谷胱甘肽的制备及含量测定
GSH含量的测定.doc
主要目的：——测定物质还原性谷胱甘肽（GSH）的含量。
主要原理：参照 GSH检测分析试剂盒说明书， 5,5 ’–二硫代–双–（2–硝基苯甲酸）能和谷胱甘肽（GSH）反应产生 2–硝基– 5–巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（ GSSG），由于 2–硝基– 5–巯基苯甲酸是一黄色产物，通过测定其在412 nm处的最大吸收可确定样品中谷胱甘肽的含量用纯化的谷胱甘肽（GSH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入谷胱甘肽（GSH），再与HRP标记的谷胱甘肽（ GSH）抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽（GSH）呈正相关。
用酶标仪在412 nm波长下测定吸光度（ OD值），通过标准曲线计算样品中谷胱甘肽（GSH）的含量。
实验室签章一、试剂——谷还原性胱甘肽（ GSH）测定试剂盒（南京建成生物研究所）二、仪器设备—— 96 孔酶标板—— UV-Vis 可见多功能酶标仪——旋涡混匀器——离心机——移液枪及其相应量程枪头三、实验方法根据试剂盒说明书具体操作步骤如下:1.上清液的制备：取稀释后的血清或组织匀浆液 mL，加试剂一应用液 2 mL 混匀， 4000 rpm 离心 10 分钟，取上清液 1 mL 进行显色反应。
2.显色反应：空白管中加入 1 mL 试剂一，标准管加入 20μmol/LGSH标准液 1 mL，测定管加入上步骤得到的上清液 1 mL，然后各管中分别加入mL 试剂二、试剂三、 mL 试剂四。
3.混匀，室温静置 5 分钟后，在 412 nm处将酶标板空板进行扫描，准确吸取 mL 各管反应液加入到新的 96 孔板中，酶标仪测定各孔吸光度（ OD值）。
4.血清中 GSH含量计算公式GSH含量（ mg/L）测定 OD值 -空白 OD值-3 mmol/L）×标准品浓度（ 20×10标准 OD值-空白 OD值×GSH分子量（ 307）×样本测试前稀释倍数组织中 GSH含量公式测定OD值-空白OD值-3 GSH含量（mg/gprot ）×标准品浓度（20×10 mmol/L）×GSH分子量（ 307）×样本测试前稀释倍数÷待测组织匀浆液蛋白浓度（gprot/L ）参考文献Lapshina E A, Sudnikovich E J, Maksimchik J Z, et al. Antioxidative enzyme and glutathione S-transferase activities in diabetic rats exposed to long-term ASA treatment [J]. Life sciences, 2006, 79(19): 1804-1811.。
谷胱甘肽含量测定
植物生理学模块实验指导玲主编科学还原型谷胱甘肽含量的测定方法（分光光度计法）【实验目的】了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代过程，学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。
【实验原理】谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Gly）组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。
谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。
2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm处具有最大光吸收。
因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。
【器材与试剂】1.实验仪器与用具研钵、高速冷冻离心机、微量移液枪、离心管、试管、水浴锅、容量瓶（100ml、200ml、1000ml）、分光光度计2.实验试剂50g/L三氯乙酸（TCA）溶液（含5mmol/L Na2-EDTA）：称取5g三氯乙酸，用蒸馏水溶解稀释至100ml。
再称取186mg Na2-EDTA·2H2O，加入到100ml 50g/L三氯乙酸溶液中溶解。
0.1mol/L磷酸钠溶液缓冲液（pH7.7）：配制方法见附录。
0.1mol/L(pH6.8)磷酸钠缓冲液：配制方法见附录。
4mmol/L二硫代硝基苯甲酸（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）溶液：称取15.8mg DTNB，用0.1mol/L、pH6.8磷酸缓冲液溶解，定容至10ml，混匀，4℃保存。
现用现配。
100μmol/L还原型谷胱甘肽标准液：称取3.1mg 还原型谷胱甘肽，加入少量无水乙醇溶解，加蒸馏水定容至100ml。
3.实验材料同抗坏血酸。
【实验步骤】1.标准曲线制作取6支试管，编号，按照表1加入各种试剂，混匀，25℃保温反应10min。
食用菌中谷胱甘肽的测定
食用菌中谷胱甘肽的测定谷胱甘肽是一种重要的抗氧化物质，被广泛应用于食品工业中。
食用菌是一类含有高丰富谷胱甘肽的食材，因此测定食用菌中谷胱甘肽的含量具有重要的意义。
本文将介绍几种常用的测定食用菌中谷胱甘肽的方法。
一、硫巴比妥酸法测定谷胱甘肽含量硫巴比妥酸法是目前测定谷胱甘肽含量最常用的方法之一。
该方法的原理是谷胱甘肽与硫巴比妥酸在碱性条件下反应生成黄色产物，通过测定产物的吸光度可以间接测定谷胱甘肽的含量。
具体操作步骤如下：1. 将食用菌样品粉碎并称取适量，加入酸性溶液中，破坏细胞结构释放出谷胱甘肽。
2. 加入碱性溶液和硫巴比妥酸，使谷胱甘肽与硫巴比妥酸反应生成黄色产物。
3. 使用分光光度计测定产物的吸光度，利用标准曲线计算样品中谷胱甘肽的含量。
二、高效液相色谱法测定谷胱甘肽含量高效液相色谱法是一种常用的分离和定量化合物的方法。
该方法的原理是利用色谱柱对样品中的谷胱甘肽进行分离，通过检测谷胱甘肽的峰面积或峰高来定量谷胱甘肽的含量。
具体操作步骤如下：1. 将食用菌样品制备成适宜的提取液，经过离心等处理步骤，获得待测样品。
2. 使用高效液相色谱仪，将待测样品注入进样器，经过一定的流动相条件下，在色谱柱中进行分离。
3. 通过检测谷胱甘肽的峰面积或峰高，利用标准曲线计算样品中谷胱甘肽的含量。
三、氧化还原法测定谷胱甘肽含量氧化还原法是一种直接测定谷胱甘肽含量的方法。
该方法的原理是利用谷胱甘肽与还原剂在适宜的条件下发生氧化还原反应，通过测定反应前后还原剂的含量变化来确定谷胱甘肽的含量。
具体操作步骤如下：1. 将食用菌样品制备成适宜的提取液，通过离心等处理步骤，获得待测样品。
2. 将待测样品与还原剂在适宜的条件下反应，使谷胱甘肽发生氧化还原反应。
3. 通过测定反应前后还原剂的含量变化，计算谷胱甘肽的含量。
在测定食用菌中谷胱甘肽的含量时，需要注意样品的制备过程，确保提取到的谷胱甘肽是代表样品中真实含量的。
同时，选择合适的测定方法，准确、快速地测定谷胱甘肽含量，有助于评估食用菌的品质和营养价值。
谷胱甘肽(GSH)含量测定
谷胱甘肽（GSH）含量测定一、实验目的1.了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程;2.学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。
二、实验原理谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）、甘氨酸(Gly)组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。
它作为体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。
谷胱甘肽能和2-硝基苯甲酸（DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG），2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm 处具有最大光吸收。
因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。
三、实验材料小麦幼嫩叶片四、实验方法及步骤1.制作标准曲线取7只干净的试管编号，按如下表格加入各试剂，反应20分钟后在412nm 下用分光光度计测其吸光度，制作标准曲线；2.样品测定a、称取小麦叶片0.2g，加入少量5%偏磷酸缓冲液研磨提取，并用5%偏磷酸缓冲液定容至6ml，8000rpm离心10min,取上清液；b、取上述上清液2ml显色，操作同标准曲线。
3.结果计算：GSH含量（ug/Gfw）= (Cx*Vt)/(Fw*Vs)注：Cx---2ml样品中GSH含量（ug），即每管中GSH的含量Vt---样品提取液总体积(ml)；Vs----显色时所取样的体积(ml)；FW---样品鲜重（g）。
五、实验结果1.标准曲线1.样品测定结果六、注意事项1.使用移液管吸取试剂时，视线要垂直于移液管且与液面凹面水平，不能斜视，以免量取试剂不准确。
2.在提取样品时，最好沉淀出去蛋白质，以防止蛋白质中所含巯基及相关酶对测定结果的影响。
3.在研磨叶片时，为方便研磨，刚开始时加入少量的提取液。
GSH含量测定
GSH含量测定一、原理还原性谷胱甘肽(GSH)是植物细胞重要的抗氧化剂之一，是一个良好的表示氧化胁迫的指标。
GSH+TDBN在pH=7时生成黄色物质，其颜色深浅与GSH的浓度成线性关系。
即：在巯基化合物的存在下，无色的DTNB将被转变成黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸。
由于5-巯基-2-硝基苯甲酸在412 nm处具有最大吸收，DTNB的吸收光谱并不干扰巯基的测定。
二、材料、试剂、仪器1、材料：小麦叶片2、试剂(1）GSH标准溶液：称取10mg 分析纯GSH，溶于蒸馏水中，并定容于10ml，即为1mg/ml 之标准母液，用稀释10倍（0.1mg/ml GSH）；(2）5%偏磷酸；(3）0.2mol/L 磷酸钾缓冲液，pH7.0；(4）TDNB试剂：称取39.6mg二硫代双-二硝基苯甲酸（TDNB），用0.2mol/L磷酸钾缓冲液溶解并定容于100ml；(5）1mol/L NaOH溶液。
2、仪器（1）可见分光光度计：4台；（2）离心机：1台（10000转/分）；（3）1/千天平-2台；（4）离心管：3支×16（10ml）（5）刻度试管：4×16支；（10或15ml）（6）普通试管（刻度试管）：7支×4（15*150 标准曲线）（7）刻度吸管：0.5ml-8支； 1ml-8支; 2ml-16支; 5ml-8支；（8）研钵：1×16个；（9）比色杯4套；（10）吸水纸适量；（11）剪刀8把；（12）玻棒8支；三、方法步骤：1、制作标准曲线：取7支刻度试管，编号，按表加入试剂：将上述溶液混合均匀，在室温下显色5min。
在412nm波长下测定吸光度。
以标准溶液中GSH浓度为X，吸光度为y，制作标准回归方程，（并求出GSH含量。
）2 、样品测定：称取植物鲜样0.204g加入少量5%偏磷酸研磨提取，并用5%偏磷酸定容到10ml。
10000rpm 离心10min。
离心后取上清液2 ml，同标准曲线操作。
谷胱甘肽标准测定方法
谷胱甘肽标准测定方法
谷胱甘肽的测定方法主要有以下几种：
1. 埃尔曼（Ellman）法：这是最常用的谷胱甘肽测定方法，其原理是谷胱甘肽在DTNB（二硝基苯磺酸）的作用下，生成具有黄色的DTNB-SH，通过测定其吸光度来定量谷胱甘肽的含量。
2. 弗斯特（Foster）法：这种方法是通过测定谷胱甘肽在酸性环境下的还原能力，即测定其对2-硝基-5-苯甲酸的还原能力，通过测定其产物2-氨基-5-苯甲酸的吸光度来定量谷胱甘肽的含量。
3. 比色法：这种方法是通过测定谷胱甘肽在酸性环境下的还原能力，即测定其对2,4-二硝基苯酚的还原能力，通过测定其产物2,4-二氨基苯酚的吸光度来定量谷胱甘肽的含量。
4. 高效液相色谱法（HPLC）：这种方法是通过分离、定量样品中的谷胱甘肽，通过比较其峰面积与已知浓度的谷胱甘肽峰面积来定量谷胱甘肽的含量。
5. 荧光光谱法：这种方法是通过测量谷胱甘肽的荧光光谱，通过比较其荧光强度与已知浓度的谷胱甘肽荧光强度来定量谷胱甘肽的含量。
以上方法都有其优点和缺点，选择哪种方法主要取决
于实验的目的和条件。
谷胱甘肽含量实验报告结果
谷胱甘肽含量实验报告结果1. 实验目的本实验旨在测定不同样本中谷胱甘肽的含量，探究谷胱甘肽在不同条件下的生成和消耗情况。
2. 实验方法2.1 实验材料- 谷胱甘肽标准品- 待测样本- 0.1mol/L磷酸缓冲液(pH=6.8)- 10%三氯乙酸- 1%二硫苏糖- 75mmol/L硝酸钠- 50mmol/L亚硫酸钠2.2 实验步骤1. 取不同浓度的谷胱甘肽标准品，分别加入磷酸缓冲液。
2. 将标准品和待测样本加入10%三氯乙酸中，振荡离心。
3. 取上清液稀释一半，加入1%二硫苏糖，室温放置15分钟。
4. 加入75mmol/L硝酸钠，室温放置5分钟。
5. 加入1ml 50mmol/L亚硫酸钠。
6. 在紫外-可见分光光度计上读取吸光度，得到吸光度与浓度的标准曲线。
7. 测定待测样本的吸光度，并根据标准曲线计算谷胱甘肽的含量。
3. 实验结果3.1 谷胱甘肽标准曲线谷胱甘肽浓度（µmol/L）吸光度:: ::0 0.00010 0.25020 0.48030 0.72040 0.9603.2 待测样本的吸光度和含量计算结果样本编号吸光度谷胱甘肽浓度（µmol/L）:: :: ::1 0.380 15.22 0.630 25.23 0.285 11.44 0.520 20.85 0.740 29.64. 结果分析根据谷胱甘肽标准曲线，可以计算出待测样本中谷胱甘肽的含量。
根据实验结果可知，样本1中谷胱甘肽的含量为15.2µmol/L，样本2为25.2µmol/L，样本3为11.4µmol/L，样本4为20.8µmol/L，样本5为29.6µmol/L。
从结果可以看出，不同样本中谷胱甘肽含量有所差异。
这可能是因为样本来源的不同，谷胱甘肽生成和消耗速率的差异等原因导致的。
5. 实验总结本实验通过测定不同样本中谷胱甘肽的含量，初步了解了谷胱甘肽的生成和消耗情况。
还原型谷胱甘肽制备方法
还原型谷胱甘肽制备方法
还原型谷胱甘肽的制备方法主要包括以下步骤：
1. 对表达双功能酶基因的大肠杆菌BL21进行培养，中后期流加葡萄糖溶液作为碳源，根据OD600值进行诱导，进行发酵。
2. 对发酵体系进行超滤，滤液用铜盐法进行分离，得到谷胱甘肽溶液。
3. 对谷胱甘肽溶液进行浓缩，结晶得到β晶型产品。
4. 对β晶型产品重新溶解，转换晶型得到α晶型产品。
通过这些步骤，可以得到纯度更高的晶型为α晶型的谷胱甘肽产品。
另外，还原型谷胱甘肽注射液的制备方法则是将原料溶解后灌装到容器中，充入二氧化碳气体密封即可。
此制备技术先进，工艺合理，操作方便，能防止制备过程中容器里的残余的氧气继续反应引起杂质，从而保证还原型谷胱甘肽注射液的质量。
以上是还原型谷胱甘肽的制备方法，仅供参考，建议咨询专业人士获取更多信息。
谷胱甘肽
谷胱甘肽的制备及含量测定一、实验目的1.了解谷胱甘肽的理化性质，作用，制备工艺2.掌握谷胱甘肽的含量检测的方法二、实验原理谷胱甘肽广泛存在于动、植物中，在生物体内有着重要的作用。
在面包酵母、小麦胚芽和动物肝脏中的含量很高，达100～1000mg/100g,在人体血液中含26～34mg/100g，鸡血中含58～73mg/100g，猪血中含10～15mg/100g,在西红柿、菠萝、黄瓜中含量也较高(12～33mg/100g)，而在甘薯、绿豆芽、洋葱、香菇中含量较低(0.06～0.7mg/100g)。
谷胱甘肽的含量测定本实验采用亚硝基铁氰化钠法。
其原理是：谷胱甘肽在氨水存在下，与亚硝基铁氰化钠发生巯基反应，生成红色化合物。
测定中加入硫酸铵可以增加颜色反应的强度。
三实验器材1 .器材：50ml量筒一个100ml烧杯一个1ml，5ml移液管各一支50ml容量瓶一个，100ml容量瓶一个732阳离子交换吸附柱紫外分光度计比色皿3个试管若干收集器，蠕动泵电磁炉冰块若干离心机离心管PH试纸2.试剂：干酵母5g 0.25mol/LNaOH(1g NaOH 配置成100ml) 亚硝基氰化钠50%H2SO4（25ml,) 硫酸铵粉末1g 亚硝基铁氰化钠，氨水（班上一起配，）四、实验步骤提取工艺1、取5g干酵母，与15ml蒸馏水充分混合后倒入25ml沸腾的水中。
2、用5ml水洗涤烧杯一并倒入，使混合液保持在95-100℃，沸腾5min。
放置冰水中速冷。
3、在2000rpm速度下离心10min，取上清液，即谷胱甘肽抽提液。
4、谷胱甘肽抽提液，调pH至3.0。
5、上处理好的732阳离子交换吸附柱吸附。
6、用0.25mol/L的NaOH溶液洗脱，洗脱流速10ml/min。
收集洗脱液，洗脱终点用亚硝基氰化钠检测。
7、中和洗脱液至pH6.5。
8、真空浓缩，干燥，得还原性谷胱甘肽粗品谷胱甘肽的含量测定1、在试管中加入1.0g硫酸铵粉末，以使体系中硫酸铵达到过饱和；1ml待测的谷胱甘肽溶液，3ml硫酸铵饱和溶液，摇匀。
谷胱甘肽
药品 基本信息 谷胱甘肽 谷胱甘肽：还原型谷胱甘肽、阿拓莫兰、古拉定 CAS号：70-18-8 EINECS200-725-4 [1] 分子式：C10H17N3O6S 分子量：307.32348 熔点：为189～193°C，晶体呈无色透明细长拉状，等电点为 5.93。 药理作用：本品可促进糖、脂肪及蛋白质代谢，加速自由基排泄， 保护肝脏的合成、解毒、灭活激素等功能。
谷胱甘肽不仅能消除人体自由基，还可以提高人体免疫力。谷胱甘肽维护 健康，抗衰老，在老人迟缓化的细胞上所发挥的功效比年轻人大。 谷胱甘肽还可以保护血红蛋白不受过氧化氢氧化、自由基等氧化从而 使它持续正常发挥运输氧的能力。红细胞中部分血红蛋白在过氧化氢等氧 化剂的作用下，其中二价铁氧化为三价铁，使血红蛋白转变为高铁血红蛋 白，从而失去了带氧能力。还原型谷胱甘肽既能直接与过氧化氢等氧化剂 结合，生成水和氧化型谷胱甘肽，也能够将高铁血红蛋白还原为血红蛋白。 人体红细胞中谷胱甘肽的含量很多，这对保护红细胞膜上蛋白质的巯基处 于还原状态，防止溶血具有重要意义。 谷胱甘肽保护酶分子中-SH基，有利于酶活性的发挥，并且能恢复已被 破坏的酶分子中-SH基的活性功能，使酶重新恢复活性。谷胱甘肽还可以抑 制乙醇侵害肝脏所产生的脂肪肝。 谷胱甘肽对于放射线、放射性药物所引起的白细胞减少等症状，有强 有力的保护作用。谷胱甘肽能与进入人体的有毒化合物、重金属离子或致 癌物质等相结合，并促进其排出体外，起到中和解毒作用。
生理作用或功能 谷胱甘肽广泛存在于动、植物中，在生物体内有着重要的作用。在面包酵 母、小麦胚芽和动物肝脏中的含量很高，达100～1000mg/100g,在人体血液中 含26～34mg/100g，鸡血中含58～73mg/100g，猪血中含10～15mg/100g,在西 红柿、菠萝、黄瓜中含量也较高(12～33mg/100g)，而在甘薯、绿豆芽、洋葱、 香菇中含量较低(0.06～0.7mg/100g)。 机体新陈代代谢产生的过多自由基会损伤生物膜，侵袭生命大分子，加快 机体衰老，并诱发肿瘤或动脉粥样硬化的产生。谷胱甘肽在人体内的生化防御 体系起重要作用，具有多方面的生理功能。它的主要生理作用是能够清除掉人 体内的自由基，做为体内一种重要的抗氧化剂，保护许多蛋白质和酶等分子中 的巯基。GSH的结构中含有一个活泼的巯基-SH，易被氧化脱氢，这一特异结 构使其成为体内主要的自由基清除剂。例如当细胞内生成少量H2O2时，GSH在 谷胱甘肽过氧化物酶的作用下，把H2O2还原成H2O，其自身被氧化为GSSG， GSSG由存在于肝脏和红细胞中的谷胱甘肽还原酶作用下，接受H还原成GSH， 使体内自由基的清除反应能够持续进行。
人谷胱甘肽(GSH)说明书
人谷胱甘肽(GSH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中谷胱甘肽(GSH)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人谷胱甘肽(GSH)水平。
用纯化的人谷胱甘肽(GSH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入谷胱甘肽(GSH)，再与HRP 标记的谷胱甘肽(GSH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽(GSH)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人谷胱甘肽(GSH)浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：720ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
谷胱甘肽的测定实验报告
一、实验目的1. 了解谷胱甘肽在生物体内的作用和重要性。
2. 掌握谷胱甘肽含量的测定原理和方法。
3. 通过实验，提高实验室操作技能和数据分析能力。
二、实验原理谷胱甘肽（GSH）是一种由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的天然三肽，具有强大的抗氧化作用。
在生物体内，谷胱甘肽参与多种生物化学反应，包括抗氧化、解毒、细胞信号传导等。
本实验采用比色法测定植物组织中谷胱甘肽的含量。
比色法测定谷胱甘肽含量的原理如下：1. 在一定条件下，还原型谷胱甘肽（GSH）与5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)（DTNB）反应，生成黄色的2-硝基5-巯基苯甲酸（TNB）。
2. 通过测定TNB在特定波长下的吸光度，可以计算出样品中谷胱甘肽的含量。
三、实验材料与仪器1. 材料：植物组织（如芦笋、花椰菜等）、DTNB溶液、EDTA-Na2溶液、Na2HPO4溶液、NaH2PO4溶液、蒸馏水等。
2. 仪器：可见光分光光度计、低温高速离心机、匀浆器、恒温水浴锅、微量加样器等。
四、实验步骤1. 样品制备：取一定量的植物组织，加入适量的蒸馏水，用匀浆器充分匀浆，制成匀浆液。
在低温高速离心机中以3000 r/min离心10分钟，取上清液作为待测样品。
2. 标准曲线绘制：分别配制不同浓度的GSH标准溶液，按照实验方法测定其吸光度。
以GSH浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：取一定量的待测样品，按照实验方法测定其吸光度。
根据标准曲线，计算出样品中谷胱甘肽的含量。
4. 数据处理：将实验数据输入计算机，进行统计分析，得出实验结果。
五、实验结果与分析1. 标准曲线：根据实验数据绘制标准曲线，得到线性方程：y = 0.046x + 0.0058，相关系数R2 = 0.9986。
2. 样品测定：取一定量的芦笋匀浆液，按照实验方法测定其吸光度，计算得到谷胱甘肽含量为0.023 mg/g。
3. 数据分析：通过实验结果可以看出，植物组织中谷胱甘肽含量较高，说明植物具有较好的抗氧化能力。
GSH含量测定
GSH含量测定一、原理还原性谷胱甘肽(GSH)是植物细胞重要的抗氧化剂之一，是一个良好的表示氧化胁迫的指标。
GSH+TDBN在pH=7时生成黄色物质，其颜色深浅与GSH的浓度成线性关系。
即：在巯基化合物的存在下，无色的DTNB将被转变成黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸。
由于5-巯基-2-硝基苯甲酸在412 nm处具有最大吸收，DTNB的吸收光谱并不干扰巯基的测定。
二、材料、试剂、仪器1、材料：小麦叶片2、试剂(1）GSH标准溶液：称取10mg 分析纯GSH，溶于蒸馏水中，并定容于10ml，即为1mg/ml 之标准母液，用稀释10倍（0.1mg/ml GSH）；(2）5%偏磷酸；(3）0.2mol/L 磷酸钾缓冲液，pH7.0；(4）TDNB试剂：称取39.6mg二硫代双-二硝基苯甲酸（TDNB），用0.2mol/L磷酸钾缓冲液溶解并定容于100ml；(5）1mol/L NaOH溶液。
2、仪器（1）可见分光光度计：4台；（2）离心机：1台（10000转/分）；（3）1/千天平-2台；（4）离心管：3支×16（10ml）（5）刻度试管：4×16支；（10或15ml）（6）普通试管（刻度试管）：7支×4（15*150 标准曲线）（7）刻度吸管：0.5ml-8支； 1ml-8支; 2ml-16支; 5ml-8支；（8）研钵：1×16个；（9）比色杯4套；（10）吸水纸适量；（11）剪刀8把；（12）玻棒8支；三、方法步骤：1、制作标准曲线：取7支刻度试管，编号，按表加入试剂：将上述溶液混合均匀，在室温下显色5min。
在412nm波长下测定吸光度。
以标准溶液中GSH浓度为X，吸光度为y，制作标准回归方程，（并求出GSH含量。
）2 、样品测定：称取植物鲜样0.204g加入少量5%偏磷酸研磨提取，并用5%偏磷酸定容到10ml。
10000rpm 离心10min。
离心后取上清液2 ml，同标准曲线操作。
谷胱甘肽(GSH)含量测定
谷胱甘肽（GSH）含量测定一、实验目的1.了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程;2.学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。
二、实验原理谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）、甘氨酸(Gly)组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。
它作为体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。
谷胱甘肽能和2-硝基苯甲酸（DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG），2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm 处具有最大光吸收。
因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。
三、实验材料小麦幼嫩叶片四、实验方法及步骤1.制作标准曲线取7只干净的试管编号，按如下表格加入各试剂，反应20分钟后在412nm 下用分光光度计测其吸光度，制作标准曲线；2.样品测定a、称取小麦叶片0.2g，加入少量5%偏磷酸缓冲液研磨提取，并用5%偏磷酸缓冲液定容至6ml，8000rpm离心10min,取上清液；b、取上述上清液2ml显色，操作同标准曲线。
3.结果计算：GSH含量（ug/Gfw）= (Cx*Vt)/(Fw*Vs)注：Cx---2ml样品中GSH含量（ug），即每管中GSH的含量Vt---样品提取液总体积(ml)；Vs----显色时所取样的体积(ml)；FW---样品鲜重（g）。
五、实验结果1.标准曲线1.样品测定结果六、注意事项1.使用移液管吸取试剂时，视线要垂直于移液管且与液面凹面水平，不能斜视，以免量取试剂不准确。
2.在提取样品时，最好沉淀出去蛋白质，以防止蛋白质中所含巯基及相关酶对测定结果的影响。
3.在研磨叶片时，为方便研磨，刚开始时加入少量的提取液。
谷胱甘肽的制备实训报告
一、实训目的1. 了解谷胱甘肽的化学性质和生物学功能。
2. 掌握谷胱甘肽的制备方法，包括原料选择、发酵工艺、提取纯化等。
3. 熟悉实验室基本操作，提高实验技能。
4. 培养团队协作精神，提高综合素质。
二、实训时间2023年11月X日至2023年11月X日三、实训地点XX大学XX学院实验室四、实训内容1. 原料选择与预处理- 选择富含谷胱甘肽的原料，如小麦胚芽、酵母等。
- 对原料进行预处理，如清洗、粉碎、浸泡等。
2. 发酵工艺- 选择合适的发酵菌株，如高含量谷胱甘肽酵母菌株。
- 配制发酵培养基，控制pH、温度、通气量等发酵条件。
- 进行发酵实验，观察菌体生长情况，记录发酵过程。
3. 提取与纯化- 采用溶剂萃取法、酶法或发酵法提取谷胱甘肽。
- 对提取液进行离心、分离、精制等操作，得到谷胱甘肽粗品。
- 利用离子交换树脂、凝胶过滤等方法对谷胱甘肽进行纯化。
4. 含量测定- 采用高效液相色谱法、紫外分光光度法等方法测定谷胱甘肽含量。
- 计算谷胱甘肽的纯度和收率。
五、实训过程1. 原料选择与预处理- 选择新鲜的小麦胚芽作为原料，将其清洗、浸泡、粉碎，备用。
2. 发酵工艺- 将小麦胚芽与酵母接种于发酵培养基中，控制pH 6.0、温度30℃、通气量1 L/min。
- 发酵过程中，定期取样，测定谷胱甘肽含量，观察菌体生长情况。
3. 提取与纯化- 采用溶剂萃取法提取谷胱甘肽，将提取液离心、分离、精制，得到谷胱甘肽粗品。
- 利用离子交换树脂对谷胱甘肽进行纯化，得到高纯度谷胱甘肽。
4. 含量测定- 采用高效液相色谱法测定谷胱甘肽含量，计算纯度和收率。
六、实训结果1. 发酵过程中，菌体生长良好，谷胱甘肽含量逐渐升高，发酵后期达到最高值。
2. 通过溶剂萃取法提取谷胱甘肽，提取率约为80%。
3. 通过离子交换树脂纯化谷胱甘肽，纯度达到95%。
4. 谷胱甘肽含量测定结果为：0.2 mg/mL。
七、实训体会1. 谷胱甘肽是一种具有重要生物学功能的活性物质，具有抗氧化、解毒、提高免疫力等作用。
谷胱甘肽测定实验报告
一、实验目的了解植物组织中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程，学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。
二、实验原理谷胱甘肽（GSH）是一种具有抗氧化作用的天然三肽，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成。
在生物体内，谷胱甘肽具有多种生理功能，如保护细胞免受氧化损伤、参与药物和毒素的解毒过程等。
还原型谷胱甘肽含量的测定对于研究生物体内氧化还原平衡、疾病诊断和药物治疗具有重要意义。
本实验采用分光光度计法测定植物组织中还原型谷胱甘肽的含量。
该方法的原理是：在一定的pH条件下，还原型谷胱甘肽与5,5'-二硫双硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色的5-硫代2-硝基苯甲酸阴离子，于423nm波长处有最大吸收峰。
通过测定该波长处的吸光度值，可以计算出还原型谷胱甘肽的含量。
三、实验材料与仪器1. 材料：小麦幼嫩叶片、5,5'-二硫双硝基苯甲酸（DTNB）、磷酸盐缓冲液（pH 7.0）、乙二胺四乙酸（EDTA）、无水乙醇等。
2. 仪器：分光光度计、电子天平、离心机、匀浆器、恒温水浴锅、微量加样器等。
四、实验方法与步骤1. 样品制备：取小麦幼嫩叶片，用无水乙醇研磨成匀浆，离心取上清液。
2. 标准曲线绘制：分别取6支干净的试管，按表1加入试剂，反应20分钟后，于423nm波长处测定吸光度值，以DTNB浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。
3. 样品测定：取6支干净的试管，按表2加入试剂，反应20分钟后，于423nm波长处测定吸光度值，根据标准曲线计算还原型谷胱甘肽的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线：根据实验数据绘制标准曲线，得到线性回归方程为y=0.0048x-0.0031，相关系数R²=0.9967。
2. 样品测定：根据标准曲线计算小麦幼嫩叶片中还原型谷胱甘肽的含量为（X±SD）mg/g。
六、讨论1. 实验结果表明，小麦幼嫩叶片中含有一定量的还原型谷胱甘肽，其含量与样品制备方法和实验条件有关。
谷胱甘肽的制备
谷胱甘肽的制备背景谷胱甘肽(glutathione，GSH)是由L一谷氨酸、L一半胱氨酸和甘氨酸经肽键缩合而成的一种同时具有1一谷氨酰基和巯基的生物活性三肽化合物⋯，在生物体内具有多种重要的、独特的生理功能，因此又被称为长寿因子和抗衰老因子。
作为一种重要的生理活性物质，GSH在解毒、抗辐射、肿瘤、癌症、氧化衰老和协调内分泌的治疗中效果明显且无副作用，这些同类药物所不具有的优点使得GSH在临床和医药领域有着极为广泛的用途【21。
在食品加T中，GSH具有抗氧化、防止褐变、强化风味和营养等功能，已被作为生物活性添加剂应用于保健食品的生产中。
但GSH在体内循环周期短、易氧化、不能穿过细胞膜，从而限制了其保健和治疗作用的发挥。
据报道，脂质体包埋技术能够有效地提高GSH的保护和治疗作用。
试验步骤1试验材料谷胱甘肽(纯度≥98．0％) Amresco公司；乙醇、乙醚、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、柠檬酸(均为分析纯)、吐温一80(化学纯)、卵磷脂、胆固醇国药集团化学试剂有限公司；0．05m01·L。
磷酸盐缓冲液(PBS) 自制。
2 实验方法1．2．1脂质体的分离方法1．2．1．1凝胶柱过滤法选用Sephadex G一25凝胶柱，取lmL脂质体混悬液进行上样分离，采用一定的洗脱剂洗脱，洗脱速度控制在0．5—1．0mL-min～，进行分部收集，测定游离的谷胱甘肽总量，计算包封率。
1．2．1．2洗脱剂的选择取1mg·mL“的谷胱甘肽溶液1mL上柱分离，分别选用去离子水、NaCI、乙醇、PBS、乙酸和PBS(NaCl)为洗脱剂进行洗脱，洗脱速度控制在0．5～1．0mL·min～，进行分部收集，。
测定洗脱液中的谷胱甘肽总量，计算回收率。
1．2．2脂质体包封率的测定方法1．2．2．1 游离GSH的测定方法采用优化的Ellman‟s测定法”1。
1．2．2．2包封率的计算方法将脂质体与游离谷胱甘肽分离，测定游离的谷胱甘肽量，根据下式计算脂质体包埋率：EE(％)=(1一Cf／Ct)×100％。
谷胱甘肽的提取实验报告
一、实验目的1. 掌握谷胱甘肽的提取方法；2. 了解谷胱甘肽的理化性质；3. 分析谷胱甘肽提取过程中的影响因素。
二、实验原理谷胱甘肽（Glutathione，GSH）是一种含硫氨基酸，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，具有抗氧化、解毒、免疫调节等生物学功能。
谷胱甘肽广泛存在于生物体内，尤其在动物和植物细胞中含量较高。
本实验采用生物技术方法从植物材料中提取谷胱甘肽。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：玉米胚芽、活性炭、无水乙醇、正己烷、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、硫酸铵、氢氧化钠、盐酸、乙醚、氯仿、三氯甲烷等。
2. 实验仪器：电子天平、高速冷冻离心机、恒温水浴锅、旋涡混合器、分光光度计、超声波清洗器、干燥箱等。
四、实验步骤1. 样品处理：将玉米胚芽洗净，晾干，剪碎，称取适量，加入适量蒸馏水，于100℃水浴中提取1小时，冷却后过滤。
2. 预处理：将滤液加入等体积的95%乙醇，混匀，静置过夜，离心取沉淀。
3. 沉淀处理：将沉淀用95%乙醇洗涤2次，每次5分钟，于50℃干燥箱中干燥。
4. 脱色：将干燥后的沉淀用适量蒸馏水溶解，加入活性炭，超声脱色10分钟，过滤。
5. 离心：将脱色后的滤液于4℃、10000r/min离心10分钟，取上清液。
6. 纯化：将上清液用正己烷萃取2次，每次5分钟，弃去正己烷层。
7. 盐析：将水层用饱和硫酸铵溶液进行盐析，于4℃、10000r/min离心10分钟，取沉淀。
8. 洗涤与干燥：将沉淀用少量蒸馏水洗涤，于50℃干燥箱中干燥。
9. 定量分析：采用分光光度法测定谷胱甘肽含量。
五、实验结果与分析1. 提取率：本实验从玉米胚芽中提取谷胱甘肽的提取率为1.23%。
2. 影响因素分析：（1）提取时间：随着提取时间的延长，谷胱甘肽的提取率逐渐提高，但超过1小时后，提取率变化不大。
因此，本实验选择提取时间为1小时。
（2）pH值：在pH值为6.0～8.0范围内，谷胱甘肽的提取率较高，pH值过低或过高均不利于谷胱甘肽的提取。
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• 3.谷胱甘肽的主要来源 • 谷胱甘肽广泛存在于动、植物中，在生物体内有着重 要的作用。在面包酵母、小麦胚芽和动物肝脏中的含量很 高，达100～1000mg/100g,在人体血液中含26～ 34mg/100g，鸡血中含58～73mg/100g，猪血中含10～ 15mg/100g,在西红柿、菠萝、黄瓜中含量也较高(12～ 33mg/100g)，而在甘薯、绿豆芽、洋葱、香菇中含量较 低(0.06～0.7mg/100g)。
谷胱甘肽的制备及含量测定
一、谷胱甘肽的背景知识
• 1.谷胱甘肽是一种什么 样的物质 谷胱甘肽(glutathiose,rglutamyl cysteingl +glycine,GSH)是一种 含γ-酰胺键和巯基的三 肽，由谷氨酸、半胱 氨酸及甘氨酸组成。 谷胱甘肽：还原型谷胱 甘肽、阿拓莫兰、古 拉定
提取工艺
1、取5g干酵母，与15ml蒸馏水充分混合后倒入25ml沸腾的水中。 2、用5ml水洗涤烧杯一并倒入，使混合液保持在95-100℃，沸腾5min。 放置冰水中速冷。 3、在2000rpm速度下离心10min，取上清液，即谷胱甘肽抽提液。 4、谷胱甘肽抽提液，调pH至3.0。 5、上处理好的732阳离子交换吸附柱吸附。 6、用0.25mol/L的NaOH溶液洗脱，洗脱流速10ml/min。收集洗脱液， 洗脱终点用亚硝基氰化钠检测。 7、中和洗脱液至pH6.5。
•
谷胱甘肽还可以保护血红蛋白不受过氧化氢、自由基 等氧化从而使它持续正常发挥运输氧的能力。还原型谷胱 甘肽既能直接与过氧化氢等氧化剂结合，生成水和氧化型 谷胱甘肽，也能够将高铁血红蛋白还原为血红蛋白。 • 谷胱甘肽保护酶分子中-SH基，有利于酶活性的发挥， 并且能恢复已被破坏的酶分子中-SH基的活性功能，使酶 重新恢复活性。 • 谷胱甘肽还可以抑制乙醇侵害肝脏所产生的脂肪肝。 • 谷胱甘肽对于放射线、放射性药物所引起的白细胞减 少等症状，有强有力的保护作用。谷胱甘肽能与进入人体 的有毒化合物、重金属离子或致癌物质等相结合，并促进 其排出体外，起到中和解毒作用 。
破碎 干酵母 含谷胱甘肽的抽 提液
离子交换层 析
洗脱 液 中和 真空浓 缩
干燥
• 谷胱甘肽的含量测定
本实验采用亚硝基铁氰化钠法。其原理是： 本实验采用亚硝基铁氰化钠法。其原理是：谷胱甘肽在 氨水存在下，与亚硝基铁氰化钠发生巯基反应， 氨水存在下，与亚硝基铁氰化钠发生巯基反应，生 成红色化合物。 成红色化合物。测定中加入硫酸铵可以增加颜色反 应的强度。 应的强度。 操作步骤】 【操作步骤】 在试管中加入1.0g硫酸铵粉末， 1.0g硫酸铵粉末 1、在试管中加入1.0g硫酸铵粉末，以使体系中硫酸铵 达到过饱和；1ml待测的谷胱甘肽溶液 3ml硫酸铵 待测的谷胱甘肽溶液， 达到过饱和；1ml待测的谷胱甘肽溶液，3ml硫酸铵 饱和溶液，摇匀。 饱和溶液，摇匀。 2、加入0.5ml 1%亚硝基铁氰化钠溶液，随即加入 加入0.5ml 1%亚硝基铁氰化钠溶液， 亚硝基铁氰化钠溶液 8mol/L氨水溶液 混合。 氨水溶液， 0.7ml 8mol/L氨水溶液，混合。 3、立即（在30秒内）用分光光度计在525nm进行比色， 立即（ 30秒内）用分光光度计在525nm进行比色， 秒内 525nm进行比色 读取光密度值。 读取光密度值。 按照标准曲线y=4.0914x+0.0028,r=0.9986 y=4.0914x+0.0028,r=0.9986来计算谷胱 按照标准曲线y=4.0914x+0.0028,r=0.9986来计算谷胱 甘肽的浓度。式中y是光密度值， 甘肽的浓度。式中y是光密度值，x是谷胱甘肽的浓 单位mg/L mg/L。 度，单位mg/L。
• • • • • •Fra bibliotek•谷胱甘肽的理化性质？ 分子式：C10H17N3O6S 分子量：307.32348 熔点：为189～193°C，晶体呈无色透明细长拉状，等电点为5.93。 药理作用：本品可促进糖、脂肪及蛋白质代谢，加速自由基排泄，保护 肝脏的合成、解毒、灭活激素等功能。 谷胱甘肽在人体内的生化防御体系起重要作用，具有多方面的生理功能。 它的主要生理作用是能够清除掉人体内的自由基，做为体内一种重要的抗氧 化剂，保护许多蛋白质和酶等分子中的巯基。GSH的结构中含有一个活泼的 巯基-SH，易被氧化脱氢，这一特异结构使其成为体内主要的自由基清除剂。 例如当细胞内生成少量H2O2时，GSH在谷胱甘肽过氧化物酶的作用下，把 H2O2还原成H2O，其自身被氧化为GSSG，GSSG由存在于肝脏和红细胞中 的谷胱甘肽还原酶作用下，接受H还原成GSH，使体内自由基的清除反应能 够持续进行。 谷胱甘肽不仅能消除人体自由基，还可以提高人体免疫力。谷胱甘肽维 护健康，抗衰老，在老人迟缓化的细胞上所发挥的功效比年轻人大。
• 4.谷胱甘肽的应用 • 谷胱甘肽具有广谱解毒作用，不仅可用于药物，更可 作为功能性食品的基料，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿 瘤等功能性食品广泛应用。 • 生化试剂、解毒药，主要用于重金属、丙烯腈、氟化 物、一氧化碳及有机溶剂等中毒。 • 其中以上信息谷胱甘肽中的理化性质和主要来源有利于分 离纯化方案