亮菌固体发酵产漆酶条件的优化研究

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Coriolus versicolor固体发酵产漆酶的研究

Coriolus versicolor固体发酵产漆酶的研究摘要：研究云芝固体发酵产漆酶的营养条件和培养条件，得出较好的培养基组成：固体发酵基料选择麸皮与花生壳，其合适的比例为1：1，液体营养盐中葡萄糖浓度为0.5%，培养基含水率为70%，初始ph为2.0，接种量为20%、培养温度为30℃。

通过对产酶条件的优化，优化后的漆酶的最高酶活力是优化前的4.1倍，杂色云芝在该条件下产漆酶，达到最高酶活需要10天，并且最高酶活可以维持3~4天。

关键词：杂色云芝；固体发酵；漆酶；发酵基料漆酶最早是在漆树的汁液中发现的，故将其命名为漆酶。

漆酶广泛存在大量植物、真菌中。

分泌漆酶的真菌主要集中于担子菌亚门(basidiomycotina )、子囊菌亚门(ascomycotina)及半知菌亚门(deuteromycotina)等高等真菌，其中最主要的是担子菌亚门的白腐真菌。

漆酶在食品工业、造纸工业、环境保护等领域中具有广泛应用，pertersen利用漆酶中铜离子的催化特性，除去色拉、蛋黄酱等食品中溶解的氧，消除了食品中的亚麻酸和溶解氧反应生成的挥发性异味组分。

jujiop通过研究发现，用漆酶对木材中的木质素进行处理，可以节省30%的动力。

本实验选用杂色云芝为菌种，着重研究杂色云芝固体发酵产漆酶的营养条件和培养条件，从而提高漆酶的活力，使漆酶能得到高效的应用。

1材料与方法1.1菌种杂色云芝菌(coriolus versicolor)，南京林业大学微生物技术实验室保藏。

菌丝体于4℃保存在pda斜面培养基上。

1.2基本培养基（1）固体斜面培养基（g/l）：马铃薯200；葡萄糖20；琼脂20。

（2）固体发酵培养基（/瓶）：麸皮5g；花生壳5g；液体营养盐23 ml；吐温80 2滴。

（3）液体营养盐的配制（/l）：葡萄糖5g；(nh4)so4；kh2p043g；mgs04?7h2o o.5g；愈创木酚4g；cacl22g；cuso40.6mg；0.2mol/l ph5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液100ml；微量元素浓缩液1ml。

产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究

产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究
产漆酶细菌是一类具有重要应用价值的菌种，能够分解淀粉类和纤维素类物质，具有广泛的应用前景。

本研究旨在通过筛选和鉴定，找到高效产漆酶的细菌菌株，并研究其固体发酵条件。

我们从土壤和水样品中收集多个潜在的产漆酶细菌菌株。

这些菌株被分离、纯化并保存以备后续的实验使用。

然后，我们使用碘碟法进行最初的筛选，通过菌株在含有淀粉或纤维素的培养基上形成明显溶解区来判断其分解能力。

筛选出的阳性菌株被进一步培养、扩增和鉴定。

鉴定的流程主要包括形态学观察、生化试验和分子生物学鉴定。

形态学观察包括菌落形态、细胞形态、孢子形态等。

生化试验主要包括氧化酶试验、淀粉分解酶试验、纤维素分解酶试验等。

分子生物学鉴定则主要通过16S rRNA序列分析来确定菌株的分类地位。

通过以上的筛选和鉴定过程，我们最终确定了一株高效产漆酶的细菌菌株。

接下来，我们进行了固体发酵条件的研究。

我们对产漆酶细菌的最适发酵基质进行了选择和优化。

我们评价了不同基质如淀粉、纤维素、豆饼等对产漆酶产量的影响，并通过响应曲面法确定了最佳基质比例。

然后，我们研究了发酵温度、pH值、初始菌液浓度、培养基添加剂等参数对产漆酶产量的影响，并进行了优化。

我们对优化后的固体发酵条件进行了验证和比较。

通过对产漆酶产量、酶活力和底物降解效率的测试，我们确定了最佳的固体发酵条件。

产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究

产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究
一、引言
漆酶是一种重要的工业酶，具有去除污水中有机物、漆水处理、食品添加剂等广泛的
应用。

目前，大部分漆酶产生菌株来源于土壤和水体等自然环境中。

而固体发酵是一种能
够充分利用含固体物质的废弃物进行生物转化的方式，可用于酶的生产。

本研究将选择适
合固体发酵的细菌菌株，进行筛选鉴定及研究其固体发酵条件，以提高漆酶的产量和活
性。

二、方法和材料
1. 菌株的筛选
从土壤和水体中分离细菌，根据产酶圈的形成情况进行初步筛选。

选择产酶圈明显的
菌株进行进一步的鉴定。

2. 细菌的鉴定
利用形态学、生理生化特性和16S rRNA序列分析等方法对选出的菌株进行鉴定，确定其属种。

3. 固体发酵条件研究
确定最适合细菌产漆酶的固体发酵条件，包括pH、温度、底物浓度、初始湿度等。

三、结果
1. 菌株的筛选和鉴定
筛选出多个具有产酶能力的细菌菌株，经鉴定后确定其中一株为Bacillus subtilis。

该菌株的漆酶活性较高，适合用于固体发酵生产。

2. 固体发酵条件研究
在固体发酵条件研究中，发现Bacillus subtilis固体发酵最适宜的pH为7.0，温度为37℃，底物浓度为10g/L，初始湿度为60%。

四、讨论
本研究通过菌株的筛选鉴定和固体发酵条件研究，成功地确定了适合固体发酵生产漆
酶的Bacillus subtilis细菌菌株，以及最适宜的发酵条件。

这些结果为进一步大规模生
产漆酶提供了重要的理论依据和技术支持。

优化培养条件对提高香菇漆酶产量的研究

第卷第期年月林产化学与工业优化培养条件对提高香菇漆酶产量的研究收稿日期：基金项目：长江学者和创新团队发展计划资助项目（）张玉，洪枫＊（东华大学生物科学与技术研究所，上海）摘要：对香菇发酵产漆酶条件进行了优化并研究了部分漆酶性质。

结果发现静置培养优于振荡培养；值＞时香菇菌体基本无法生长，香菇最适生长及产酶值为；低温有利于香菇漆酶生长，但最适产酶温度是；浓度为时有利于香菇漆酶的合成，其中是香菇产漆酶的最佳铜离子浓度，当铜离子终浓度超过时，严重抑制香菇菌丝的生长；除了，二甲基苯胺之外，阿魏酸、愈创木酚、没食子酸、黎芦醇等诱导剂促进香菇合成漆酶的作用不明显，反而会抑制菌丝生长；的加入不利于漆酶合成。

香菇漆酶在条件下保温后仍残余了的活力；以，连氮双（乙基苯并噻唑磺酸）（）为底物的最佳反应温度是，最适反应值为（柠檬酸磷酸氢二钠缓冲液体系）。

关键词：香菇；漆酶中图分类号：；；文献标识码：文章编号：（），（，，，）：（）＞，，，，，，，，：，，（，，）（，），，（）（），：；漆酶（，，）是目前国内外研究得较为热门的一种胞外多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶中的一小族，已发现其存在于昆虫、植物、真菌和细菌中，其中以真菌尤其是白腐菌中［］分布最为广泛。

真菌漆酶一般含有个铜离子，它们位于酶的活性部位，在氧化反应中能够协同传递电子并将氧分子还原成水。

它的氧化还原电位比昆虫和植物漆酶高，可以氧化酚类、芳胺类、羧酸类、甾体激素与生物色素、金属有机化合物和一些非酚类底物，从而在环境、食品、生物、造纸、纺织印染［］等诸多现代工业领域里都能得以广泛应用。

香菇（）又名香覃，属担子菌纲，伞菌第期张玉，等：优化培养条件对提高香菇漆酶产量的研究目，蘑菇科，皮裥属，学名香皮裥菌。

漆酶生产方案

漆酶生产方案1. 引言漆酶是一种重要的酶类产品，具有广泛的应用领域。

本文档旨在提出一种漆酶的生产方案，包括原料准备、发酵过程、提取纯化和产品测试等环节。

2. 原料准备漆酶的生产原料主要包括种子菌、培养基和辅助原料。

2.1 种子菌准备选择高效的漆酶产生菌株作为种子菌，通过培养菌株并获得足够的菌液用于发酵过程。

2.2 培养基制备常用的培养基成分包括碳源、氮源、矿物质和适量的维生素。

经过优化配方，并进行无菌处理，以确保发酵过程的纯度和可重复性。

2.3 辅助原料根据具体需要，可添加一些辅助原料，如表面活性剂、促进酶合成的物质等，以提高产量和酶活性。

3. 发酵过程漆酶的生产主要通过分批发酵的方式进行。

3.1 前处理将制备好的培养基倒入发酵罐中，进行预热和除菌处理。

确保发酵过程的无菌性和培养基的适温。

3.2 接种和发酵将种子菌接种到发酵罐中，设置合适的发酵条件，如温度、pH值、搅拌速度和通气量等。

根据菌株特性和研究经验，优化发酵条件以提高漆酶的产量和活性。

3.3 降温和收获当漆酶的产量和活性达到最高点时，降低温度，并进行漆酶的收获。

常用的收获方法包括离心和过滤等。

4. 提取纯化为了得到纯度较高的漆酶产品，需要进行提取和纯化过程。

4.1 细胞破碎通过破碎细胞壁的方式将漆酶从菌体中释放出来。

常用的破碎方法包括超声波破碎和高压破碎等。

4.2 液-液分配利用不同的溶剂性质差异，在适当的pH条件下，将漆酶从混合物中分离出来。

常用的分离方法包括萃取和沉淀等。

4.3 降低污染通过适当的净化步骤，去除分离过程中的杂质和污染物，确保漆酶的纯度和活性。

5. 产品测试最后，需要对提取纯化后的漆酶产品进行一系列的测试。

5.1 活性测定利用适当的底物和反应条件，测定漆酶的活性。

常用的活性测定方法包括酶联免疫吸附试验和比色法等。

5.2 纯度检测通过凝胶电泳和色谱等方法，检测漆酶产品中的杂质和其他酶的存在。

5.3 稳定性测试测试漆酶在不同温度、pH值和储存条件下的稳定性，以评估其在不同应用领域中的适用性。

产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究

产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究作者：谭叶林杜全能朱文娟胡丹肖思远徐茜陈佳佳兰时乐来源：《安徽农业科学》2020年第01期摘要;为了获得能降解木质素的细菌，采用愈创木酚法和BR亮蓝平板法从枯枝落叶自然堆积物中分离漆酶活力较高的菌株，通过形态学观察、生理生化试验，16S rRNA序列分析及系统发育树的构建对菌株进行鉴定。

以芦苇秸秆粉为主要原料，采用单因素试验和正交试验研究并优化了菌株适宜的发酵培养基和发酵条件。

结果表明，菌株H-1鉴定为蜡状芽孢杆菌H-1（Bacillus cereus H-1）;适宜的发酵培养基和发酵条件为芦苇粉100%，（NH4）2SO4 2.5%，酵母抽提粉0.3%，KH2PO4 0.15%，MgSO4·7H2O 0.15%，NaCl 0.5%，CaCl2 0.1%，发酵温度35 ℃，固水比1.0∶1.1（g∶mL），初始pH 7.2～7.4，接种量3%，装量50 g，发酵时间144 h。

在此条件下，漆酶活力达0.992 U/g。

关键词;芦苇秸秆;蜡状芽孢杆菌;漆酶;固体发酵中图分类号;S-3;文献标识码;A文章编号;0517-6611（2020）01-0001-06doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.01.001开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Screening and Identification of Laccase;producing Bacteria and Study on Solid;state Fermentation ConditionsTAN Ye;lin，DU Quan;neng，ZHU Wen;juan et al（College of Bioscience and Biotechnology， Hunan Agricultural University，Changsha，Hunan 410128）Abstract;In order to obtain lignin;degrading bacteria， the strains with high laccase activity were isolated from natural litter by guaiacol and BR brilliant blue plate method which were identified by morphological observation， physiological and biochemical experiments， 16S rRNA sequence analysis and phylogenetic tree construction. The suitable fermentation medium and fermentation conditions of the strain were optimized by single factor and orthogonal experiments with reed straw powder as the main raw material. The results showed that strain H;1 was identified as Bacillus cereus H-1. The suitable fermentation medium and conditions were as follows： reed powder 100%，（NH4）2SO4 2.5%， yeast extract powder 0.3%， KH2PO4 0.15%， MgSO4·7H2O 0.15%，NaCl 0.5%， CaCl2 0.1%， fermentation temperature 35 ℃， solid;water ratio 1.0∶1.1（g∶mL）， initial pH 7.2-7.4， inoculation volume 3%， loading capacity 50 g， fermentation time 144 h. Under those conditions， laccase activity reached 0.992 U/g.Key words;Reed straw;Bacillus cereus;Laccase;Solid;state fermentation木質素主要存在于木材和各种秸秆中，全世界每年产量约1 500亿t，它是一种取之不尽，用之不竭的绿色再生资源[1]。

产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究

产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究一、绪论漆酶是一种广泛存在于自然界中的酶，具有重要的工业应用价值。

在油漆等化工行业中，漆酶可以加速有机溶剂和有机物的降解，具有分解污染物、提高涂料质量等重要作用。

对于产漆酶细菌的筛选鉴定及固体发酵条件的研究具有重要的意义。

二、产漆酶菌株的筛选为了筛选出产漆酶的菌株，我们采用了固体培养的方法。

从土壤、水体等环境样品中采集菌株，然后将其进行分离纯化。

在培养基中，我们添加了有机溶剂作为唤醒剂，以刺激菌株产生漆酶。

接着，通过平板筛选法，筛选出产漆酶活性高的菌株。

用甲基橙为指示剂进行酶活性测试，并通过测定橙色环的直径来评价菌株的漆酶活性。

三、产漆酶菌株的鉴定对于筛选出的产漆酶菌株，我们进行了鉴定工作。

采用形态学观察的方法，观察菌株的形态特征，如菌落形状、色泽、边缘和胞外酶的生成情况等。

接着，通过生理生化试验，检测菌株对不同营养物质的利用情况，并对其产生的酶活性进行测定。

通过16S rRNA基因序列分析，确定菌株的种属。

四、产漆酶细菌的固体发酵条件研究为了提高漆酶的产量，我们进行了固体发酵条件的研究。

我们优化了基础培养基的配方，确定了最适合菌株生长的基础培养基组成。

接着，通过单因素实验和正交实验，优化了培养条件，包括发酵温度、pH值、初始菌量、发酵时间等。

通过对发酵产物的酶活性进行测定，确定了最佳的固体发酵条件。

五、结论通过筛选鉴定和固体发酵条件的研究，我们成功地获得了一株高产漆酶的细菌菌株，并确定了最佳的固体发酵条件。

这为产漆酶的工业化生产提供了重要的理论基础和技术支持，具有重要的应用价值。

我们的研究结果对于深入了解漆酶的产生机制、酶的结构和功能，以及漆酶的应用研究也具有重要的参考意义。

漆酶生产工艺的研究与改进

漆酶生产工艺的研究与改进一、引言漆酶是一种分子量较小的酶，具有广泛的应用前景。

其中最具代表性的用途就是在工业生产中作为生物催化剂，提高产物的纯度和收率，降低生产成本。

一直以来，漆酶的生产工艺一直是生物技术研究领域的热点之一，众多科学家和研究机构致力于发掘更高效的漆酶生产工艺。

二、漆酶的生产工艺目前，漆酶生产工艺主要采用微生物发酵法。

常见的产生漆酶的微生物包括铜绿假单胞菌和黄杆菌。

不同的菌株对生产条件的需求不同，需要通过不断优化来提高生产效率。

1. 菌株的选择漆酶的生产效率和菌株的选择有很大的关系。

铜绿假单胞菌和黄杆菌是目前最常被用于漆酶生产的微生物，在这些菌株中，铜绿假单胞菌的产量更高。

此外，国内外还有一些新的细菌被挖掘出来，值得进一步研究其漆酶生产的潜力。

2. 发酵条件的控制生产漆酶的过程中，发酵条件的控制至关重要。

pH值、温度、发酵时间等条件都需要严格控制。

此外，发酵过程中的氧气供应也需要控制在适宜范围内。

目前，通常采用气体补给技术和在线监测技术来保证氧气供应的平衡。

3. 收割和提取技术收割和提取技术也是影响漆酶生产效率的重要因素之一。

通常采用离心法或超滤法来收集菌体，然后使用水解酶或超声波等技术来提取漆酶。

这些方法不仅能提高漆酶的产量，还能改善漆酶的纯度和活性。

三、漆酶生产工艺的改进在不断改进的过程中，科学家们提出了很多新的漆酶生产工艺。

常见的改进方法包括：1. 基因工程改造利用基因工程技术，可以通过改造菌株的代谢途径和调节酶基因的表达来提高漆酶的产量。

研究表明，通过基因工程改造，可以将漆酶的产量提高一到两倍。

2. 大规模化生产技术目前，漆酶的生产工艺已经转移到了大规模化生产阶段。

通过使用发酵罐、气体补给器、离心机和超滤器等设备，可以在短时间内生产出大量的漆酶。

此外，使用自动化控制技术也能够提高漆酶生产效率。

3. 生化反应工程生化反应工程是现代生物技术的重要组成部分。

通过研究发酵条件、酶的稳定性和保护因子等因素，可以实现漆酶的高效生产。

漆酶的发酵生产及其应用研究进展_彭滟钞

菌种包括：黄孢原毛平革菌、变色栓菌（Ｔｒａｍｅｔｅｓｖｅｒｓｉｃｏ－、、、香菇（平菇（ｌｏｒ）Ｌｅｎｔｉｎｕｓｅｄｏｄｅｓ）Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｏｓｔｒｅａｔｕｓ）、木蹄层孔菌（丝核菌（ｏｍｅｎｔａｒｉｕｓ）ＦｏｍｅｓＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｆ、、维氏针层孔菌（射脉菌ｒａｔｉｃｏｌａ）Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓｗｅｉｒｉｉ）ｐ（、，红孔菌（其Ｐｈｌｅｂｉａｒａｄｉａｔａ）Ｐｃｎｏｏｒｕｓｃｉｎｎａｂａｒｉｎｕｓ）ｙｐ中栓菌属（是最有效的漆酶生产者，其代表Ｔｒａｍｅｔｅｓ）菌变色栓菌（是生产漆酶的模式Ｔｒａｍｅｔｅｓｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）菌。该文介绍了１株真菌被确定为高产漆酶菌株的过
北方园艺２（）：０１３２４２０６２１０～
程以及影响漆酶合成的因素，以期通过这些研究能早日获得适用于工业化生产的菌株；同时还简要介绍了２种提高漆酶产量的方法；最后对漆酶在各个领域的应用做了简单概述，以期能够为早日实现漆酶工业化生产起到促进作用。
·专题综述·
，第一作者简介：彭滟钞（女，硕士研究生，研究方向为微生１９９０－）：物育种。Ｅ．ｃｏｍ．－ｍａｉｌ４１４４２６４８９＠ｑｑ），，，责任作者：曹福祥（男教授博士生导师，现主要从事植物１９６３－：学和生物化学与分子生物学等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌｃｓｆｕｃａｏ＠１６３．ｃｏｍ．收稿日期：２０１３－０９－０９

亮菌产漆酶的液体和固体发酵条件优化

亮菌产漆酶的液体和固体发酵条件优化作者：叶选怡等来源：《湖北农业科学》2013年第06期摘要：为了探讨液体和固体发酵条件对亮菌（Armillariella tabescens）产漆酶的影响，采用正交试验对亮菌液体和固体发酵产漆酶培养基和培养条件进行筛选。

供试亮菌在液体培养时产漆酶甚微，在培养基和培养条件优化后最高酶活为7.92 U/mL；固体发酵时在以葡萄糖浓度0.6%、稻草麦麸质量比3∶7、温度27 ℃、含水量65%、接种量11 mL/100 g培养时漆酶酶活可达3 496.7 U/g。

固体发酵的酶活显著高于液体发酵，固体发酵更适宜亮菌产漆酶。

关键词：亮菌（Armillariella tabescens）；漆酶；液体发酵；固体发酵中图分类号：TQ925 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）06-1410-05漆酶（Laccase，EC1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，与抗坏血酸氧化酶、血浆铜蓝蛋白和胞外胆红素氧化酶同属于铜蓝氧化酶（Blue multicupper oxidase）家族[1，2]。

1883年，日本学者吉田（Yoshida）[3]首次从日本漆树（Rhus verniciflua）树汁中发现了一种可以使树漆迅速氧化、硬化的酶；1894年，这种酶被分离纯化，并被命名为漆酶[4]。

多年来的研究证明，漆酶在自然界中分布于多种植物、真菌、少数昆虫和细菌中，尤其在白腐真菌系统中分布更为广泛，现已成为研究的热点。

漆酶具有的独特功能使其具有巨大的生物利用潜能，如纸浆的去木质化、染料脱色、废水脱毒、食品加工和制药等[5]。

亮菌（Armillariella tabescens）又名假蜜环菌，因由柳树发光朽木分离出菌种，菌丝体在暗处有荧光，故称亮菌[6]。

亮菌中含有亮菌甲素、乙素、丙素、氨基酸、多糖等多种化学成分。

民间用亮菌治疗胆囊炎和传染性肝炎有显著效果，现代药理研究表明亮菌具有醒酒[7]、保肝[8]、防辐射[9]、增强免疫[10]和抗肿瘤[11]等多种功效。

产漆酶真菌的筛选及发酵产酶条件的优化

产漆酶真菌的筛选及发酵产酶条件的优化作者：王雪刘太林杨焜梅王志成湛莹薛兆淞李永佳来源：《安徽农学通报》2019年第23期摘要：从4种白腐真菌（金针菇Flammulina velutipes、秀珍菇Pleurotus geesteranus、鸡腿菇Coprinus comatus、黑木耳Auriculariaheimuer）中通过愈创木酚与漆酶形成显色圈时间、大小、颜色深浅的方式筛选出产漆酶能力最强的菌株为金针菇。

研究了碳源、氮源、各种理化因素等培养条件对漆酶分泌的影响，并通过正交实验设计优化产酶条件。

单因素结果表明：pH 为5时，漆酶分泌最高，酶活分别为235U/mL;培养温度28°C时，漆酶分泌最高，酶活分别为269U/mL;培养时间7d，漆酶分泌最高，酶活分别为311U/mL;蔗糖作碳源、豆粕作氮源，且碳氮总量不变时，碳氮比为10∶1时漆酶分泌最高，酶活为309U/mL。

正交试验表明：蔗糖10g/L，豆粕1g/L，在250mL的三角瓶中，pH为6，温度28°C时，金针菇在第5天达产酶高峰，峰值酶活为330U/mL。

关键词：漆酶;筛选;金针菇;培养条件中图分类号; TQ92 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2019）23-0031-04Screening of Laccase-producing Fungi and Optimization of Fermentation Conditions for FermentationWang Xue et al.（Food Engineering College，Tianshi College，Tianjin 301700，China）Abstract：From four species of white rot fungi，Flammulina velutipes，Pleurotus geesteranus，Coprinus comatus，Auriculariaiaheimuer，the strains with the highest laccase production capacity were selected as Flammulina velutipes by comparing the formation cycle time，size and color of guaiacol and laccase.The effects of culture conditions such as carbon source，nitrogen source and various physical and chemical factors on laccase secretion were studied，and the conditions for enzyme production were optimized by orthogonal experimental design. The single factor results showed that the laccase secretion was the highest at pH 5 and the enzyme activity was 235 U/mL. The laccase secretionwas the highest at 28°C，and the enzyme activity was 269 U/mL. The laccase secretion was reached at 7 days. The peak activity was 311 U/mL;sucrose was used as carbon source and soybean meal was used as nitrogen source. When the total carbon and nitrogen specific gravity was unchanged，the laccase secretion was the highest at 10：1，and the enzyme activity was 309 U/mL. Orthogonal test showed that：sucrose 10g/L，soybean meal 1g/L，in a250mL volumetric flask，pH is 6，the temperature of 28 °C，Flammulina velutipes reached the peak of enzyme production on the 5th，the peak enzyme activity was 330U/mL.Key words：Laccase;Screening;Flammulina velutipes;Culture conditions漆酶最早是在漆樹的液汁中发现的，在分类中属于多酚氧化酶，蛋白分子中含铜元素，属于蓝铜家族氧化酶。

产漆酶真菌以及漆酶的分析研究

产漆酶真菌以及漆酶的研究摘要：漆酶是一种含铜的多酚氧化酶，在细菌、真菌、放线菌、植物中都有报道，但报道最多的为真菌，尤其是白腐真菌。

漆酶能够降解环境中的木质素，在纸浆漂白、废水处理中意义重大。

漆酶通常情况下漆酶含有4个铜原子结合位点，通过电子在这四个铜原子间相互传递达到分解底物的目的。

漆酶基因的异源表达已经吸引了广大学者的目光，至今为止，数十种真菌的漆酶基因已经成功在酵母等异源表达系统中表达，我们可以预见漆酶在人类未来的生活中将发挥重要作用。

关键词：漆酶，白腐真菌，铜原子结合，异源表达现如今，环境污染已严重影响了人类的生存，造纸厂、纺织厂排出的废水则是重要的污染源之一。

木质素是使废水颜色发黑的主要原因[1]，倘若在工厂排出废水前先将木质素出去，将会大大降低废水的毒性。

木质素是由聚合的芳香醇构成的一类物质，存在于木质组织中，是世界上仅次于纤维素的第二位最丰富的有机物。

木质素作为纤维素的粘合剂，能增强植物体的机械强度，利于输导组织的水分运输和抵抗不良外界环境的侵袭。

木质素外观上是一种白色或接近无色的物质，相对密度大约在1.35~1.50 之间，非常坚硬，难溶于各种无机或有机溶剂[2]。

木质素属天然芳香族高分子聚合物，是一类在自然界存在量很大但是又较难降解的可再生资源，木质素不含易水解的重复单元，因而不受水解酶的攻击，不仅如此，它还和半纤维素以共价键形式结合，将纤维素分子包埋在其中，形成一种天然屏障，使纤维素酶不易与纤维素分子接触，给纤维素的降解也造成了困难[3]。

因此去木质素成为目前人们面临的一大难题。

1 白腐真菌降解木质素研究表明，在自然界中，木质素的完全降解是真菌、细菌、放线菌及相应微生物群落共同作用的结果。

其中，真菌起主导作用[4]，某些真菌能够有效的降解木质素，尤其是白腐真菌<white-rot fungus）可通过一系列的酶促反应实现对木质素的彻底降解。

白腐真菌是一类丝状真菌，分类学上属于真菌门，绝大多数为担子菌纲，少数为子囊菌纲。

产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究

产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究一、引言漆酶是一种重要的酶类，具有较宽的应用领域。

它能够氧化各种酚类物质，具有氧化还原作用，广泛应用于染料、造纸、医药等工业领域。

而细菌资源是一种潜在的产漆酶资源。

对产漆酶细菌的筛选鉴定及固体发酵条件的研究具有重要的理论和应用价值。

二、产漆酶细菌的筛选鉴定1. 筛选菌种产漆酶细菌的筛选是通过对大量的细菌进行筛选和鉴定，以找到高产漆酶的菌株。

筛选菌种的方法有多种，最常见的是通过对土样、水样、沉积物等环境中的微生物进行分离培养，通过酶活性的检测和分析来判断细菌的产酶能力。

近年来，随着分子生物学技术的发展，常规分离培养方法的不足逐渐显现出来。

也可以通过PCR扩增和基因测序的方法对微生物进行鉴定，找到潜在的高产漆酶菌株。

2. 鉴定菌种对于通过分子生物学技术找到的潜在高产漆酶菌株，还需要进行鉴定验证。

鉴定菌种的方法有生理生化鉴定和分子生物学鉴定两种。

生理生化鉴定主要通过对细菌在不同培养基、不同温度、不同pH等条件下的生理生化特性进行鉴定，分子生物学鉴定主要通过对菌株的16S rRNA基因进行测序和比对，从而确定其分类地位和亲缘关系。

三、固体发酵条件的研究1. 发酵基质的选择发酵基质的选择对漆酶的产量和质量有着重要影响。

常见的发酵基质有玉米芯、小麦麸、大豆皮等，这些基质均为农副产品废弃物，具有丰富的碳源和氮源，适合用于漆酶的生产。

目前，常见的固体发酵基质优化方法包括改变基质成分比例、添加辅料等，以提高漆酶的产量。

2. 发酵条件的优化固体发酵对于漆酶的生产有着重要的影响，包括温度、pH值、湿度、通气等条件都会影响漆酶的产量和质量。

常见的发酵条件优化方法包括响应面法、单因素试验法、正交试验法等，通过对各个发酵参数进行调整，找到最适合漆酶生产的发酵条件。

四、结语产漆酶细菌的筛选鉴定及固体发酵条件的研究是一个复杂而又重要的课题。

通过对有效菌种的筛选鉴定和固体发酵条件的研究，为漆酶的产业化生产提供了理论基础和技术支撑。

产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究

产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究1. 研究背景漆酶是一类能分解漆酚的酶，具有广泛的应用前景。

目前，产漆酶的菌株主要有放线菌、细菌、真菌等。

其中，细菌产漆酶的效率较高，且易于工业化生产。

因此，筛选和鉴定高效产漆酶的细菌株，并对其进行固体发酵条件研究，具有重要的意义。

2. 筛选鉴定产漆酶细菌2.1 筛选菌株来源从野外土壤、河流水样、废弃物等样品中筛选，收集到的样品应多样性、覆盖面积广，可增加筛选到合适菌株的概率。

2.2 筛选方法2.2.1 选择富含漆酚的培养基常用的培养基有Potato Dextrose Agar（PDA）培养基、Czapec-Dox培养基、Mineral Salt Medium（MSM）培养基等。

其中，富含漆酚的选择性培养基可增加筛选到产漆酶菌株的几率。

2.2.2 测定漆酶活性将潜在菌株接种在含有漆酚的培养基上，培养一定时间后取样测定漆酶活性。

活性高的菌株可以被选择用于后续研究。

2.2.3 16S rRNA序列分析选择漆酶活性高的菌株进行16S rRNA序列分析，依据序列相似度、系统发育关系等参数，确定其分类学地位。

3. 固体发酵条件研究3.1 基质选择从可获得性、成本低、未对环境造成污染等方面考虑，选择米糠、玉米秸秆等当地廉价自然资源作为基质。

3.2 酸碱条件在漆酶的适宜pH范围内选择适宜的酸碱调节剂，使固体发酵过程中的pH值稳定，不影响菌株的生长及漆酶产生。

3.3 湿度控制在不影响氧气传递的前提下，控制固体基质中的湿度。

可通过加水或旋转鼓的调节实现。

3.4 温度调节根据菌株的生长特性，将其生长温度控制在适宜的范围内。

培养室可安装自动温控仪，实现对温度的控制。

4. 结论筛选鉴定高效产漆酶的细菌株，并对其进行固体发酵条件研究，可为产漆酶的工业化生产提供重要的理论和实践基础。

亮菌漆酶的发酵生产、酶学性质及应用基础研究的开题报告

亮菌漆酶的发酵生产、酶学性质及应用基础研究的
开题报告
一、选题背景及意义
亮菌漆酶是一种重要的有机催化剂，广泛应用于食品、医药、化妆品、纺织、造纸、制革等行业，具有广阔的应用前景。

近年来，随着生物技术的快速发展，重点开展酶的发酵生产及应用研究已经成为一个热门研究领域。

亮菌漆酶是一种可以利用微生物发酵生产的酶，但目前亮菌漆酶的发酵生产工艺还存在一些问题，导致产量不高、质量不稳定等问题，因此研究亮菌漆酶的发酵生产，不仅能够提高亮菌漆酶的产量和质量，还可以更好地开发和利用这一重要的催化剂，促进相关行业的发展。

二、研究内容及思路
1、亮菌漆酶的生物学性质研究
了解亮菌漆酶的生物学性质，包括亮菌漆酶的来源、组成、结构、分类等方面的研究。

通过对亮菌漆酶的生物学性质进行深入研究，可以为亮菌漆酶的发酵生产提供有益的参考。

2、亮菌漆酶的发酵生产研究
探究亮菌漆酶的发酵生产工艺，包括发酵条件的优化、发酵菌株的筛选、培养基的设计等方面的研究。

通过对亮菌漆酶的发酵生产进行研究，可以提高亮菌漆酶的产量和质量，进一步促进亮菌漆酶的应用。

3、亮菌漆酶的应用研究
分析和探究亮菌漆酶在食品、医药、化妆品、纺织、造纸、制革等行业中的应用，包括亮菌漆酶的催化机理、催化效果等方面的研究。

通过对亮菌漆酶的应用进行研究，可以更好地发挥亮菌漆酶的催化作用，提高相关行业的产业效益。

四、预期研究成果及意义
本研究将全面探究亮菌漆酶的发酵生产、酶学性质及应用等方面的基础研究，为亮菌漆酶的发酵生产和应用提供科学依据。

同时，本研究还将为亮菌漆酶的产业化应用提供有益的参考，推进我国相关行业的发展。

中药渣固体发酵亮菌产漆酶研究

中药渣固体发酵亮菌产漆酶研究杨丽红;叶选怡;凌庆枝;张超;何军邀;魏兆军【摘要】[Objective] To study the residue of traditional Chinese medicine to produce lacease by solid fermentation of Armillariella tabescens and its fermentation conditions, in order to make full use of residue from traditional Chinese medicine. [ Methods] On the basis of unifactor experiment , the orthogonal experiment were employed to optimize culture medium from residue of traditional Chinese medicine and fermentation conditions, and produce laccase with solid fermentation of Armillariella tabescens. [Result] Radix paeoniae alba residue was found to be a good carbon source of laccase production, and the ratio of radix paeoniae alba and wheat bran was 3:7, the optimum conditions were glucose 0.6% , moisture content of substrate 65% , inoculation dosage 11% , and culture temperature 25 ℃. [Conclusion] It is capable of producing laccase with the six kinds of residue of traditional Chinese medicine by solid fermentation of Armillariella tabescens. And the production of laccase under solid culture with optimal fermentation conditions was 19 times higher than that in the original medium used previously.%[目的]研究中药渣固体发酵亮菌产漆酶及其发酵条件,以充分利用中药渣.[方法]在单因子试验基础上,用正交试验法对中药渣固体发酵亮菌的培养基和培养条件进行优化筛选.[结果]在供试的6种药渣培养基中以白芍药渣为碳源时产漆酶量最佳,其最适培养条件为葡萄糖0.6％,白芍麸皮比3∶7,温度25℃,含水量65％,接种量11％.[结论]供试6种中药渣固体发酵亮菌均可产漆酶,培养条件优化后,亮菌漆酶酶活力较初始培养基提高了19倍.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2013(041)006【总页数】3页(P2396-2398)【关键词】中药渣;亮菌;固体发酵;漆酶【作者】杨丽红;叶选怡;凌庆枝;张超;何军邀;魏兆军【作者单位】合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥230009【正文语种】中文【中图分类】S188漆酶(Laccase，EC1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶，属蓝色氧化酶家族［1］。

亮菌漆酶的初步研究

亮菌漆酶的初步研究凌庆枝;董丽辉;范三微;高莉莉;黄贝贝;袁怀波;魏兆军【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2009(030)019【摘要】对亮菌(Armillariella tabescens)固体发酵产生的漆酶进行研究,其粗酶液经过硫酸铵盐析、DEAE-cellulose柱纯化,活力回收率为42.3%,得到电泳纯的亮菌漆酶,SDS-PAGE法证实其分子量约为55.6kD.实验表明,亮菌漆酶最适反应温度为50℃、最适反应pH值为4.0,催化ABTS的米氏常数为0.018mmol/L,在pH4.0～5.0的偏酸性环境中,酶活力较高,活性较稳定.酸根阴离子和金属阳离子对酶活力都有不同程度的影响,其中SO42-、Na+对亮菌漆酶的活力有促进作用,CO32-、Cu2+、Mg2+对酶的活力有抑制作用.【总页数】4页(P190-193)【作者】凌庆枝;董丽辉;范三微;高莉莉;黄贝贝;袁怀波;魏兆军【作者单位】浙江医药高等专科学校,浙江,宁波,315100;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽,合肥,230009;浙江医药高等专科学校,浙江,宁波,315100;浙江医药高等专科学校,浙江,宁波,315100;浙江医药高等专科学校,浙江,宁波,315100;浙江医药高等专科学校,浙江,宁波,315100;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽,合肥,230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽,合肥,230009【正文语种】中文【中图分类】Q936【相关文献】1.亮菌固体发酵产漆酶条件的优化研究 [J], 董丽辉;曾杰;范三微;凌庆枝2.中药渣固体发酵亮菌产漆酶研究 [J], 杨丽红;叶选怡;凌庆枝;张超;何军邀;魏兆军3.东祁连山高寒草地土壤产漆酶真菌的筛选、鉴定及产酶条件的初步研究 [J], 芦光新;王军邦;陈秀蓉;杨成德;薛莉4.亮菌产漆酶的液体和固体发酵条件优化 [J], 叶选怡;防丽红;凌庆枝;董丽辉;何军邀;张超5.产漆酶真菌筛选及其对PAHs污染土壤修复的初步研究 [J], 潘澄;茆婷;吴宇澄;申卫收;钟文辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。