实验1-1 MS培养基母液和常用试剂的配制

实验1 胡萝卜愈伤组织的诱导培养 实验内容：
1-1 MS培养基母液和常用试剂的配制
1-2 胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配制
1-3 胡萝卜愈伤组织的诱导
1-4 胡萝卜愈伤组织继代培养基的配制
1-5 胡萝卜愈伤组织的继代培养
实验1-1 MS培养基母液 和常用试剂的配制
1 实验目的
ZnSO4 • 7H2O H3BO3
1000
5
CoCl2 • 6H2O
0.025
5
5.3.3 有机成分母液的配制
MS培养基中所需的维生素和氨基酸等有机 成分母液应分别单独配制（具体配制见下 表）。配制的步骤为：确定母液的浓度和 体积→计算各种化合物用量→称量→溶解 →定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保存。
母 液 种 类
成 分 MnSO4 • H2O
规定 用量 /mg• L-1
16.9 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025
浓 称取 缩 量/mg 倍 数
3380 1720 1240 200 166 50 5
母液 定容 体积 /ml
配1L 培养 基吸 取量 /ml
微 量 KI 元 素 Na2MoO4 • 2H2O CuSO4 • 5H2O
注意： CaCl2 • 2H2O最后加入
母 液 种 类
浓 缩 倍 数
成 分
规定 称取 用量 量/mg /mg• L-1
母液 定容 体积 /ml
配1L MS培 养基 吸取 取量 /ml
KNO3
Hale Waihona Puke 1900 3800050
大 NH4NO3 1650 33000 量 20 1000 元 CaCl2 • 2H2O 440 8800 素 MgSO4 • 7H2O 370 7400 KH2PO4 170 3400
5000
5.3.4 铁盐母液的配制
铁盐母液宜单独配制，其配制步骤为：
确定母液的浓度和体积→计算各种化合物 用量→称量→分别溶解→混合→煮沸数分 钟→调节pH值至5.8 →定容→装瓶（棕色） →贴标签→放入冰箱保存。 用时每配l L培养基取该溶液5ml。
母 液 种 类
成 分
规定 用量 /mg• L-1
通过本次实验，使学生能熟练准确配制MS 培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩 固相关理论基础知识。
2 实验原理
培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生 存的营养基质。配制培养基时，为了减少 试剂称取时的工作量和少量称取时出现的 误差，以及避免多种营养成分混合导致沉 淀产生或相互反应而失去培养效果，预先 要将各种营养成分配制为一定倍数的培养 基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母 液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50 倍、100倍等或更高。
如果没有培养基干粉，则可采用以下两种 方法来配制： 一个是按照配方规定的数量分别称量出各 种成分，分别使它们溶解于水，然后再将 它们混合在一起。 另一个是先配制一系列的浓缩贮备液（母 液），贮存在2～4℃冰箱内，待配培养基 时取出，按比例稀释配用。此法较为常用。
5.3 MS 培养基母液的配制
配制好的各种母液应分别贴上标签，写明 母液名称、配制倍数、配制者、配制日期。 母液最好在2～4℃的冰箱中保存。尤其对 生长调节物质与有机类物质要求较严。 贮存时间不宜过长，如发现有霉菌和沉淀 结晶产生，就不能再使用。
注意事项：
（1）玻璃器皿的洗涤
（2）天平的使用 （3）配制大量元素母液时溶液的混合顺序 （4）铁盐的配制 （5）洗液的配制 （6）生长调节物质的配制
作业：
待本实验全部完成后撰写综合性实验报告。 报告空表自己到教务处网站下载。本次要 求详细写出MS培养基母液和常用试剂的配 制流程。
5.3.2 微量元素母液的配制
MS培养基中的微量元素可由MnSO4 • 4H2O、ZnSO4 • 7H2O、H3BO3、KI、 Na2MoO4 • 2H2O、CuSO4 • 5H2O、CoCl2 • 6H2O几种无机盐来供应，它们也可配在 同一母液中（具体配制见下表）。配制步 骤同大量元素（混合时不要求先后顺序）。
2,4-D/NAA用少量95％酒精溶解，再加水定 容；6-BA/KT应先溶于少量1 mol·L-1的HCl 中，再加水定容。 具体配制见下表：
母液 种类 生长素
成分
母液定 母液浓 称取量 容体积 度 (mg ) (ml ) (mg/ml)
2,4-D NAA
50 50 10
10
100 100 100
浓 缩 倍 数
称 取 量 /mg 3730
母液 定容 体积 /ml
配1L MS培 养基 吸取 量 /ml
铁 Na2EDTA • 2H2O 盐 FeSO4 • 7H2O
37.3
27.8
200
2780
500
5
5.3.5 植物生长调节物质母液的配制
对于植物生长调节物质，配制成母液时， 通常用mg·ml-1或 ppm 较为方便，一般配 制成0.1-1mg·ml-1的母液，这样的浓度便 于计算也可避免冷藏时形成结晶。
3 主要实验用具和仪器
冰箱、普通天平、分析天平、各种型号的 试剂瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、 烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、 玻棒、标签纸、pH试纸（pH5.4~7.0）， 电磁炉、电热恒温干燥箱等。
4 药品和试剂
硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸 二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸 钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、 硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡 哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙 酸)、NAA（α -萘乙酸）、 6-BA （ 6-苄 基腺嘌呤）、 KT、浓盐酸、氢氧化钠、浓 硫酸、重铬酸钾、95%酒精、蒸馏水等。
MS培养基中的9种大量元素除C、H、O外， 剩下的六种可由KNO3、NH4NO3、CaCl2 • 2H2O、MgSO4 • 7H2O、KH2PO4几种无机 盐来供应，它们可配在同一母液中（具体 配制见下表）。配制的步骤为：确定母液 的浓度和体积→计算各种化合物用量→称 量→分别溶解→混合→定容→装瓶→贴标 签→放入冰箱保存。
5 MS培养基母液和 常用试剂的配制流程
5.1培养基的成分
目前，不论液体培养还是固体培养，大多 数植物组织培养中所用的培养基都是由无 机营养物、碳源、维生素、生长调节物质 和有机附加物等几大类物质组成。
5.2 培养基的配制方法
配制培养基的最简单的方法是用市售培养 基干粉溶解在蒸馏水里，加上蔗糖、琼脂 和其他必要的补加物，再加入蒸馏水使之 达到最终的容积。最后调节pH值，高压灭 菌，于是制成所需要的培养基。
亦可配制成混合母液（不主张采用）。
母 液 种 类
成 分
规定 用量 /mg• L-1 2.0 0.1
0.5 0.5
浓 缩 倍 数
称 取 量 /mg 100 5
25 25
母液 配1L 定容 MS培 体积 养基 /ml 吸取 量/ml
甘氨酸
有 机 成 分
盐酸硫胺素
盐酸吡哆素 烟酸
200
250
5
肌醇
100
100
0.5 0.5 0.1
0.1
细胞分 裂素
6-BA
KT
5.3.6 其它常用试剂的配制
盐酸（lmol· L-1 ）：用浓度36.5%、密度 1.19g/cm3的浓盐酸配制
氢氧化钠（lmol· L-1 ）：用固体氢氧化钠配 制 75%酒精(v/v) ：用95%的酒精来配制
稀铬酸洗涤液：重铬酸钾50 g溶于1000 ml 蒸馏水中，冷却后缓慢加入工业用硫酸90 ml。
母液的配制有两种方法：
一种是配制成单一化合物母液。此法适合 配制多种培养基都需要的同一种母液。
另一种是配成几种不同化合物的混合母液。 此法在大量配制同种培养基时省时省力。 由于MS 培养基较为常用，故配制MS 培养 基母液。
配好的母液应放在试剂瓶中贮存。
在配制MS培养基母液时，为减少工作量可 以把几种药品（如培养基中的大量元素或 微量元素）配在同一母液中，但应注意各 种化合物的组合以及加入的先后顺序，以 免发生沉淀。
通常把每种试剂单独溶解后再与别的也已 完全溶解的药品混合，或者待前一种化合 物完全溶解后再加入后一种化合物。混合 已溶解的各种矿质盐时还应注意先后顺序， 力求把Ca2+与SO42- 和PO43-错开，以免形 成硫酸钙或磷酸钙的不溶物。同时，要慢 慢地混合，边混合边搅拌。
5.3.1 大量元素母液的配制