黄色短杆菌

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黄色短杆菌B.003产L-精氨酸发酵条件的研究

ＷＥＩＹｕｎ — ｗｅｉ，ＸＵＪｕｎ．ｑｉｎｇ，ＧＡＯＸｉａｎ．１ｉｎｇ，ＹＵＡＮＪｉａｎ．ｇｕｏ ’
（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＪｉｎａｎ，Ｊｉｎａｎ２５００２２，Ｃｈｉｎａ，＂２．ＺｈｏｎｇＸｉｅＦｏｏｄ
ＡｄｄｉｔｉｖｅｓＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＣｅｎｔｅｒｆＳｏｈａｎｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｊｉｎａｎ２５００１３，Ｃｈｉｎａ）
ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｇｌｕｃｏｓｅ，（ＮＨ４）２ＳＯ４ａｎｄＫＨ２ＰＯ４ｈａｄｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｉｎｌｆｕｅｎｃｅｓｏｎｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＬ — ａｒｇｉｎｉｎｅｂｙ
ｅｘｐｌｏｉｔｅｄｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙｔｏｏｐｔｉｍｉｚｅｆｅｍｅｒｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒＬ．ａｒｇｉｎｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．ＲｅｓｕｌｔｓＩｔｗａｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔ

黄色短杆菌原生质体制备与再生条件的研究

ＳｔｕｄｙｏｎＰｒｏｔｏｐｌａｓｔＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆＢｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｌａｆｖｕｍ
ＱＩＹｏｎｇ — ｃｈｕｎ ‘ ，ＸＵＪｕｎ — ｑｉｎｇ，ＧＡＯＹａｎ — ｈｕａ２，ＬＩＦｅｎｇ，ＹＵＡＮＪｉａｎ－ｇｕｏ ’
ｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ：ｐｒｅｔｒｅａｔｉｎｇＢｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｌａｖｕｍａｔｔｈｅｅａｒｌｙｔｉｍｅｏｆｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌｐｈａｓｅ，ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
２５００１３）
摘要：目的研究高产谷氨酰胺的黄色短杆菌原生质体制备和再生的最佳条件。方法用青霉素和甘氨酸预处理黄色短杆菌后，用溶菌酶酶解，研究菌龄、青霉素和甘氨酸预处理浓度及时间、酶浓度、酶解时间、酶解温度等条件对原生质体制备和再生的影响。结果原生质体制备和再生的最佳条件为：预处理处于对数生长早期的黄色短杆菌，青霉素最适浓度
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｈａｎｄｏｎｇＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎａｎ２５００１４，Ｃｈｉｎａ；２．ＪｉｎｇＬｕＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈ

谷氨酸棒状杆菌gdh基因在黄色短杆菌C-11中的克隆及表达

ｅｕｏｆｉｐｏｃｗｓｏｔｙｓｉｒｕｔｎａｄｔｒｅ— ｂｔｃ：Ｏｊｉ】ｈｒｓｏｔｓｒｅｔａｔｓｄｅｎｐｄｃｏｔａｅｅｎｒｃｖｐｐｅｊｕＬ— ｒｅｏｉｒｅｎｈｆｍｈｔｉｑｉｃｅｔｙｅｘｒｓｏＤ．【ｔｄＴｅｄｇｔａｅｙｒｅａｅｇｎａａｏｅｃｎｙｆｃｄｐｅｉｏＧＨＭｅｏ】ｈｈ（ｌａｔｄｈｄｏｎｓ）ｅｅｓｔｎｆｅａｅｂｔｅｉｈｓｎｆｈｇｕｍｅｇｗ
ｃｏｅｒｍｏｙｅａｃｅｉｍｕａｍｉｕＡＴＣＣ３３ｎｍｐｌｅｙＰＣＲ．ＴｈｅｇｄｅｅｗａｎｓｒｅｎｏｌｎｄｆｏＣｒｎｂｔｒｕｇｌｔｃｍ９１５ａｄａｉｄｂｉｆｈｇｎｓｉｅｔｄｉｔ
Ｅｏ —ＢｅｉａｔｉｍｆａｕｓｕｔｘｒｓｉｅｔＥ７ｔｃｎｔｃａｒｃｍｉａｔｌｓｉＥ７．ｃｌｒｂｃｒｖｍｈｔｅｅｐｅｓｎｖｃｒｐＣｏｏｓｕｔｅｏｂｎｎａｍｄｐＣＧ，ｉｖｅｕｌｌｏｏｒｐｗｉａｕｓｑｅｔａｓｒｅｔＢｆｖｍＣ一１，ｒｄｃｇａｇｎｔｎｉｅｉｇｓａｈｃｗｓｓｂｅｕｎｌｔｎｆｍｄｉｏ．ａｕｈｙｒｏｎｌｐｏｕｉｅｅｃｅｇｅｒｔｉＣ一１．１ｎｉｎｎｒｎ１Ｇ
【ｅｕ】ｔａｓｗａｔＤｚｅｃｖｙｏｌｂｃａｄｙ２７ｉｔｒｎＣ— ｌ，ｎＲｓｌＩｗｓｈｎｔｔｅＨｅｙｔｉｕｅｎｒｓ．％ｎｈｓａｌＧａｄｔｏｈＧｈｎｍａｉｔｃｄｉｅｅｂ３ｅｔｉｈｐｄｃｇｃｔｏＬ— ｅｎｓ５２／，ｈｈｗｓ３８％ｉｅｔｎｔｓｓａ．【ｏ－ｔｒｕｉｉｒｅｆｓｉｅａ１．８ＧＬｗｉａ３．０ｈｈｒａｅｏｒｎＣｎｅｏｎａｄａｒｗｃｇｈｈｈｔｔｉｃｓｎＴｅｎｉｅｎａ１ＧｗｓｕｃｓｕｃｎｔｃｄＴｅｘｒｓｎｏｇｈｇｎａａｉｅｌｉ】ｈｇｅｒｇｓｉＣ一ａｓｃｅｓｌｏｓｕｔ．ｈｐｓｏｅｅｈｓｇｒｕｏｅｎｉｔｎｒ１ｆｒｅｅｅｉｆｄｈｈ

产生L_异亮氨酸的黄色短杆菌的代谢途径分析

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,$ 异亮氨酸是人体 - 种必需氨基酸之一，在临床领域主要
作为复合氨基酸输液、三支链氨基酸输液、氨基酸口服液等的成分之一，用于治疗肝病、肝昏迷、体弱乏力等疾病，是比较昂贵的氨基酸原料药之一。目前国内 ,$异亮氨酸的市场需求急剧上升，因而对微生物发酵法生产 ,$异亮氨酸的研究也日益加强 V!W。工业微生物学家试图通过对细胞进行遗传修饰来改变生物过程的运行，以实现目的产物的过量合成，这就需要对代谢网络进行理性的分析。代谢途径的确定对于提供一种以整个代谢功能和表型为出发点进行途径定位的方法是必不可少的。途径分是代谢工程中用以指导遗传操作的理论基析（ K2=IR2> 2726><5<）础，是代谢网络分析的基本方法 V%W。对于这种鉴别和分析的方法，最有发展前途的是利用凸分析原理，这些原理包括最近提出的元素模型概念和极端途径模型，两者都能用于确定代谢网络的生产能力的界限。一些反应的不可逆性使得代谢网络中的相当多的通量存在于一个凸圆锥中，该圆锥可由用矩阵方法计算出来的向量确定。代谢途径的结构分析需要有关计量学模型和可逆性或非可逆性反应的知识，然后通过计算就能得到最优途径这已通过计算机程序得到实现 V’W。王健、张蓓等对的通量分布 V+$*W，

黄色短杆菌产L-苏氨酸的中试发酵工艺研究

黄色短杆菌产L-苏氨酸的中试发酵工艺研究刘超;贾召鹏;伏广好【摘要】对黄色短杆菌在发酵罐中产苏氨酸的发酵工艺进行研究.通过单因素试验确定了培养时间、温度、pH和接种量的最优条件.在单因素试验的基础上,利用正交试验确定发酵最优条件.结果证明:在最优试验条件下(温度30℃,pH 7,接种量10％),L-苏氨酸产率为12.14％.【期刊名称】《发酵科技通讯》【年(卷),期】2016(045)002【总页数】4页(P103-105,113)【关键词】黄色短杆菌;L-苏氨酸;发酵工艺【作者】刘超;贾召鹏;伏广好【作者单位】山东阜丰发酵有限公司,山东莒南276600;山东阜丰发酵有限公司,山东莒南276600;山东阜丰发酵有限公司,山东莒南276600【正文语种】中文【中图分类】TQ92L-苏氨酸属于人体20种必需氨基酸之一，主要用于医药、食品及饲料领域，近年来需求量增长迅速［1］。

在医药方面，L-苏氨酸可以抗脂肪肝，促进淋巴细胞分化成熟，保护细胞膜；在食品方面，L-苏氨酸可以作为食品强化剂，提高食品的营养价值，与葡萄糖共热产生的焦香味可以增香，一般与其他氨基酸合并用于强化谷物营养；在饲料方面，L-苏氨酸与赖氨酸、色氨酸和蛋氨酸一起列为4大饲料添加剂，主要用于未成年仔猪和家禽等的饲料［2］，并逐渐成为影响畜禽生产性能的主要限制因素［3］。

微生物发酵法是目前生产L-苏氨酸的主要方法［4］，本文通过对本公司生产菌种的中试发酵工艺进行优化，期望可以降低后续实际生产中的能耗，增加公司利润。

1.1菌种黄色短杆菌（Brevibacteriumflavum），由本公司保藏。

1.2摇瓶培养基（200 m L）蛋白胨2 g，酵母膏2 g，NaCl 1 g，pH 7.0，150 r/min，30℃培养15 h。

1.3发酵培养基（20 L）蛋白胨200 g，牛肉膏200 g，酵母膏100 g，NaCl 100 g葡萄糖100 g，接种后转速300 r/min，气压0.1 MPa，每4 h采样分析。

大肠杆菌SerB基因的克隆及其在黄色短杆菌中的表达

ｉｏｔｉｅｒｍ．ｏｉＪ１９ｂＣＴｉｇｎ＇ａｎｅｔｔＦ＇ｎｅｒｃｍｉａｔｌｍｉｓｔｅＢｓｂａｎｄｆｏＥｃｌＭ０ｙＰＲ．ｈＳｅｅｗｓｉｓｒｉｏｐＬ７ａｄｔｅｏｂｎｎａｄｈＳｒｄｅｎｈｐｓｗｉ
Hale Waihona Puke ＡｓａｔＰｏｐｏｅｎｉｏａｓｒｓＳｒ）ｓｋｙｅｚ￣ｉｂｏｙｔｅｉｏＬ—ｓｉｅＴｅｅｅｅｂｔｃ：ｈｓｈｓｒｅａｎｔｎｆａｅ【ｅｉａｅｙｎｉｎｓｆｒｉｍｒｅＢｎｎｓｈｓｅｎ．ｈＳｒｎｒＢｇ
ｈｅｅｒｈｏｏｓｒｃｉｎｏｉｈＬ—ｓｒｒｄｃｄｇｎｔｅｒｓａｃｆｃｎｔｕｔｏｆｈｇｅｉｐｏｕｅｅｅ—ｅｇｎｅｎｔａｎ．ｎｅｎｉｅｆｇｓｒｉｉＫｅｒｓ：ｌ￣ｐｏｅｉｅａｎｔａｓｅａｅｃｏｉｇ；ｘｒｓｉｎｙｗｏｄＰｘｓｈｓｒｎｍｉｏｒｎｆｒｓ；ｌｎｎｅｐｅｓｏ
一
丝氨酸高产基因工程菌的研究奠定了基础。文献标识码：Ａ文章编号：０１３０２０｝２０６４１０ —４３（０６０ —０９ —０
关键词：酸丝氨酸转氨酶；隆；达磷克表中图分类号：８２Ｑ１
ＣｏｉｇｏｈｓｈｓｒｅＡｎｔａｓｅａｅ（ｅＢ）ＧｅｅｏｓｈｒｈａｃｌａｄｌｎｎｆＰｏｐｏｅｉｍｉｏｒｎｆｒｓＳｒｎｎｆＥｃｅｉｉｏｉｎｃＥｐｅｓｎｉｒｖａｔｉｍｆｖｍｘｒｓｉＢｅｉｃｒｌｕｏｎｂｅｕａ

黄色短杆菌YILW生产L-异亮氨酸的发酵工艺研究

第３９卷第３期
２１年７００月
发酵科技通讯
黄色短杆菌ＹＬ生产Ｌ异亮氨酸的发酵工艺研究ＩＷ一
白亚磊冯宁徐庆阳谢希贤陈宁
（天津科技大学生物工程学院天津３０５）０４７
摘要：本文对Ｌ异亮氨酸产生菌ＹＬ的发酵工艺条件做了研究，定了其积累Ｌ异亮氨酸的一ＩＷ确一
化率达到２％。１关键词：色短杆菌黄Ｌ）一ＬＩ是人体八种必需氨基酸ｅ
ｍｇＬＶＢ３ｇＬｐ．７２０１ａ湿热灭菌／，ｌｍ／，Ｈ７０－．，．Ｍｐ
１ａｉ５ｒｎ。
之一，又是三种支链氨基酸之一，因其特殊的结构
和功能，因此，人类生命代谢中具有特别重要的在地位。Ｌ一异亮氨酸除用于一般营养型复合氨基酸输液、要素膳外，还作为特殊的支链氨基酸之
一
基础发酵培养基：萄糖８，Ｈ）ｏ４，ｅ．葡０（４２．ｏＦＳＮｓ
ｍｇ豆饼水解液２，，０玉米浆２，Ｈ７－．，．５ａ．ｐ．７０７Ｍｐ５０２０湿热灭菌１ｒｉ。５ｎａ
肾安氨基酸输液，特别是以Ｌ一异亮氨酸为主要
原料生产的高支链氨基酸输液、肝安糖浆、肝灵口服液，治疗各种肝脏疾病具有显著疗效，对因此，
中，于旋转式摇床上（８ｒｉ）１振荡培养置１０／ｎ，ａｒ３

营养及环境因素对黄色短杆菌发酵生产L-亮氨酸的影响

维普资讯
生
３８７
ＬＩＲＳＩＢＯＴＮＯＬＥ１ＮＩＥＣＨＴＴＥＨＯＧＹＶｌ７Ｎｏ３一ｙ０６ｏ一２０－１・Ｍａ，２Ｏｊ，Ｏ０＿
．
技
术
通
ｆｒｅｔｔｏｅｐｅｍｅｔＣｏｌｉｎ：Ｔｅｆｅｔｏｎｔｔｏｌｅｍｎａｉｎｘｒｉｎ．ｎｃｕｓｏｈｅｃｓｆｕｒｉｎａａｎｅｖｒｍｅｔｌｏｉｉｓｎｈｆｒｅａｉｎｒｄｕｔｏｉｄｎｉｏｎｎａｃｎｄｔｏｎｏｔｅｅｍｎｔｔｏｐｏｃｉｎｏｆＬ－ｌｕｃｎｗｅｅｖｅｙｍｐｏｔｎ．ｅｉｅｒｒｉｒａｔ
ｔｅｏｔｍｅｍｅｔｔｎｃｎｉｏ，ｓｅｕｔｒｉ６ｎｎｃｌｍｉｅ１％，１．／－ｅｃｎｓａｃｍｕａｅｈｐｉｍｕｆｒｎａｉｏｄｔｎｅｄｃｌｅｔｏｉｕｍｅ３ｈａｄｉｏｕｕｓ０ｚ９４ｇＬＬｌｕｉｅｗａｃｕｌｔｄｉ２ｙｓａｉｇｆｓｅｐｒｎｎｈｙｅｄｆＬｌｕｉｅｗａ９４／ｎ６ｙ０ｌｅｅｅｔｒｆｅｂｔｈｎ７ｈｂｈｋｎａｋｘｅｍｅｔａｄｔｅｉｌｏ－ｅｃｎｓ２．７ｇＬｉ４ｈｂ１一ｉｒｆｒｎｏｅｄａｃｌｉｔｍ
亮氨酸具有重要影响。
［键词］黄色短杆菌；一氨酸；酵条件关Ｌ亮发

L-异亮氨酸产生菌黄色短杆菌的选育

上，一步筛选ａ氨基丁酸抗性突变株，进一以期获得Ｌ异亮氨酸产量有较大提高的突变株。一
收稿日期：２１－０２０Ｉ１—５作者简介：沈加彬，１８在读硕士，男（９５）研究方向为微生物遗传育种。基金项目：福建省自然科学基金项目（ｏ９ｏ１８；建省科技重２ｏＪ１２）福
摘要：以黄色短杆菌Ｂ４０为出发菌株，过紫外线和亚硝基胍（Ｇ）合诱变处理后，得一株甲硫氨酸缺陷（ｔＦ２经ＮＴ复获Ｍｅ一）
及抗ａ氨基丁酸（— Ｂ的Ｌ异亮氨酸产生菌Ｂ６０该菌株在未进行优化的发酵条件下能够积累Ｉ异亮氨酸的量为７１一ａＡ）一Ｍ２１，『．２ｇＬ・，出发菌株Ｂ４０提高了１２５。比Ｆ２２．
１材料与方法１１材料．
１１１菌种：色短杆菌Ｂ４０为本实验室保藏．．黄Ｆ２
菌种。１１２培养基．．
有许多生理功能，已被广泛应用到医药、品、味食调
剂、动物饲料以及化妆品的制造中，以在医学研究尤和治疗中受到重视口。］
关键词：异亮氨酸；色短杆菌；合诱变；种黄复育
中图分类号：９Ｑ３文献标识码：Ａ文章编号：０６８７（０１０ —０８０１０ —３６２１）４０３—４

黄色短杆菌产L-精氨酸发酵培养基的优化

ＺＨＡＯＸｉｎ，ＸＩＡＯＹｕ－ｐｉｎｇ，ＬＩＬｉ－ｙｉｎｇ
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＦｏｏｄａｎｄＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｉｒｎｇ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＩｎｄｕｓｔｒｙＴｅｃｈｎｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０３００，
黄色短杆菌产Ｌ一精氨酸发酵培养基的优化
赵鑫．一。肖玉平，李立英（ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ１．广东轻工职业技术学院食品与生物工程系，广东广州５１０３００；２．广东高校特色调味品工程技术开
发中心，广东广州５１０３００）
摘要：在液体培养条件下，采用单因素试验法，考察了发酵培养基中不同浓度的碳源、氮源、无机盐和生物素对实
ｏｆＳｐｅｃｉａｌｉｔｙＣｏｎｄｉｍｅｎｔｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０３００，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｔｔｈｅｌｉｑｕｉｄｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍｏｆＧＣ１３２５，ｔｈｅｈｉｇｈｙｉｅｌｄｉｎｇｏｆＬ—
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅｓ，ｎｉｔｒｏｇｅｎｓｏｕｒｃｅｓ，ｉｎｏｒｇａｎｉｃｓａｌｔｓ，ａｎｄｔｈｉａｍｉｎｅｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＬ—

黄色短杆菌中L-异亮氨酸同位素丰度及分布的分析方法研究

第43 卷第 3 期2024 年3 月Vol.43 No.3496~500分析测试学报FENXI CESHI XUEBAO（Journal of Instrumental Analysis）黄色短杆菌中L-异亮氨酸同位素丰度及分布的分析方法研究赵雅梦1，2，范若宁1，2，雷雯1，2*（1．上海化工研究院有限公司，上海　200062；2．上海市稳定同位素检测及应用研发专业技术服务平台，上海　200062）摘要：随着代谢组学、蛋白质组学等生命科学领域的迅猛发展，稳定同位素标记试剂，尤其是标记氨基酸，因无放射性、与非标记化合物理化性质一致等优势得到广泛应用。

该文建立了一种稳健、快速的氨基酸同位素丰度分析方法。

方法采用Hypersil Gold Vanquish（100 mm × 2.1 mm，1.9 μm）色谱柱，以水和含0.1%甲酸的甲醇为流动相，正离子模式下进行液相色谱-高分辨质谱联用（LC-HRMS）分析；测得细菌发酵液中L-异亮氨酸-15N的同位素丰度为98.58%，相对标准偏差为0.03%，可应用于不同稳定同位素（15N或13C）示踪的黄色短杆菌中L-异亮氨酸同位素丰度及分布的准确测定。

该方法具有简便、灵敏、稳健等优点，有望在合成生物学、同位素示踪代谢流等研究中发挥重要作用。

关键词：同位素标记氨基酸；液相色谱-高分辨质谱（LC-HRMS）；黄色短杆菌；同位素分布及丰度中图分类号：O657.72；O629.7文献标识码：A 文章编号：1004-4957（2024）03-0496-05Analysis of Isotope Abundance and Distribution for L-Isoleucinein Brebvibacterium flavumZHAO Ya-meng1，2，FAN Ruo-ning1，2，LEI Wen1，2*（1．Shanghai Research Institution of Chemical Industry Co. Ltd.，Shanghai　200062，China；2．Shanghai Professional Technology Service Platform on Detection and Application Development for Stable Isotope，Shanghai　200062，China）Abstract：In the rapidly advancing life science fields such as metabolomics and proteomics，stable isotope labeling reagents that are non-radioactive and have similar physiochemical properties with un⁃labeled compounds have been widely utilized. Biological fermentation is one of the major synthesis ap⁃proaches for labeled amino acids. In this study，we have established an accurate，robust，and rapid method to determine the isotope abundance of the amino acids in the fermentation broth to aid in early assessment of batch quality and optimization of fermentation conditions and amino acid yield. A Hy⁃persil Gold Vanquish column（100 mm × 2.1 mm，1.9 μm）with water and methanol containing 0.1%formic acid as mobile phase and a liquid chromatography-high resolution mass spectrometry（LC-HRMS） system in positive ion mode were used for the study. The isotopic abundance of L-iso⁃leucine-15N samples was determined to be 98.58%，closely matching the indicated value（>98%），with a relative standard deviation of 0.03%，demonstrating excellent accuracy and precision for the method. Then the method was successfully applied to determine the isotopic abundance and distribu⁃tion of L-isoleucine in Brevibacterium flavum labeled with 15N or 13C. The proposed method is simple to perform，convenient，highly sensitive，and robust，holding wide application potentials in syn⁃thetic biology and research in stable isotope traced metabolic pathways.Key words：stable isotope labeled amino acid；liquid chromatography-high resolution mass spec⁃trometry（LC-HRMS）；Brebvibacterium flavum；isotope distribution and abundance利用同位素标记技术将化合物中普通原子替换为同位素核素所合成的稳定同位素标记化合物，结合质谱技术，已在蛋白质组学、代谢组学、生物靶标发现、临床诊断等生命科学研究中发挥重要作用［1-4］。

NH_4 +浓度对黄色短杆菌XV0505发酵生产L-缬氨酸的影响

第９卷第２期２１年３月０１
生
物
加
上
过
程
Ｖ０＿ｌ９Ｎｏ．２Ｍａ．２ｒ０ｌ１
ＣｉｅｅＪｕａｆＢｏｒｃｓｇｎｅｉｇｈｎｓｏｒｌｏｉｐｏｅｓＥｎｉｅｒｎｎ
ｄｉ１．９９ｊｉｎ１７３７．０．２０３ｏ：０３６／．ｓ．６２— ６８２１０．０ｓ１
（ｏｌｅｏＢｏｃｎｌｇ，ｉｊｎｖｒｉｆｃｎｅ＆ＴｃｎｌｙＴａｊ０４７ＣｉａＣｌｇｆｉｅｈｏｙＴａｉＵｉｅｔｏＳｉｃｅｔｏｎｎｓｙｅｅｈｏｇ，ｉｉ３０５，ｈｎ）ｏｎｎ
Ａｂｓｒｃ：ｅａｔａｔＴｈｍｍｏｉｍｕｆｔｓｓｌｃｅｓｔｅｏｌｅｄｎｉｒｇｎｓｕｒｅｉｈｖｌｎｅｍｅ — ｎｕｓｌｅｗａｅｅｔｄａｈｎｙｆｅｉｇｎｔｏｅｏｅｎｔｅＬ— ａｉｅｆｒｎａ
度分别可达２．５和５．２ｇＬ２３９１／。
关键词：色短杆菌；谢流；ＨＬ缬氨酸黄代Ｎ４；
中图分类号：９Ｑ３
文献标志码：Ａ
文章编号：６２—３７（０１００１０１７６８２１）２— ０２— ６
ｔ５．２ａｄ２．５ｇＬ（０ｈｎｔｅ３ｅｍｅｔｒ０９１ｎ２３／６）ｉｈ０Ｌｆｒｎｏ．
ｔｉｒｃｓｂｒｉｃｒｍ口ｍＸ００．ｆｃｓｆｉｅｅｔＨｉｏｃｎｒｔｎｎｂｏａｓｙｅａｏｐｏｅｓｙｅｂｔｉｎＭＶ５５Ｅｆｔｏｄｆｒｎｅｔｉｓｉｓ，ｉｄｔｎＢｖａｅｕｅｆｎＮｃａｏｏｍｌ

响应面法优化黄色短杆菌c-11产L-丝氨酸发酵培养基

ＲｓｒｎｔｕｅＡｐｉｃｏｉｏｙＸｎｉｎｃｄｍＡｒｕｔｒｌｃｎｅ，ｒｍｑ８０９，ｈｎ）ｅａｃＩｓｔｔｏｐｌｄＭｉｂｌ，ｉａｇＡａｅｙｏｇｉｌａｉｃｓＵｕｉ３０ＣｉａｅｈｉｆｅｒｏｇｊｆｃｕＳｅ１
ｆｔｓｈｉｔｅｔｃｒｗｒｃｏｅｙａｔｘａｔＮ４２Ｏ，ＨＰ４ＭｇＯ，ｉｉ，Ｂｎａｏ．Ｔｅｅｈｌｅｆｔｓｅｅｓｒｓ，ｅｓｅｔｃ，（Ｈ）Ｓ４Ｋ２Ｏ，Ｓ４ｂｏｎＶ１ｄｃｒｇｒａｄａｏｕｒｔａ
ｅｇｔｒｌｔｄｆｃｏｓｗｅｅｅａｕｔｄｉｅｍｅｔｔｎｍｅｉｍｙＰａｋｔ —Ｂｒｎｄｓｇｏｆｔｒｏｔｈｉｉｈｅａｅａｔｒｒｖｌａｅｎｆｒｎａｉｄｕｂｌｅｅｔ— ｕｍａｅｉｎｔｌｕｅｍａｎｏｉｅｔ
ＢｅｉｃｒｍｆｖｍｂｓｇＲｓｏｓｕｆｃｔｏｏｏｙｒｖａｔｉａｕｙＵｉｅｐｎｅＳｒａｅＭｅｈｄｌｂｅｕｌｎｇ
ＹＡＮＨｕ，ＡＯＨｕ —ＦｎＷＡＮＧＮｉｇ，ＡＮＧＷｅＧｉＢｉａｇ，ｎＷｉ
（．１石河子大学生命科学院，新疆石河予８２０；新疆农业科学院微生物应用研究所，３００２．乌鲁木齐８０９）３０１
摘要：目的】【利用响应面法对黄色短杆菌Ｃ１发酵培养基进行优化，一１以提高Ｌ一丝氨酸产率。【方法】先
采用Ｐａｋｔ—Ｂｒａｌｅｃｔｕｍｎ实验法对发酵培养基８因素（个蔗糖、酵母膏、硫酸铵、ＨＰＭｇＯ、物素、ＢＫ￣Ｏ、Ｓ生Ｖ和

微生物与发酵工程

第五章微生物与发酵工程年级__________ 班级_________ 学号_________ 姓名__________ 分数____一、填空题(共16题，题分合计16分)1.自2002年11月我国报告首例非典病例，其后疫情先后发生于我国内地的20多个省份，至2003年6月，我国的非典疫情得到了有效控制。

请回答：(1)据世界卫生组织的研究结果表明，引起"严重急性呼吸系统综合症"(SARS)疫情的病原体为流感病毒的一个变种，称为__________________，其遗传物质为__________________。

遗传信息的传递是按照__________________的规律进行的。

(可以用简图表示)。

(2)一般认为，这类病原体的变异性较强，提出这种观点的原因是____________________________________。

但最近的研究结果表明，SARS病原体并不如想像的那样变幻不定，从而为疫苗的研制工作带来了福音。

(3)治疗非典病人时曾有人试用"血清疗法"，即用已康复者的血清注入患者的体内，这属于__________________免疫。

2.酶活性的调节是一种_______._________的调节方式。

3.酶活性的调节和酶合成的调节两种方式是_______________，并且密切配合.协调起作用的。

4.人们将通过微生物的培养，大量生产各种代谢产物的过程叫做__________。

5.将少量的某种细菌接种到_________容积的________培养基中，定时取样测定培养基里的细菌数目。

然后，以_________为横坐标，以_________为纵坐标作图，便可以得到反映细菌生长规律的曲线，叫做___________。

6.微生物群体从开始生长到死亡的动态变化可以分为______________ ____________ __________和___________四个主要时期。

一种将穿梭质粒导入黄色短杆菌(或谷氨酸棒杆菌)的转化方法[发明专利]

专利名称：一种将穿梭质粒导入黄色短杆菌(或谷氨酸棒杆菌)的转化方法
专利类型：发明专利
发明人：王翠平,马承国,王开成,张传军
申请号：CN201310033531.6
申请日：20130129
公开号：CN103966251A
公开日：
20140806
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开一种能在大肠杆菌和黄色短杆菌（或谷氨酸棒杆菌）中穿梭表达的重组质粒转化进入谷氨酸棒杆菌和营养缺陷型黄色短杆菌的快速有效方法。

本发明提供的方法包括制备感受态细胞和高温培养转化两个步骤：（1）将营养缺陷型黄色短杆菌（或谷氨酸棒杆菌）接种至特殊配制的培养基上，使营养缺陷型黄色短杆菌（或谷氨酸棒杆菌）快速增殖，之后再转接到营养缺乏的培养基上，制备感受态细胞。

（2）将待转化的质粒和上述制备的感受态细胞混匀并冰浴，然后恒温培养，将质粒导入到所述待转化的黄色短杆菌（或谷氨酸棒杆菌）中。

本发明提供的方法，能减少黄色短杆菌对穿梭质粒的限制性酶切作用，并能稳定复制和传递，转化效果好，操作简便。

申请人：上海凯圣生物科技有限公司,山西凯盛肥业有限公司
地址：201803 上海市嘉定区金沙江西路1555弄388号4楼
国籍：CN
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短杆菌病的防治与常见问题解答

短杆菌病的防治与常见问题解答短杆菌病，也被称为细菌性短杆菌病，是一种广泛存在于自然环境中的细菌引起的疾病。

这种病菌可以侵袭人体的不同部位，引发多种症状和并发症。

有效的短杆菌病的防治措施可以帮助我们预防和治疗这种疾病，以下将详细讨论相关问题和解答。

一、短杆菌病的防治措施1. 保持良好的个人卫生习惯：勤洗手、勤洗澡，尤其是在接触潜在病菌的场所或物品后，要及时用洗手液或肥皂清洁双手。

洗澡时使用清洁、温和的洗浴产品，保持身体清洁。

2. 饮食卫生：选择新鲜、健康的食物，注意生食和熟食的分开处理，在烹饪和储存食物时要遵循卫生规范，确保食物不被细菌污染。

餐具、厨具要经过彻底清洁和消毒。

3. 避免局部伤口感染：对于皮肤上的伤口或破损，尽量保持清洁和干燥，使用适当的消毒剂进行处理，避免病菌进一步侵入。

4. 密切接触者的保护：如果家庭或社区出现短杆菌病病例，应加强对患者的护理，避免接触病菌的分泌物，使用个人防护用品如口罩和手套，并且定期清洁和消毒居住环境。

5. 预防措施的宣传教育：加强公众对短杆菌病的认识和了解，传播相关的预防和治疗知识，提高公众的自我防护意识，减少疾病的传播。

二、常见问题解答1. 短杆菌病的症状有哪些？短杆菌病的症状可以因感染部位的不同而有所差异。

常见的症状包括发热、寒战、头痛、恶心、呕吐、腹痛等。

在呼吸道感染时，还可能伴有咳嗽、咳痰、胸闷等症状。

皮肤感染时会出现疼痛、红肿等局部症状。

2. 短杆菌病的传播途径是什么？短杆菌可以通过多种途径传播，最常见的是接触感染和空气传播。

接触感染是指将病菌直接接触到皮肤或黏膜上，例如通过污染的物品、伤口等途径。

空气传播是指通过呼吸道飞沫或气溶胶传播，例如在咳嗽、打喷嚏时。

3. 如何确诊短杆菌病？确诊短杆菌病需要进行细菌培养和病原学检测。

医生会收集患者的临床样本，如血液、尿液、咽喉拭子等，并将其送往实验室进行细菌培养和鉴定。

同时，还可以通过血清学检测、分子生物学技术等辅助手段来确诊。

各种常见细菌镜检与菌落图

黄色短杆菌LB培养基黄色短杆菌镜检1.蕈状芽胞杆菌：蕈状芽胞杆菌蕈状芽胞杆菌2.地衣芽胞杆菌：地衣芽孢杆菌:革兰氏阳性杆状。

0.6～0.8×1.5～3.0微米。

无荚膜，不成链，能运动。

芽孢椭圆形至柱状，中生或次端生，0.6～0.9×1.0～1.5微米。

菌落粗糙，不透明，粘着，扩展。

明胶液化，淀粉水解，V.P试验阳性，柠檬酸盐利用。

广泛分布在土壤和食品中。

也是实验室中普遍存在的污染菌。

从某些菌株培养物中可获得杆菌肽素和地衣形杆菌素。

有的能产生碱性蛋白酶。

但也是引起罐头食品腐败的平酸腐败菌，是罐头生产中应严加注意的一种污染菌。

地衣芽胞杆菌——18h革兰氏染色：地衣芽胞杆菌——24h营养琼脂菌落：地衣芽胞杆菌——36h革兰氏染色：地衣芽胞杆菌——36h芽胞染色：地衣芽胞杆菌——48h营养琼脂菌落：地衣芽胞杆菌卵磷脂酶阳性：腊样芽胞杆菌卵磷脂酶:附：卵磷脂酶试验操作：１．鸡蛋一枚浸泡于７５％酒精中３０min ～24h;2.50或１００ml小三角烧瓶，放置１０粒左右玻璃珠，盛１０ml生理盐水，１5Ｐ灭菌15min;3. 根据用量配制营养琼脂，１５Ｐ灭菌１５min（与盐水同时高压；４．用无菌小镊子在已灭菌的鸡蛋两端打孔，让蛋清流出，弃之不用；５．打开蛋壳使蛋黄全部留入三角瓶中，轻轻摇匀，玻璃珠起搅匀蛋黄的作用；６．琼脂温度至４５度左右，以１０％量加入蛋黄液（无菌吸管），摇匀，倒平板（4mm 规格平即可，太大浪费）；７．将待检菌点种（穿刺）入平板，３５孵育，菌落周围有如图所示混浊圈即为卵磷脂酶阳性．否则，阴性．试验结果如下图：蜡样芽孢杆菌：杆状，1.0～1.2×3.0～5.0微米。

末端方，成短或长链。

革兰氏阳性，无荚膜，运动。

芽孢椭圆形，中生或次端生，1.0～1.5微米，孢囊无明显膨大。

菌落大，表面粗糙，扁平，不规则。

它可用于明胶液化，牛奶胨化，还原硝酸盐，水解淀粉。

广泛分布于土壤、灰尘、牛奶以及植物外表。

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二、黄色短杆菌及其特征
• 特性：革兰氏染色阳性。短杆近球形，G+，特性：革兰氏染色阳短杆近球形，，不运动，无鞭毛，无芽孢，不运动，无鞭毛，无芽孢，菌落产生非水溶性黄色素。兼性厌氧，试验阳性。黄色素。兼性厌氧，M·R试验阳性。试验阳性

育种方法
1. 切断或减弱代谢支路切断或减弱合成Met Thr的分支途径——选育营养缺陷型的分支途径—— 切断或减弱合成Met 、Thr的分支途径——选育营养缺陷型突变。通过诱变剂诱变后使用选择培养基选育。突变。通过诱变剂诱变后使用选择培养基选育。 2. 解除反馈调节

结语
微生物无处不在！微生物无处不在！微生物虽小，作用不小！微生物虽小，作用不小！合理利用，创造价值！合理利用，创造价值！

物理诱变紫外线、射线、射线、紫外线、X-射线、 γ-射线、快中子特点：紫外线方便、有效、使用安全，特点：紫外线方便、有效、使用安全，其他的几种射线有一定的穿透力化学诱变碱基类似物、吖啶类、碱基类似物、吖啶类、烷化剂特点：高效、经济、特点：高效、经济、但应注意使用安全三、产 Nhomakorabea及合成途径
黄色短杆菌利用天冬氨酸合成赖氨酸、苏氨酸和黄色短杆菌利用天冬氨酸合成赖氨酸、苏氨酸和天冬氨酸合成赖氨酸甲硫氨酸：甲硫氨酸：

具体机制：具体机制：高丝氨酸脱氢酶是合成苏氨酸过高丝氨酸脱氢酶是合成苏氨酸过是合成苏氨酸程中不可缺少的一种酶，程中不可缺少的一种酶，不能合成高丝氨酸脱氢酶的黄色短杆菌，丝氨酸脱氢酶的黄色短杆菌，就不能合成苏氨酸。合成苏氨酸。在生产赖氨酸的过程中，赖氨酸的过程中在生产赖氨酸的过程中，当黄色短杆菌细胞内的赖氨酸苏氨酸都超过赖氨酸和杆菌细胞内的赖氨酸和苏氨酸都超过一定浓度时，就会抑制天冬氨酸激酶一定浓度时，就会抑制天冬氨酸激酶的活性，赖氨酸的合成停止的合成停止。的活性，使赖氨酸的合成停止。
黄色短杆菌的研究
第七组

黄色短杆菌
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概况黄色短杆菌及其特征产物及合成途径诱变育种

一、概况
微生物的应用：微生物的应用： • 在医药工业上的应用医药工业上的应用包括抗生素维生素等目前，常用的抗生素已达100多种。抗生素、多种。包括抗生素、维生素等。目前，常用的抗生素已达多种 • 在食品工业上的应用食品工业上的应用发酵工程在食品工业上的应用十分广泛，主要包括：发酵工程在食品工业上的应用十分广泛，主要包括：第一、生产传统的发酵产品，啤酒、果酒、食醋等第一、生产传统的发酵产品，如啤酒、果酒、食醋等，使产得到明显提高。品的质量和产量得到明显提高。第二、生产食品添加剂。苹果酸、第二、生产食品添加剂。如L-苹果酸、柠檬酸、谷氨酸、红苹果酸柠檬酸、谷氨酸、曲素、高果糖浆等曲素、高果糖浆等。第三、单细胞蛋白的生产的生产。第三、单细胞蛋白的生产。 • 在农业上的应用农业上的应用微生物工程技术和产品为农业的发展提供了有利的支持：微生物工程技术和产品为农业的发展提供了有利的支持：生物农药（微生物杀虫剂、防治植物病害微生物）、生物除草剂、）、生物除草剂农药（微生物杀虫剂、防治植物病害微生物）、生物除草剂、生物增产剂、食用菌。生物增产剂、食用菌。 • 在轻工业上的应用轻工业上的应用由微生物生产出许多种可用于轻工业加工的酶：糖酶、由微生物生产出许多种可用于轻工业加工的酶：糖酶、蛋白酸性蛋白酶等。酶、酸性蛋白酶等。

四、诱变育种
赖氨酸是一种人和高等动物的必需氨基酸，赖氨酸是一种人和高等动物的必需氨基酸，是一种人和高等动物的必需氨基酸在食品、医药和畜牧业上的需要量很大。在食品、医药和畜牧业上的需要量很大。通过人工诱变选育出了不能合成高丝氨酸人工诱变，通过人工诱变，选育出了不能合成高丝氨酸脱氢酶的黄色短杆菌的黄色短杆菌，脱氢酶的黄色短杆菌，这就解除了苏氨酸等对天冬氨酸激酶的抑制作用，使黄色短杆菌能不天冬氨酸激酶的抑制作用，的抑制作用断合成赖氨酸。断合成赖氨酸。
抗性突变株。结构类似物的作用机制：选育结构类似物抗性突变株。结构类似物的作用机制：起
反馈抑制作用结构类似物与赖氨酸结构相似，反馈抑制作用结构类似物与赖氨酸结构相似，被天冬氨酸激酶所识别， Thr一起在天冬氨酸激酶的变构部位上结合，酶所识别，与Thr一起在天冬氨酸激酶的变构部位上结合，一起在天冬氨酸激酶的变构部位上结合协同抑制酶活。若能选育出酶活不受抑制的突变体，生成的协同抑制酶活。若能选育出酶活不受抑制的突变体，赖氨酸产物就不能与天冬氨酸激酶的酶活性中心识别从而解除了抑制反应。除了抑制反应。
• 最适生长温度最适生长温度25-32℃ ℃ 保藏温度：摄氏度保藏温度：-70摄氏度 • 保存方法：低温保存法、矿物油法、定期移植法保存方法：矿物油法、
• 用途：产谷氨酸、赖氨酸、抗噬菌体等有价值的产品。用途：产谷氨酸、赖氨酸、抗噬菌体等有价值的产品。