【CN110093366A】一种枯草芽孢杆菌葡萄糖酸盐诱导表达元件及构建方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910368345.5

(22)申请日 2019.05.05

(71)申请人 江南大学

地址 214000 江苏省无锡市蠡湖大道1800

号

(72)发明人 刘延峰　堵国成　张晓龙　陈坚　

(74)专利代理机构 哈尔滨市阳光惠远知识产权

代理有限公司 23211

代理人 林娟

(51)Int.Cl.

C12N 15/75(2006.01)

C12N 1/21(2006.01)

C12R 1/125(2006.01)

(54)发明名称

一种枯草芽孢杆菌葡萄糖酸盐诱导表达元

件及构建方法

(57)摘要

本发明公开了一种枯草芽孢杆菌葡萄糖酸

盐诱导表达元件及构建方法，属于遗传工程领

域。本发明以组成型启动子P lytE 表达转录调控蛋

白GntR，进一步通过在组成型启动子P thrS 中，整

合转录调控蛋白GntR结合序列，实现以枯草芽孢

杆菌(Bacillus subtilis)168为宿主时，添加葡

萄糖酸盐后，达到较高强度的诱导表达水平和较

低的泄漏表达水平，其诱导表达强度达到

22500a.u.，泄漏量从15.6％降低至3.0％，为筛

选基因工程菌或调控蛋白表达奠定了基础。

权利要求书1页 说明书4页序列表12页CN 110093366 A 2019.08.06

C N 110093366

A

权　利　要　求　书1/1页CN 110093366 A

1.一种诱导表达元件，其特征在于，所述元件响应的诱导底物为葡萄糖酸盐；所述元件含有GntR蛋白、P lytE启动子、整合GntR结合序列的启动子P thrS；所述P lytE启动子调控GntR蛋白；所述整合GntR结合序列的启动子P thrS含有如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；启动子P lytE和启动子P thrS的转录方向相反。

2.根据权利要求1所述的诱导表达元件，其特征在于，编码所述P lytE启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的诱导表达元件，其特征在于，所述转录调控蛋白GntR含有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，或，编码所述转录调控蛋白GntR的基因含有如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。

4.根据权利要求1～3任一所述的诱导表达元件，其特征在于，所述GntR蛋白、P lytE启动子和整合GntR结合序列的启动子P thrS设置在同一质粒上。

5.根据权利要求4所述的诱导表达元件，其特征在于，所述质粒包括pHT01、pP43NMK或pSTOP1622。

6.含有权利要求1～5任一所述诱导表达元件的基因工程菌。

7.根据权利要求6所述的基因工程菌，其特征在于，以枯草芽孢杆菌为宿主。

8.权利要求1～5任一所述诱导表达元件在促进目的蛋白表达或降低蛋白泄露表达方面的应用。

9.权利要求1～5任一所述诱导表达元件在筛选表达目的基因的微生物中的应用。

10.权利要求6或7所述基因工程菌在促进目的蛋白表达或降低蛋白泄露表达方面的应用。

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