实验1-1 MS培养基母液和常用试剂的配制

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MS培养基母液的配制与保存

MS培养基母液的配制与保存

MS培养基母液的配制与保存一、目的要求1、通过MS培养基母液的配制,掌握配制与保存培养基母液的基本技能。

2、掌握培养基各种母液的保存方法。

二、仪器与用具1、仪器:各类天平、磁力搅拌器、冰箱等。

2、用具:烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签等。

3、试剂:95%酒精,0.1-1 NaOH,0.1-1NHCl,配制MS培养基所需的各种无机物、有机物,蒸馏水。

三、方法步骤(一)母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液,一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。

优点:(1)保证各物质成分的准确性。

(2)便于配置时快速移取。

(3)便于低温保藏。

1、MS大量元素母液(10X)称10升量溶解在1升蒸馏水中。

配1升培养基取母液100ml。

2、MS微量元素母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。

配1升培养基取母液10ml。

注意:CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量(0.25 mgX10 =2.5 mg)或100倍量(25 mg)称取后,定容于100ml水中,每次取10ml或1ml,(即含0.25 mg的量),加入到母液中。

3、MS铁盐母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。

配1升培养基取母液10ml。

注意配制时,应将两种成分分别溶解在少量蒸馏水中,其中EDTA盐较难完全溶解,可适当加热。

混合时,先取一种置容量瓶(烧杯)中,然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡,至产生深黄色溶液,最后定容,保存在棕色试剂瓶中。

4、MS有机物母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。

配1升培养基取母液10ml。

5、生长调节剂单独配制,浓度为1-5 mg/ml(书中为0.5 -1mg/ml),一般配成4 mg/ml 。

配制培养基母液时注意事项:①一些离子易发生沉淀,可先用少量蒸馏水溶解,在按配方顺序依次混合;②配制母液时必须用蒸馏水或重蒸馏水;③药品应用化学纯或分析纯;④溶解生长素时,可用少量0.5 –1N的NaOH 或95%酒精溶解,溶解分裂素类用0.5 –1N的HCl加热溶解。

实验1 MS培养基贮备液的配制及不同外植体诱导培养基配制

实验1 MS培养基贮备液的配制及不同外植体诱导培养基配制

100
10
100
10
100
10
注意事项:
1. 用蒸馏水、重蒸馏水、分析纯或化学纯试剂 2 .注意防止沉淀 3.激素溶解方法: NAA 2,4-D先溶95%酒精再加水定容;
KT、BA先溶于少量1MHCl再加水。
(二)培养基配制
移母液
确定配方 称蔗糖 分 装


称琼脂 调PH值 培养基熬制





思考题
1、如何使用高压蒸汽锅,应注意哪些事项? 2、配制大量元素母液母液;100×微量元素母
液;50×铁盐母液;50×有机物母液; 2mg/ml6-BA、1mg/mlNAA激素母液。 如何配制2升下列配方的培养基? ①MS+6-BA1.0+NAA1.0+30g蔗糖+6g琼脂
1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025 27.85 37.25 2 0.4 0.5 0.5 100 19000 16500 3700 1700 4400 2230 860 620 83 25 2.5 2.5 2785 3725 200 40 50 50 10000 10

胡萝卜愈伤组织诱导培养基配方
(H) MS+2,4-D1.0+KT0.2 +30g蔗糖+5g琼脂 pH5.8
非洲紫罗兰芽诱导培养基配方
(F)MS+BA0.1+NAA0.1+30g蔗糖+5g琼脂 pH5.8
分 8组,每组配制0.5L,分装28瓶。前4组配H培 养基,后4组配F培养基。
移母液
大量元素母液 微量元素母液 铁 盐母液 有机物母液

MS培养基配方

MS培养基配方

MS 培养基配方1、配置MS母液母液配置:加热都是用温水浴加热,全部都要避光保存,用装乙醇的棕色瓶来保存在4度即可表2.1大量元素母液药品20x g/L 500ml(20 x)KNO338g 19gNH4NO333 g 16.5gMgSO4•7H2O7.4 g 3.7gCaCl2 6.644g 3.322gKH2PO4 3.4g 1.7g溶于200ml蒸馏水,定容至500ml 需要加热才能完全溶解CaCL2.2H2O 4.4g/L表2.2微量元素母液药品100x g/L 500ml(100x g/L)KIH3BO3MnSO4.4H2OZnSO4.7H2ONa2MoO4.2H2OGuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 0.083g0.6222.3 g0.86 g0.025 g0.0025 g0.0025 g0.0415 g0.31 g1.115 g0.43 g0.0125 g0.00125 g0.00125 g溶于100ml蒸馏水,定容至500ml表2.3有机母液药品100x 1L500ml(100x)肌醇10g5g烟酸0.05g0.025gVB60.05g0.025gVB10.1g0.05g甘氨酸0.2g0.1g表2.4铁盐母液药品100x g/L500mlFeSO4•7H2O 2.78g 1.39gNa2-EDTA. 2H2O 3.73g 1.865g铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于100ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,加水定容至500ml,置于小口瓶中,贴上标签2、固体MS培养基材料•找到4种母液:大量元素,微量元素,有机微量元素,铁盐母液•蔗糖,琼脂锥形瓶MS培养基配方:母液都稀释至1xMS培养基配方(1L)母液体积或重量(1L) 200ml大量元素20x50mL 10ml铁盐100x 微量100x 10mL 2ml 10mL 2ml有机100x10mL 2ml 蔗糖15g(15g/L)3g琼脂8g(8g/L) 1.6gPH先调至 5.85-5.88,最终灭菌后pH接近5.81)。

组织培养实验MS培养基及配制注意事项

组织培养实验MS培养基及配制注意事项

一、MS培养基母液的配制注意:1.除CaCl2·2H2O单独配制外,大量元素按照使用时高10倍的数值称取,将各种化合物称量后,分别用少量水在不同的容器内充分溶解,然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液,加适量蒸馏水,用玻璃棒搅拌促溶,倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,置小口瓶中保存,贴上标签注明化合物名称(或编号),浓缩倍数,配制日期和配制者姓名,CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。

2.微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取,分别将各种化合物称量除铁盐(FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外,其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后,定容在1000ml容量瓶中,置小口瓶中保存,贴上标签。

3.铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,调PH至5.5加水定容至1000ml,置于小口瓶中,贴上标签。

4.有机物母液配制,按母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量外,其余分别称量后,溶解,定容在500ml容量瓶中,置于小口瓶中保存,贴上标签。

5.母液最好在2~4℃的冰箱中贮存,特别是有机类物质,贮存时间不宜过长,无机盐母液最好在一个月内用完,如发现有霉菌和沉淀产生,就不能再使用。

A.制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的(分析纯)。

B.称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。

二、培养基配制和灭菌一.养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积(CC)×——————————母液浓缩倍数(二)各种母液按顺序编号排列A.大量元素;B.CaCl2.2H2O;C.微量元素;D.铁盐;E.有机物;F.生长素萘乙酸(NAA):配制0.5mg/ml的NAA称取50mg , NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml;G..细胞分裂素、激动素(KT)配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。

实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制

实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制
根据实验需求,将其他试剂溶解于相 应的溶剂中,如水、有机溶剂等。按 照所需的浓度进行配制,并充分摇匀。
其他常用试剂的保存
配制好的其他试剂应保存在密封的玻璃瓶中 ,并放置在阴凉干燥处。避免阳光直射和高 温环境,以防变质。对于一些易挥发或易氧 化的试剂,应特别注意密封保存和使用。
04
实验操作流程与注意事项
03
04
配制好的培养基应尽快使用,避 免长时间存放。
实验安全须知
避免直接接触培养基和化学试剂,如不慎接 触,应立即用大量清水冲洗。
对于有毒有害的化学试剂,应遵循相关规定 进行操作和处理,不得随意倾倒或排放。
在实验过程中,应注意防范火灾、爆炸等安 全事故,遵循实验室安全规定。
05
实验结果与数据分析
03
常用试剂的配制与保存
植物生长调节剂的配制与保存
植物生长调节剂的配制
根据实验需求,将植物生长调节剂溶解于相应的溶剂中,如 水、乙醇等。按照所需的浓度进行配制,并充分摇匀。
植物生长调节剂的保存
配制好的植物生长调节剂应保存在低温、避光、干燥的环境 中,避免长时间暴露在空气中,以防氧化失效。
无机盐与微量元素的配制与保存
实验过程中严格控制了操作步 骤和试剂质量,确保了实验结 果的准确性和可靠性。
实验结果符合预期,证明了实 验方案的有效性和可行性。
实验中存在的问题与改进建议
实验中存在试剂配制误差和操 作不规范的问题,可能导致实
验结果的不准确。
建议加强实验操作规范性培 训,提高实验人员的操作水 平,确保试剂配制的准确性
熟悉实验操作流程与注意事项
实验操作流程
准备所需试剂和器材→按照配方配制 母液和常用试剂→过滤除菌→分装→ 储存。

试验各种试剂的配制方法

试验各种试剂的配制方法

组织培养实验有关试剂的配制:75%的酒精:75ml的95%的酒精加水定容至95ml。

0.2%的升汞溶液:称取HgCl2 20克,加蒸馏水至4000ml。

1N 盐酸:取8.25ml的浓盐酸,加蒸馏水定容至100ml。

1N NaOH:称8g NaOH,用蒸馏水定容至200ml。

0.1mg/ml的2,4-D溶液:取25mg的2,4-D,加入少量95%的酒精和1N的NaOH 溶解,再加蒸馏水定容至250ml。

0.1mg/ml 的6-BA溶液:取25mg的6-BA,用少量1N的盐酸溶解,再加蒸馏水定容至250ml。

遗传转化与GUS基因检测的试剂配制LB培养基的配制:将下列组分溶解在0.9L水中:1L10ml 的10mmol/l的AS(乙酰丁香酮)母液(100x)配制:称19.6mg的AS,先溶于少量甲醇中,然后慢慢加蒸馏水定容至10ml,过滤除菌,分装成200ul/管(每组1管),使用时将200ul的AS母液加入20ml的MS液体培养基中。

50mmol/l的磷酸钠缓冲液(pH 7.0):A液:取NaH2PO4.2H2O 3.12g溶于蒸馏水,定溶至100ml。

B液:取Na2HPO4.12H2O 7.17g溶于蒸馏水,定溶100ml。

取A 液39ml与B 液61ml混合,定容至400ml,调PH至7.0。

50mmol/L铁氰化钾母液:称3.295g,用蒸馏水定容至200ml50mmol/l亚铁氰化钾母液:称4.224g ,用蒸馏水定容至200ml。

0.5mol/l EDTA母液(pH8.0):药品分子量100ml 500mlEDTA Na2 2H2O 372.24 18.6g 93.06g双蒸H2O 80ml 400ml用NaOH调PH至8.0 6g 10gDdH2O定容至100ml 500mlGUS检测液的配制:100mgGluc,先溶于1ml的DMF。

取80ml 50mmol/l的磷酸钠缓冲液(pH 7.0),加入1ml 50mmol/L铁氰化钾、1ml 50mmol/L亚铁氰化钾和2ml 0.5mol/l EDTA(PH 8.0),再加入已溶解的Gluc,再加20ml的甲醇,混匀。

MS培养基及常用试剂的配制

MS培养基及常用试剂的配制

一、MS培养基母液的配制注意:1.大量元素按照使用时高10倍的数值称取,分别将各种化合物称量后,除CaCl2·2H2O单独配制外,其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解,用玻璃棒搅拌促溶,倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,置小口瓶中保存,贴上标签注明化合物名称〔或编号〕,浓缩倍数,配制日期和配制者姓名,CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。

2.微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取,分别将各种化合物称量除铁盐〔FeSO4·7H2O和Na22O〕作为一组单独配制外,其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后,定容在1000ml容量瓶中,置小口瓶中保存,贴上标签。

3.铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na22O分别溶于450mlml,置于小口瓶中,贴上标签。

4.有机物母液配制,按母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量外,其余分别称量后,溶解,定容在500ml容量瓶中,置于小口瓶中保存,贴上标签。

5.母液最好在2~4℃的冰箱中贮存,特别是有机类物质,贮存时间不宜过长,无机盐母液最好在一个月内用完,如发现有霉菌和沉淀产生,就不能再使用。

1.制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的〔分析纯〕。

2.称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。

.生长调节剂母液配制:为了操作方便,节约时间,生长调节剂也可如同配制母液一样,先配成原液,这样配制培养基时只要稍加计算,按需要量取即可。

不同药品在配制时假设不溶于水,可用少量不同的溶剂先溶解,萘乙酸〔NAA〕,吲哚乙酸〔IAA〕,赤霉素〔GA3〕,2,4-D等生长素和玉米素〔ZT〕可先用少量95%酒精溶解,然后加水,如溶解不完全再加热。

冲动素〔KT〕和6-苄基嘌呤〔BA〕可溶于少量1mol/L的盐酸中,叶酸需用少量稀氨水溶解。

称取50mg生长调节物质,溶解后,在100ml的容量瓶中定容,配制的母液每毫升那么含有生长调节物质,配制后一般要求在低温〔0~4℃〕保存,配制培养基时如每升〔1000ml〕需添加的生长调节剂物质为时,那么取1ml母液即可。

实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制

实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制

养基 吸取 取量
/ml
KNO3
1900
38000


NH4NO3 1650 20 33000 1000 50
元 素
CaCl2 • 2H20
440
MgSO4 • 370
8800 7400
7H2O
KH2PO4
170可编辑ppt 3400
13
5.3.2 微量元素母液的配制
▪ MS培养基中的微量元素可由MnSO4 • 4H2O、ZnSO4 • 7H2O、H3BO3、KI、 Na2MoO4 • 2H2O、CuSO4 • 5H2O、CoCl2 • 6H2O几种无机盐来供应,它们也可配在 同一母液中(具体配制见下表)。配制步 骤同大量元素(混合时不要求先后顺序)。
5.3 MS 培养基母液的配制
▪ 母液的配制有两种方法:
▪ 一种是配制成单一化合物母液。此法适合 配制多种培养基都需要的同一种母液。
▪ 另一种是配成几种不同化合物的混合母液。 此法在大量配制同种培养基时省时省力。 由于MS 培养基较为常用,故配制MS 培养 基母液。
▪ 配好的母液应放在试剂瓶中贮存。
可编辑ppt
1
实验内容:
▪ 实验1-1 MS培养基母液和常用试剂的 配制
▪ 实验1-2 马铃薯试管苗快速繁殖培养基 的配制
▪ 实验1-3 马铃薯试管苗的快速繁殖
▪ 实验1-4 马铃薯试管薯的诱导
可编辑ppt
2
实验1-1 MS培养基母液 和常用试剂的配制
▪ 1 实验目的
▪ 通过本次实验,使学生能熟练准确配制MS 培养基母液和组培室常用的化学试剂,巩 固相关理论基础知识。
50
CuSO4 • 5H2O 0.025

植物生物学试验有关试剂配制

植物生物学试验有关试剂配制

组织培养实验有关试剂的配制:75%的酒精:75ml的95%的酒精加水定容至95ml。

0.2%的升汞溶液:称取HgCl2 20克,加蒸馏水至4000ml。

1N 盐酸:取8.25ml的浓盐酸,加蒸馏水定容至100ml。

1N NaOH:称8g NaOH,用蒸馏水定容至200ml。

0.1mg/ml的2,4-D溶液:取25mg的2,4-D,加入少量95%的酒精和1N的NaOH 溶解,再加蒸馏水定容至250ml。

0.1mg/ml 的6-BA溶液:取25mg的6-BA,用少量1N的盐酸溶解,再加蒸馏水定容至250ml。

遗传转化与GUS基因检测的试剂配制LB培养基的配制:将下列组分溶解在0.9L水中:1L10ml 的10mmol/l的AS(乙酰丁香酮)母液(100x)配制:称19.6mg的AS,先溶于少量甲醇中,然后慢慢加蒸馏水定容至10ml,过滤除菌,分装成200ul/管(每组1管),使用时将200ul的AS母液加入20ml的MS液体培养基中。

50mmol/l的磷酸钠缓冲液(pH 7.0):A液:取NaH2PO4.2H2O 3.12g溶于蒸馏水,定溶至100ml。

B液:取Na2HPO4.12H2O 7.17g溶于蒸馏水,定溶100ml。

取A 液39ml与B 液61ml混合,定容至400ml,调PH至7.0。

50mmol/L铁氰化钾母液:称3.295g,用蒸馏水定容至200ml50mmol/l亚铁氰化钾母液:称4.224g ,用蒸馏水定容至200ml。

0.5mol/l EDTA母液(pH8.0):药品分子量100ml 500mlEDTA Na2 2H2O 372.24 18.6g 93.06g双蒸H2O 80ml 400ml用NaOH调PH至8.0 6g 10gDdH2O定容至100ml 500mlGUS检测液的配制:100mgGluc,先溶于1ml的DMF。

取80ml 50mmol/l的磷酸钠缓冲液(pH 7.0),加入1ml 50mmol/L铁氰化钾、1ml 50mmol/L亚铁氰化钾和2ml 0.5mol/l EDTA(PH 8.0),再加入已溶解的Gluc,再加20ml的甲醇,混匀。

MS培养基的配制-母液法

MS培养基的配制-母液法
• 在过滤灭菌加入激素和抗生素等时,应避 免产生气泡,或尽快去除气泡
• 配好的培养基一般放置1-2条观察无菌落 后方可使用
• 配好的培养基在15-20℃存放,并尽快在 一个月内使用
组培室的卫生?
• 定期消毒,熏蒸 • 组培污染物的处理 • 污染的培养材料或培
养瓶,灭菌后洗涤 • 升汞等,回收后集中
灭菌温度与灭菌时间和培养基体积的关系
培养基的配制(母液法)
• 培养基配制过程 • /v_show/id_XMTE2Nzg
3MjA=.html • /player.php/sid/XM
TE2Nzg3MjA=/v.swf
0.025
25
铁盐
Na2-EDTA
37.3
3730
FeSO4˙4H2O
27.8
100
2780
1000
10
微生素等
Gly VB1 VB2 VB6 肌醇
2.0
100
0. 1
5
0.5
525
100
5000
母液的配制
• 以MS培养基为例,其母液如下: • MS大量组份(扩大20倍); • MS微量(扩大1000倍); • MS有机组分(扩大50倍); • MS铁盐(扩大100倍);
2,配制分工:
• 1.配制母液 • MS大量------第1组 • MS微量------第2组 • MS有机------第3组 • MS铁盐------第4组 • 6-BA母液(50mL;1mg/ml) ------第5组 • NAA母液(50mL;1mg/ml) ------第6组 • 2,4-D母液(50mL,1mg/,mL)---第7组 • 0.1% 溶液升汞,2000mL ---第8组 • 来苏尔液—1000MmL-----第9组 • 75%酒精 ------------1000mL---第10组

MS培养基的配制,灭菌等注意事项

MS培养基的配制,灭菌等注意事项

一、MS培养基母液注意:1.大量元素按照使用时高10倍的数值称取,分别将各种化合物称量后,除CaCl2·2H2O单独配制外,其余化合物混合在500ml 烧杯中加适量蒸馏水溶解,用玻璃棒搅拌促溶,倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,置小口瓶中保存,贴上标签注明化合物名称(或编号),浓缩倍数,配制日期和配制者姓名,CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。

2.微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取,分别将各种化合物称量除铁盐(FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外,其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后,定容在1000ml容量瓶中,置小口瓶中保存,贴上标签。

3.铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,调PH至5.5加水定容至1000ml,置于小口瓶中,贴上标签。

4.有机物母液配制,按母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量外,其余分别称量后,溶解,定容在500ml容量瓶中,置于小口瓶中保存,贴上标签。

5.母液最好在2~4℃的冰箱中贮存,特别是有机类物质,贮存时间不宜过长,无机盐母液最好在一个月内用完,如发现有霉菌和沉淀产生,就不能再使用。

1.制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的(分析纯)。

2.称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。

.生长调节剂母液配制:为了操作方便,节约时间,生长调节剂也可如同配制母液一样,先配成原液,这样配制培养基时只要稍加计算,按需要量取即可。

不同药品在配制时若不溶于水,可用少量不同的溶剂先溶解,萘乙酸(NAA),吲哚乙酸(IAA),赤霉素(GA3),2,4-D等生长素和玉米素(ZT)可先用少量95%酒精溶解,然后加水,如溶解不完全再加热。

实验一 MS培养基母液的配制与保存

实验一   MS培养基母液的配制与保存

实验一MS培养基母液的配制与保存一、目的要求1、通过MS培养基母液的配制,掌握配制培养基母液的基本技能;2、掌握培养基各种母液的保存方法。

二、仪器与用具1、仪器:各类天平、磁力搅拌器、冰箱;2、用具:烧杯、量筒、玻璃棒、试剂瓶、标签;3、试剂:95%酒精,0. 1 -1N NaOH,0.1-1N HCl,配制MS培养基所需的各种无机物、有机物,蒸馏水。

三、方法步骤(一)母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液,一般配成比所需浓度高10—100倍。

优点:(1)保证各物质成分的准确性;(2)便于配置时快速移取;(3)便于低温保藏。

1、MS大量元素母液(10×)称10升量溶解在1升蒸馏水中。

配1升培养基取母液100ml。

化学药品1升量10升量(10×)50升量(50×)①NH4NO31650 mg 16.5g②KNO31900 mg 19.0g③CaCl2·2H2O (CaCl2)440 mg () 4.4g④MgSO4·7H2O(MgSO4)370 mg () 3.7g⑤KH2PO4170 mg 1.7g2、MS微量元素母液(100×)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。

配1升培养基取母液10ml。

化学药品1升量10升量100升量(100×)①MnSO4·4H2O(MnSO4·H2O)22.3mg(21.4 mg)223mg(214 mg)②ZnSO4·7H2O8.6 mg 86mg③H3BO3 6.2 mg 62 mg④KI 0.83 mg 8.3 mg⑤Na2MoO4·2H2O0.25 mg 2.5mg⑥CuSO4·5H2O0.025 mg 0.25mg⑦CoCl2·6H2O0.025mg 0.25mg注意:CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量(0.25 mg×10=2.5 mg)或100倍量(25 mg)称取后,定容于100ml水中,每次取10ml或1ml,即含0.25 mg的量。

ms基本培养基母液的配制方法

ms基本培养基母液的配制方法

ms基本培养基母液的配制方法一、准备所需材料1. 酸性植物激素溶液:包括吲哚乙酸(IAA)、纯度较高的激素(如6-苄基腺嘌呤,BA)等。

2. 碱性植物激素溶液:如生长素(GA3)等。

3. 无机盐溶液:包括硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸钾、硼酸、锌硫酸、硼酸等。

4. 维生素溶液:如次黄嘌呤核苷酸(NAA)等。

5. 蔗糖溶液:用于提供能量和碳源。

6. 琼脂:用于凝固培养基。

二、配制步骤1. 称取适量的无机盐溶液成分,按照MS基本培养基的配方比例将各种盐溶解在蒸馏水中,常用的浓度为1/2或1/4的MS培养基。

2. 将酸性植物激素溶液和碱性植物激素溶液分别加入到溶液中,注意控制激素的浓度。

3. 加入维生素溶液,按照配方比例加入到溶液中。

4. 加入适量的蔗糖溶液,用来提供能量和碳源。

5. 最后将琼脂加入到溶液中,搅拌均匀。

6. 调节溶液的pH值,通常为5.8左右。

7. 用蒸馏水补充溶液至总体积,并充分搅拌均匀。

8. 将配制好的培养基溶液进行高温高压灭菌处理,一般条件下为121摄氏度,压力为0.1MPa,持续20分钟。

三、注意事项1. 在配制过程中,要保持实验室卫生,使用无菌操作。

2. 使用高质量的试剂和蒸馏水,避免杂质的干扰。

3. 激素的浓度要根据实验需要进行调整。

4. 配制过程中要注意酸碱度的调节,尽量控制在5.8左右。

5. 琼脂的加入要充分搅拌均匀,避免结块。

6. 灭菌处理要按照规定的条件进行,确保培养基的无菌性。

通过以上步骤,我们可以成功地配制出MS基本培养基的母液。

这种培养基在植物组织培养、植物细胞和胚胎发生研究中起着重要的作用。

根据实验的需要,可以在母液的基础上进一步调整培养基的成分和浓度,以满足不同植物材料的培养要求。

希望以上内容对您有所帮助。

实验一 培养基母液和培养基的配制

实验一 培养基母液和培养基的配制

实验一 MS培养基母液和培养基的配制一、目的要求1、通过MS培养基母液的配制,掌握配制培养基母液的基本技能;2、通过MS培养基的配制、分装和灭菌,掌握配制培养基的基本技能;3、掌握培养基各种母液的保存方法。

二、仪器与用具1、仪器:电子分析天平、磁力搅拌器、冰箱、高压灭菌锅2、用具:三角瓶、烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签、移液管、记号笔、注射器、封口塑料、电磁炉、酸度计3、试剂:95%酒精,0.5mol ∕L NaOH,0.5mol∕ L HCL,配制MS培养基所需的各种无机物、有机物,蒸馏水,琼脂,蔗糖三、方法步骤(一)培养基母液的配制(MS培养基)配制培养基前先要配制母液。

母液分大量元素、微量元素、铁盐及有机物质四类。

MS培养基母液配制(单位:mg)分别称取10倍用量的各种大量无机盐,依次溶解于大约800mL热的(60~80℃)蒸馏水中。

(一种成分完全溶解后再加入下一种,最后加水,定容至1000mL后装入试剂瓶中,存放冰箱内备用。

)2. 微量元素母液(100倍液)分别称取100倍用量的微量无机盐,依次溶解于800mL重蒸水中,加水定容到1000mL。

3. 铁盐母液(100倍液)称取100倍用量的Na2-EDTA(乙二胺四乙酸钠)和FeSO4·7H2O,溶于800mL重蒸水中,最后定溶到1000mL。

4. 钙盐母液(10倍): 称取10倍用量的CaCl2·2H2O溶于80mL重蒸水中,最后定溶到100mL。

5. 有机物质母液(50倍液)分别称取50倍用量的各种有机物质,依次溶解于400mL重蒸水中,定容至500mL装入棕色试剂瓶中,存放在冰箱中备用。

6. 生长素如2,4-D、IAA、NAA等。

准确称取20mg,先用2mL95%乙醇溶解,然后加水,定容至20mL,浓度为1mg/mL,放在冰箱内备用。

6.细胞分裂素如激动素(Kt)、6-BA.准确称取20mg,先用2mL的1mol/L的NaOH或HCl溶解,然后加水,定容至20mL,浓度为1mg/mL,再放置冰箱内备用。

(完整word版)MS母液的配制与保存

(完整word版)MS母液的配制与保存

MS母液的配制与保存一、目的要求:通过MS培养基母液的配制,掌握配制与保存培养基母液的基本技能。

二、设备用品:1、设备:百分之一天平,万分之一天平,电磁炉,家用冰箱2、用品:称量纸(大小都要),玻璃烧杯250ml,容量瓶500ml和250ml,广口瓶500ml250ml,标签纸,洗瓶,药匙,玻璃棒,搪瓷杯,纯水,95%酒精,纸巾,笔。

三、方法步骤计算方式:称取量=规定量×浓缩倍数×母液体积1、MS1大量元素母液配制(0.5L)化合物原配方量扩大倍数称取量母液体积NH4NO3 1650mg/L 20倍16.5g0。

5LKNO3 1900mg/L 20倍19g0。

5LMgSO4。

7H2O 370mg/L 20倍3。

7g0。

5LKH2PO4 170mg/L 20倍 1.7g0.5LCaCl2。

2H2O 440mg/L 20倍 4.4g0,5L配制方法:用百分之一天平称取NH4NO316。

5g,KNO319g,MgSO4.7H2O3。

7g,KH2PO41。

7g;将纯水装入搪瓷杯中放到电磁炉上加热,把药品分别放入玻璃烧杯中加热水玻璃棒搅拌至药品完全溶解,用玻璃棒引流的方式将溶解完的药品倒入容量瓶中,用洗瓶清洗3次玻璃烧杯,以免药品残留。

用此方式分别将药品溶解然后引流至容量瓶中,最后将容量瓶定溶至500ml刻度线,待冷却后倒入广口瓶中放置冰箱内保存。

注意:CaCl2.2H2O是放热性药品所以单独配制,称取药品4。

4g放入玻璃烧杯中用冷水将药品溶解,用同样的方法将CaCl2。

2H2O定溶,待冷却后倒入广口瓶中放置冰箱内保存.在MS母液瓶上贴标签,注明母液名称,浓缩倍数,配制日期,配制人以及吸取量。

2、MS2微量元素母液的配制(0.25L)化合物原配方量扩大倍数称取量母液体积H3BO36。

2mg/L200倍0.31g0.25LMnSO4. 4H2O22.3mg/L200倍1。

115g0。

25LZnSO4. 7H2O 8。

MS培养基及常用试剂的配制

MS培养基及常用试剂的配制

一、MS培养基母液的配制注意:1.大量元素按照使用时高10倍的数值称取,分别将各种化合物称量后,除CaCl2·2H2O单独配制外,其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解,用玻璃棒搅拌促溶,倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,置小口瓶中保存,贴上标签注明化合物名称(或编号),浓缩倍数,配制日期和配制者姓名,CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。

2.微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取,分别将各种化合物称量除铁盐(FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外,其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后,定容在1000ml容量瓶中,置小口瓶中保存,贴上标签。

3.铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中,加热,不断搅拌,溶解后,两液混合,调PH至5.5加水定容至1000ml,置于小口瓶中,贴上标签。

4.有机物母液配制,按母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量外,其余分别称量后,溶解,定容在500ml容量瓶中,置于小口瓶中保存,贴上标签。

5.母液最好在2~4℃的冰箱中贮存,特别是有机类物质,贮存时间不宜过长,无机盐母液最好在一个月内用完,如发现有霉菌和沉淀产生,就不能再使用。

1.制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的(分析纯)。

2.称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。

.生长调节剂母液配制:为了操作方便,节约时间,生长调节剂也可如同配制母液一样,先配成原液,这样配制培养基时只要稍加计算,按需要量取即可。

不同药品在配制时若不溶于水,可用少量不同的溶剂先溶解,萘乙酸(NAA),吲哚乙酸(IAA),赤霉素(GA3),2,4-D等生长素和玉米素(ZT)可先用少量95%酒精溶解,然后加水,如溶解不完全再加热。

激动素(KT)和6-苄基嘌呤(BA)可溶于少量1mol/L的盐酸中,叶酸需用少量稀氨水溶解。

MS培养基母液的配制与保存

MS培养基母液的配制与保存

MS培养基母液的配制与保存方法步骤(一)母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液,一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。

优点:(1)保证各物质成分的准确性。

(2)便于配置时快速移取。

(3)便于低温保藏。

1、MS大量元素母液(10X)称如下药品,溶解在1升蒸馏水中。

化学药品①NH4NO3硝酸铵16.5g②KNO3硝酸钾19.0g③CaCl2·2H2O两水合氯化钙4.4g④MgSO4·7H2O七水合硫酸镁3.7g⑤KH2PO4磷酸二氢钾1.7g 2、MS微量元素母液(100X)称如下药品,溶解在100ml蒸馏水中。

化学药品①MnSO4·4H2O(MnSO4·H2O)四水合硫酸锰(一水合硫酸锰)223mg(214mg)②ZnSO4·7H2O七水合硫酸锌86mg③CoCl2·6H2O六水合氯化钴0.25mg④CuSO4·5H2O五水合硫酸铜0.25mg⑤Na2MoO4·2H2O两水合钼酸钠2.5mg⑥KI 碘化钾8.3 mg⑦H3BO3硼酸62 mg3、MS铁盐母液(100X)称如下药品,溶解在100ml蒸馏水中。

化学药品Na2·EDTA乙二胺四乙酸二钠373 mgFeSO4·7H2O七水合硫酸亚铁278 mg注意配制时,应将两种成分分别溶解在少量蒸馏水中,其中EDTA盐较难完全溶解,可适当加热。

混合时,先取一种置容量瓶(烧杯)中,然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡,至产生深黄色溶液,最后定容,保存在棕色试剂瓶中。

4、MS有机物母液(100X)称如下药品,溶解在100ml蒸馏水中。

化学药品①烟酸 5 mg②盐酸吡哆素(VB6) 5 mg③盐酸硫胺素(VB1) 1 mg④肌醇1000 g (1 g)⑤甘氨酸20 mg5、生长调节剂配成1 mg/ml 。

各100 ml。

6-苄基嘌呤(6-BA)用0.5 N的HCl加热溶解。

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实验1 胡萝卜愈伤组织的诱导培养 实验内容:
1-1 MS培养基母液和常用试剂的配制
1-2 胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配制
1-3 胡萝卜愈伤组织的诱导
1-4 胡萝卜愈伤组织继代培养基的配制
1-5 胡萝卜愈伤组织的继代培养
实验1-1 MS培养基母液 和常用试剂的配制
1 实验目的
ZnSO4 • 7H2O H3BO3
1000
5
CoCl2 • 6H2O
0.025
5
5.3.3 有机成分母液的配制
MS培养基中所需的维生素和氨基酸等有机 成分母液应分别单独配制(具体配制见下 表)。配制的步骤为:确定母液的浓度和 体积→计算各种化合物用量→称量→溶解 →定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保存。
母 液 种 类
成 分 MnSO4 • H2O
规定 用量 /mg• L-1
16.9 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025
浓 称取 缩 量/mg 倍 数
3380 1720 1240 200 166 50 5
母液 定容 体积 /ml
配1L 培养 基吸 取量 /ml
微 量 KI 元 素 Na2MoO4 • 2H2O CuSO4 • 5H2O
注意: CaCl2 • 2H2O最后加入
母 液 种 类
浓 缩 倍 数
成 分
规定 称取 用量 量/mg /mg• L-1
母液 定容 体积 /ml
配1L MS培 养基 吸取 取量 /ml
KNO3
Hale Waihona Puke 1900 3800050
大 NH4NO3 1650 33000 量 20 1000 元 CaCl2 • 2H2O 440 8800 素 MgSO4 • 7H2O 370 7400 KH2PO4 170 3400
5000
5.3.4 铁盐母液的配制
铁盐母液宜单独配制,其配制步骤为:
确定母液的浓度和体积→计算各种化合物 用量→称量→分别溶解→混合→煮沸数分 钟→调节pH值至5.8 →定容→装瓶(棕色) →贴标签→放入冰箱保存。 用时每配l L培养基取该溶液5ml。
母 液 种 类
成 分
规定 用量 /mg• L-1
通过本次实验,使学生能熟练准确配制MS 培养基母液和组培室常用的化学试剂,巩 固相关理论基础知识。
2 实验原理
培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生 存的营养基质。配制培养基时,为了减少 试剂称取时的工作量和少量称取时出现的 误差,以及避免多种营养成分混合导致沉 淀产生或相互反应而失去培养效果,预先 要将各种营养成分配制为一定倍数的培养 基母液,待使用时稀释到要求的浓度。母 液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50 倍、100倍等或更高。
如果没有培养基干粉,则可采用以下两种 方法来配制: 一个是按照配方规定的数量分别称量出各 种成分,分别使它们溶解于水,然后再将 它们混合在一起。 另一个是先配制一系列的浓缩贮备液(母 液),贮存在2~4℃冰箱内,待配培养基 时取出,按比例稀释配用。此法较为常用。
5.3 MS 培养基母液的配制
配制好的各种母液应分别贴上标签,写明 母液名称、配制倍数、配制者、配制日期。 母液最好在2~4℃的冰箱中保存。尤其对 生长调节物质与有机类物质要求较严。 贮存时间不宜过长,如发现有霉菌和沉淀 结晶产生,就不能再使用。
注意事项:
(1)玻璃器皿的洗涤
(2)天平的使用 (3)配制大量元素母液时溶液的混合顺序 (4)铁盐的配制 (5)洗液的配制 (6)生长调节物质的配制
作业:
待本实验全部完成后撰写综合性实验报告。 报告空表自己到教务处网站下载。本次要 求详细写出MS培养基母液和常用试剂的配 制流程。
5.3.2 微量元素母液的配制
MS培养基中的微量元素可由MnSO4 • 4H2O、ZnSO4 • 7H2O、H3BO3、KI、 Na2MoO4 • 2H2O、CuSO4 • 5H2O、CoCl2 • 6H2O几种无机盐来供应,它们也可配在 同一母液中(具体配制见下表)。配制步 骤同大量元素(混合时不要求先后顺序)。
2,4-D/NAA用少量95%酒精溶解,再加水定 容;6-BA/KT应先溶于少量1 mol·L-1的HCl 中,再加水定容。 具体配制见下表:
母液 种类 生长素
成分
母液定 母液浓 称取量 容体积 度 (mg ) (ml ) (mg/ml)
2,4-D NAA
50 50 10
10
100 100 100
浓 缩 倍 数
称 取 量 /mg 3730
母液 定容 体积 /ml
配1L MS培 养基 吸取 量 /ml
铁 Na2EDTA • 2H2O 盐 FeSO4 • 7H2O
37.3
27.8
200
2780
500
5
5.3.5 植物生长调节物质母液的配制
对于植物生长调节物质,配制成母液时, 通常用mg·ml-1或 ppm 较为方便,一般配 制成0.1-1mg·ml-1的母液,这样的浓度便 于计算也可避免冷藏时形成结晶。
3 主要实验用具和仪器
冰箱、普通天平、分析天平、各种型号的 试剂瓶(棕色和白色)、移液管、量筒、 烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、 玻棒、标签纸、pH试纸(pH5.4~7.0), 电磁炉、电热恒温干燥箱等。
4 药品和试剂
硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸 二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸 钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、 硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡 哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙 酸)、NAA(α -萘乙酸)、 6-BA ( 6-苄 基腺嘌呤)、 KT、浓盐酸、氢氧化钠、浓 硫酸、重铬酸钾、95%酒精、蒸馏水等。
MS培养基中的9种大量元素除C、H、O外, 剩下的六种可由KNO3、NH4NO3、CaCl2 • 2H2O、MgSO4 • 7H2O、KH2PO4几种无机 盐来供应,它们可配在同一母液中(具体 配制见下表)。配制的步骤为:确定母液 的浓度和体积→计算各种化合物用量→称 量→分别溶解→混合→定容→装瓶→贴标 签→放入冰箱保存。
5 MS培养基母液和 常用试剂的配制流程
5.1培养基的成分
目前,不论液体培养还是固体培养,大多 数植物组织培养中所用的培养基都是由无 机营养物、碳源、维生素、生长调节物质 和有机附加物等几大类物质组成。
5.2 培养基的配制方法
配制培养基的最简单的方法是用市售培养 基干粉溶解在蒸馏水里,加上蔗糖、琼脂 和其他必要的补加物,再加入蒸馏水使之 达到最终的容积。最后调节pH值,高压灭 菌,于是制成所需要的培养基。
亦可配制成混合母液(不主张采用)。
母 液 种 类
成 分
规定 用量 /mg• L-1 2.0 0.1
0.5 0.5
浓 缩 倍 数
称 取 量 /mg 100 5
25 25
母液 配1L 定容 MS培 体积 养基 /ml 吸取 量/ml
甘氨酸
有 机 成 分
盐酸硫胺素
盐酸吡哆素 烟酸
200
250
5
肌醇
100
100
0.5 0.5 0.1
0.1
细胞分 裂素
6-BA
KT
5.3.6 其它常用试剂的配制
盐酸(lmol· L-1 ):用浓度36.5%、密度 1.19g/cm3的浓盐酸配制
氢氧化钠(lmol· L-1 ):用固体氢氧化钠配 制 75%酒精(v/v) :用95%的酒精来配制
稀铬酸洗涤液:重铬酸钾50 g溶于1000 ml 蒸馏水中,冷却后缓慢加入工业用硫酸90 ml。
母液的配制有两种方法:
一种是配制成单一化合物母液。此法适合 配制多种培养基都需要的同一种母液。
另一种是配成几种不同化合物的混合母液。 此法在大量配制同种培养基时省时省力。 由于MS 培养基较为常用,故配制MS 培养 基母液。
配好的母液应放在试剂瓶中贮存。
在配制MS培养基母液时,为减少工作量可 以把几种药品(如培养基中的大量元素或 微量元素)配在同一母液中,但应注意各 种化合物的组合以及加入的先后顺序,以 免发生沉淀。
通常把每种试剂单独溶解后再与别的也已 完全溶解的药品混合,或者待前一种化合 物完全溶解后再加入后一种化合物。混合 已溶解的各种矿质盐时还应注意先后顺序, 力求把Ca2+与SO42- 和PO43-错开,以免形 成硫酸钙或磷酸钙的不溶物。同时,要慢 慢地混合,边混合边搅拌。
5.3.1 大量元素母液的配制
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