食用菌栽培学实验---食用菌母种的制作实验
食用菌实验
操作方法： ①将实验用的材料用品和仪器用具准备好、摆放整齐，并 按照超净工作台的使用方法使其处于工作状态。 ②在超净工作台的无菌区，按照无菌操作规程，进行常规 的手部消毒和器械的烧灼灭菌。随后用75%酒精棉球对 子实体进行表面消毒。 ③可以直接将子实体沿菌柄迅速纵向撕开，用灼烧灭菌后 的尖头镊子移取菌盖、菌柄交界处组织块（绿豆大小）。 移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上棉塞。 ④将分离的试管放在25℃恒温箱培养，培养期间每天都要 检查菌种的萌发与生长情况，对污染的试管及时挑选、 处理。经过7～10 d培养，菌丝体长满试管，即为纯菌 种。
三、方法步骤 1．种菇选择 选择生长健壮、无病虫害、菇形正、大小适中、颜色 正常、尚未散发孢子、七八分成熟的子实体作为分离材料， 最好在第一潮菇中采摘，保持菇体洁净备用。 2．母种分离方法 （1）组织分离法。此法是生产中最常用的方法，它操 作简便，菌丝萌发快，分离所得的菌种遗传性较稳定，在 培养基条件适宜的情况下，能保持原有菇种的优良性状和 特性。
5．培养
接种后，在恒温培养箱中闭光培养，及时淘汰杂菌污 染的试管，一般10 d左右菌丝可长满管。
实验二
食用菌菌种的分离技术
一、目的要求 了解食用菌菌种分离基本原理，通过操作熟悉掌握子 实体组织分离、担孢子采集关键技术。 二、实验材料 1．材料用品 平菇、香菇等新鲜子实体、试管斜面培 养基、三角瓶培养基、95%酒精、75%酒精棉球、记号笔等。 2．仪器用具 超净工作台、酒精灯、尖头镊子、接种 针、接种铲、刀片、金属丝、培养皿、废物罐等。
3. 母种培养基的灭菌 按照手提式高压蒸汽灭菌锅的操作规程对培养基进行 灭菌。一般121℃灭菌30min。灭菌结束后待温度、压力降 到“0”，打开锅盖，让锅内多余蒸气逸出，利用锅体余 热烘干棉塞后取出已灭菌物品；趁热将试管摆成斜面，培 养基以试管长度的1/2到2/3为宜，斜面试管上应覆盖洁净 的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。斜 面制成后，如不马上使用，可在5℃的冰箱中保存待用。
食用菌实验-母种原种扩大培养
实验五母种、原种接种扩大培养（板书用）一、实验目的熟悉母种、原种接种操作技能。
二、实验材料和用具接种箱或超净工作台，恒温培养箱，接种钩（针），酒精灯，镊子、、火柴，记号笔，记录本，75％酒精及棉球、95％酒精，母种试管斜面，灭菌好的原种培养基。
三、实验步骤与方法1.无菌测定灭菌后的培养基，随机抽出数支斜面试管培养基，置25—28℃的温箱中培养3天，培养基表面仍光滑，无杂菌出现，证明灭菌彻底，即可供接种使用。
2.接种操作过程无菌操作要点：①无菌箱在启用前先灭菌，将待接种的斜面试管、酒精灯、火柴、接种针等放入箱内，紫外线照射半小时以上。
超净工作台则要先灭菌20分钟。
②双手洗净。
打开工作灯，将双手伸入接种箱内，点燃酒精灯。
用75%酒精的棉球擦拭双手，擦拭方向由前向后。
③左手平托两支试管，拇指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待转接母种的斜面试管，两支试管的斜面都应朝上。
右手持接种钩，将接种钩的顶端烧红，并将整条接种柄在火焰上过几次灭菌。
④将两支试管的管口部分靠近火焰，用右手同时夹住两个棉塞。
拔掉两支试管的棉塞，并立即以火焰灼烧管口，并适当转动。
操作过程在不离酒精灯火焰一寸远处进行。
⑤用冷却的接种钩，在长满菌丝的斜面挖取少许菌丝及培养基，然后轻轻抽出试管。
迅速伸进待接试管中，将种块置于培养基的中部，盖好塞子。
接种过程中，应注意保持试管与桌面平行，不要远离酒精的火焰，周而复始。
一支母种可扩接20—25支试管。
贴上标签（或用记号笔），注明菌种或菌株名称及日期。
⑥原种接种：3．菌种培养接好种的试管和原种，放在25℃条件下培养，每隔2-3天检查一次。
遇有杂菌的试管要及时选出，以免污染其他试管。
7～10天后菌丝就可长满试管。
原种30天左右长满。
作业：归纳原种和试管种的接种全过程。
实验五母种接种扩大培养一、实验目的通过对接种箱常规消毒、斜面试管培养基母种(即一级种)接种和培养，基本熟悉母种接种操作技能。
食用菌栽培技术实验
食用菌栽培技术实验第一部分食用菌栽培的原理及发展状况一、食用菌栽培的原理及意义自然界中具有生命的物体叫生物。
迄今为止．人们已经知道的生物约有200多万种．它们组成了丰富多彩的生物世界。
这些生物大体可分为三大类．即动物、植物及微生物。
微生物是形体微小、结构简单的生物，包括病毒、细菌、放线菌和真菌等，还包括简单的藻类植物和原生动物。
真菌有真正的细胞核，没有叶绿体，不能进行光合作用，只能以现成的有机物质为生．是异养生物。
真菌的营养器官为分枝的丝状体，能进行有性繁殖和无性繁殖。
有些大型真菌可形成子实体，俗称菇或草，有的地方根据它们对人类的作用、可分为食用菌、药用菌和毒菌等。
食用菌是可供食用的大型真菌，可食部分是它们肉质或胶质的子实体，如平菇、金针菇、双抱菇、香菇、草菇、猴头、银耳、黑木耳等。
我国已查明并记录报导的食用苗约有360多种，其中只有10余种现在可以人工栽培。
食用菌大多是腐生性真菌，生活在死亡的植物体或有机质上，分解利用其中的纤维素、半纤维素、本质素和蛋白质等有机物质。
工农业生产中的许多副产品，如棉籽壳、锯木后、麦秸、稻草、玉米芯、玉米秸、花生壳、棉柴杆、甘蔗渣、甜菜渣及粪便等，都含有上述有机物质，这些有机物很难直接被人利用，往往大量堆积腐烂或挠持。
近些年来，随着食用菌栽培技术的大大提高，通过人工培养和改造已经能将这些价值很低、难以直接利用的有机养分，转变为营养价值很高的优质食品。
二、食用菌栽培的营养价值及社会效益食用菌是一种味道鲜美，口感脆嫩，营养丰富并兼具食疗价值的天然食品。
其食用部分是具有产孢结构的子实体。
食用菌中除去72％~92％的水分外，在剩下的干物质中，有90％~97％是有机物。
据报道，在1 12种食用苗的干物质中．平均含蛋白质25％，脂质8％，糖类60％(其中糖52％，纤维8％)，灰分7％。
此外，还有较多的核酸和多种维生素，包括维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生亲B5(姻酸)、维生柬C (抗坏血酸)和维生亲D2(麦角固酵)等。
食用菌培养实验报告
食用菌培养实验报告篇一：食用菌栽培实验报告食用菌栽培技术实验报告1 实验流程1.1 食用菌母种的制作1.2 培养料的制备、灭菌1.3 将栽培种接种于菌袋1.4 出菇管理1.5 采收1.6 菇棚参观2 食用菌菌种的制作2.1 食用菌菌种的概述菌种母种(一级菌种或试管种)原种（二级种）栽培种（三级种）鉴定洁白，健壮，无虫害，有蘑菇香味洁白，健壮，有凝水，不干燥洁白，健壮，有凝水，不干燥, 一般不超过25-35天2.2 食用菌母种的制作（无菌操作）2.2.1 组织分离法菇片消毒：取1张香菇菇片，用70%的酒精轻擦表面进行消毒；菇肉接种：将菇片纵向撕开，在每个裂面靠近菇柄与菌盖的交界处取一米粒大小的菇肉组织接于PDA试管斜面上；培养：将塞好棉塞的斜面放置于25℃恒温箱培养1周，观察。
实验结果我取了三张香菇菇片进行母菌的制作，分别编号为①②③。
经过一周的培养可以看出，①试管里面菌丝很少，可能是在无菌操作时，接种环的的温度过高，烫死了菇片。
②试管里面有白色菌丝，同时菇片变黑了，可能是取用的菇片较老，经过一周的培养，老化更为严重了，产生的菌丝也不多。
③试管菌丝洁白，较为理想。
2.2.2孢子分离法选用成长较好的秀珍菇，按下图步骤进行操作。
实验结果在进行操作时，没有将菌褶取出，故秀珍菇的菌丝长得比较多，但效果还比较令人满意。
3 食用菌的栽培3.1 培养料配方：棉籽壳3900g，麸皮1000 g，蔗糖50 g，CaCO3 50 g，水5000 ml，pH7.4～7.6。
（宽15cm*长24cm的菌种袋可装12袋）3.2 拌料按培养料配方准确称取所需棉籽壳和麸皮放入大盆中用手搅拌混合均匀，将所需的蔗糖和CaCO3溶于水中，然后泼洒在棉籽壳和麸皮上，边加水边搅拌，直至均匀。
搅拌好后，焖30分钟，使培养料吸水均匀。
3.3 装袋边加边将培养料压实，装至1/2左右，袋口套上颈圈，用大拇指在培养料中打一洞，盖上封口膜，用橡皮筋扎紧。
食用菌栽培实验报告
食用菌栽培实验报告一、实验目的1.学习和掌握食用菌的组织分离法制作食用菌母种；2.掌握食用菌培养基的配置原理；3.通过平菇、秀珍菇、金针菇、鸡腿菇、香菇、榆黄菇的栽培实验，掌握食用菌代料栽培的一般方法和栽培管理技术。
二、实验原理（一）食用菌母种的制作食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。
利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。
（二）平菇、秀珍菇、金针菇、鸡腿菇、香菇、榆黄菇的栽培实验1.食用菌的营养物质食用菌在生活时需要多种多样的营养物质，除水和氧气外，还要碳、氮、钾、磷、硫、镁、铁等大量元素和一些微量元素。
各种食用菌对营养物质的要求各不相同，有的要求不严格，有的要求严格。
[1]碳源：能利用自单糖到纤维素等各种复杂的碳水化合物，如：纤维素、葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、半乳糖、糊精、淀粉、半纤维素、木质素、有机酸、某些醇类等。
[2]氮素：是食用菌合成蛋白质和核酸必不可少的主要原料。
主要有蛋白质、氨基酸、尿素、氨、铵盐和硝酸盐等。
蛋白质必须经蛋白酶分解成氨基酸后才能被吸收；其他小分子氮素化合物菌丝体可直接吸收。
[3]碳氮比:一般认为食用菌在营养生长阶段碳氮比（C/N）以20 : 1为好，而在生殖生长阶段碳氮比以30 : 1～40 : 1为好。
[4]无机盐类，如：磷酸二氢钾、硫酸钙、硫酸镁、氯化钠、硫酸锌、氯化锰等。
这些无机盐中的金属元素磷、钾、镁为最重要，适宜浓度是每升培养基加100—500毫克，而铁、钴、锰、锌、钼等微量元素，每升培养基只需1／4毫克。
这些金属元素在普通水（河水、自来水）中都有，一般培养料不再添加。
[5]各种维生素和生长素，量很微，但必不可少。
[6]栽培原料:广泛采用棉籽壳。
棉籽壳含粗蛋白73％，粗脂肪3.45％，粗纤维36.99％，无氮浸出物73.99%。
其物理性能良好，能使水分和空气的矛盾得到解决，以满足菌丝生长的要求，棉籽壳的表面密布的一层棉纤维，在合适的水分、空气和温度的条件下首先分解，加之壳内残存的棉籽碎屑，也易分解利用；经过试验，1斤干棉籽壳能产1斤左右的鲜平菇，最高达4斤左右。
食用菌栽培技术实验
食用菌栽培技术实验一、实验目的1、了解食用菌的基础知识。
2、掌握食用菌培养基的配置原理。
3、通过木耳、香菇、金针菇,平菇的栽培实验，掌握食用菌代料栽培的一般方法和栽培管理技术。
4、学习和掌握食用菌的组织分离法二、实验内容1. 代料栽培培养基的制备2. 培养基的灭菌3. 接种三、实验原理（食用菌的组织分离法食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。
利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。
四、实验材料1、原种制作实验材料（1）食用菌：香菇、木耳，金针菇，平菇。
（2）仪器或其他用具： 75%酒精棉球、接种针记号笔等。
2、食用菌的组织分离（1）试剂：棉籽壳、蔗糖、CaCO3 ，木屑，草糠。
（2）仪器或其他用具：平菇菌种、香菇菌种、金针菇菌种、木耳菌种、台秤、盆子、聚丙烯塑料袋（24cm*45cm,两头开及一头开各一件）、颈圈（未买到）、封口膜、橡皮筋、高压蒸气灭菌锅、pH试纸（pH 5.5—9.0）、记号笔、麻绳等。
五、培养料配方②木屑种：木屑78%、麦麸（草糠）20%、石膏1%、蔗糖1%、料：水=1:1.3，装袋灭菌，接种培养。
一般25-30天即成。
pH ：7.4～7.6六、试验方法1、原种制作实验材料（1）拌料按培养料配方准确称取所需木屑和草糠放入大盆中用手搅拌混合均匀，将所需的蔗糖和CaCO3溶于水中，然后泼洒在木屑和草糠上，边加水边搅拌，直至均匀。
搅拌好后，焖30分钟，使培养料吸水均匀。
（2）侧培养水分培养料搅拌好后，用于抓一把培养料握在手中，攥紧，手指缝中有水印但无水滴滴下，这时的含水量适合，为60%—62%，若含水量不足，可再加少量的水，充分搅拌均匀，在检测，直至含水量合适为止。
（3）装袋边加边将培养料压实，装至3/4左右，袋口套上颈圈，用木棒在培养料中打一洞，盖上封口膜，用橡皮筋扎紧。
（4）灭菌 126 ℃高压蒸气灭菌90分钟。
（5）接种栽培袋冷却到25℃左右，在超净工作台上用镊子或接种枪夹取所需菌种（1个鸡蛋大小）放入培养料袋的洞中。
实验7 食用菌母种的制作与转管技术
实验注意事项
（1）组织块分离法对于胶质的耳类及菇体较小较薄的菇类，如金 针菇等不太适宜。 （2） 此法应严格遵循无菌操作。 （3）纯化菌丝长至斜面1/2时，挑尖丝转管，培养成再生母种。 （4）控制菌龄菌丝即将长满斜面（一般7～10天）终止培养。分 别用于菌种保藏或繁衍原种。 （5）出菇试验将再生母种扩成原种、栽培种，使其出菇。看产量、 质量、形态、长势、抗性如何，鉴定为优质菌种后，才可供生产 使用。
应用：此法适宜多数食用菌，是野外工作者和种菇专 业户必须掌握的一种方法。
实验原理
2.钩悬法 是一种特别适用于耳类，也适用于伞菌类的多孢分离
法。
实验原理
3.孢子印分离法 取成熟子实体经表面消毒
后，切去菌柄，在20～ 24℃静置一天，大量孢子 落下形成孢子印。 接种环沾少量孢子在试管 培养基上划线培养。
（0.3～0.4立方厘米）大组织，放入斜面培养基上。迅速 塞上棉塞。
如已开伞的种菇、则选菌盖与菌柄交界处的菌肉。 如种菇已受雨淋，吸水较多，应取菌褶作为接种材料。
母种分离视频
实 验 步骤
5. 培养 取接组织的斜面试管放置于
25℃的培养箱中培养。 6. 转管
在菌丝长满斜面之前，菌丝生 长最旺盛时，挑取菌丝进行转管扩 繁。
结果与思考题
1.如何避免因污染而造成的组织分离的失败？ 2.判断你所分离的母钟是否标准？ 3.孢子分离的母种为何一定要做出菇试验？
实验材料
材料：平菇、香菇、杏鲍菇较成熟的子实体 用具：培养皿；试管斜面培养基；酒精灯，接种刀，
75%酒精，消毒液；冰箱；培养箱等。 培养基：PDA斜面培养基
实 验 步骤
1. PDA培养基的配置 配方： 马铃薯浸粉； 5.0g /L；葡萄糖20.0g /L；琼脂 20.0g /L ；
实验7食用菌母种的制作与转管技术
结果讨论
本实验成功制作出食用菌母种，为后 续的栽培和生产提供了优质的种源。
本实验中严格的无菌操作对于防止杂 菌污染起到了关键作用，在实际生产 中也需要高度重视无菌操作，以确保 食用菌的纯度和质量。
在实验过程中，我们发现适宜的温度 和湿度条件对母种菌丝的生长具有重 要影响，这为实际生产中控制食用菌 生长环境提供了理论依据。
无菌操作
在实验过程中，要始终保持无 菌操作，避免杂菌污染。
温度控制
不同食用菌对温度的要求不同 ，要保持恒定的温度以利于菌
丝生长。
湿度控制
保持适宜的湿度，避免培养基 过度干燥或湿度过高导致杂菌
滋生。
定期检查
在培养过程中要定期检查菌丝 生长情况，发现异常及时处理
。
04
实验结果与分析
实验结果
实验成功制作出食用菌母种，菌 丝洁白、浓密、健壮，生长旺盛。
05
结论与建议
结论
实验7成功地展示了食用菌母种的制作和转管技术，确保了菌种的纯度和活性。
在实验过程中，我们观察到菌种的生长速度和形态特征，为后续的实验和研究提供 了基础数据。
通过实验，我们验证了母种培养基的配方和制备方法，为食用菌的规模化生产提供 了技术支持。
建议
01
为了进一步提高菌种的产量和质量，建议优化母种培养基的配 方，添加适量的营养成分或生长因子。
保障食品安全
培养创新型人才
实验能够培养学生的创新思维和实践 能力，为培养具备创新精神和实践能 力的人才提供有力支持。
通过实验，学生将了解食用菌母种的 质量控制和安全管理，这对于保障食 品安全和消费者权益具有积极作用。
02
实验材料与设备
实验材料
01
食用菌的实验
实验一母种培育基的制作一、本次实验的目的和要求学会母种培育基的配制方法，认识食用菌母种制作的工艺流程和制作母种的基本技术。
二、实验内容或原理母种培育基配制。
工艺流程：培育基配方培育基的配制分装试管理灭菌摆斜面三、需用的仪器或试剂等仪器：接种箱或超净工作台、高压灭菌锅、电炉、天平、试管、试管架、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管。
试剂：、马铃薯、葡萄糖、琼脂等。
四、实验步骤1.培育基配方以 PDA 培育基为例，马铃薯（去皮） 200g、葡萄糖 20g、琼脂 20g、水1000ml 。
为经强化营养或准备保藏菌种，可添加KH2PO43g 、、 VB110mg。
2.培育基配制第一将马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片，称取200 g，放入铝锅顶用1000ml 清水加热煮沸，保持20min 左右，煮至软而不烂为止。
用双层湿沙布过滤，而后取滤液并补足蒸发损失的水分。
再加入琼脂持续加热泪，待琼脂熔解后，增添葡萄糖及其余成分，搅拌均匀后准备装管。
3.分装试管培育基配制后应趁热分装。
装管时勿使管内外壁沾上溶液，免得浸润棉塞，污染杂菌。
装管后塞上棉塞。
棉塞的大小、松紧度应适合，以用手提棉塞、试管不零落为准。
而后每10 支度试管扎成一捆，棉塞上方用牛皮纸包好，防止灭菌时被水蒸汽浸润。
4.灭菌灭菌前将水加至锅内水位标志高度。
将试管放入锅内，盖上锅盖，对角旋紧锅上螺旋，并闭排气阀，开始加热，当锅内蒸汽大批排出时再持续排汽3-5 min，封闭放气阀。
当压力表指针指到0.15 Kg/cm2 时（灭菌所需压强）开始计时，持续保持该压强30min。
灭菌结束持压力表指针自然回到”0”位时翻开放汽阀，排出锅内节余蒸汽后，翻开锅盖。
注意切忌在压力表未到”0”位时就放汽，免得试管内的培育基向上冲浸润棉塞，造成此后菌种的污染。
5、摆斜面当培育基的温度降到60℃时，将试管斜面放在木棒上，使呈斜面，斜面的长度以占试管长度的1/2 为宜。
冷却后即成斜面培育基。
食用菌生产技术 实验三、原种、栽培种
五、思考题
1.简述培养基的配制过程，并指明要点。 2.为什么要排冷气？
三、实验步骤
1、按配方称量 、 2、加水拌料：控制含水量 ﹪ 、加水拌料：控制含水量60﹪ 3、装菌种瓶及菌种袋 、 4、灭菌 高压蒸汽灭菌或常压蒸汽灭菌 、灭菌——高压蒸汽灭菌或常压蒸汽灭菌 5、接种 、 6、培养 、
四、实验要求
说出高压锅的构造及其功能，能独立完 成各环节的操作。并能分析解释灭菌不 彻底的原因。
实验三、原种、 实验三、原种、栽培种的培养基制作
一、目的要求 能制作适宜培养料， 能制作适宜培养料，独立完成接 种前的准备工作。 种前的准备工作。
二、实验准备
1. 材料 棉籽壳、麸皮、蔗糖、石灰粉、 过磷酸钙、母种、原种等。 2．器具 菌种瓶、棉塞、打孔棒、菌 种袋、接种耙、大镊子、酒精灯、火柴、 酒精棉球、标签、高压灭菌锅、常压灭 菌炉、接种箱、消毒药品等。
三、实验内容
1、培养料的配制 2、菌种瓶及菌种袋的分装
（1）配方与配制
①棉籽壳麦麸培养基 配方：棉籽壳87%，麦麸 配方：棉籽壳 ，麦麸10%，白 ， 糖1%，石灰 ，石灰1%，过磷酸钙 ，过磷酸钙1%。 。 ②木屑麦麸培养基 配方：木屑87%，麦麸 配方：木屑 ，麦麸10%，白糖 ， 1%，石灰 ，石灰1%，过磷酸钙 ，过磷酸钙1%。 。
Байду номын сангаас
③ 谷粒培养基（麦粒、玉米粒等） 谷粒培养基（麦粒、玉米粒等）
配方：粮食粒 配方：粮食粒98.5%，石膏粉 ，石膏粉1%，碳 ， 酸钙0.5%。 酸钙 。 配制：将洗净的粮食粒洗净， 配制：将洗净的粮食粒洗净，用1% 石灰水泡胀，文火煮沸15～ 石灰水泡胀，文火煮沸 ～20min(熟 熟 而不烂，勿破皮)， 而不烂，勿破皮 ，捞出晾至无明水后拌 入余料。原种多使用颗粒培养基。 入余料。原种多使用颗粒培养基。
实验7 食用菌母种的制作与转管技术
食用菌母种制作与转管技术
实验目 的
掌握了解食用菌组织分离的方法和实际操 作技术；
明确食用菌组织分离在食用菌生产中的重 要性。
实验原理
母种
原种
栽培种
实验原理
1.组织分离法：用子实体的某一部 分来分离菌种的方法。
优势：方法简便，后代不易发生变 异，是食用菌栽培中防止品性退化， 保持优良品种特性常用的一种手段。
121℃高压灭菌15min。
实 验 步骤
2.种菇的选择 选择无病虫害、典型、八成成熟的食用菌子实体。
3. 环境和种菇消毒 在接种箱内，用镊子夹着燃烧的酒精棉球迅速擦拭菇
体。 或选用的子实体用0.1％开汞水或70％酒精表面消毒，
用无菌水冲洗并用无菌纱布擦去表面水分。
实 验 步骤
4.取接组织 将菇体撕开，用无菌尖头镊在柄盖交界处取绿豆粒
应用：此法适宜多数食用菌，是野外工作者和种菇专 业户必须掌握的一种方法。
实验原理
2.钩悬法 是一种特别适用于耳类，也适用于伞菌类的多孢分离
法。
实验原理
3.孢子印分离法 取成熟子实体经表面消毒
后，切去菌柄，在20～ 24℃静置一天，大量孢子 落下形成孢子印。 接种环沾少量孢子在试管 培养基上划线培养。
母种转管视频
实验注意事项
（1）组织块分离法对于胶质的耳类及菇体较小较薄的菇类，如金 针菇等不太适宜。 （2） 此法应严格遵循无菌操作。 （3）纯化菌丝长至斜面1/2时，挑尖丝转管，培养成再生母种。 （4）控制菌龄菌丝即将长满斜面（一般7～10天）终止培养。分 别用于菌种保藏或繁衍原种。 （5）出菇试验将再生母种扩成原种、栽培种，使其出菇。看产量、 质量、形态、长势、抗性如何，鉴定为优质菌种后，才可供生产 使用。
食用菌母种制作技术
食用菌母种制作技术母种是从子实体中提纯，复壮获得母种，人工栽培蘑菇成功的关键是菌种，只有优良的菌种才能达到优质高产，这是种植蘑菇高产的第一个要素。
母种制作：母种培养基配制：母种培养基的原料是马铃薯，葡萄糖，蛋白胨，水，琼脂粉，以配制一千毫升的母种培养基为例，将马铃薯去皮后称重200克，葡萄糖20克，琼脂粉20克，蛋白胨10克，用量杯量取1000毫升的水倒入锅中，用刀将马铃薯切成片加入锅中，用文火煮沸，煮至用筷子轻轻一插既可插入，这时可以用四层的纱布过滤煮好的马铃薯汁，然后倒在量桶里，看一下，如果不足一千毫升可加水补足一千毫升，在倒入锅中煮，最后加入称好的葡萄糖、琼脂粉、蛋白胨，为了防止锅底烧焦要边加热边搅拌，煮至完全溶化，母种培养基就配制好了。
母种培养基的分装：母种培养基配制好后要分装以试管中，这里用到的试管规格为18毫米X200毫米，每7根试管扎成一捆，分装培养基时用漏斗下面接一根塑料管，在通塑料管接装到试管内，分装量为试管高度的五分之一左右，分装完后及时用棉塞装试管口塞住，防止其它杂菌侵蚀。
要注意，母种培养基的温度降到45度以下时凝固，所以分装过程要在母种培养基凝固之前完成。
母种培养基的灭菌：用白纸包裹试管口，在用绳子将白纸扎紧，将试管放入高压来菌锅中高压来菌，盖上锅盖，压紧螺帽，在压力为0.5MPa条件下持续来菌30分钟，来菌完后在让其在锅内自然冷却一小时，待压力为零时就可以打开锅将试管取出来，这样母种的培养基就制作好了。
制作母种：母种接种：母种的接种也是在无菌工作室的无菌箱中进行的，另外要选取品质优，长势好的蘑菇来提取菌丝，分别用酒精棉球擦拭双手和蘑菇表面进行消毒，点燃酒精灯然后把长柄小刀放在酒精灯火焰上消毒2至3秒钟，用消毒后的小刀割开新鲜蘑菇的菌柄，在菌柄与菌盖连接处用小刀切割一小块蘑菇组织，打开母种培养基试管瓶塞，为了避免杂菌感染，要将试管口靠近酒精灯火焰，用长柄钩针钩取切割好的蘑菇组织带到试管中，放在试管培养基斜面的中部，退出长柄钩针，将棉塞在火焰上消毒，塞住试管口，母种的接种工作就完成了。
食用菌的栽培实验
食用菌（平菇）的栽培实验1实验名称：食用菌（平菇）的培养2实验目的2.1了解食用菌的培养过程；2.2在实验过程中掌握培养基的配制方法；2.3学习从平菇子实体中分离平菇菌种。
3实验步骤3.1平菇母种培养基的制作（马铃薯综合培养基）称去皮的马铃薯200g，切成小块，放入大烧杯中，加1000ml蒸馏水，加热煮沸，煮马铃薯至熟而不烂（煮沸20min左右），后用四层纱布过滤，加水至1000ml，称取20g琼脂加入，加热至融化，称取磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，葡萄糖20g加入，搅拌均匀。
分装入30支试管，6个锥形瓶中。
试管10支一扎，棉塞处用报纸包好扎紧，每个锥形瓶都用报纸包好扎紧，放入灭菌器中灭菌（121℃，30min）。
灭菌完成后，取出试管和锥形瓶稍凉一下，未凝固前铺斜面。
待斜面凝固，将试管收起，放在无菌操作台中备用。
3.2母种的扩大培养将酒精灯、酒精棉球、镊子、打火机、接种针、活化后的菌种等接种所用的材料和器材放入无菌操作台内，紫外灭菌30min，关紫外灯后吹风10min后接种。
先用酒精棉球擦拭双手，点燃酒精灯，左手拿母种和铺好的斜面试管，右手拿接种针（先在灯上烧红，后晾凉）进行接种。
用接种针在母种试管中取培养基与菌丝接触面一小块，迅速放入铺好斜面的试管的斜面上，塞上棉塞，放在试管架上，再继续接完其他的斜面试管。
待所有的试管都接种完成后，取出试管放入25℃恒温培养箱中培养。
24小时后可看见所接的菌种向斜面周围生长，再过三四天，菌种可长满斜面。
取出几支长的好的菌种，用报纸包好，注明名称及时间，放入冰箱冷藏，以备下次接种。
3.3平菇原种培养料的制作（麦粒培养基）取200g小麦浸泡10-12小时，煮熟晾干后加辅料（CaCO3（石灰石）2g，CaO（生石灰）2g，糖2g），搅拌均匀，装入菌种瓶（1／２体积），用耐高温膜包好。
在高温121℃下灭菌90-120min。
石膏粉（Ca[SO4].2H2O）3.4原种的培养取出培养箱中长的旺盛的平菇斜面，与小麦菌种瓶放入接种台内，进行接种，将母种斜面划成4-5块，迅速将母种块移入菌种瓶中，使母种块上的培养基与瓶内斜面接触，包好菌种瓶，放入25℃恒温培养箱培养。
食用菌母种制作方法
食用菌母种制作方法一、食用菌种瓶的选择用100毫升医用盐水瓶代替试管作盛装培养基的容器。
二、培养基的配制1．配方：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂18～20克，水1000毫升。
2．制作：马铃薯挖去芽眼，去皮洗净，切成薄片后加水，在铝锅中煮沸25～30分钟，用4层纱布过滤，取滤液放入铝锅中，加入琼脂，小火加热并不断搅拌，待琼脂溶化后加入葡萄糖，加开水补足1000毫升，搅匀，趁热装入盐水瓶中，每瓶装8～10毫升，塞上棉塞棉塞要求干燥、松紧、长度合适，再用牛皮纸包住棉塞及瓶口部分，用胶圈扎紧瓶口。
三、灭菌采用高压灭菌，若没有专用高压锅，可用家用高压锅进行灭菌。
方法是：将装好培养基的菌种瓶放置在高压锅中，瓶间留有空隙，不可堆放过紧，以利蒸汽循环，灭菌彻底。
当压力表指针指到0．05时，打开放气阀，集中排出冷空气，使压力降到零时，关闭排气阀进行升压灭菌，自动放气后保持30分钟家用普通高压锅灭菌1．5小时，让其自然冷却，取出放置在接种箱中备用。
四、菌种分离主要采用组织分离法。
通常是从食用菌子实体内部分离纯菌种，操作时，从子实体内切取一小块组织，放在培养基中培养可长出纯菌种，且菌丝萌发快，遗传性状稳定，后代不易发生变异。
1．种菇消毒：种菇采下后，切去菌柄，放入洗净的盘内，在装有紫外灯的接种箱内照射20～30分钟。
2．接种块切取：在已消毒的接种箱内，撕开子实体，用经酒精灯火焰杀菌冷却的小刀，在菌柄与菌盖交接处内部切取黄豆大小组织块，放入菌种瓶内培养基上培养。
3．接种块选择部位：接种块选择部位因食用菌种类不同而异，菇体肥厚的种菇，在菌盖外缘菌盖皮和菌褶交接处切取组织块进行分离。
菌体小、盖薄、柄空的菌类如金针菇，应快速击掉菌盖，用接种针钩取菌柄顶端生长点组织进行分离。
菌肉极薄菌柄中空孢子不易萌发的伞菌类，可采用子实层分离法，选取半破膜的子实体，移入培养基上，菌丝萌发后即转入新的培养基上。
对子实体较大、质地结实的多孔菌类，应取子实体外缘菌肉组织块。
食用菌母种制作-实验一
实验一食用菌母种制作一、目的要求：1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理；2、掌握母种培养基的制备方法；3、了解无菌操作基本原理，掌握母种的无菌接种培养方法。
4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤；5、熟练分离出栽培用菌种。
二、主要仪器设备及药品材料：灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管（18x180mm）、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。
三、实验步骤与方法:①培养基的制作1 PDA培养基配方马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升.2. 母种培养基的配制(1)熬制。
马铃薯洗净，挖芽去皮。
称取200克，切成玉米大小颗粒或薄片。
量筒量取1000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。
四层纱布过滤于量杯中。
滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。
补足水量至1000毫升。
(2)分装试管。
将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。
培养基高度为试管长度的1/5左右，注意避免培养基沾于试管口外。
分装完成后，盖紧硅胶塞。
（3）捆把。
7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。
贴上标签，准备灭菌。
（4）灭菌。
注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。
（5）摆斜面，培养基长度约为试管长度的1/2。
斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。
①菌种分离与培养（1）种菇选择。
选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子实体，要求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子实体。
子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿内备用。
（2）母种分离（组织分离法）。
在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒，在超净工作台内将子实体撕开，用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上硅胶塞。
将分离的试管放在室内避光培养7-8天，检查菌丝生长情况。
食用菌栽培学实验---食用菌原种和栽培种培养料的制作实验
食用菌原种和栽培种培养料的制作实验一、目的要求掌握常见食用菌原种和栽培种培养基的制作、接种和培养技术。
二、材料与用具(1)材料:优质小麦、棉籽壳、木屑、稻草、玉米面、葡萄糖或蔗糖、右膏粉、碳酸钙等。
(2)用具:电户、大铝锅、大盆、菌种瓶、12cm x 12cm x0.02cm高压聚丙烯塑料膜、线绳、接种箱、超净工作台、酒精灯等。
三、内容与方法(一)培养基的制作1.麦粒原种培养基制作谷粒(如麦粒，玉米粒)南种培养基制作难度较大，但优点很多。
谷粒营养丰富，大小适中，是绝大多数种类食用菌原种制作的最佳原料。
现以小麦原种培养基制作为例，介绍如下。
(1)麦粒培养基配方:常用麦粒培养基配方为小麦99%、石膏粉1%。
(2)制作方法①泡小麦:冬天浸泡24 ~ 48h,隔夜换水;夏天浸泡10~12h,隔友换水，可加人1%石灰浸泡。
泡好后，小麦粒饱胀，用清水漂洗干净，除去杂质。
②煮小麦:煮至充分吸水，无白心，切忌煮开花。
③木腐生菌类一般添加一定量木屑(10%左右)效果更好:木屑可用煮小麦的水拌料，料:水以1:0.5的比例拌和，或酌情处理;可添加木屑干重0. 5%的蔗糖、0. 5%的尿素、1% 的石灰。
④装瓶:将小麦粒捞出后，趁热滩平，使表面多余水分蒸发，然后加人石膏粉或其他辅料拌匀，再将料装至瓶肩处即可。
⑤封瓶口:用两层完整的塑料膜封瓶口并套好皮筋。
⑥灭菌:麦粒菌种一般采用高压灭菌方式。
高压灭黄于126℃左右维持2h即可。
其排冷气，开锅方法同斜面培养基制作。
2.其他原料制作原种和栽培种培养基(1)粪草培养基(适于制作双孢磨菇菌种)配方:粪草(粪:草=6:4, 堆积发酵15 -20d) 90g,，米桃或麸皮8g，碳酸钙1kg，糖1Kg，水适量。
制作方法:先将粪草堆积发酵，发酵时间18d左右，其间加人米糠等辅料，翻准2-3次，晒干，切碎，装瓶，灭菌。
灭菌方法同麦粒培养基。
(2)木屑-米糠培养基(适宜各种木腐生食用菌)配方:阔叶树木屑70%~ 80%，米糠或麸皮20%~28%，碳酸钙1%，蔗糖1%，石膏1%，水调至适量。
食用菌母种的制作培养
食用菌母种的制作培养用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种(保留种，并用于生产的母种即为生产母种，可用于扩接原种。
1．培养基配方配方一综合马铃薯培养基马铃薯 200克葡萄糖20克磷酸氢二钾2克硫酸镁0.5克维生素B110毫克琼脂20克水1000毫升 PH值自然配方二合成培养基马铃薯 200克葡萄糖20克磷酸二氢钾2克蛋白胨10克牛肉膏5克酵母膏5克硫酸镁0.8克水1000毫升 PH值自然2．培养基制作方法先将马铃薯洗净去皮切成簿片，称取200克，加水1000毫升，煮沸15—20分钟，用4层纱布过滤，取其滤液并补足水至1000毫升，加入琼脂20克，再加热，琼脂溶化后，再加入其它配方中的药品。
培养基的分装，应在培养凝固前进行（琼脂培养基40℃凝固）一般用漏斗，或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一水段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管细口插入试管内，但不要碰到管壁，每支试管装入量为度管长度1/4。
装好后塞上棉塞，每10支试管扎一捆，棉塞上用塑料纸封扎好，用线绳捆扎起来。
3．灭菌将分装后的试管扎捆好，放入高压蒸气灭菌锅，在1公斤/厘米压力下(锅入温度达121℃)灭菌20分钟,使微生物包括芽子色全部杀死。
待压力降到0度时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。
4．接种与培养通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上，置28℃、3天后将温度降至24℃继续培养，12—15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成(生产)母种。
原种的制作母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种，原种一般采用广口瓶或袋装。
1．培养基配方配方一木屑麸皮培养基阔树木 78% 麸皮 20% 糖 1% 石膏粉 1% 水 65% PH值自然配方二棉籽壳木屑混合培养基棉籽壳 90% 糖 1% 麸皮 5% 过磷酸钙 3% 石膏粉 1% PH值自然2．拌料与装袋选用新鲜无霉变原料，根据生产所需的数量，计算配料总量，将麸皮、石膏粉均匀的混合在培养料里，糖和过磷酸钙溶于水解后，按上述干料量加入水，比例为1：1、3拌匀，培养料含水量60%为宜，含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。
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食用菌母种的制作实验
一、目的要求
了解无菌操作规程，熟练掌握PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)的制作、母种的转管与培养技术。
二、材料与用具
(1) 材料:马铃薯、葡萄糖、琼脂、酒精棉球、高锰酸钾、37%甲醛溶液、紫外线灯、标签纸等。
(2)用具:锅、玻璃棒、18mm×180mm试管、棉塞、纱布、牛皮纸、1000mL量筒、手提式高压蒸汽灭菌锅、菜刀、砧板、天平、烧杯、接种箱、超净工作台、接种针、酒精灯、恒温培养箱等。
三、内容与方法
(一)PDA母种培养基的制作
1.PDA培养基配方
去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂18-20g，水1000mL,pH自然。
此配方培养基适用于香菇、黑木耳、金针菇、滑菇、灵芝、草菇、平菇等多种菌种，但不适用于双孢菇等有特殊营养要求的食用菌。
2.配制方法
(1)确定使用量:根据人数确定使用量，一般每人制作10-20支培养基供接种用。
(2)制备营养液:马铃薯去皮、挖掉芽眼，切成黄豆大小的块。
称量后用略多于用量的水煮开，并维持10-20min，至马铃薯块酥而不烂，再用2层纱布过滤，取其滤液，定容至1000ml待用；琼脂称好后，用剪刀剪成小段，再用清水浸泡，以利于熔化;将琼脂条放人滤液申边煮边搅拌，至全部熔化。
再将溶液倒入量器中，
加入葡萄糖，并不断搅拌使之完全溶解。
一般情况下，此营养液的pH不需要特意调节。
(3)营养液分装:趁热用注射器分装营养液。
营养液以装人试管容量(或高度)的1/5 左右为宜，一般18mmx180mm试管注人8-10ml营养液即可。
注意防止培养液粘到近管口的壁上装好后，塞好棉塞，每7支或10-12支捆成束，管口一端用防潮纸包扎好，待灭菌。
(4)灭菌:按照高压蒸汽灭菌锅的操作规程使用。
①加水:先向外锅加水，略超过支架。
②装锅:将灭菌物品装人锅内，不宜装得过满过紧，应留下1/5空间及空隙，以利蒸汽流通，并检查导管是否与排气网结合紧密，畅通。
③盖锅盖:对好内锅上插孔，盖好锅盖，对角将螺丝旋紧。
④开启电源:通电后压力表指针徐徐上升，当指针至0.055MPa时，打开排气间排除冷气，压力表指针回零，关好排气阀再继续加热。
⑤开温保温:当温度上升到121℃时(约0.105MPa)维持20—30min。
⑥降温与排气:保温时间结束后，停止加热，让其自然冷却，切勿直接打开排气阀，否则压力骤然下降，导致培养基剧烈沸腾，冲掉棉塞，甚至造成容器炸裂。
10mi后即可开盖，取出已灭菌物品。
(5)摆斜面趁热将试管摆成斜面，培养基以试管长度的1/2-2/3为宜。
斜面制成后，如不马上使用，可在3—5℃的冰箱中保存，待用。
(二)母种的接种与培养
1.接种环境的消毒
接种一般采用接种箱或超净工作台。
(1)接种箱的熏蒸消毒:先用2%来苏尔溶液清洁接种箱内外，放人接种所需的物品，再用甲醛熏蒸。
熏蒸时每1立方米一般用甲醛10mL,加高锰酸钾5g,先将高锰酸钾放人接种箱内的容器中，再注人甲醛，可立即产生强烈刺激的甲醛气体，从而达到杀菌的效果。
熏蒸时间至少保持30min以上。
(2)超净工作台的消毒:用消毒液擦拭台面后放置接种所需物品，开启超净工作台上的紫外灯，照射20min后使用。
2.母种的转管
(1)手及菌种管的消毒:用肥皂洗手，再用75%酒精棉球擦手和菌种管表面，在酒精灯火焰上略烧试管外的棉塞后，立即将菌种管放人接种箱内。
(2)转管:两手从接种孔伸入接种箱内，酒精棉球擦状接种环。
左手持菌种管和空白斜面管，两支试管口对齐于火焰上方。
右手持接种环，并将其在灯焰上干热灭菌，用小指及无名指
使棉塞底部朝外。
接种环冷却后伸人菌种管内取黄豆粒大小、带有培养基的菌种块，迅速移入斜面培养基的中部，菌丝朝上。
然后，将棉塞在火焰上烧下，立即塞人试管口，旋紧棉塞。
接种针不要触碰管口及管壁。
接种后的试管应立即贴标签，注明菌种名称及接种日期，再进行适温培养。
3.母种的培养
将已接种的母种分类捆扎，放于站养前中适温培养。
2 - 3d后每天检查菌丝生长情况，及时挑除污染及不萌发的试管。
一般7-10d菌丝长满斜面。
四、作业与思考题
(1)简述PDA母种培养基制作的工艺流程。
(2)分析母种接种成败的原因。
答：（1）PDA母钟培养基的制作工艺流程：设计培养基配方→材料煮汁→补水→琼脂溶解→再次补水→药品溶解→调PH值→分装→灭菌→摆斜面
（2）①母种培养基凝固不良;
②接种物不萌发或萌发缓慢;
③萌发出的菌丝纤细无力，扩展缓慢;
④培养温度过高或含水量过低;
⑤灭菌不彻底，有细菌残留;
⑥培养料酸碱度不适或培养料中混入有毒物质等。
接种环境的处理，接种箱的熏蒸先用2%来苏清洁接种箱内外，放入接种所需的物品，用甲醛熏蒸。
每立方米空间一般用甲醛10ml,加入高锰酸钾(5-7g) 使甲醛氧化挥发。
先将高锰酸钾放入接种箱内的容器中，再注入甲醛，立即产生强烈刺激的甲醛气体。
熏蒸20--30min。
超净工作台的消毒用消毒液擦拭台面后放置接种所需物品，开启超净工作台上的紫外灯，照射20-30min后使用。
五．实验结果。