（比需要量大若干倍）的配制方法。
实验仪器电子天平（感量为O.OOOIg）、一般天平（感量为0.1g）、烧杯100mL 50 mL 25mL ）、量筒（1000 mL 100 mL 50 mL ）、容量瓶200 mL 100 mL 50 mL 25 mL ）、细口瓶（500 mL 200 mL 100 mL 50 mL ）、药勺、玻棒、电炉等。
实验试剂按培养基配方准备实验原理一）培养基的组成培养基是植物组织培养中的血液”,血液的成分及其供应状况直接关系到培养物的生长与分化，因此了解培养基的成分、特点及其配制至关重要。
自然状态下生长的绿色植物由于自身能进行光合作用，并且能合成植物生长发育所需的几乎所有有机成分，加上土壤中含有较全面的无机和有机营养成分，所以只需在适当的时候施加少量的无机和有机肥（复合成分），植物就可良好的生长。
目前所使用的培养基有10余种之多，大部分都是在前人研究的基础上经过分析综合和改进而成的。
例如，White培养基是Uspenski 和Uspenskaia（ 1925）的藻类培养基演化的结果，被广泛用于根的培养；Cautheret培养基是建立在Knop营养液（1865）基础上的。
以后的培养基大部分是在White和Cautheret培养基的基础上改进而成。
就目前所使用的各种培养基而言，可将它们的成分划分为几大类，常用的有MS、B5、和White1.水水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。
配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程发霉变质。
大规模生产时可用自来水。
但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。
2.无机营养成分：大量元素，主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种微量元素：培养基的微量元素主要包括铁（Fe）、锰（Mn ）、铜（Cu）、锌（Zn）、氯（CI）、硼（B）和钼（Mo ）等。
植物组织培养基的配制
植物组织培养基的配制一、母液的配制和保存在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。
为简便起见，通常先配制一系列母液(stockso1utlon)，即贮备液。
所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但刊以侏让各物质成分的精确性及配制时的迅速移取，而且还便于低温收藏。
普通母液配成比所需浓度高10～100倍。
母液配制时可分离配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。
配制时注重一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042-、Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。
配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。
药品应选职等级较高的化学纯或分析纯。
药品的称量及定容都要精确。
各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。
普通配成大量元素、微量元素、铁盐、维生索等母液，其中维生素、氨基酸类可以分离配制，也可以混在一起。
母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。
下面以MS培养基制备为例，概述其制备办法，为MS基本培养基4种母液成分配制。
(1)大量元素母液可配成浓度10倍母液。
用分析天平按表25称取药品，分离加100mL左右蒸馏水溶解后，再用磁力搅拌器搅拌，促进溶解。
注重Ca2+和PO3-4易发生沉淀。
然后倒入1000mL定容瓶中，再加水定容至刻度，成为10倍母液。
(2)微量元素母液可配成100倍的母液。
用分析天平按表精确称取药品后，分离溶解，混合后加水定容至1000mL。
(3)铁盐母液可配成100倍的母液，按表称取药品，可加热溶解，混合后加水定容至1000mL。
(4)有机物母液可配成l00倍的母液。
按表分离称取药品，溶解，混合后加水定容至1000mL。
(5)激素母液每种激素必需单独配成母液，浓度普通配成1mg／mL。
用时按照需要取用。
由于激素用量较少，一次可配成50mL或100mL。
另外，多数激素难溶于水，要先溶于可溶物质，然后才干加水定容。
激素的配法如下：将IAA、IBA、GA等先溶于少量的95％的酒精中，再加水定容至一定浓度。
植物组培母液实验报告
一、实验目的1. 理解植物组织培养母液在植物细胞培养中的重要作用。
2. 掌握植物组织培养母液的配置、保存及使用方法。
3. 通过实验验证不同植物组织培养母液对植物细胞生长和分化效果的影响。
二、实验材料1. 材料：拟南芥叶片、MS培养基、琼脂糖、葡萄糖、琼脂、植物激素（生长素、细胞分裂素、赤霉素等）。
2. 仪器：无菌操作台、超净工作台、显微镜、移液器、培养箱、冰箱、天平等。
三、实验方法1. 植物组织培养母液的配置（1）称取一定量的MS培养基母液，加入去离子水溶解，配制成一定浓度的母液。
（2）将母液加入适量的琼脂糖，溶解后倒入培养皿中，制成固体培养基。
（3）将固体培养基放入培养箱中，于适宜温度下固化。
2. 植物细胞培养（1）将拟南芥叶片表面消毒后，剪成小块，接种到固体培养基上。
（2）将培养皿放入培养箱中，于适宜温度下培养。
（3）观察细胞生长和分化情况，记录实验数据。
3. 植物组织培养母液对细胞生长和分化效果的影响（1）将不同浓度的植物激素加入植物组织培养母液中，制成实验组。
（2）将对照组和实验组进行对比，观察细胞生长和分化情况。
（3）记录实验数据，分析不同植物组织培养母液对细胞生长和分化效果的影响。
四、实验结果与分析1. 植物组织培养母液的配置成功配制了不同浓度的植物组织培养母液，并制作了固体培养基。
2. 植物细胞培养在适宜的条件下，拟南芥叶片细胞在固体培养基上成功生长和分化。
3. 植物组织培养母液对细胞生长和分化效果的影响实验结果表明，不同浓度的植物组织培养母液对细胞生长和分化效果有显著影响。
（1）生长素浓度对细胞生长和分化有促进作用，但过高浓度会导致细胞死亡。
（2）细胞分裂素浓度对细胞生长和分化有促进作用，但过高浓度会导致细胞分化不良。
（3）赤霉素浓度对细胞生长和分化有促进作用，但过高浓度会导致细胞畸形。
五、实验结论1. 植物组织培养母液在植物细胞培养中起着重要作用，其浓度和成分对细胞生长和分化效果有显著影响。
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实验一、植物组织培养基母液配制的若干关键环节目的与要求：
熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法.
植物组织培养（plant tissue culture）是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化形成完整植株的过程.植物组织培养具有取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制等特点.因而被广泛应用于各种植物的快速繁殖之中.
为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。
这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。
现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。
以MS培养基为例，其母液的配制包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、氨基酸、植物生长调节物质和有机附加物等种类.(见表1)
表1 MS培养基母液的配制
成分规定用量
/mg.L-1 扩大倍
数
称取量/ mg 母液定溶
体积/ml
配1LMS培
养基吸取量
/ml
大量元素
KNO3
NH4NO3 MgSO4·7H2O KH2PO4
CaCl2·2H2O 微量元数
MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O 1900
1650
370
170
440
22.3
8.6
20
20
20
20
20
1000
1000
38000
33000
7400
3400
8800
22300
8600
1000
1000
1000
1000
1000
1000
1000
50
50
50
50
50
1
1
H3BO3
KI
Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O
铁盐
Na2-EDTA FeSO4·7H2O
维生素和氨基酸
甘氨酸
Vit.B1
Vit.B6
肌醇
烟酸6.2
0.83
0.25
0.025
0.025
37.3
27.8
2.0
0.1
0.5
100
0.5
1000
1000
1000
1000
1000
100
100
100
100
100
100
100
6200
830
250
25
25
3730
2780
100
5
25
5000
25
1000
1000
1000
1000
1000
1000
1000
500
500
500
500
500
1
1
1
1
1
10
10
10
10
10
10
10
1 大量元素和微量元素母液的配制
按规定用量,称取所需的各种药品，在配制时为减少工作量，可以把几种药品（如大量元素或微量元素）配在同一母液中（见表1）.但由于各种药品的混合，可能发生反应，生成沉淀物，以致母液失效.为避免类似现象发生，在大量元素、微量元素和维生素及氨基酸的母液配制时，可采用如下2种做法加以解决：①将要配在同一母液的大量元素、微量元素和维生素及氨基酸等化合物，按“表1”所列药品的先后顺序溶解药品，待前一种药品完全溶解后再加入后一种化学药品，以此类推；②使每种成份分别完全溶解，再把它们彼此混合.
2 铁盐母液的配制
铁盐的成份含硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA）.这两种化合物的溶解和混合较为严格，必须按如下方法配制，否则将会产生沉淀.该方法是：分别溶解FeSO4·7H2O和Na2-EDTA，加热并不断搅拌，使之完全溶解，冷却，将2种溶液混合，调P H至5.5，用蒸溜水加至所需容积，棕色瓶保存于冰箱之中.
3 植物生长调节物质母液的配制
植物生长调节物质是培养基的重要组分之一，一般是植物激素类物质，如生
长素类的IAA、IBA、NAA，赤霉素类的GA3，细胞分裂素类的2，4-D、KT和6-BA等.由于大多数生长调节物质难溶于水，因此配制方法也各不相同：①IAA，IBA和GA3先用少量95%酒精溶解，再加水定容，摇匀后贮于试剂瓶中、贴上标签后，存放在冰箱中；②NAA可用热水或少量95%酒精溶解，再加水定容至所需容积；③2，4-D可溶于少许1mol·L-1的NaOH溶液中，然后加水定容；④KT和6-BA可用少量1mol·L-1的HCl溶解，再加水定容；⑤玉米素先溶于少量95%酒精中，然后加水定容.
植物生长调节物质浓度通常用ppm（mg·ml-1）和mol·L-1表示，在配制母液时，常以ppm较为方便，一般配制成0.5ppm的母液，这个浓度既便于计算，也可避免冷藏时形成结晶.
4 有机附加物母液的配制
在植物组织培养时，培养基中往往要加入一些有机附加物，如椰子汁，以促进组织培养活性.由于椰子汁的活性成分是耐热的，在配制时，要先把由果实中采集到的汁液加热煮沸以除去其中的蛋白质，过滤，然后置塑料瓶中贮存于的-200c的低温冰箱内.
以上各种混合液(母液)或单独配制药品，均应放入冰箱中保存，以免变质、长霉。
至于蔗糖、琼脂等，可按配方中要求，随称随用。