食用菌选修课

3. 孢子的采集
4. 稀释、接种（接种环或注射针头）
单孢分离法
多孢分离法——孢子印法
多孢分离法——钩悬法
多孢分离法——褶上涂抹法
5. 培养
25℃，恒温培养。
6. 转管
待菌丝长至1cm，转管。培养7~10天。
二、组织分离法
1. 种菇的选择和消毒；
2. 用手术刀将菌柄与菌盖交界处的组织切成大米粒 大小的小块；
二、化学方法消毒灭菌
1. 酒精
（1）浓度：70~75%
（2）用于皮肤和器具表面消毒。
2. 甲醛
（1）浓度：10mL/立方米； （2）用于空气和物体表面消毒。
3. 高锰酸钾
（1）浓度：0.1%；
（2）用于物体表面消毒。
4. 升汞（HgCl2）
（1）浓度：0.1%； （2）用于非金属器皿消毒。
5. 来苏尔
5. 栽培种的培养
第二节 食用菌的菌种制作技术
一、母种的制作
1. 母种的概念：
又称一级种，是指由孢子分离、菇木分离或组织 分离所得到的试管种。
2. 母种培养基的种类
（1）土豆：200g，糖20g，琼脂20g；水1000mL。 （2）蛋白胨2 g；糖20g，磷酸氢二钾1g，磷酸二氢 钾0.5g，硫酸镁0.5g，琼脂20g；水：1000mL。
一、孢子分离法
是用食用菌的孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。 菌种生活力较强，但孢子个体之间有差异，自然分 化现象较严重，变异大，需经出菇试验才能用于生产。
1. 种菇的选择
选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、 高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇。
2. 种菇的消毒
去菌柄，无菌水冲洗数次，移到超净工作台，用无 菌纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。
平菇7~8 香菇8~10 双孢蘑菇8~10 金针菇7~8 猴头10~12 木耳10~12 鸡腿菇9~10 杏鲍菇10~12
巴西蘑菇12~14
三、原种的扩大培养
一般28左右满瓶，满瓶后：
麦粒种再培养3~5天； 棉籽壳种7~10天， 木屑种10~15天后，可使用。
四、栽培种的扩大培养
一般35天满袋，满瓶后： 麦粒种再培养3~5 天； 棉籽壳种7~10天； 木屑种10~15天后，可使用。
①液氮保藏法：-196℃ ，需使用专用器具，适合专 业保藏，理想的保藏方法；
② -70℃低温冰箱保藏法 ③ -20℃~-30℃普通冰箱保藏法
三、菌种的复壮
复壮是从衰退的群体中找出少数尚无衰退的个体。 1. 淘汰已衰退的个体
将斜面菌丝制成菌悬液→用注射器接种于平板中→ 适温培养至菌丝萌发→挑选健壮菌丝转接→经试验符合 原菌种形状→用于生产
经灭菌后，用接种刀把袋口上部约15毫米厚的老 菌根挖除，并进行培养。待袋口露出白色菌丝时，用 接种针挑取一块半粒米大的白色菌结体，迅速移入母 种试管培养基的中央，轻轻地脱去接种针， 塞上棉塞。 为了能够获得较多的母种，一次接种量要有100— 200支试管，以便从中选择。分离后应及时移入 22℃—24℃恒温箱或温室中培养。由于培养基内水分 较多，菌丝恢复要比耳木分离得快。
菌种质量的优劣影响产量和质量。
在自然界里，食用菌不是单独存在的，而是和许多 细菌、放线菌、霉菌等生活在一起的。所谓菌种分离， 就是把食用菌从这些和食用菌一起生活的杂菌中分离出 来，通过培养，获得纯的优良菌种。菌种分母种、原种、 栽培种。 食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、组织分离 法以及基内菌丝分离等。
②缺点是需直立，占空间大，不变于携带。
2. 冷冻保藏法
（1）原理：
将菌种处于冷冻状态，使其代谢作用停止，理论 上新陈代谢停止是-130℃，可无限期保藏。 低温会使细胞内的水分形成冰晶，速冻冰晶小而 减小对细胞的损伤； 快速升温，可减少对细胞的损伤。
（2）冷冻保护剂 保护剂可提高存活率，如：甘油、二甲基亚砜、糊 精、血清蛋白、脱脂牛奶等。
经2-3天后，分离物的边缘就可看 到白色菌丝。 每天要至少观察两次，以便提纯。观察、提纯方法与 耳木分离法担同。经适温培养10-15天后，当接种块 扭结团出现红、黄色水珠时，即可扩大原种。
第五节 菌种质量的鉴定和保藏
一、菌种质量的鉴定
1. 母种质量的鉴定
（1）镜检；
（2）PDA培养基试验；
（3）高温试验（35℃半天）；
4.接种
（1）菌种表面消毒；
（2）将菌种切割成2×4×2mm的 小块；
（3）将菌种接到斜面中心略 偏试管底部处；
（4）1支试管种可接斜面30支左右。
5.培养
（1）最适培养温度 多数食用菌为25℃， 木耳、银耳28℃，
草菇35℃。
（2）培养时间 不同的菌种差异较大，一般为7~12天。 （3）协调的最适培养温度 比最适培养温度低2~3℃，菌丝健壮。
二、原种的制作
1. 原种的概念
将母种接入瓶装或袋装的木屑、麦粒或粪草等培养 基内所得到的菌种。
2. 原种培养基的种类
（1）木屑78%，麦麸20%，糖1%，石膏1%。
（2）棉籽壳88%，麦麸10%，糖1%，石膏1%。 （3）麦草50%，牛粪46.%，糖1%，石膏1%，
过磷酸钙1.5%，尿素0.5% 。
（1）斜面法——基本方法
①菌种转接到适宜斜面上（最好用带帽的螺旋试管）；
②适温培养至菌体健壮； ③用油纸包扎好棉塞部分，4℃冰箱保藏；
④定期转管。
特点：
①简单易行，能随时观察，适宜短期保藏的菌种； ②保藏时间短，一般为2~4个月，需定期传代培养， 容易污染，菌种易退化。 （2）液体石蜡法 长好斜面的菌种→加无菌液体石蜡→盖试管帽→直立 4℃冰箱保藏。 特点： ①保藏时间一般为1~2年，不须经常转接；
2.定期重新分离菌种 一般1~2年后重新分离一次，可采用组织分离法或 菇木分离法
第六节 菌种制备过程中的几个问题
一、组织分离法分离母种时，组织块不萌发 的原因 1. 消毒过头 2. 烫死 3. 挫折 4. 污染 5. 种菇有病
二、母种接原种时，母种不萌发的原因
1. 消毒过头 2. 烫死 3. 挫折 4. 污染 5. 母种老化
●液体菌种的特点
1、成本低：菌种成本是固体菌种的1/2； 2、时间短：制种时间是固体的1/10； 3、萌发快：接种后6小时萌发，24小时吃料； 4、生长快：栽培养菌时间比固体缩短1/2； 5、纯度高：设备密闭运行，菌种纯度高； 6、污染低：杂菌没有滋生侵染的机会，污染率低； 7、菌龄短：出耳齐，出菇快，转潮快； 8、自动化：自动控制，按键操作，节省劳动力。
3. 原种的配制
（1）过筛、称重
（2）浸泡或直接拌料
（3）装瓶或袋
松紧适宜、打孔、擦净 塑料袋规格：17×33cm
瓶规格：菌种瓶、罐 头瓶。
装袋
（4）灭菌
高压蒸汽灭菌锅：121℃,2~2.5小时； 土蒸锅：100℃，10小时。
4.接种
（1）菌种表面消毒； （2）将菌种斜面分成5等份；
（3）将菌种接到瓶或袋 装培养基的顶部中心处； （4）1支试管种可接原 种培养基5瓶（袋）左右。
土中菌丝分离：食用菌种类很多，许多土生的食用 菌；孢子不易萌发。组织分离也不易成功，用土中菌丝 分离获得纯种的方法，叫土中菌丝分离。
由于土中菌丝体的周围生活着多种多样的土壤微生 物，因此分离时必须尽可能避开这些微生物的干扰，尽 可能批取清洁菌丝素的尖端、不带杂物的菌丝接种，反 复用无菌水冲洗，在培养基中加入一些抑制细菌 生长的 药物，如 40微克／升的链霉素或金霉素。如发现感染 细菌，可以把菌落边缘的菌丝挑出来，接种到木屑培养 基中。因细菌没有分解木质素的能力，因此在木屑培养 基中不易扩展；只局限于接种处。待菌丝长出感染区后， 就可以再进行扩大提纯了。
第二章 菌种制作技术
第一节 制种的程序 第二节 食用菌的菌种制作技术 第三节 消毒灭菌方法 第四节 母种的分离培养
第五节 菌种质量的鉴定和保藏
第六节 菌种制备过程中的几个问题
第七节 菌种生产的季节安排
第一节 制种的程序
一、制种的程序
1. 种菇的选择及孢子的采集 2. 菌种分离 3. 母种培养 4. 原种的培养
三、制原种和栽培种时，接种块不萌发 后不吃料的原因
1. 接种块没有贴紧培养基
2. 培养基含水量太低 3. pH 不适宜 4. 培养基配方不合理
5. 恒温器控制失灵
四、菌种污染的原因
1. 杂菌出现在中下部或全瓶（袋） ——灭菌不彻底 2. 瓶（袋）壁上某处出现杂菌 ——瓶（袋）有裂口 3. 接种块上发生污染 ——菌种本身带菌或接种工具消毒不彻底 4. 瓶（袋）接种穴表面出现杂菌
（2）灭菌时间10小时左右；
3. 间歇蒸气灭菌
100℃灭菌1小时→间歇1天→100℃灭菌1小时→间 歇1天→100℃灭菌1小时。
4.干热灭菌
适合于瓶、试管口和接种工具。
5. 紫外线
（1）适合于空气和物体表面消毒； （2）照射距离以1.2米最好，2米有效；
（3）照射时间以20~30min；
（4）照射环境应黑暗。
——接种操作不严
第七节 菌种生产的季节安排
一、母种的活化
新购买或冰箱保藏的菌种必须活化。 所谓活化，是指将菌种重新转接，在适宜的温度下 培 养 ， 当 菌 丝 长 满 斜 面 ， 即 得 到 活 化 菌 种 一 般 需要 10~15天。
二、母种的扩接
根据生产需要，按排接种时间和支数。
不同的食用菌从接种到满管所需要的天数：
3. 接种 将组织块接到斜面中心略偏试管底部处； 4. 培养 5. 转管
三、菇木分离法
1. 菇木的采集 2. 菇木的消毒并去掉树皮 3. 将菇木切成大米粒大小的小块 4. 将菇木小块接到斜面中心略偏试管底部处； 5. 培养 25℃，恒温培养。 6. 转管 待菌丝长至1cm，转管。培养7~10天。