地贫筛查中血红蛋白电泳教学
血红蛋白电泳在地中海贫血筛查中的应用及价值分析
血红蛋白电泳在地中海贫血筛查中的应用及价值分析地中海贫血一直是现阶段困扰着孕妇妈妈的问题。
地中海贫血的又被称为“海洋性贫血”及“珠蛋白合成障碍性贫血”，是一种非常常见的遗传性血红蛋白型疾病。
简单而言，就是患者体内血液红细胞中血红蛋白的产生量出现了明显的不足，导致了组织细胞携氧量的缺乏，身体各个部分器官及组织的功能也都受到了很明显的影响。
而血红蛋白电泳可以有效的进行地中海贫血的筛查工作。
具体的情况就让我们一同来看看。
血红蛋白电泳血红蛋白是人体内部负责运输氧气的蛋白质，同时也是人体红细胞的主要组成物质。
血红蛋白病是一种由珠蛋白肽链结构异常或合成肽链速率发生变化而产生的，可引发血红蛋白功能失效的常见类疾病。
日常我们所能见到的血红蛋白病有地中海贫血、血镰状细胞贫血、高铁血红蛋白血症、不稳定血红蛋白病等等。
这种疾病的诊断常常需要依赖实验室进行检测，因此血红蛋白电泳的应用就是现阶段最为有效也最为常见的手段，是确诊地中海贫血问题的重要方式。
地中海贫血病因及临床表现地中海贫血的分子结构通常是由基因所决定的。
因此它也是一种遗传性的贫血疾病。
而根据珠蛋白链缺乏种类的不同，可以将其分为α型、β型、δβ型和δ型四种，其中以α型、β型较为常见。
当γ、δ、ε和β珠蛋白基因可以构成“β基因族”，ζ和α珠蛋白则可以构成“α基因族”。
正常人的父母双方会各自继承2个α珠蛋白基因，从而合成足够的α珠蛋白链。
但当珠蛋白基因发生缺失或是突变后，肽链就出现合成型障碍最终导致发病。
α珠蛋白生成障碍性贫血，大部分α珠蛋白生成障碍性贫血都是由α珠蛋白基因缺失所导致的，少数因基因点突变所导致。
而β珠蛋白生成障碍性贫血的发生概率比较复杂，现阶段已有100种以上的β基因发生突变，其中以基因的点突变为主，少数会因基因缺失引发。
地中海贫血临床表现：根据病情轻重不同临床表现可分为以下几种，其一是重型，在患儿出生后数日内就出现了贫血情况，并且随着时间的变化，肝脾肿大的情况也会出现加重的可能性，黄疸出现的概率增大，并且患者会表现出发育不良，最为明显的就是头大、眼距增宽，马鞍鼻、前额突出、两颊突出等，同时也还会出现臀状头，长骨可发生骨折等。
生化检验辅导：血红蛋白电泳
血红蛋白电泳
珠蛋白生成障碍性贫血是世界上最常见和发病率最高的一种单基因遗传病，常见有两类，即α和β海洋性贫血(以往称地中海贫血)，是由于基因突变引起存在于红细胞内的几种血红蛋白(Hb)合成异常。
此项化验可用于检验异常Hb，进一步诊断一些相关疾病。
参考值
HbA：96％-98％
HbA2：1％--3％
HbF：1％～2％
临床意义
(1)HbA2增高是轻型β—海洋性贫血最重要的诊断依据；
(2)HbS病、β链异常的不稳定Hb病及某些巨幼细胞性贫血患者HbA2也可增高；
(3)缺铁性贫血时，HbA2常降低，可与轻型β—海洋性贫血鉴别；
(4)正常人Hb电泳后，一般只见两条区带(HbA和HbA2)，若出现新的区带，则可能为异常Hb，应进一步检查。
要求
用肝素或EDTA抗凝血。
血红蛋白电泳实验报告
实验汇报实验名称：血红蛋白电泳项目名称：两种碱性血红蛋白样品处理方法的电泳结果实验时间：2018年9月17日实验室：龙泉驿区妇幼保健院检验科实验人员：杨松报告单位：成都温伦科技有限公司一、实验目的：1、掌握生理盐水处理血红蛋白样品的方法2、掌握四氯化碳处理血红蛋白样品的方法3、掌握电泳仪实验的操作4、分析两种碱性血红蛋白样品处理方法电泳结果的不同二、实验原理：血红蛋白电泳就是利用在电场的作用下, 由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小, 形状等性质的差异, 使带电分子产生不同的迁移速度, 从而对样品进行分离, 鉴定或提纯的技术，在临床检验中, 主要用于分离各类蛋白分子。
三、实验方法：琼脂糖电泳法四、实验器械：样品：10个EDTA抗凝管抽取的病人全血样品试剂：0.9%生理盐水500ml，四氯化碳500ml，界面液250ml，美国Helena Spife3000血红蛋白电泳检测试剂盒器材：移液枪，一次性移液枪头若干，EDTA抗凝管10个，玻璃试管10个设备：美国Helena Spife3000 全自动电泳仪五、实验步骤：1、取得医院检验科EDTA抗凝管抽取的病人全血样品10个，编号为1，2,3......10。
2、将1-10号十个个样品分别用移液枪取200ul到玻璃试管中，编号为1-1,2-1,3-1,.....10-1。
3、将1-10号10个样品进行生理盐水前处理，处理方法如下：-用0.9%生理盐水混匀，3500 rpm离心10分钟.-吸走弃去清液。
-以上步骤连续进行三次。
-完全吸走弃去上清液。
-20ul制作后的样本+80ul溶血素，混匀。
-取溶血后的样本17ul加入样品孔。
4、将1-1到10-1号10个样品进行四氯化碳前处理，处理方法如下：-用0.9%生理盐水溶液5000μL与样品混合。
-3000rpm离心5分钟。
-弃去上清液，只留下红细胞。
-加入200ul 蒸馏水溶解红细胞。
-加入300ul 的四氯化碳，混合均匀，3000rpm离心5分钟。
血红蛋白电泳操作规程
血红蛋白电泳操作规程一．项目名称血红蛋白电泳（HYDRAGEL HEMOGLOBIN）二．检验方法名称琼脂糖凝胶区带电泳三．方法学原理血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。
氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同，这还与pH、电泳缓冲液的离子强度等有关。
血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。
血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。
实验使用洗涤过红细胞的溶血液来进行，在碱性的凝胶片上进行电泳来分离血红蛋白，分离出来的片段通过氨基黑染色剂来显色，烘干后的凝胶片就可以用来解释结果了。
四．方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
五．仪器（一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)（二）分析和计算参数：1．处理量：约45个样本/小时2．所需样本量：10ul3．检验时间：约半小时4．重复性：有良好的批内和批间重复性5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）电流0－500mA功率0－100W六．试剂及配套品（一）试剂1．HYDRAGEL 7 HEMOGLOBIN（E）试剂盒HYDRAGEL 15 HEMOGLOBIN（E）试剂盒（1）商标：SEBIA（2）包装规格：70测试/150测试（3）货号：PN4106/ PN41262．脱色液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×100ml（3）货号：PN4540(4) 成分：柠檬酸3．洗涤液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×80ml（3）货号：PN4541（4）成分：叠氮钠4．生理盐水（二）配套品血红蛋白质控（1）商标：SEBIA(2) 包装规格：Pack for 1×1ml(3) 货号：PN4791七．操作步骤㈠开机，启动电泳仪。
血红蛋白电泳解读
血红蛋白电泳解读？
答：血红蛋白电泳是一种常用的检测方法，主要用于诊断血红蛋白病，尤其是地中海贫血。
这种方法能够定量检测血红蛋白A（HbA）、血红蛋白F（HbF）、血红蛋白A₂（HbA ₂）的含量，有助于对地中海贫血进行初步分类，并筛查出各种异常血红蛋白。
血红蛋白电泳结果的解读主要依赖于各种血红蛋白的含量。
正常情况下，血红蛋白A是主要的血红蛋白，一般占95%以上；血红蛋白A2占血红蛋白的2%左右；而血红蛋白F主要用于胎儿，其含量在出生后逐渐降低。
如果血红蛋白A2或血红蛋白F的含量出现异常，可能提示患有某种血红蛋白病。
例如，如果血红蛋白A2的含量增高，可能是地中海贫血的重要标志，特别是β地中海贫血。
此外，如果血红蛋白F 的含量异常增高，可能提示患有α地中海贫血或其他血红蛋白病。
然而，血红蛋白电泳只能提供初步的诊断信息，对于确诊还需要进行进一步的基因诊断和遗传咨询。
同时，血红蛋白电泳的结果也可能受到一些因素的影响，如年龄、性别、生理状态等，因此在解读结果时需要综合考虑。
血红蛋白电泳实验报告
血红蛋白电泳实验报告实验报告：血红蛋白电泳实验一、引言血红蛋白（hemoglobin）是一种具有输送氧气功能的蛋白质，存在于人类和许多动物的红细胞中。
它由四个亚基构成，包括两个α亚基和两个β亚基。
血红蛋白的功能和结构与其所含的亚基类型密切相关，而异常的血红蛋白亚基组合可能导致一些血液疾病的发生。
血红蛋白电泳实验是一种常用的实验方法，用于检测血液中血红蛋白的类型和数量，以帮助诊断和监测相关疾病。
二、实验目的通过血红蛋白电泳实验，了解不同类型血红蛋白的迁移速度，并根据实验结果对血液样本进行分类和鉴定。
三、实验材料与方法实验材料：1. 血液样本2. 血红蛋白电泳试剂盒3. 相关实验设备：电泳仪、垂直电泳槽、电源等实验方法：1. 血液样本处理：将血液样本离心，取上清液得到红细胞。
2. 血红蛋白裂解：将红细胞加入裂解液，用振荡器进行充分混合。
3. 准备样品槽：将电泳槽填充足够量样品缓冲液，并插入电泳纸。
4. 样品加载：取相应量的裂解液，滴于电泳纸上。
5. 电泳：将电泳槽连接至电源，设定电压和时间。
6. 停止电泳：电泳结束后，断开电源，取出电泳纸。
7. 进行染色：用染色试剂将血红蛋白带染色。
8. 结果分析：观察电泳纸上的血红蛋白带，根据迁移速度和染色程度对其进行鉴定和分类。
四、实验结果与讨论实验结果显示，通过血红蛋白电泳实验，可以清晰地观察到不同类型血红蛋白的迁移带。
血红蛋白A带出现在电泳纸上最远的位置，表明它的迁移速度最快，而其他类型的血红蛋白则随着亚基结构的不同而迁移速度差异明显。
根据实验结果，我们可以将血红蛋白带分为以下几类：1. 血红蛋白A：正常血红蛋白，包括两个α亚基和两个β亚基。
2. 血红蛋白S：镰状细胞贫血患者中常见的异常血红蛋白，由两个α亚基和两个替代的βS亚基组成。
3. 血红蛋白C：血红蛋白C病患者中可见的异常血红蛋白，由两个α亚基和两个替代的βC亚基组成。
4. 血红蛋白F：胎儿血红蛋白，包括两个α亚基和两个γ亚基。
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相关症状： 舌苔薄白、贫血、脾萎缩、指(趾)骨梗死。
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相关疾病：
叶酸缺乏所致贫血、维生素B12缺乏所致 贫血、地中海贫血、巨球蛋白血症、异常 血红蛋白病、巨幼细胞性贫血、血红蛋白 M病、血红蛋白C病、硫化血红蛋白血症。
一、HbA2升高，可见于维生素B12或 叶酸缺乏所致的巨细胞贫血、部分轻型珠 蛋白生成障碍性贫血; 二、HbA2降低：见 于缺铁性贫血; 三、HbF升高：可见于纯 合子β珠蛋白生成障碍性贫血、杂合子β 珠蛋白生成障碍性贫血和正常新生儿。 四、其他： 1.主要成分为HbS，而无HbB， 可
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谢谢！Βιβλιοθήκη 临床意义：A占65%-75%，并含有正常的HbF和HbA2， 可诊断为HbS-α-海洋性贫血; 5.HbA消失， HbC占总血红蛋白的28%-44%，可诊断为血 红蛋白病，多见于黑人，血片中可见较多 的靶形细胞; 6.有HbS，还出现HbD，血片 中有靶形细胞，可诊断为血红蛋白D病， 我国北方较多见;
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别名： 血红蛋白电泳。
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简介： 各种血红蛋白的等电点不同的特点，
在一定pH缓冲液中所带的正、负电荷不同， 经电泳后各血红蛋白的移动方向不同。
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临床意义：
地贫筛查中血红蛋白电泳教学
血红蛋白电泳设备
醋酸纤维膜电泳
Байду номын сангаас ▊ ▋▋▉
H J K A
正常→
▋ ▋ ▋
G D E
点样线→
▉▍
A F
▋▋
A2 CA
HbA2的常用测定方法
原理:根据不同Hb自带电荷的不同、分子量大小的不 同、结构和等电点的不同,在一定pH值的缓冲液中朝 特定方向泳动，在一定的电压下经一定时间，可分 离出各自的区带。 主要类别: 醋酸纤维素膜电泳法 琼脂凝胶电泳法 HbA2含量测定: 洗脱法 扫描法
Hb的种类
A.正常的Hb分三类 a.HbA(α2β2) b.HbF(α2γ2) c.HA2(α2δ2) B.异常Hb有两类 a.快速异常Hb:稳定Hb b.慢速异常Hb:不稳定Hb
基层常用的电泳分析方法 醋酸纤维膜电泳 琼脂凝胶电泳
醋酸纤维膜电泳→主要过程←琼脂凝胶电泳 ↓ RBC洗涤 ↓ 制备溶血 ↓ 点样 ↓ 电泳 ↓ 染色与脱色 ↙↘扫描法 ↙ 比色法:分区剪下色带，洗脱 分区切割色带,融化琼脂，干燥,透明→比色
1.通过扫描定量给出HbA、 HbA2和HbF值。 2.异常区带通过查表确定。
HbE区带的鉴别
A.联苯胺染色,鉴定是否为Hb B.区带位于HbA2 区带位置上,在阴性(-)泳动 速度最慢的一种异常Hb,难与A2区分开 C.HbA2定量在10%以上,应考虑为HbE D.HbE纯合子只有HbF和HbE,HbE高达95%以上
谢谢！
地贫防治网站： 联系电话： 2870295（地贫检验） 2870135（地贫输血） 2870640（遗传咨询） 2870640（药物邮购）
地贫筛查中的血红蛋白电泳 操作技术
解放军第三0三医院血液实验室
血红蛋白Hb电泳
注意事项：
1. 电泳时间不能太长； 2. 点样量不能太多，否则色带易脱落，出现
HbA相对增高的假阳性结果； 3. 避免醋纤膜被蛋白质污染； 4. 电流不应过大，否则血红蛋白分不开带； 5. 应同时作阴性和阳性对照。
临床意义:
1. 通过与正常人的Hb电泳图谱进行比较，可 发现异常Hb区带。如HbH、HbE、 HbBarts HbS、HbD和HbC 等；
4. 按下式计算 抗碱血红蛋白（%）= 测定管吸光度(A) 100% 对照管吸光度(B) 5
注意事项：
1. 每份标本要重复测定，以提高准确性，每次 测定应作正常对照；
2. 碱液浓度和碱化时间、温度应准确，过滤后应 1h内完成比色；
3. 血红蛋白液应新鲜，否则会形成高铁血红蛋 白，可被碱变性，使测定结果偏低。
血红蛋白电泳
实验要求：
1. 掌握血红蛋白电泳的原理、操作、注意 事项和临床意义；
2. 熟悉血红蛋白电泳的方法学评价； 3.了解血红蛋白电泳的试剂配制。
原理：
不同的Hb带有不同的电荷及等电点不同， 在一定pH缓冲液中， Hb的等电点小于缓冲液
的pH时带负电荷，电泳时在电场中向阳极泳动， 反之，Hb带正电荷向阴极泳动。在一定电压下 经过一定时间的电泳，不同的Hb所带电荷及分 子量不同，其泳动方向和速度不同，可分出各 自的区带，同时对电泳出的各区带进行比色或 电泳扫描，可进行各种Hb的定量分析。
2. 在HbF、 HbH、HbE含量>4%、G6PD 缺乏、α珠蛋白合成障碍性贫血时均可 出现阳性结果。
空白带， 放入试管内，再分别加入10mL 、 2mL和2mL的蒸馏水，轻轻震摇，待白完全洗脱 后，混匀； 血红蛋
6. 比色: 将以上洗脱液用空白带管调零，在波
血红蛋白电泳简易操作流程
血红蛋白电泳简易操作流程样本的制备：1）洗涤红细胞。
取400μL血细胞加4mL生理盐水，上下颠倒5次或吹打混匀。
2）用3000转速的离心机离心全血5分钟并弃去浮在表面上的悬浮液3）重复1）和2）步骤，尽量吸走红细胞表面多余的生理盐水。
6) 取40l RBC于一试管中，加150l裂解液7) 充分混匀，放置15-20分钟。
说明：RBC及裂解液比例浓度可据标本情况调整。
注意：1、每次洗涤需要充分混匀。
2、吸取40l RBC时，需要枪头深入至压积红细胞内部或底部，完全吸取40l 之后再提起枪头，避免吸到生理盐水，保证RBC的量。
3、裂解时间最少15分钟，以保证裂解充分。
电泳前准备：1. 打开电脑以及电泳仪器右侧的主开关。
2. 试剂检查及准备：每次在开始新的电泳前，应检查如下内容：染色液是否在Min-Max标记线之间，染色液用过10次染色循环后不能再使用；脱色液及蒸馏水是否过少；点样器是否放置在准确的位置中；废液是否清空。
3. 放置海绵条：用干净的镊子把海绵条插入电泳槽的两侧电极中，轻轻压平。
注意：请勿将海绵条插入到中间的电极中。
4. 样本装载：从仪器中抽出样盘托，取开吸磁铁片，将一次性载样盘放置样盘托中，盖好铁片，然后按1-13号顺序每孔加入30ul裂解后的样本，并将其插入仪器相应位置中。
5. 胶片准备：取胶片一块用配套滤纸沿同一方向将多余的缓冲液吸走，应保证滤纸完全贴在胶片的表面，然后快速移走滤纸。
将胶片装在胶片架上，装胶片时抓住胶片有条形码侧的一角，将有凝胶面向上，箭头向胶片架上方，沿上下卡口轻轻插入，然后将胶片架放回电泳仪对应位置。
注：滤纸在胶片上约5s就必须要移走，防止胶片脱水。
6. 检查各项准备情况，完全准备好后切记要合上仪器盖。
电泳分析软件操作：1. 双击电脑桌面上的电泳扫描图标（Elfolab）→ 数据库（Database）→ 打开数据库（Open Database）→ 数据库（Database）→ 工作数据库（Working Database）→ 新的工作数据库（New working Database）→ 在胶片1中选择血红蛋白→ OK。
血红蛋白电泳实验操简易作步骤
血红蛋白电泳实验简易操作步骤1. 洗涤红细胞：取离心后的红细胞200ul，10倍体积的0.9%的生理盐水洗涤，3000转/5分钟，离心后去掉上层。
洗涤2-3次。
2. 溶血：130ul溶血素+10ul洗涤后的红细胞3. 加样：加样梳每孔中加溶血后的液体10ul后放入保湿盒中4. 选择7/15Hb程序，在黑色方框的中下1/3处加入200ul（15人份）蒸馏水、130ul（7人份）蒸馏水，放上已经吸水后的琼脂板（注意放入黑色方框内）和缓冲条，并将加样梳从保湿盒中取出放在4号位（加样梳有字的一面朝向自己）5. 开始电泳，20多分钟后听到“嘣”的一声电泳结束，弃去加样梳和缓冲条6. 选择Hb程序进行染色，取出琼脂板放在染色架上进行染色，30分钟后取出琼脂板进行扫描7. 点击胶片扫描图标, 启动扫描程序。
9. 在软件操作界面上, 选择进入工作单界面。
10. 在每个即将扫描的标本的信息, 都可以在这一界面下进行录入.11. 在扫描仪上, 放入胶片。
将胶片的正面朝下, 放于扫描仪上。
12. 将胶片放置于胶片支架内, 根据支架内胶片类型和规格, 选择扫描程序。
13. 关闭扫描仪机盖，点击开始扫描键。
（提示: 如果多次扫描胶片, 请更改扫描程序中的开始扫描的样品编号, 否则, 后面的扫描结果, 会覆盖上一次的扫描结果. 如果一次同时扫描多个胶片, 软件会自动分配样品编号.）14. 检查扫描的居中范围线，仔细察看居中线是否对齐, 具体操作请查阅仪器使用手册.15. 编辑曲线，电泳胶片扫描结束后, 关闭窗口, 然后点击“编辑曲线”键进入曲线编辑模式进行曲线编辑, 添加病例的IF 图片和注释。
16. 曲线编辑完成后, 就可以进行结果报告。
所有的报告单必须有相关负责人员的签名及日期, 同时, 遵守医院的相关程序进行数据保管。
血红蛋白电泳检查（电泳法）
血红蛋白电泳检查（电泳法）1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。
每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。
所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。
所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。
正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。
血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。
氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。
本实验在碱性（PH=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。
多余的染色液用酸性液体洗去。
待琼脂糖凝胶板干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。
运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。
血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。
血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。
2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2 标本种类：抗凝血2.3 标本要求：抗凝剂选用ED TA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。
常规静脉采血1.8ml，加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。
清洁试管中，充分混匀。
3. 标本储存：储存于2-8℃冰箱中，5天。
4. 标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。
6. 试剂6.1 试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂6.2 试剂生产厂家：法国Sebia公司6.3 包装规格：150test s6.4 试剂盒组成琼脂糖凝胶 10块溶血素 1瓶缓冲液条带 10包×2条薄滤纸1×10张氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml点样模具滤纸 10条×1盒6.5 试剂储存条件及有效期：贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃），不能冷冻。
血红蛋白电泳检查（电泳法）
血红蛋白电泳检查（电泳法）血红蛋白电泳检查（电泳法）1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。
每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。
所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。
所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。
正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。
血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。
氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。
本实验在碱性（PH=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。
多余的染色液用酸性液体洗去。
待琼脂糖凝胶板干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。
运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。
血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。
血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。
2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2 标本种类：抗凝血2.3 标本要求：抗凝剂选用EDTA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。
常规静脉采血1.8ml，加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml 的干燥。
清洁试管中，充分混匀。
3. 标本储存：储存于2-8℃冰箱中，5天。
4. 标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。
6. 试剂6.1 试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂6.2 试剂生产厂家：法国Sebia公司6.3 包装规格：150tests6.4 试剂盒组成琼脂糖凝胶 10块溶血素 1瓶缓冲液条带 10包×2条薄滤纸1×10张氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml点样模具滤纸 10条×1盒6.5 试剂储存条件及有效期：贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃），不能冷冻。
有效期两年。
7. 仪器设备7.1 仪器名称：SEBIA电泳仪7.2 仪器厂家：法国Sebia公司7.3 仪器型号：HYDRASYS8. 操作步骤8.1 血红蛋白液制作：抗凝血离心，5000rpm，5分钟，去掉血浆，用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞3次，若红细胞体积小于10ul，需特别小心。
血红蛋白电泳及地中海贫血基因联合检测对地中海贫血诊断价值
血红蛋白电泳及地中海贫血基因联合检测对地中海贫血诊断价值血红蛋白电泳是一种常规的血液检测方法，通过电泳技术分离和检测不同类型的血红蛋白，可以用于诊断各种贫血症和血液疾病。
地中海贫血是一种常见的遗传性疾病，主要发生在地中海沿岸和周边地区，因此得名。
地中海贫血主要是由异常血红蛋白基因引起的，包括α型地中海贫血和β型地中海贫血两种类型。
血红蛋白电泳结合地中海贫血基因联合检测，可以为地中海贫血的诊断提供更为准确的结果，具有重要的临床意义。
本文将从血红蛋白电泳和地中海贫血基因联合检测的原理、方法、诊断价值等方面进行探讨。
1. 血红蛋白电泳原理血红蛋白电泳是利用纸电泳、琼脂糖凝胶电泳、高效液相色谱等方法进行血红蛋白的分离和检测。
血红蛋白是红细胞内的重要蛋白质成分，携氧、释氧和运输二氧化碳的功能均与血红蛋白有关。
血红蛋白由四个亚基组成，包括两个α亚基和两个β亚基。
在血红蛋白电泳中，不同类型的血红蛋白根据电荷、大小和形状的不同会在电场中产生不同的迁移速度，从而实现分离和检测。
通过血红蛋白电泳可以鉴别正常血红蛋白、异常血红蛋白及其亚型，为各种贫血症和血液疾病的诊断提供重要依据。
二、血红蛋白电泳及地中海贫血基因联合检测方法1. 血红蛋白电泳方法血红蛋白电泳主要包括纸电泳法和琼脂糖凝胶电泳法两种方法。
纸电泳法操作简单，价格低廉，但对血红蛋白的分辨率不高，通常用于初筛。
琼脂糖凝胶电泳法分辨率高，可以鉴别各种血红蛋白的亚型，但操作较为繁琐，费时费力。
在实际应用中，根据具体情况可以选择合适的电泳方法进行检测。
2. 地中海贫血基因联合检测方法地中海贫血基因联合检测主要包括PCR扩增、DNA杂交、基因芯片分型等方法。
PCR扩增技术是目前常用的基因扩增方法，可以在体外扩增特定DNA片段，具有高度敏感性和特异性。
DNA杂交技术可以通过与特异性探针结合来检测特定基因的变异情况。
基因芯片分型技术可以同时检测多个基因位点的突变情况，具有高通量和高效率的优势。
血红蛋白电泳与MCV对新生儿地中海贫血筛查的临床诊断效果分析
血红蛋白电泳与MCV对新生儿地中海贫血筛查的临床诊断效果分析地中海贫血是一种常见的遗传性血液疾病，患病率高，严重影响患者的生活质量和寿命。
特别是对于新生儿来说，在早期进行有效的筛查和诊断是至关重要的。
目前，血红蛋白电泳和MCV（红细胞平均体积）两种方法已经被广泛应用于地中海贫血的筛查和诊断。
本文将对这两种方法在新生儿地中海贫血筛查中的临床诊断效果进行分析，为临床医生提供参考。
一、血红蛋白电泳在新生儿地中海贫血筛查中的应用血红蛋白电泳是一种用于检测血红蛋白亚型的方法，通过对不同类型的血红蛋白进行电泳分离和测定，可以帮助诊断各种类型的贫血疾病，包括地中海贫血。
在新生儿筛查中，血红蛋白电泳可以快速、准确地检测出患有地中海贫血的婴儿，对早期干预和治疗非常重要。
MCV是红细胞的平均体积，是反映红细胞大小的重要指标。
在地中海贫血患者中，由于异常的血红蛋白类型和数量，红细胞的大小和形状也会发生改变，导致MCV值异常。
MCV 在新生儿地中海贫血筛查中也具有重要的应用价值。
相比之下，MCV是一种间接反映红细胞大小的指标，检测方法简便、快速，适合作为初筛工具使用。
通过对患者MCV值的测定，可以快速发现可能患有地中海贫血的婴儿，为进一步的诊断和治疗提供重要参考。
MCV的特异性相对较低，有时可能会存在假阳性或假阴性结果。
血红蛋白电泳和MCV两种方法在新生儿地中海贫血筛查中应该互相结合，共同发挥各自的优势，提高诊断的准确性和可靠性。
首先可以通过MCV进行初步筛查，发现可能患有地中海贫血的婴儿，然后再进行血红蛋白电泳的确诊，从而确保患者能够及时接受准确的诊断和治疗。
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醋酸纤维素膜电泳法 琼脂凝胶电泳法 HbA2含量测定: 洗脱法 扫描法
血红蛋白A2测定
不连续电泳将HbA2分离后，分别剪 出膜条中的HbA和HbA2区带，分别放
入试 管中，HbA加蒸馏水20ml， HbA2加
4ml ，浸泡30分钟，不定时摇动，使Hb完
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谢谢！
染色与脱色 ↙↘扫描法
↙ 比色法:分区剪下色带，洗脱 分区切割色带,融化琼脂，干燥,透明→比色
血红蛋白电泳设备
醋酸纤维膜电泳
▊ ▋▋▉ ▋ ▋ ▋
H J KA
G D E 点样线→
正常→ ▉▍
▋▋
AF
A2 CA
HbA2的常用测定方法
原理:根据不同Hb自带电荷的不同、分子量大小的 不
同、结构和等电点的不同,在一定pH值的缓冲液中 朝
全 冼脱下来后混匀，用721分光光度计以
波
抗碱血红蛋白(HbF)测定
设备：721分光光度计，刻度吸管，秒表，玻璃漏 斗
，滤纸。
试剂：1/12mol/LKOH或NaOH溶液，酸性半饱 和硫酸
铵溶液。
方法：取两支试管，测定管加入溶血液0.1ml，对 照
管加入0.02ml，于测定管中加入KOH1.6ml，摇匀 ，
带 E.Hb↓MCV↓MCH↓ F.HbBart’s 区带在HbH区带后,泳动速度比HbH稍
慢 些,有Bart’s 区带,一般都有H区带,H含量高达30% 多,但不会超出40%,低少到1%左右。
HbA2 在血红蛋白病中的意义
HbA2组成: α2 δ2 HbA2参考值:1.2%-3.5% HbA2含量的改变: HbA2水平升高,是β
地贫筛查中的血红蛋白电泳 操作技术
第三0三医院血液实验室 王荣新
血红蛋白的组成
血红蛋白由血红素与珠蛋白组成 血红素：铁原子与原卟啉Ⅸ复合物。 珠蛋白：包括α、β、γ、δ、ε和ζ 珠蛋白6种。
血红蛋是由两种不同的鳌合了血红素的 珠蛋白肽链所形成的四聚体结构，在人体的 不同发育时期，其主要的血红蛋白（Hb）组 成不同。
全自动Hb电泳仪
目前国内使用的主要有 美国的Helena电泳仪、扫描仪和分析系统。 法国的Sebia电泳仪、扫描仪和分析系统。 国产的金桑特电泳仪、扫描仪和分析系统。
1.通过扫描定量给出HbA、 HbA2和HbF值。
2.异常区带通过查表确定。
HbE区带的鉴别
A.联苯胺染色,鉴定是否为Hb B.区带位于HbA2 区带位置上,在阴性(-)泳动
1分钟时立即加入酸性半饱和硫酸铵溶液3.4ml，倒
转6次，放10分钟，滤取溶液检测，用波长 540nm
HbCS的区带多在HbA2位置的 前 后，含量低，2％左右，很不稳定， 有时还可分开成三或四小区带，用 联苯胺染色可确定。HbE为慢速异 常区带，其位置相当于HbA2。 HbH和HbBart’s为快速异常区带。
临床常见的异常血红蛋白
以速度快慢排序 1.血红蛋白E/A2 2.血红蛋白D/S 3.血红蛋白G 4.血红蛋白K 5.血红蛋白J 6.血红蛋白H
Hb电泳操作中的经验与教训
1.RBC洗涤：离心的速度和时间要够，生理盐水与 血
比例要5：1，血浆与冼涤生理盐水要尽量吸干净。 2.制备溶血：加入的溜水、溶血剂与红细胞体积要 符合要求。离心的速度和时间要够。 3.点样:血红蛋白液适量，不能太宽。 4.电泳:醋纤膜浸泡时间要够长，平衡时间要够。 5.染色与脱色:时间要够。
人体发育过程中Hｂ的组成
发育期 胚胎期 胎儿期
0－2周岁左 右
2周岁后以后
血红蛋白 Gower1 Gower2 Porland
F A F
A A2 A A2 F
肽链组成
ζ2 ε2 α2 ε2 ζ2 γ2 α2 γ2 α2 β2 α2 γ2
α2 β2 α2 δ2 α2 β2 α2 δ2 α2 γ2
Hb的种类
地 贫基因携带者的特征性标志, 故HbA2定 量的准确与否,对于临床一线β地贫基因 携带者的筛查至关重要。
血红蛋白（Hb）病
1.血红蛋白病：基因突变导致合成的珠蛋白 肽链结构异常（如：镰状细胞血红蛋白病 /HbS） 2.地中海贫血：基因突变导致一种或多种珠 蛋白肽链合成减少或缺如（α/β地贫） 3.获得性血红蛋白病：接触或误服化学药物
速度最慢的一种异常Hb,难与A2区分开 C.HbA2定量在10%以上,应考虑为HbE D.HbE纯合子只有HbF和HbE,HbE高达95%
以上
HbH区带的鉴定
A.联苯胺染色,确定是否为Hb B.在阳极(+)泳动速度最大的Hb区带 C.HbH包含体阳性(+) D.pH6.5缓冲液(酸性)唯一向阳性(+)移动的Hb区
A.正常的Hb分.HA2(α2δ2)
B.异常Hb有两类 a.快速异常Hb:稳定Hb b.慢速异常Hb:不稳定Hb
基层常用的电泳分析方法
醋酸纤维膜电泳 琼脂凝胶电泳
醋酸纤维膜电泳→主要过程←琼脂凝胶电泳 ↓
RBC洗涤 ↓
制备溶血 ↓ 点样 ↓ 电泳 ↓
1.正常新生儿
9.轻型β地中海贫血
2.胎儿水肿综合征
10.异常HbD杂合子
3.α地中海贫血1(脐血)
11.异常HbG杂合子
4.HbCS-HbH病型
12.轻型β地中海贫血复合HbE
5.重型β地中海贫血复合HbE 13.正常成人
6.轻型β地中海贫血
14.正常成人
7.异常HbK杂合子
15.HbH病
8.异常HbJ杂合子
Hb病为世界上发病率最高危害最大的单基因遗 传病，被WHO列为严重危害人类健康六大疾病之
一。 全球约有4.83%的人口携带Hb病基因,每年各类 重型地贫(包括地贫复合异常Hb病类型)患儿的出生 率不低于2.4‰。据此推算,全球每年至少约35万Hb 病患儿出生; 至今为止，全球在分子水平上已鉴定出近1000 种不同的珠蛋白突变基因，其中包括700多种异常 Hb 变异体和200余种β地贫基因以及70多种α地贫突变 ,其中中国人群中异常Hb、β地贫基因和α地贫突变 各占70多种、34种和11种。