谷胱甘肽的制备及含量测定

• 3.谷胱甘肽的主要来源 • 谷胱甘肽广泛存在于动、植物中，在生物体内有着重 要的作用。在面包酵母、小麦胚芽和动物肝脏中的含量很 高，达100～1000mg/100g,在人体血液中含26～ 34mg/100g，鸡血中含58～73mg/100g，猪血中含10～ 15mg/100g,在西红柿、菠萝、黄瓜中含量也较高(12～ 33mg/100g)，而在甘薯、绿豆芽、洋葱、香菇中含量较 低(0.06～0.7mg/100g)。
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பைடு நூலகம்
谷胱甘肽还可以保护血红蛋白不受过氧化氢、自由基 等氧化从而使它持续正常发挥运输氧的能力。还原型谷胱 甘肽既能直接与过氧化氢等氧化剂结合，生成水和氧化型 谷胱甘肽，也能够将高铁血红蛋白还原为血红蛋白。 • 谷胱甘肽保护酶分子中-SH基，有利于酶活性的发挥， 并且能恢复已被破坏的酶分子中-SH基的活性功能，使酶 重新恢复活性。 • 谷胱甘肽还可以抑制乙醇侵害肝脏所产生的脂肪肝。 • 谷胱甘肽对于放射线、放射性药物所引起的白细胞减 少等症状，有强有力的保护作用。谷胱甘肽能与进入人体 的有毒化合物、重金属离子或致癌物质等相结合，并促进 其排出体外，起到中和解毒作用 。
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谷胱甘肽的理化性质？ 分子式：C10H17N3O6S 分子量：307.32348 熔点：为189～193°C，晶体呈无色透明细长拉状，等电点为5.93。 药理作用：本品可促进糖、脂肪及蛋白质代谢，加速自由基排泄，保护 肝脏的合成、解毒、灭活激素等功能。 谷胱甘肽在人体内的生化防御体系起重要作用，具有多方面的生理功能。 它的主要生理作用是能够清除掉人体内的自由基，做为体内一种重要的抗氧 化剂，保护许多蛋白质和酶等分子中的巯基。GSH的结构中含有一个活泼的 巯基-SH，易被氧化脱氢，这一特异结构使其成为体内主要的自由基清除剂。 例如当细胞内生成少量H2O2时，GSH在谷胱甘肽过氧化物酶的作用下，把 H2O2还原成H2O，其自身被氧化为GSSG，GSSG由存在于肝脏和红细胞中 的谷胱甘肽还原酶作用下，接受H还原成GSH，使体内自由基的清除反应能 够持续进行。 谷胱甘肽不仅能消除人体自由基，还可以提高人体免疫力。谷胱甘肽维 护健康，抗衰老，在老人迟缓化的细胞上所发挥的功效比年轻人大。
破碎 干酵母 含谷胱甘肽的抽 提液
离子交换层 析
洗脱 液 中和 真空浓 缩
干燥
• 谷胱甘肽的含量测定
本实验采用亚硝基铁氰化钠法。其原理是： 本实验采用亚硝基铁氰化钠法。其原理是：谷胱甘肽在 氨水存在下，与亚硝基铁氰化钠发生巯基反应， 氨水存在下，与亚硝基铁氰化钠发生巯基反应，生 成红色化合物。 成红色化合物。测定中加入硫酸铵可以增加颜色反 应的强度。 应的强度。 操作步骤】 【操作步骤】 在试管中加入1.0g硫酸铵粉末， 1.0g硫酸铵粉末 1、在试管中加入1.0g硫酸铵粉末，以使体系中硫酸铵 达到过饱和；1ml待测的谷胱甘肽溶液 3ml硫酸铵 待测的谷胱甘肽溶液， 达到过饱和；1ml待测的谷胱甘肽溶液，3ml硫酸铵 饱和溶液，摇匀。 饱和溶液，摇匀。 2、加入0.5ml 1%亚硝基铁氰化钠溶液，随即加入 加入0.5ml 1%亚硝基铁氰化钠溶液， 亚硝基铁氰化钠溶液 8mol/L氨水溶液 混合。 氨水溶液， 0.7ml 8mol/L氨水溶液，混合。 3、立即（在30秒内）用分光光度计在525nm进行比色， 立即（ 30秒内）用分光光度计在525nm进行比色， 秒内 525nm进行比色 读取光密度值。 读取光密度值。 按照标准曲线y=4.0914x+0.0028,r=0.9986 y=4.0914x+0.0028,r=0.9986来计算谷胱 按照标准曲线y=4.0914x+0.0028,r=0.9986来计算谷胱 甘肽的浓度。式中y是光密度值， 甘肽的浓度。式中y是光密度值，x是谷胱甘肽的浓 单位mg/L mg/L。 度，单位mg/L。
提取工艺
1、取5g干酵母，与15ml蒸馏水充分混合后倒入25ml沸腾的水中。 2、用5ml水洗涤烧杯一并倒入，使混合液保持在95-100℃，沸腾5min。 放置冰水中速冷。 3、在2000rpm速度下离心10min，取上清液，即谷胱甘肽抽提液。 4、谷胱甘肽抽提液，调pH至3.0。 5、上处理好的732阳离子交换吸附柱吸附。 6、用0.25mol/L的NaOH溶液洗脱，洗脱流速10ml/min。收集洗脱液， 洗脱终点用亚硝基氰化钠检测。 7、中和洗脱液至pH6.5。
• 4.谷胱甘肽的应用 • 谷胱甘肽具有广谱解毒作用，不仅可用于药物，更可 作为功能性食品的基料，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿 瘤等功能性食品广泛应用。 • 生化试剂、解毒药，主要用于重金属、丙烯腈、氟化 物、一氧化碳及有机溶剂等中毒。 • 其中以上信息谷胱甘肽中的理化性质和主要来源有利于分 离纯化方案
谷胱甘肽的制备及含量测定
一、谷胱甘肽的背景知识
• 1.谷胱甘肽是一种什么 样的物质 谷胱甘肽(glutathiose,rglutamyl cysteingl +glycine,GSH)是一种 含γ-酰胺键和巯基的三 肽，由谷氨酸、半胱 氨酸及甘氨酸组成。 谷胱甘肽：还原型谷胱 甘肽、阿拓莫兰、古 拉定