组织切片制作步骤

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组织病理切片制作流程(完整版)

组织病理切片制作流程(完整版)

组织病理切片制作流程(完整版)

组织病理切片是一种常规病理学检查方法,用来对病理组织进行形态学观察和病理诊断。制作一张优质的组织病理切片需要严格按照一定的流程进行。

组织标本采集

组织标本的采集是组织病理学检查的第一步。组织标本的质量直接影响到切片的质量。因此,采集前需要确保标本来源正确,并与患者信息相符。对于手术标本,需要注意保护

血管、神经、肌肉等结构,避免对组织结构造成不必要的损害。对于活检标本,需要选择

有代表性的组织,避免损伤重要结构和血管。

组织处理

组织标本采集后,需要进行组织处理。对于手术标本,可以直接收取。对于活检标本,需要迅速固定,避免组织发生变性和坏死。常用的固定剂包括10%中性缓冲福尔马林、乙醇、甲醛等,选择固定剂需要根据样本的性质和检测需要来确定。

样本包裹

固定后的组织标本需要进行包裹以便于切片操作。包裹材料通常选择的是聚苯乙烯、

增韧剂聚苯乙烯等塑料材料,包裹材料必须能够完全包裹组织标本,并保证固定。

切片制备

组织标本包裹后,需要进行切片制备。切片机是用于切割病理标本的设备,其切割面

的厚度一般在4-6μm之间。在切片制备中,需要根据标本要求来选择显微镜下的切面。切片后,标本必须尽快贴在玻片上进行染色。

组织染色

组织染色是组织病理学检测的重要环节。目前常用的染色包括常规的苏木素-伊红染

色和免疫组化染色等。苏木素-伊红染色是一种常规染色方法,可以显示出组织的基本结

构和染色体。免疫组化染色可以显示出特定的蛋白质和胚间充质细胞等。

组织标签和包装

染色后的组织切片需要进行标签和包装。标签需要包含姓名、性别、年龄和检测日期

组织切片制作

组织切片制作

酒精固定液: 酒精固定液: 无水乙醇(纯酒精) 无水乙醇(纯酒精)85ml(或95ml) ( ) 15ml(或5ml) 蒸馏水 ( ) 优点:有固定兼脱水作用,固定后可直接放入 %- %-95 优点:有固定兼脱水作用,固定后可直接放入85%- 酒精中脱水。对糖原、 %酒精中脱水。对糖原、纤维蛋白和弹性纤维等固定效 果好。 果好。 缺点:但固定速度较慢,易使组织变脆。一般先用 % 缺点:但固定速度较慢,易使组织变脆。一般先用85% 酒精固定数小时再放入95%酒精继续固定。 酒精固定数小时再放入 %酒精继续固定。 除此之外,还有重铬酸钾、苦味酸、升汞、醋酸、 除此之外,还有重铬酸钾、苦味酸、升汞、醋酸、丙酮 重铬酸钾 等单纯固定液。 等单纯固定液。
石蜡切片技术
石蜡切片法是将组织经过一系列药品处理,使石蜡渗 石蜡切片法是将组织经过一系列药品处理, 是将组织经过一系列药品处理 入组织,包埋成蜡块,再把组织蜡块切成极薄的片子, 入组织,包埋成蜡块,再把组织蜡块切成极薄的片子, 根据不同的需要用不同的染色方法以显示不同细胞和 组织的形态,以及细胞和组织中某些化学或特殊( 组织的形态,以及细胞和组织中某些化学或特殊(如 抗原)成份含量的变化。 抗原)成份含量的变化。
组织切片技术
概述
制片方法的种类: 制片方法的种类:非切片法、切片法 制片方法的一般步骤: 制片方法的一般步骤:
1 2 3 切片法(1)杀死、取材与固定(2)洗涤(3)脱水 (4)透明(5)透入(6)包埋(7)切片(8)贴片 (9)染色(10)封藏

组织病理切片步骤

组织病理切片步骤

组织病理切片步骤

全文共四篇示例,供读者参考

第一篇示例:

组织病理切片是临床病理学中一项非常重要的操作步骤,通过对

组织标本进行切片、染色和观察,可以帮助医生准确诊断患者的疾病。下面我们将介绍一下组织病理切片的具体步骤。

1. 标本采集:在进行组织病理切片之前,首先需要进行标本采集。医生会根据患者的临床症状和检查结果,决定需要进行组织切片检查

的部位,并采集相应的组织标本。常见的标本包括活检标本、手术标

本等。

2. 标本固定:采集到的组织标本需要进行固定处理,以保持细胞

和组织的形态结构。常用的固定剂包括福尔马林、4%的中性缓冲福尔马林等。

3. 标本包埋:固定后的组织标本需要进行包埋处理,即将组织标

本置于蜡块中,以便进行切片。包埋可以帮助维持组织的完整性和形

态结构。

4. 组织切片:将包埋好的组织标本切割成薄片,即组织切片。组

织切片的厚度通常为3-5微米,切片时需要使用显微镜预先调整刀片角度和大小。

5. 组织染色:切割好的组织切片需要进行染色处理,以凸显组织

细胞的形态和特征。常用的染色剂包括伊红染、嗜酸性粒染、埃曼若染、普鲁斯染等。

6. 组织观察:染色后的组织切片可以放置于显微镜下观察,通过

观察组织细胞的形态、核的大小和形态等特征,医生可以进行病理诊断。

7. 病理诊断:最终根据对组织切片的观察和分析,医生可以进行

病理诊断,明确患者疾病的类型、程度和预后。

第二篇示例:

组织病理切片是病理学检查中的重要步骤之一,通过组织切片的

制备,医生可以观察组织的形态结构,从而对疾病进行准确的诊断和

鉴别。下面将介绍一下组织病理切片的步骤。

病理切片的制作方法,流程

病理切片的制作方法,流程

病理切片的制作方法,流程

病理切片的制作过程简单来说,就是将有病变的组织经过各种化学物理方法处理,使之固定硬化,然后在切片机上切成薄片,放在玻片上的过程。病理切片中,最常见的石蜡切片,它的具体制作步骤包括取材、固定、脱水、透明、浸蜡包埋和切片。

常用的固定液有10%的甲醛或者95%的酒精固定液。脱水是用梯度酒精将组织块内的水分置换出来,可以用脱水机自动完成。脱水以后进入石蜡包埋,石蜡凝固后,组织就被包在其中,制成蜡块。然后将蜡块放在切片机上切成4-6微米薄片展开放在玻片上。接下来,就是烤片和染色,最后盖上盖玻片,贴好病理标签。病理切片就制作完成了。

组织病理切片的制作流程(精品)

组织病理切片的制作流程(精品)

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组织病理切片的制作流程 1.取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序,根据教学、科研及外检的具体要求取自人体(外科手术切除标本、活检标本、尸检标本)或动物,并确定取材的部位和方法。

取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识,还要掌握实际操作技术,每个组织器官的取材都有一定的部位和方法,不能任意切取组织作为制片材料,不然,无法达到教学、科研和临床诊断的目的,具体要求如下:

(1) 材料新鲜:

取材组织愈新鲜愈好,人体组织一般在离体后,动物组织在处死后迅速固定,以保证原有的形态学结构。

(2) 组织块的大小:

所取组织块较理想的体积为 2. 0cm2. 0cm0. 3cm,以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部,但根据制片材料和目的不同,组织块的较理想体积也不同,如制作病理外检、科研切片,其组织块可以薄取 0. 1~0. 2cm 即可,这样可以缩短固定脱水透明的时间,若制作教学切片厚取 0. 3 ~0. 5cm,这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。

(3) 勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利,切割时不可来回锉动。

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夹取组织时切勿过紧,以免因挤压而使组织、细胞变形。

(4) 规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材,病理标本取材按照各病变部位、性质的不同,根据要求规范化取材。

组织切片制作步骤

组织切片制作步骤

如何做出一张合格的组织切片?

一般要先取材→固定→透明→包埋→切片,最后进行染色组化等操作。本文着重叙述取材以后如何进行包埋和切片。

包埋可分为OCT包埋(冰冻切片)与石蜡包埋。

.冰冻切片对于组织的抗原性保留比较好,但是形态保留比较差,一般用来做原位杂交ISH,免疫荧光IF。冰冻切片较厚一般厚度8~15μm。冰冻包埋步骤较为简洁,固定之后,直接用镊子将样品放置到样品托上,挤压OCT完全包裹组织,放入冷冻机待OCT凝固即可。凝固后就可以直接切片。如果不能及时切片,用锡箔纸包装好,放入-80℃存放。

.石蜡切片,一般用来做HE染色或者免疫组织化学IHC。厚度更薄,一般为4um,工艺较为复杂并且制作样本的好坏取决于不同组织的种类和组成,更加依赖制作者的经验,需要在实验过程中不断优化才能得到最佳的实验条件。

下面是石蜡包埋和切片的具体步骤:

一、实验材料

动物组织,4%多聚甲醛(PFA),PBS,ddH2O,二甲苯,梯度乙醇,石蜡,石蜡包埋机。

二、实验步骤

1、取材:针对各组织部位规范化取新鲜组织,并用刀片单向切割成约3-4mm大小组织块,不要超过5mm。

2、固定:将切好的组织块放入4%多聚甲醛(PFA)中固定,以组织块与4%多聚甲醛体积比1:7为宜。PFA最好现用现配,一般在4度固定24~48h即可,固定时间因组织而异。冰冻切片可以直接用丙酮固定。其他固定液比如缓冲福尔马林PBS配的福尔马林含有K+和Na+,PH=7.4。

固定的原理是采用蛋白质凝固剂,使细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构、位置和除水以外的物质的过程。固定的目的是为了防止组织细胞自溶与腐败,防止细胞内的酶对蛋白质的分解作用,使细胞内的各种成分如蛋白质、脂肪、碳水化合物、酶类转变为不溶性物质,以保持原有的结构和生活时相仿。

组织病理切片步骤

组织病理切片步骤

组织病理切片步骤

全文共四篇示例,供读者参考

第一篇示例:

组织病理学是一门研究疾病的科学,通过对组织和细胞的形态结构进行分析,可以帮助医生做出正确的诊断和治疗方案。而组织病理切片是组织病理学的重要步骤之一,通过切割组织标本并染色,可以观察组织和细胞的形态结构,进而帮助医生做出诊断。

组织病理切片的步骤是一个繁琐而精细的过程,需要经过多个环节的处理才能得到准确的结果。下面我们就来了解一下组织病理切片的具体步骤。

1. 标本获取:组织病理学的切片首先需要获得病理标本,这通常通过组织活检或手术取材来完成。医生会根据患者的病情和需要进行相应的标本获取。

2. 组织固定:标本获取后,需要立即将组织标本放入10%的甲醛或其他固定剂中进行固定,以保持组织形态的完整性。固定后的组织标本可以长期保存,并且能够在病理切片的过程中保持组织的形态结构。

3. 组织处理:固定后的组织标本需要进行脱水、清洁和浸蜡等处理,以使组织标本透明并且易于切割。这一步通常需要用到甲醇和乙醇等有机溶剂,以及蜡浸渍处理。

4. 组织包埋:处理完的组织标本需要放入蜡液中进行包埋,以便

于切割。在包埋过程中,需要正确定位组织标本,并使其固定在蜡块中。

5. 组织切割:包埋后的组织标本需要用微切片机切成薄片,厚度

通常在3-5微米左右。切片时需要保持切割的准确性和统一性,以便后续的染色和观察。

6. 组织染色:切割后的组织标本需要进行染色,以显示组织和细

胞的形态结构。常用的染色方法包括赖氏染色、简单染色和特异性染

色等。

7. 组织固定:染色后的组织切片需要进行固定,以保持染色的效果。通常用乙醇和甲醇进行脱水和抗褪色处理。

类器官病理切片方法

类器官病理切片方法

类器官病理切片方法

类器官病理切片的制作主要包括以下步骤:

1. 取材和固定:病理组织取材愈新鲜愈好,以保证原有的形态学结构。根据制片材料和目的不同,制作病理外检、科研切片其组织块可以薄取制作教学切片厚取。固定分为小块组织固定法、注射灌注固定法、蒸汽固定法。

2. 脱水透明:经过固定和冲洗后,组织中含有较多水分,可用石蜡切片、火棉胶切片,必须将组织块内的水分置换出来。

3. 浸蜡、包埋:在切片放蜡块时,应注意组织包埋的方向,组织的层次,纤维、肌肉等的走向应与切片刀平行,较难切的部分应放在上面,如皮肤的表皮,肿块的包膜,胃肠道的浆膜等,这样可以减少组织的断裂现象。

4. 切片、贴片:通常采用微米级的切片机将组织切成极薄的片。

5. 染色:常用的染色方法是苏木素-伊红染色法,这种对任何固定液固定的组织和应用包埋法的切片均可使用。

6. 封片:将染色后的切片用封固剂封固,以保持切片的完整性。

以上信息仅供参考,如需获取更多详细信息,建议咨询专业医生或查阅相关医学文献。

切片制作过程

切片制作过程

组织病理切片的制作过程 1.取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序,根据教学、科研及外检的具体要求取自动物,并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识,还要掌握实际操作技术,每个组织器官的取材都有一定的部位和方法,不能任意切取组织作为制片材料,不然,无法达到教学、科研和临床诊断的目的,具体要求如下:(1)材料新鲜:取材组织愈新鲜愈好,人体组织一般在离体后,动物组织在处死后迅速固定,以保证原有的形态学结构。(2)组织块的大小:所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm,以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部,但根据制片材料和目的不同,组织块的较理想体积也不同,如制作病理外检、科研切片,其组织块可以薄取0.1~0.2cm即可,这样可以缩短固定脱水透明的时间,若制作教学切片厚取0.3 ~0.5cm,这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利,切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧,以免因挤压而使组织、细胞变形。(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材,病理标本取材按照各病变部位、性质的不同,根据要求规范化取材。(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构,决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键,如长管状器官以横切为好。(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等,可用水冲洗干净后再放入固定液中。(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后,或多或少会产生收缩现象,有时甚至完全变形。为此可将组织展平,以尽可能维持原形。2.固定小块组织固定法:这是最常用的方法,从人体或动物体取下的小块组织,须立即置入液态固定剂中进行固定,通常,标本与固定液的比例为1:4~20,但组织块不宜过大过厚,否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。。最常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。3.脱水透明标本经过固定和冲洗后,组织中含有较多的水分,必须将组织块内的水分置换出来,这一过程叫做脱水。无论是用石蜡切片,还是用火棉胶切片,都必须除去组织中所含水分,因含水组织与石蜡、火棉胶等包埋材料不相容,常用的脱水剂为一系列不同浓度的乙醇。脱水的步骤是:80%、90%、95%、100%各种浓度乙醇2小时。4.浸蜡、包埋(1)使石蜡浸入组织中,取代组织中含有的透明剂。(2)包埋:将浸蜡后的组织置于融化的固体石蜡中,石蜡凝固后,

病理切片步骤流程

病理切片步骤流程

病理切片步骤流程

一、病理标本接收

1.标本登记

(1)标本信息登记

(2)核对患者信息

2.标本处理

(1)标本初步处理

(2)定位需要切片的部位

二、标本固定

1.选择固定液

(1)根据标本类型选择固定液

(2)浸泡标本使其固定

2.固定时间

(1)确定固定时间

(2)控制固定时间以保证标本质量

三、组织脱水

1.醇度递增

(1)逐步使用不同浓度醇溶液脱水

(2)保证组织彻底脱水

2.渗透剂处理

(1)使用透明剂处理标本(2)保证标本透明度

四、组织包埋

1.包埋模具准备

(1)准备标本包埋模具

(2)注入包埋剂

2.标本定位

(1)将处理好的组织放入模具(2)调整标本位置

五、切片制作

1.切片机设置

(1)设置切片机参数

(2)切割标本制作薄片

2.切片染色

(1)染色处理

(2)固定染色结果

六、镜检与诊断

1.镜下检查

(1)镜检准备

(2)医生进行镜检

2.病理诊断

(1)根据切片结果进行诊断(2)生成病理报告

组织病理切片制作流程(完整版)

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组织病理切⽚制作流程(完整版)

组织病理切⽚的制作流程

1.取材

组织取材的⽅法是制作切⽚的⼀个重要程序,根据教学、科研及外检的具体要求取⾃⼈体(外科⼿术切除标本、活检标本、⼫检标本)或动物,并确定取材的部位和⽅法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识,还要掌握实际操作技术,每个组织器官的取材都有⼀定的部位和⽅法,不能任意切取组织作为制⽚材料,不然,⽆法达到教学、科研和临床诊断的⽬的,具体要求如下:

(1) 材料新鲜:取材组织愈新鲜愈好,⼈体组织⼀般在离体后,动物组织在处死后迅速固定,以保证原有的形态学结构。

⑵组织块的⼤⼩:所取组织块较理想的体积为2.0cm X 2.0cm X 0.3cm,以使固定液能迅速⽽均匀地渗⼊组织内部,但根据制⽚材料和⽬的不同,组织块的较理想体积也不同,如制作病理外检、科研切⽚,其组织块可以薄取0.1?0.2cm即可,这样可以缩短

固定脱⽔透明的时间,若制作教学切⽚厚取0.3?0.5cm,这样可以同⼀蜡块制作出较

多的教学切⽚。

(3) 勿挤压组织块: 切取组织块⽤的⼑剪要锋利,切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧,以免因挤压⽽使组织、细胞变形。

(4) 规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材,病理标本取材按照各病变部位、性质的不同,根据要求规范化取材。

(5) 选好组织块的切⾯: 根据各器官的组织结构,决定其切⾯的⾛向。纵切或横切往往是显⽰组织形态结构的关键,如长管状器官以横切为好。

(6) 保持材料的清洁: 组织块上如有⾎液、污物、粘液、⾷物、粪便等,可⽤⽔冲洗⼲净后再放⼊固定液中。

组织切片的制作步骤

组织切片的制作步骤

组织切片制作过程:

1.固定: 10%甲醛溶液内固定 24~28h

组织块大小为15×15×5mm

2.水洗:流水冲洗24h 需用到胶皮管、烧杯、纱布

组织块放于烧杯中,用纱布将烧杯口封死,在纱布中间部位留出供胶皮管插入的豁口,胶皮管一头接到水源,另一头插入烧杯中。有水注入后,尽量让组织块不要沉底。

3.脱水:不同浓度的酒精

50%——70%——80%——95%——95%——无水酒精——无水酒精

30m-1h 2-4h 2-4h 2h 2h 1h 1h

其中70%酒精可以长时间保存,并且在脱水过程中随时可返回70%酒精中。但是返回后,仍需按顺序进行,即80%开始。

4.透明:

无水酒精:二甲苯(1:1)——二甲苯

30m 30m

透明过程中,在二甲苯中时,需注意观察组织块是否已透明,无需按固定时间来计算。

5.浸蜡与包埋:将石蜡融化后置于52℃~60℃烘箱中

二甲苯:石蜡(1:1)——石蜡(1)——石蜡(2)——石蜡(3)

30min 30min 30min 30min

6.切片:

按需要厚度一般将切片机设为5-7um厚,厚度视组织块而定。

7.展片:

用水浴锅,将温度设为40℃,用毛笔将切好的蜡片从切片机上卷下,放入水浴锅中。

8.粘片:

需准备蛋白甘油,蛋白甘油由鸡蛋蛋清和甘油调配而成,比例为1:1。

先将一滴蛋白甘油涂抹在干净的载玻片上,然后用载玻片从水中将展好的蜡片捞起,平放入烘箱内进行烘干,烘干温度为50℃,时间为12~24h。

9.染色:

二甲苯(1)——二甲苯(2)——无水酒精(1)——无水酒精(2)——

5-10min 5-10min 5min 3-5min

组织切片操作流程

组织切片操作流程

组织切片操作流程

切片法主要步骤1、取材与固

(1)取材:从动物体取下所需的器官材料。取材的动物要健康,材

料愈新鲜愈好,应在致死后立即取材,防止组织细胞自溶变性;取材的器

械要锋利;所取材料力求小而薄(以不超过0.5cm为宜),不能挤压和损伤。

(2)固定:将所取的材料立即投入固定液中,目的是使组织蛋白迅

速凝固,使细胞内的结构和成分不再发生变化,保持组织细胞与活体相似

的形态结构,固定后的组织块变硬,便于进一步处理。常用的固定剂有甲醛、乙醇、苦味酸或混合固定液。实验室常用Bouin固定液,固定时间为12~24小时,其固定的组织块不需进行水洗,可直接进行脱水。2、脱水

与透明

(1)脱水:固定后的组织块内含有的大量水分要彻底脱去,以便石

蜡的浸入。常用的脱水剂为乙醇,脱水过程必须循序渐进,从低浓度开始,逐步升高,使组织块中的水分逐渐被乙醇所取代。具体操作为:Bouin固

定液固定的组织块可直接进入70%的乙醇进行脱水,时间12小时左右。(若材料暂不制片,可保存于70%乙醇中。)然后将组织块依次移入85%乙醇(Ⅰ)、(Ⅱ)各8-12小时,→95%乙醇(Ⅰ)、(Ⅱ)各2小时,→100%乙醇(Ⅰ)、(Ⅱ)各1小时。因无水乙醇对组织有脆化作用,

故在无水乙醇中时间不能超过2小时。

(2)透明:由于乙醇与石蜡不能相溶,故浸蜡前要对脱水后的组织

块进行透明。常用透明剂有二甲苯、氯仿、苯、香柏油或冬青油等,透明

剂能同与乙醇和石蜡相溶,并能增强组织块的折光系数,故透明后的组织

块呈半透明状。使用二甲苯作透明剂的透明过程为:将脱水后的组织块放

组织切片制作步骤

组织切片制作步骤

组织切片制作步骤

1.取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序,根据教学、科研及外检的具体要求取自人体(外科手术切除标本、活检标本、尸检标本)或动物,并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识,还要掌握实际操作技术,每个组织器官的取材都有一定的部位和方法,不能任意切取组织作为制片材料,不然,无法达到教学、科研和临床诊断的目的,具体要求如下:

(1)材料新鲜:取材组织愈新鲜愈好,人体组织一般在离体后,动物组织在处死后迅速固定,以保证原有的形态学结构。

(2)组织块的大小:所取组织块较理想的体积为50px×50px×7.5px,以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部,但根据制片材料和目的不同,组织块的较理想体积也不同,如制作病理外检、科研切片,其组织块可以薄取0.1~5px即可,这样可以缩短固定脱水透明的时间,若制作教学切片厚取0.3 ~12.5px,这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。

(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利,切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧,以免因挤压而使组织、细胞变形。

(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材,病理标本取材按照各病

变部位、性质的不同,根据要求规范化取材。

(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构,决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键,如长管状器官以横切为好。

(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等,可用水冲洗干净后再放入固定液中。

(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后,或多或少会产生收缩现象,有时甚至完全变形。为此可将组织展平,以尽可能维持原形。

显微镜切片制作方法

显微镜切片制作方法

显微镜切片制作方法

一、引言

显微镜切片制作是一种常见的组织学研究方法,可以通过切割样本制作薄片以便观察细胞和组织的细节结构。本文将介绍显微镜切片制作的基本步骤和技巧。

二、材料准备

1. 组织样本:可以是动植物组织、细胞培养物等。

2. 甲醇、乙醇和戊醇:用于固定组织样本。

3. 蜡块:用于包埋组织样本。

4. 切片刀:用于切割组织样本。

5. 显微镜载玻片:用于固定切片。

三、步骤详解

1. 组织固定:将组织样本放入甲醇中固定,固定时间根据组织样本的大小和类型而定,通常为数小时至过夜。固定的目的是保持组织样本的形态结构和细胞组织的完整性。

2. 组织脱水:将固定的组织样本转移到乙醇中进行脱水处理。脱水的目的是逐渐去除甲醇,并使组织样本逐渐适应乙醇的性质。

3. 组织透明化:将脱水后的组织样本转移到戊醇中进行透明化处理。透明化的目的是使组织样本逐渐适应戊醇的性质,为后续的包埋和切片做准备。

4. 组织包埋:将透明化处理后的组织样本放入蜡块中进行包埋。包埋的目的是将组织样本固定在一个坚硬的蜡块中,以便进行切割。

5. 切片:用切片刀将包埋好的组织样本切成薄片。切片时要注意控制切割厚度和角度,以获得清晰的切片。

6. 切片上玻片:将切好的组织片用显微镜载玻片固定。将载玻片放置在切片上,轻轻按压使其粘合在一起。

7. 去蜡:将载玻片放入去蜡盒中进行去蜡处理。去蜡的目的是去除切片中的蜡质。

8. 染色:将去蜡后的载玻片放入染色盒中进行染色处理。染色的目的是增强切片的对比度,使细胞和组织的结构更加清晰可见。

9. 封片:将染色后的载玻片用封片剂封住。封片的目的是保护切片,防止其受到外界的损害。

组织病理切片制作流程(完整版)

组织病理切片制作流程(完整版)

组织病理切片的制作流程

1.取材

组织取材的方法是制作切片的一个重要程序,根据教学、科研及外检的具体要求取自人体(外科手术切除标本、活检标本、尸检标本)或动物,并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识,还要掌握实际操作技术,每个组织器官的取材都有一定的部位和方法,不能任意切取组织作为制片材料,不然,无法达到教学、科研和临床诊断的目的,具体要求如下:

(1)材料新鲜:取材组织愈新鲜愈好,人体组织一般在离体后,动物组织在处死后迅速固定,以保证原有的形态学结构。

(2)组织块的大小:所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm,以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部,但根据制片材料和目的不同,组织块的较理想体积也不同,如制作病理外检、科研切片,其组织块可以薄取0.1~0.2cm即可,这样可以缩短固定脱水透明的时间,若制作教学切片厚取0.3 ~0.5cm,这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。

(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利,切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧,以免因挤压而使组织、细胞变形。

(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材,病理标本取材按照各病变部位、性质的不同,根据要求规范化取材。

(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构,决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键,如长管状器官以横切为好。

(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等,可用水冲洗干净后再放入固定液中。

(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后,或多或少会产生收缩现象,有时甚至完全变形。为此可将组织展平,以尽可能维持原形。

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组织切片制作步骤:

1.取材

确定所取材料的来源及部位,纵切还是横切;

取材要迅速,防止阻止发生进一步变化,材料体积要适宜。

下图为植物芽体取样实拍。

2.固定

(1)固定液的选择

最常用的固定液为FAA(万用固定液)。

它的优点是材料固定时间不受限制,固定时间短则数小时,长则数月或数年。(可做材料保存液)

配方:50%或70%酒精90ml

冰醋酸5 ml

福尔马林5 ml

(柔软材料用50%酒精,坚硬材料用70%酒精配制)

(2)材料固定后的处理

冲洗或漂洗:组织固定后应充分水洗,除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀,否则会影响以后的染色效果。

(材料固定后,若暂时不能进行下一步操作,可于70%的酒精溶液或直接与FAA固定液中,于冰箱中4℃存放。)

下图为固定液浸泡的组织切块。

3.脱水

目的:水和透明剂不能互溶,只有脱去水分后,才能让透明剂进

入。

试剂:梯度酒精溶液

流程:70%---85%---95%--100%---100%每步1h-2h左右。

注意事项:保证脱水梯度和每一步脱水时间,水要完全脱净,但也不能过度脱水(过久使组织变脆、收缩,这个时间大家可以根据自己的实验来摸索一下,不必完全按照本操作来)。

下图为自动组织脱水机,适于大量样品组织脱水用。如果材料体积及样品量较少可用小烧杯做容器来进行逐级脱水。

4.透明

目的:纯酒精不能与石蜡相溶,还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液,替换出组织内的酒精。

(二甲苯是最常用的透明剂,可以很好地与石蜡互溶)

流程:二甲苯与酒精的等体积混合液1h---纯二甲苯1h---纯二甲苯1h。

5.浸蜡与包埋

目的:用石蜡取代透明剂,使石蜡浸入组织而起支持作用。

浸蜡程序:(恒温)

(1)低温浸蜡(36℃):接上步,在有二甲苯和材料的烧杯中逐步加碎蜡至过饱和(石蜡不能溶解),过夜12-24h。

(2)高温浸蜡(55-60℃,高于石蜡熔点3℃):

将上步二甲苯与石蜡的混合液倒出,不要倒掉材料,将烧杯中加入纯石蜡,共5-24h。纯石蜡需要更换三次。

关于石蜡的选择石蜡熔点:

对于较硬的材料,用熔点较高的石蜡进行包埋;

当切片较薄时(在8μm以下),选用熔点较高的石蜡包埋;

夏季宜采用熔点较高的石蜡(56,58℃),冬季宜选用熔点较低的石蜡(52,54℃)。

6.切片

传统的切片方法是将包埋好的蜡块用刀片修成规整的梯形,粘于小木块上,上机切片。

新型的切片方法是将包埋框(见下图)代替木块的支撑作用,上机切片。

切片的厚度可以根据自己的实验要求来确定,一般在8μm-20μm范围内。

7.粘片与烤片

粘片:用粘片剂将蜡片牢附于载玻片上,防止在后续的操作中材料脱落。

在载玻片上涂抹粘片剂(甲液),再滴蒸馏水(乙液),放上蜡片,用滤纸吸取多余的水分。

烤片:将载玻片放于40℃展片台中烤干。

常用的粘片剂为郝伯特(Haupt)配方:

甲液:明胶1g乙液:甲醛4 ml

蒸馏水100ml蒸馏水100ml

甘油15 ml

苯酚2g

8.脱蜡与复水、染色

脱蜡目的:干燥后的切片需脱蜡及复水才能在水溶性染液中进行染色。

复水目的:脱蜡后的材料,如果不经过复水,直接进入染色剂中,材料将会严重变形,甚至难以染色。

染色目的:使细胞组织内的不同结构呈现不同的颜色和足够强的差异以便于观察。

总体流程:二甲苯→1/2二甲苯+1/2纯酒精→100%酒精→95%酒精→85%酒精→番红(4h以上)→95%酒精→固绿(迅速)→95%酒精(迅速)→100%酒精→1/2二甲苯+1/2纯酒精→二甲苯→二甲苯,以上各级约需5~10分钟,已注明时间的除外。

染色剂:1%番红(85%酒精配制)

0.5%固绿(95%酒精配制)

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