菌落活化方法
菌落分离纯化的方法
菌落分离纯化的方法
1. 灭菌酒精消毒，在进行菌落分离纯化之前，首先需要使用灭菌酒精消毒工作台和所需的培养基、试管、移液器等器具，以确保实验操作的无菌条件。
2. 稀释涂布法，将混合培养基中的细菌样品进行系列稀释，然后取适量的稀释液在琼脂平板上均匀涂布，使得单个菌落能够生长并形成可见的典型形态。
3. 单菌落移接，在菌落形成后，使用无菌的移液器或接种环，将单个菌落转移到新的琼脂平板上，进行单菌落的分离。
4. 隔离单菌落，在新的琼脂平板上培养分离出的单个菌落，观察并等待其生长形成纯种菌落。
5. 鉴定纯化菌落，通过形态学观察、生理生化实验或分子生物学方法，对纯化菌落进行鉴定，确认其种属及特性。
需要注意的是，在菌落分离纯化的过程中，必须严格遵守无菌
操作规范，以避免外源细菌的污染。
此外，不同类型的细菌可能需
要采用不同的分离纯化方法，具体操作时需根据实验需要进行调整。
菌种活化_操作方法
低温保存管（cryotube）中之一般菌种临时存放及活化A. 低温保存管之临时存放及解冻1. 低温保存管（cryotube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。
2. 准备 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高达管塞。
3. 将 cryotube 从低温保存条件中取出，置于 37℃浴槽之小试管架上。
4. 不断轻微摇动 cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需 2 分钟）。
B. 菌株活化: 在无菌操作下1. 用无菌微量吸管，从已溶解之 cryotube 吸取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近，以划线法接种于培养基。
2. 将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。
C. 划线法1. 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3 培养基为止（I 区）。
2. 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）。
3. 重复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区。
4. 灼烧接种环，将接种环归位。
D. 图示（1）金属接种环（2）平板划线法冷冻干燥管之开管说明下列步骤请在无菌环境下操作：1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端。
2、滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。
3、取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。
4、( a ) 适用于细菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。
菌种的活化操作步骤
菌种的活化操作步骤
菌种活化就是将保藏状态的菌种放入适宜的培养基中培养，逐级扩大培养是为了得到纯而壮的培养物，即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。
菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化，让菌种逐渐适应培养环境。
要明白菌种活化的情况就需要了解菌种保藏的方式和方法。
目前国际国内常用的菌种保存方法包括：定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80℃冰箱冻结法、液氮超低温冻结法。
对于不同的保存方式活化的方式也不同：
1、定期移植法的菌种复苏较简单，直接转接即可。
2、液体石蜡法保存的菌种在复苏时，挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上，生长繁殖后，再重新转接一次。
3、沙土管法保存菌种在复苏时，在无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次。
或取沙土粒于适宜的液体培养基中，增殖培养后再转接斜面。
2018-大肠杆菌菌种活化步骤-推荐word版 (6页)
本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==大肠杆菌菌种活化步骤篇一：抑菌实验步骤抑菌实验：待测菌金色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；大肠杆菌；绿脓杆菌菌种活化：菌种，进行活化，可以划线，也可以涂布，划线：直接用接种环在酒精灯上烧过之后，等之冷却，蘸取进行划线！涂布：用枪头吸取100ul的菌液涂布既可！本实验采用涂布法1.金色葡萄球菌最佳生长条件(过夜培养一般为12h)2. 枯草芽孢杆菌培养条件（过夜培养）3.绿脓杆菌最佳培养条件（14-17h）培养基MH（A）培养基( Mueller-Hinton Agar)成分：牛肉浸粉（牛肉膏） 5g；酪蛋白水解物 17.5g；淀粉 1.5g；琼脂 12.5gMH液体培养基配制方法：称取本品36.5克，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟备用。
牛肉膏蛋白胨固体培养基（LB培养基）：牛肉膏10 g，蛋白胨10 g，琼脂15g，NaCl 5 g，双蒸水1000mL，pH 7.2-7.5，121℃灭菌20min。
牛肉膏蛋白胨液体培养基：不加琼脂，其他同牛肉膏蛋白胨固体培养基。
菌悬液的配制将冰箱保存的大肠杆菌移接到牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养24 h，用接种环挑取少许菌体与装有无菌生理盐水的试管中，震荡均匀，制成菌悬液。
具体为用接种环挑取一环（本实验是吸取100uL菌悬液）于5 mL的无菌生理盐水中，每10倍稀释一次地逐级稀释，取（10-8、10-9、10-10 、10-11）的浓度100μL做涂布实验，每个梯度平行三组，加100μL药品溶剂（二甲基亚砜）的空白对照3个平板，完全不加任何样品即只是LB培养基的完全空白对照1个平板，调整菌悬液浓度，用平板菌落法测定其菌液浓度，使其含菌体数为103 cfu/mL，即为供试菌悬液。
活化菌种的方法
活化菌种的方法菌种是微生物学研究中非常重要的一部分，它们可以用于制备各种发酵产品，如酸奶、酒、酱油等。
但是，菌种经过一段时间的保存后，会出现休眠或死亡的现象，这就需要进行活化处理，使其恢复生命活力。
本文将介绍几种常见的活化菌种的方法。
一、温度法温度法是最常用的活化菌种方法之一。
该方法是将被保存的菌种移至适宜的温度环境下进行培养，使其恢复生命活力。
具体方法是将菌种从冰箱中取出，放置于适宜的温度环境中进行培养。
一般情况下，大多数菌株的培养温度为30℃左右。
二、营养法营养法是通过添加适当的营养成分来活化菌种。
该方法适用于营养成分缺乏、菌种处于休眠状态的情况。
具体方法是将保存的菌种接种到含有适量营养成分的培养基中进行培养。
常用的营养成分包括葡萄糖、酵母粉、胰蛋白胨等。
三、pH法pH法是通过改变培养基的pH值来活化菌种。
该方法适用于菌种处于休眠状态、培养基酸碱度不适宜的情况。
具体方法是将保存的菌种接种到pH值适宜的培养基中进行培养。
一般情况下，大多数菌株的适宜pH值为6.5-7.5。
四、氧气法氧气法是通过调节培养环境氧气含量来活化菌种。
该方法适用于需氧菌株、培养环境氧气含量不足的情况。
具体方法是将保存的菌种接种到含有适量氧气的培养基中进行培养。
常用的氧气供应方式包括摇床培养和搅拌培养。
五、复苏法复苏法是通过多种活化手段的组合来活化菌种。
该方法适用于菌种处于极度休眠状态、多种单一活化手段无法恢复生命活力的情况。
具体方法是将保存的菌种接种到含有多种活化成分的培养基中进行复苏培养。
常用的活化成分包括葡萄糖、酵母粉、胰蛋白胨、氧气等。
总之，活化菌种是菌种保存和利用中的重要环节。
选择合适的活化方法可以使菌种恢复生命活力，保证其在后续的利用中发挥更好的作用。
活化菌种的方法
活化菌种的方法菌种的活化是指将冷冻、干燥或其他方式保存的菌种重新复苏，使其具有生物活性和生长能力的过程。
活化菌种的方法有很多种，根据菌种的特点和保存方式的不同，选择不同的方法进行活化。
本文将介绍几种常见的活化菌种的方法。
一、液体培养法液体培养法是一种简单、易操作的活化菌种方法。
首先将保存的菌种接种到含有适当营养成分的液体培养基中，然后在适当的温度、湿度和通气条件下培养。
液体培养法的优点是适用范围广，可以用于多种菌种的活化，且容易控制生长条件，可以获得较高的活化率。
但液体培养法需要较长的时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。
二、固体培养法固体培养法是将保存的菌种接种到含有适当营养成分的固体培养基上，然后在适当的温度、湿度和通气条件下培养。
固体培养法的优点是可以获得单个菌落，可以对菌株进行纯化和鉴定。
但固体培养法的缺点是需要较长时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。
三、滴定法滴定法是将保存的菌种加入到含有适当营养成分的液体培养基中，然后逐渐加入新的培养基，使菌株逐渐适应新的环境。
滴定法的优点是可以逐渐适应新的环境，可以获得较高的活化率。
但滴定法需要较长的时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。
四、化学处理法化学处理法是利用化学物质对保存的菌种进行处理，使其重新复苏。
常用的化学处理方法包括酸碱处理、渗透压处理、氧化还原处理等。
化学处理法的优点是操作简单，可以获得较高的活化率。
但化学处理法对菌株的适应性要求较高，有可能对菌株造成伤害，影响其生物活性和生长能力。
五、生物处理法生物处理法是利用其他微生物对保存的菌种进行处理，使其重新复苏。
常用的生物处理方法包括共培养法、共生法、共生菌法等。
生物处理法的优点是可以利用其他微生物对菌株进行适应性调节，可以获得较高的活化率。
但生物处理法对微生物的适应性要求较高，且需要较长时间才能获得足够的活化菌种。
菌种活化操作步骤
菌种活化操作步骤引言：菌种活化是一项重要的实验室技术，用于使冷冻保存的微生物菌种恢复活力并进行后续研究。
本文将介绍菌种活化的操作步骤，以帮助读者正确进行实验并获得可靠的结果。
一、准备工作1.1 材料准备确保准备好以下实验材料：- 冷冻保存的菌种样本- 无菌培养基- 无菌培养皿或试管- 灭菌的移液器和吸头- 灭菌的培养箱或恒温培养箱- 无菌操作台或洁净工作台1.2 环境准备在进行菌种活化之前，必须确保实验环境的无菌和洁净。
清洁操作台或洁净工作台，并使用适当的消毒剂擦拭工作表面。
同时，确保培养箱或恒温培养箱已经预热到适当的温度。
二、菌种活化步骤2.1 无菌操作在进行菌种活化之前，务必进行无菌操作。
戴上手套，使用灭菌的移液器和吸头，避免任何外界污染。
2.2 菌种接种将冷冻保存的菌种样本取出，迅速将其转移到无菌培养基中。
使用移液器，将适量的菌种悬浮液滴入无菌培养皿或试管中。
确保每个培养皿或试管只接种一种菌种。
2.3 培养条件设置根据菌种的特性，设置适当的培养条件。
这包括温度、pH值、培养基成分等。
将接种好的培养皿或试管放入预热好的培养箱或恒温培养箱中。
2.4 培养过程管理在菌种活化的过程中，需要定期观察和管理培养过程。
这包括检查培养皿或试管中的菌落形态和生长情况，以及调整培养条件，如温度和培养基的补充。
2.5 菌种分离与保存当菌种活化成功后，可以进行菌种分离和保存。
使用无菌技术，将菌落转移到新的培养皿或试管中，并进行进一步的鉴定和研究。
同时，将一部分菌种保存在冷冻条件下，以备将来使用。
结论：菌种活化是一项关键的实验技术，为后续的微生物研究提供了可靠的菌种资源。
通过正确的操作步骤，可以成功地活化冷冻保存的菌种，并获得可靠的实验结果。
在进行菌种活化实验时，务必遵循无菌操作规范，并根据菌种的特性进行适当的培养条件设置和管理。
这将有助于保证实验的准确性和可重复性，为微生物研究提供坚实的基础。
菌种复苏方法的步骤
菌种复苏方法的步骤菌种复苏方法的步骤菌种复苏是指将沉睡或休眠状态的菌株重新活化，使其恢复到活跃生长状态的过程。
这一步骤对于微生物研究、工业生产以及农业生产中的微生物应用非常重要。
在本文中，我将介绍一些常用的菌种复苏方法的步骤，并分享我的观点和理解。
1. 定义复苏目标和菌种选择在进行菌种复苏之前，首先需要明确复苏的目标，例如用于研究、生产或其他用途。
根据目标选择合适的菌株。
确保菌株来源可靠，并了解其特性和保存状况。
2. 菌种保存的恢复为了复苏沉睡的菌株，首先需要从保存状态中将其恢复。
最常见的方法是从冷冻保存的菌株中重新提取并进行培养。
这可以通过将冷冻样品快速解冻后接种于适宜的培养基中来实现。
i. 准备培养基根据菌株的需求，选择适宜的培养基。
可选择富含营养物质的琼脂糖培养基、特定选择性培养基或其他特定类型的培养基。
ii. 解冻样品将冷冻样品迅速解冻，通常可以通过将样品浸入温水中迅速解冻。
解冻后，务必立即进行后续步骤，以减少细胞的损伤。
iii. 平板接种将解冻的样品滴于琼脂糖培养基平板上，并利用灭菌的铁环将其均匀涂抹于琼脂糖面上。
然后将平板倾斜或水平放置，以促进菌落的生长。
iv. 培养条件将接种好的平板培养在适当的温度下，并提供菌株所需的氧气和养分。
根据菌株的特性，可以选择在培养箱、培养瓶或其他适合的培养设备中进行培养。
3. 菌落的筛选与分离经过一段时间的培养后，菌落开始生长。
在此阶段，需要对菌落进行筛选和分离，以获得纯净的单一菌株。
这可以通过选择特定的菌落形态、颜色、大小或其他特征来实现。
i. 菌落筛选观察培养基上的菌落特征，并选择具有所需特征的菌落。
根据需要，可以使用显微镜进行初步观察，进一步确定菌落的性状。
ii. 菌落分离使用消毒的铁环或其他工具，将所选菌落转移到新的琼脂糖平板上，以确保它们的纯度和单一性。
每个菌落都在新的平板上进行分离，避免不同菌落之间的干扰。
4. 菌种的继代和培养通过连续分离、培养和继代，可以确保菌种的纯度和稳定性。
大肠杆菌活化操作规程
大肠杆菌活化操作规程1. 引言大肠杆菌(Escherichia coli)是一种常见的细菌，在分子生物学研究中广泛应用。
本文档旨在介绍大肠杆菌的活化操作规程，以确保实验的准确性和安全性。
2. 实验材料和设备•大肠杆菌冻存菌•LB培养基•离心管•无菌吸管•烧杯•恒温培养箱•培养皿3. 操作步骤3.1 准备工作•清洗实验台面，并用消毒液擦拭干净。
•穿戴实验手套和实验服。
•准备所需的实验材料和设备。
3.2 活化大肠杆菌1.取出冻存菌样，以无菌吸管悬浮于10 ml LB培养基中。
确保冻存菌样完全融化。
2.将悬浮的大肠杆菌培养液转移到无菌离心管中。
3.进行高速离心，以1500 g离心10分钟，以沉淀菌细胞。
4.弃去上清液，保留菌细胞沉淀。
5.加入适量的预热(37℃)的LB培养基，用吸管轻轻悬浮菌细胞。
6.取一小部分悬浮液，在无菌培养皿表面均匀涂布。
7.将培养皿放入恒温培养箱中，以37℃孵育24小时。
4. 结果记录与分析观察培养皿表面是否有细菌生长，检查菌落的形态和颜色。
5. 实验注意事项•操作过程中要保持无菌环境，避免细菌污染。
•注意个人安全，保护眼睛和皮肤，避免直接接触培养物。
•严格执行实验室安全规章制度，如正确处理废弃物。
•实验结束后，进行器械的清洗和消毒。
6. 结论通过以上活化操作规程，我们能够成功地从冻存菌样中活化大肠杆菌，为后续实验提供研究材料。
在实验中，严格遵循操作规程和注意事项是确保实验准确性和安全性的关键。
本文档提供了大肠杆菌活化的详细步骤说明，供实验人员参考。
需要注意的是，操作规程可能会因实验目的和实验设备的不同而有所变化，因此在具体操作前请查阅相关实验文献，并根据实际情况进行调整。
菌种活化的操作方法
菌种活化的操作方法
菌种活化的操作方法包括以下几个步骤：
1. 选择合适的培养基：根据菌种的特性选择适合它生长和繁殖的培养基，例如普通营养琼脂培养基、选择性琼脂培养基等。
2. 预处理培养基：将培养基加热至融化状态后，待其降温至大约45-50摄氏度时，加入适量的菌种悬浮液。
3. 均匀混合：用铁线或玻璃棒将菌液和培养基充分混合均匀。
4. 倒入培养器：将混合后的培养基倒入培养器（如琼脂培养皿或试管）中，使其均匀覆盖整个培养器底部。
5. 固化培养基：让培养器中的培养基自然凝固，或者将其放置在恒温箱中以加速凝固。
6. 培养：将已固化的培养基置于适当的环境中，如温度、湿度等适宜的条件下培养。
7. 观察生长情况：根据菌种的特性和培养的要求，定期观察并记录菌种的生长情况，如菌落形态、颜色等。
需要注意的是，不同的菌种可能有不同的活化方法，因此在操作前最好查阅相关的文献资料，或者咨询专业人员的建议。
此外，操作时要保持清洁，避免外界微生物的污染。
分享你需要知道的标准菌株的活化方法！
分享你需要知道的标准菌株的活化方法！食品实验室服务实验室必须保存有满足试验需要的标准菌种/菌株，除检测方法（如药物敏感试验、抗菌性能测试）中规定的菌株外，还应包括应用于培养基（试剂）验收/质量控制、方法确认/证实、阳性对照、阴性对照、人员培训考核和结果质量的保证等所需的菌株。
并且标准菌种必须从认可的菌种或标本收集途径获得。
▲CNAS-CL09-2013《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明》常用标准菌种来源美国菌种保藏中心ATCC英国国家典型菌株保藏中心NCTC中国医学细菌保藏管理中心CMCC中国工业微生物菌种保藏管理中心CICC▲ ATCC和CICC标准菌种的常见包装形式接下来一起了解下标准菌株的活化方法ATCC标准菌种KWIK-STIK TM产品的活化说明将KWIK-STIKTM产品平衡至室温，撕开袋子。
取出菌种管，揭下标签上可撕取部分，贴于原始培养皿或QC记录本上。
捏碎管帽处的安瓿，使其释放出液体，将管子直立以使液体流入管底。
挤压管底的菌球，使之与液体混合，以形成均匀的菌悬液。
将棉签浸于菌悬液中，并于培养皿约三分之一范围内轻轻挤压并旋转涂抹。
使用无菌接种环进行三区或四区划线，以尽可能分离出单菌落。
随即在适合的温度和条件下倒置培养已接种的原始培养皿。
按照适宜的生物危害品处置方法（如121℃高压30 min），丢弃菌种管。
▲ ATCC标准菌株KWIK-STIK TM产品操作说明CICC标准菌种的操作说明使用酒精棉球擦拭冻干菌种管表面进行消毒。
将冻干管顶端置于酒精灯火焰上均匀加热约1~2分钟。
立即滴2~3滴无菌水于加热部位，使管壁破裂。
使用镊子或剪刀敲击裂痕处，将管顶端敲落。
吸取约0.5mL液体培养基于冻干管中，将冻干菌粉充分溶解。
取0.2mL菌悬液转移至装有5mL~8mL液体培养基的试管中混匀，并取0.1mL菌悬液转移至平板培养基上，进行划线分离。
将液体培养基和平板培养基置于合适条件下培养。
菌种活化步骤
菌种活化步骤
日期：2007-6-26 18:31:28 点击次数2519 发布单位：EM 录入：李清
一、安瓿瓶装微生物菌种开封
1-1、用浸过70％酒精的脱脂棉擦净安瓿瓶。
1-2、用火焰将安瓿瓶口加热灭菌。
1-3、用镊子将铝封口撕开。
二、菌株恢复培养
2-1、用无菌吸管，吸取0.3-0.4ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。
2-2、取约0.2ml菌体悬浮液，移植于指定的琼脂斜面培养基上，剩余的菌液，注入指定的液体培养基内（3-4ml），然后在建议的温度下培养。
三、注意事项
3-1、菌种活化前，请将安瓿瓶保存在5-10℃的环境下。
3-2、厌氧菌的培养，如无特别说明，自开封至接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态。
3-3、某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长。
四、制作ＥＭ菌液
4-1、菌种活化:用ＥＭ菌种10克、红糖0.1公斤（红糖先用热水溶化），加入1公斤的水。
注：（先把水加热到100°C后加入红塘或白糖，而后继续加热5分钟。
冷却到40°C时加入ＥＭ菌种），密闭发酵(35°C-40°C温度)下活化3天，打开容器口闻到有酸甜味即活化成功。
可以作为液体菌种使用。
4-2、制作原液：将活化好的液体菌种加入二级发酵罐。
菌种——二级发酵罐(密闭) (加水比例:按1:10的比例加入) 二级发酵液:（10%的无菌糖水！0.1%琼脂粉！温度35-40度！发酵5-7天！）成品发酵液标准（气味：酸甜！PH值：4.0-5.0！活菌含量：100亿/ml ！）。
甘油菌种复苏方法过程
甘油菌种复苏方法过程以甘油菌种复苏方法过程为标题的文章：甘油菌是一种常见的微生物菌种，可以用于多种实验室研究和工业生产。
然而，由于一些原因，甘油菌有时会失活或进入休眠状态，需要进行复苏才能重新活化。
本文将介绍甘油菌种复苏的方法过程。
甘油菌种复苏的第一步是选择合适的培养基。
常用的培养基有富含营养物质的琼脂培养基和液体培养基。
对于甘油菌的复苏，琼脂培养基是较为常用的选择。
琼脂培养基中添加了适当的营养物质，可以为菌种提供所需的养分。
接下来，准备培养基的材料和设备。
首先，准备好琼脂培养基的成分，如琼脂粉和水。
将琼脂粉加入适量的水中，然后加热至溶解。
将溶解后的琼脂液倒入培养皿中，待其凝固。
同时，准备好消毒的试管、移液器、螺旋霉素等实验器材。
然后，取一支含有甘油菌种的冷冻管。
将冷冻管放在冰上解冻，解冻后加入适量的无菌生理盐水。
使用移液器将菌液转移到试管中，然后将试管放入离心机中进行离心。
离心的目的是将菌液沉淀在试管底部，去除上清液。
离心后，将上清液倒掉，只留下菌液沉淀。
接下来，将菌液沉淀重新悬浮在无菌生理盐水中。
使用移液器将菌液沉淀吸取，然后加入适量的无菌生理盐水中，轻轻搅拌使其均匀悬浮。
悬浮后的菌液可以用于接种培养基。
将培养皿中的琼脂培养基倾斜放置，使其凝固后。
然后，使用移液器将悬浮的菌液均匀地滴在琼脂培养基上。
滴菌液时要注意避免气泡的产生。
滴菌液后，将培养皿盖好，放置在恒温箱中进行培养。
在恒温箱中，将培养皿保持在适宜的温度和湿度条件下。
甘油菌种一般在28-37摄氏度下生长，可以根据具体情况调整温度。
同时，要保持培养皿内的湿度，可在培养箱中放置一定量的水。
经过一段时间的培养，甘油菌种会开始复苏并生长。
可以观察到培养基上的菌落开始形成。
在菌落形成后，可以将菌落转移到新的培养基中进行进一步的培养和实验。
总结起来，甘油菌种复苏的方法包括选择合适的培养基、准备培养基的材料和设备、取菌液沉淀、重新悬浮菌液、滴菌液在琼脂培养基上，并在适宜的温度和湿度条件下进行培养。
关于菌种活化知识点总结
一、菌种活化的原理和方法1.原理菌种活化的原理是通过特定的方法对微生物菌株进行处理，改善其生长环境和代谢活动，提高其生理功能和应用性能。
菌种活化的关键是创造一个有利于微生物生长和活性的环境，促进微生物的代谢活动和生长繁殖。
2.方法菌种活化的方法主要包括以下几种：(1) 培养基优化：改良培养基的配方，提供适宜的营养物质、微量元素和pH值，创造一个有利于菌株生长和代谢的环境；(2) 激活培养：通过操作改变培养条件，如温度、氧气含量、光照等，刺激微生物的生理活性和代谢活动；(3) 生物激素处理：利用一定的生物激素或生长因子来刺激微生物的生长和代谢活动；(4) 培养基添加：在培养基中添加一些特定的辅助物质，如细胞因子、氨基酸等，促进微生物的生长和代谢活动；(5) 抗生素处理：在一定的浓度范围内添加抗生素，抑制一些有害细菌的生长，保护有益微生物的生长环境；(6) 培养温度控制：控制培养温度，促进微生物的生长和代谢活动。
二、菌种活化的应用菌种活化技术具有广泛的应用价值，主要体现在以下几个方面：1. 环境保护和修复：菌种活化技术可用于土壤修复、水体净化、废水处理等环境保护和修复工作，促进有益微生物的生长和活性，加速污染物的降解和清除；2. 生物农药和生物肥料：菌种活化技术可用于生产高效、低毒的生物农药和生物肥料，提高其杀菌、杀虫活性和利用率，减少对环境和人体的危害；3. 食品加工和酿造：菌种活化技术可用于食品发酵和酿造工艺中，提高微生物的代谢产物质量和产量，改善产品口感和品质；4. 医药和保健品：菌种活化技术可用于生产保健品和药物中，提高药物的活性和利用率，加快药效，降低副作用。
随着现代科学技术的不断发展，菌种活化技术也将会有更广阔的发展空间和应用前景，主要体现在以下几个方面：1. 专业化和精细化：菌种活化技术将更加专业化和精细化，针对不同的微生物菌株和应用领域，开发出更加精准和有效的活化方法和配方；2. 生物工程技术：菌种活化将会与生物工程技术相结合，通过改造菌株的基因、调控代谢途径、提高酶活性等方法，实现微生物的高效利用和生产；3. 微生物资源开发：菌种活化技术将会成为开发和利用微生物资源的重要手段，通过菌株的活化和增殖，实现对微生物资源的高效开发和利用；4. 产业化应用：菌种活化技术将会逐步应用到相关产业领域，如环境保护、农业生产、食品加工和医药制造中，推动相关产业的快速发展和升级。
培养菌落的方法
培养菌落的方法
培养菌落是生物学中一种重要的研究方法，涉及到长期对菌株的收集、保存、研究及应用。
通常情况下，培养菌落都是在营养培养基上或实验室中准备的特定环境中进行。
培养菌落的方法大致分为三个步骤，即菌株的收集、表面培养和深层培养。
首先，需要从某个目标区域或场所择取有效的环境样本，以收集菌株，使用适当的防护和采样器具可以有效的分离菌株。
环境样本往往包括沉积物、水和空气等多种地质样品，如湿地、河流、道路等。
其次，在做好收集准备后，就可以开始表面培养，一般都是采用来自特定环境样品的菌株在培养基上进行培养。
表面培养要注意适当控制温度、氧气浓度和光照等多种条件，以及各种营养物质的添加或复合物的添加，以获得最佳的生长，并从而观测微生物的菌落形态、菌落数量和微生物的种属等。
最后，深层培养。
在表面培养的基础上，进一步把表面培养的有效微生物分离出来，进行深层培养。
深层培养一般采用分离培养琼脂培养和冷冻保存。
分离培养琼脂培养可以把选择No.1菌落分离出来，接种到不同的琼脂板上，把每一个菌落
形态和种属的的特征彻底的分离出来。
而冷冻保存方法，则确定待培养的菌株种类，按照一定的处理流程，对该株微生物进行重新活化和繁殖，并持续不断的保存在低温冰箱中。
培养菌落方法是微生物研究中的一个关键性和核心性的步骤，涉及到收集、表面培养和深层培养等多个环节。
它涉及到对环境样本的采集、收集菌株、操纵环境条件如温度、氧气浓度等以及琼脂培养和冷冻保存等步骤，这些都是有助于微生物研究及应用的重要准备工作。
菌株活化操作
菌株活化操作
1．准备培养基和接种工具。
选择合适的非选择性培养基，确保营养富集。
准备无菌微量吸管、无菌接种环、无菌棉签、酒精棉球、火焰、培养皿等工具和耗材。
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2．活化前准备。
对于冻干菌株，使用75%酒精棉球擦拭冻干管表面进行消毒，然后在火焰上加热外管顶端，滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再用硬棒敲破尖端，取出隔热纤维纸和内管，用灭菌过的镊子取出内管之棉塞。
3．溶解菌株。
对于液体培养基中的菌株，使用无菌吸管吸取指定量的液体培养基，滴入内管内，轻微震荡直到均匀悬浮。
对于固体培养基中的菌株，使用无菌吸管吸取指定量的无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，用无菌吸管吸取并滴入无菌水，轻微震荡使其均匀后，静置30至60分钟。
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4．接种培养基。
在无菌环境下，用无菌微量吸管从内管中吸取菌液，滴入固态指定培养基的边缘附近，使用划线法接种于培养基。
将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。
5．废弃菌种管。
按照适宜的生物危害品处置方法丢弃菌种管，如121℃高压30分钟。
酵母菌落PCR
酵母菌落PCR方法酵母菌落PCR方法，酵母菌落PCR方法，涉及提取DNA方法、PCR方法问：很郁闷，最近在做电转毕赤酵母，但是转化完了没有合适的筛选方法，如果提基组的话费时费钱，而且由我这个电转的几率十分低，也就有1%-10%，所以想用菌落PCR 方法筛选，但酵母菌破壁很困难，如果处理不好的话基组释放不出来，就没有阳性结果了。
查了一些资料说用反复冻融法，是不是直接挑单菌落就行了呢？还有说用蜗牛酶帮助消化的，这个我倒不是很清楚，所以请各位大虾们帮帮忙，在实在是被这个伤透脑筋了！求助十万火急！！！！！！！答：蜗牛酶提取DNA以后作PCR效果很稳定酵母DNA的提取1、x新鲜的菌中加入150ul（200ul）bufferiI25(30)ul蜗牛酶（30mg/ml），37度，10Min（可以30min水浴，中间隔5分钟，振荡一次，避免细胞沉到管底。
2、离心10000rmp，10min，去上清，沉淀中加入bufferII250ul3、加入25ul，10%SDS。
65度，30min水浴。
4、加入25ul 5mol/lKAC，冰浴60分钟（4度冰箱放置就可以）5、12000rmp，15min，取上清，在上清中加入2-3倍积的无水乙醇，混匀放置－20度一小时（可过夜，取出后不振荡，直接离心）6、12000rmp，15min，弃上清。
7、150ul，bufferIII溶液沉淀，12000rmp，15min8、将上清溶液转到干净的离心管中，加入6ul（10ug/ul），ran酶，37度，30min9、加入等积异丙醇，4度静止10min，10000rmp，5min，溶50ulbufferIII中10、如果有蛋白质可以使用酚氯仿抽提11、bufferI：0.9mol/l 山梨醇，0.1mol/l EDTA12、bufferII：50mmol/l Tris，20mmol/l EDTA13、bufferIII：10mmol/l tris，1mol/l EDTA14、筛选AD/BD可以直接使用抗生素筛选的方法酵母菌落PCR1、酵母质粒和基组DNAPCR模版的备取对数生长期酵母菌株 1.5ml，13000r/min，离心15s，去上清，双蒸水洗涤一次，13000r/min 离心15s，沉淀悬浮200ulTE缓冲液中，在沸水上煮1-10min，冰浴10min，13000r/min，离心5min，将上清液储存－20度取1ul用PCR2、从板上调取长势良好的菌落少许，悬浮含20ul无菌水的0.5ml eppendofff离心管中（离心管中央预先用注射器针头扎一个小孔，放置盖子受热膨胀）水浴煮沸0.2.5.10min3、利用微波炉快速备酵母治理以及菌落取直大3mm的酵母干菌落，至EP管中盖上盖子，在微波炉中加热，加入30ulTE振荡，13000r/min，离心2-5min，上清储存浴－20度，取1ul来作PCR真菌DNA的提取方法改良1、酵母活化后加入YEPD培养基，25-28度培养16-24小时，收集菌2、取少许新鲜的菌，加入0.6ml缓冲液I（0.9mol/l 山梨醇，0.1mol/l EDTA）1ml。
【参考文档】大肠杆菌菌种活化步骤-word范文模板 (6页)
本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==大肠杆菌菌种活化步骤篇一：抑菌实验步骤抑菌实验：待测菌金色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；大肠杆菌；绿脓杆菌菌种活化：菌种，进行活化，可以划线，也可以涂布，划线：直接用接种环在酒精灯上烧过之后，等之冷却，蘸取进行划线！涂布：用枪头吸取100ul的菌液涂布既可！本实验采用涂布法1.金色葡萄球菌最佳生长条件(过夜培养一般为12h)2. 枯草芽孢杆菌培养条件（过夜培养）3.绿脓杆菌最佳培养条件（14-17h）培养基MH（A）培养基( Mueller-Hinton Agar)成分：牛肉浸粉（牛肉膏） 5g；酪蛋白水解物 17.5g；淀粉 1.5g；琼脂 12.5gMH液体培养基配制方法：称取本品36.5克，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟备用。
牛肉膏蛋白胨固体培养基（LB培养基）：牛肉膏10 g，蛋白胨10 g，琼脂15g，NaCl 5 g，双蒸水1000mL，pH 7.2-7.5，121℃灭菌20min。
牛肉膏蛋白胨液体培养基：不加琼脂，其他同牛肉膏蛋白胨固体培养基。
菌悬液的配制将冰箱保存的大肠杆菌移接到牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养24 h，用接种环挑取少许菌体与装有无菌生理盐水的试管中，震荡均匀，制成菌悬液。
具体为用接种环挑取一环（本实验是吸取100uL菌悬液）于5 mL的无菌生理盐水中，每10倍稀释一次地逐级稀释，取（10-8、10-9、10-10 、10-11）的浓度100μL做涂布实验，每个梯度平行三组，加100μL药品溶剂（二甲基亚砜）的空白对照3个平板，完全不加任何样品即只是LB培养基的完全空白对照1个平板，调整菌悬液浓度，用平板菌落法测定其菌液浓度，使其含菌体数为103 cfu/mL，即为供试菌悬液。
菌种的活化方法
菌种的活化方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：菌种活化是指将菌种从休眠状态激活至活跃状态的过程，使其恢复生长和繁殖能力。
良好的活化方法可以提高菌种的发酵效率和产量，保证产品的质量稳定性。
下面将介绍一些常用的菌种活化方法。
一、前处理菌种在储存过程中可能会受到损伤或降解，因此在进行活化之前首先要进行前处理。
常见的前处理方法包括：将菌种在富含营养物质的培养基中培养一段时间，以恢复其活力；采用低温冷冻保存的菌种需先进行解冻和复苏处理；对于被冷冻干燥的菌种，需要通过加入适量水或培养基来复苏。
二、温度调节温度是影响菌种活化的一个重要因素。
一般来说，大多数菌种的适宜生长温度在25-35摄氏度之间。
在活化菌种时应根据不同菌种的特性和环境条件调节适宜的温度，提供一个适宜的生长环境，促进菌种的恢复和生长。
三、培养基选择培养基的选择对菌种的活化也有很大的影响。
一般来说，应选择含有适当营养成分、低毒性和无污染的培养基，以促进菌种的复苏和生长。
对于不同种类的菌种可能需要选择不同的培养基，以满足其特定的生长和营养需求。
四、氧气供应氧气是微生物生长和代谢所必需的。
在活化菌种时，应保证有足够的氧气供应，以促进菌种的代谢活动和生长。
可以通过搅拌、通气等方式增加培养基中的氧气含量，提高菌种的代谢和生长速度。
五、PH值调节PH值是影响菌种生长的另一个重要因素。
不同菌种对PH值的适应范围不同，因此在活化菌种时应考虑到不同菌种的PH值需求。
一般来说，绝大多数菌种的适宜生长PH值在6-8之间，因此应选择适当的PH值培养基来活化菌种。
六、添加生长因子有些菌种对特定生长因子有较高的依赖性，缺乏这些生长因子会导致其生长迟缓或死亡。
在活化菌种时，可以考虑添加一些生长因子或促生长物质，以帮助菌种更快地复苏和生长。
不过，需要根据菌种的特性和需求来确定添加何种生长因子以及添加的浓度。
七、时间控制菌种活化的时间一般较长，需要耐心等待。
在活化菌种时，应根据菌种的生长速度和复苏程度来控制活化时间，不能过早打断或过早结束。
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TA97a步骤：
放置至室温，移去盖和塞子，用镊子夹一个或多个颗粒至管中，加入营养肉汤（管子应容量是肉汤量的3-5倍），若有需要可加入25μg/mL的氨苄青霉素。
37℃摇菌至1-2×109cfu/mL。
TA98步骤：
使用前一天晚上放置至室温，移去盖和塞子，用镊子夹一个颗粒至管中，加入营养肉汤，37℃放置过夜。
第二天早上37℃摇菌至1-2×109cfu/mL。
此时肉汤会变得浑浊。
菌落可直接计数，或通过光密度检测，或在营养琼脂中稀释。
条件合适的情况下，约30分钟菌落数就会翻倍，务必不要使生长过度。
TA100步骤：
使用前一天晚上放置至室温，移去盖和塞子，用镊子夹一个颗粒至管中，加入营养肉汤，37℃放置过夜。
第二天早上37℃摇菌至1-2×109cfu/mL。
此时肉汤会变得浑浊。
菌落可直接计数，或通过光密度检测，或在营养琼脂中稀释。
条件合适的情况下，约30分钟菌落数就会翻倍，务必不要使生长过度。
TA102步骤：
放置至室温，移去盖和塞子，用镊子夹一个或多个颗粒至管中，加入营养肉汤（管子应容量是肉汤量的3-5倍），若有需要可加入25μg/mL的氨苄青霉素和2μg/mL的四环素。
37℃摇菌至1-2×109cfu/mL。