以FSH受体的配体结合部位作为抗原进行主动免疫对大鼠生殖的影响
环磷酰胺对雄性大鼠生殖免疫功能的影响
环磷酰胺对雄性大鼠生殖免疫功能的影响韩咪莎;林珊;高学勇【摘要】Objective To investigate the toxic effects of cyclophosphamide (CP) on the testis and the cellular immunity of rats. Methods Sixteen 15-week male SD rats were randomly divided into a control and an experimental group. The rats of the experimental group were injected intraperitoneally with cyclophosphamide of 20 mg/kg/dX5d. After 2 months, the histological changes were examined hy light microscopy. The testicular germ cell apoptosis was visualized hy TUNEL. Serum testosterone(T) , follicle-stimulating hormone (FSH),and luteinizing hormone (LH) levels were detected hy radioimmunoassay. Flow Cy-tometry analysis was used to detect blood T-lymphocyte subsets. Results The average diameter and area of seminiferous tubules, and the cell number of spermatogenic epithelium in the experimental group were all lower than those in controls (P＜0. 01). The spermatozoon was not found in many the seminiferous tubules. The experimental group showed obvious increase of germ cell apoptosis in testicular seminiferous tubules compared with the control group (P＜0. 01). Serum T of the experimental group was significantly decreased (P＜0.01) . There was no significant difference in serum FSH and LH levels between these groups. Compared with those of the control group, CD3 + /CD4+ and CD4+/ CD8+ were decreased significantly ( P ＜ 0. 01 ) and CD3+/CD8+ increased significantly higher ( P ＜ 0. 01 ) in the experimental group. Conclusion The toxic effects ofcyclophosphamide on rat testis are obvious. The germ cell apoptosis is significantly increased. Testosterone secretion of Leydig cells and T lymphocyte immunity are inhibited.%目的观察环磷酰胺对大鼠睾丸及其细胞免疫的影响,探讨抗肿瘤药物在生殖免疫功能中的机制.方法选用16只15周龄SD 大鼠,随机分为对照组和实验组,每组8只;实验组腹腔注射环磷酰胺20mg/kg/d,连续5天,用药两个月后,应用HE染色法研究大鼠睾丸远期组织学变化,用原位缺口末端标记法(TUNEL方法)检测生精小管中生殖细胞凋亡,放射免疫法检测血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH),流式细胞术进行血液T淋巴细胞亚群分析.结果实验组睾丸生精小管直径缩小、间距增宽、生精上皮变薄、生殖细胞层次和数量减少、生精小管腔多未见精子形成,实验组睾丸生精小管直径、面积、生殖细胞数均显著低于对照组( P < 0.01);实验组与对照组比较生殖细胞凋亡增多,差异显著(P＜0.01);实验组与对照组比较血清T明显降低,差异显著(P<0.01),血清FSH、LH水平两组间差异无显著性;血液T淋巴细胞亚群分析,实验组与对照组比较CD3+CD4+、CD4+/ CD8+明显降低(P<0.01),CD3+CD8+明显升高(P<0.01).结论环磷酰胺对大鼠睾丸远期损害明显,促进生殖细胞凋亡,降低睾酮的分泌,并抑制T 淋巴细胞的免疫功能.【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2011(020)006【总页数】5页(P596-600)【关键词】环磷酰胺;生殖细胞;细胞凋亡;T淋巴细胞【作者】韩咪莎;林珊;高学勇【作者单位】福建医科大学基础医学院解剖学与组胚学系,福州,350004;福州儿童医院检验科,福建,350003;福建医科大学基础医学院解剖学与组胚学系,福州,350004【正文语种】中文【中图分类】R329.8环磷酰胺（cyclophosphamide，CP）是常用抗肿瘤药物。
卵泡刺激素及其受体在大鼠肝的免疫荧光定位
大鼠(Rat)性激素结合球蛋白(SHBG)-NEWA
大鼠(Rat)性激素结合球蛋白(SHBG)什么是性激素结合球蛋白？性激素结合球蛋白（Sex hormone-binding globulin，SHBG）是一种存在于血液中的糖蛋白，主要功能是与性激素（如睾酮和雌激素）结合，从而调节它们在体内的生物活性。
SHBG是由肝脏细胞合成的，并通过血液进入到其他组织中。
SHBG的浓度水平在生理和病理过程中都有重要的意义。
大鼠(Rat)SHBG的基本结构大鼠(Rat)SHBG是一种糖基化蛋白，具有两个结构域：N末端的N-亲水性区（N-terminal N-hydrophilic region）和C-末端的C-疏水性区（C-terminal C-hydrophobic region）。
N-亲水性区含有两个亲水性区域和两个端粘合区域；C-疏水性区富含β转角和α螺旋。
大鼠(Rat)SHBG的合成和调节在大鼠(Rat)体内，SHBG的合成主要由肝脏细胞完成。
SHBG的合成和分泌受到多种因素的调节，如雄激素、雌激素、孕激素、卵泡刺激素和睾酮等。
大鼠(Rat)SHBG在生殖系统中的作用SHBG可以结合睾酮和雌激素，通过维持性激素的稳定，对生殖系统具有重要的作用。
SHBG的变化与多种性激素相关性疾病有关，如多囊卵巢综合症、早发性卵巢衰竭和乳腺癌等。
大鼠(Rat)SHBG在其他生理和病理过程中的作用除了在生殖系统中的作用外，SHBG也参与了其他生理和病理过程中。
研究表明，SHBG与类型2糖尿病、肥胖症、心血管疾病和骨代谢疾病等有关。
大鼠(Rat)SHBG作为一种重要的性激素调控蛋白，对生殖系统和其他生理和病理过程都有重要作用。
深入研究SHBG的生物学特性和调节机制，对于进一步认识其在生理和病理过程中的作用，并为性激素相关性疾病的诊断和治疗提供理论依据。
促性腺激素释放激素（GnRH）疫苗在哺乳动物免疫去势中的研究进展
2024·02畜牧兽医XUMUSHOUYI摘要：GnRH 免疫阉割是控制动物性欲和生殖能力的一种手段，它可在不做手术的前提下达到“阉割”动物的目的，比手术阉割更安全便捷，是一种对动物福利友好的替代方案。
近年来GnRH 免疫去势疫苗研究发展迅速，本文阐述了GnRH 免疫去势的机制，综述了GnRH 疫苗在哺乳动物免疫去势中的研究进展，并进一步探讨了目前GnRH 去势疫苗研发困境与发展前景，为GnRH 疫苗的广泛开发、完善和推广应用提供参考。
关键词：GnRH ；免疫去势；疫苗；哺乳动物动物去势技术是通过限制动物性器官的发育来消除或削弱动物性欲和生殖能力的手段，常被用于动物生殖管理。
目前常用的去势方法有手术阉割、化学去势和免疫去势。
传统手术阉割可一次性彻底绝育，但手术操作复杂，容易造成动物伤口感染、疼痛和应激反应，导致动物生长速率减慢，甚至引发动物疾病和死亡，也违背动物福利。
化学去势是利用棉酚、甲醛、高锰酸钾等化学药剂直接注射入动物睾丸部位，该方法应激少，出血少，但去势往往不彻底，并伴有持续的肿胀、疼痛和炎症反应，并有药物残留的风险。
免疫去势是一种新型的去势手段，以生殖激素作为抗原，刺激动物免疫系统产生相应抗体，中和内源性生殖激素的活性，以此达到去势目的。
在这三种去势方法中，免疫去势不仅更安全、更人道，也可以提高动物饲料转化率，改善胴体质量，符合经济发展的需要，是最具优势及发展前景的去势方法。
近年来，免疫去势技术发展势头强劲，陆续出现了以促性腺激素释放激素（GnRH ）、促卵泡激素（FSH ）、促性腺激素释放激素受体（GnRHR ）、精子特异性蛋白（TSP ）等为靶点的免疫去势疫苗。
哺乳动物的生殖是由下丘脑、垂体和性腺组成的神经内分泌轴控制的，即下丘脑-垂体-性腺（HPG ）轴，在众多靶点中，GnRH 因其位于HPG 轴的顶端，是哺乳动物调节繁殖的终极信号分子，进而成为了生殖免疫调控的最佳靶激素。
抗卵泡刺激素自身抗体引起大鼠睾丸生精细胞凋亡
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７０ ４・
第２ ０卷
第 ７期
医 学 研 究 生 学 报
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｐ ｏ ｓ ｔ ｇ ｒ ａ ｄ ｕ ａ ｔ ｅ ｓ
Ｖ０ １ ． ２ Ｏ Ｎｏ． ７
２ ０ ０ ７年 ７月
中 图分 类 号 ： Ｒ ６ ９ ７ ． ２ ２ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ８ — ８ １ ９ ９ （ ２ ０ ０ ７ ） ０ ７ － ０ ７ ０ ４ － ０ ４
Ａｎ ｔ ｉ － ｆ ｏ ｌ ｌ ｉ ｃ ｌ ｅ － ｓ ｔ ｉ ｍｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ｈ ｏ ｒ ｍｏ ｎ ｅ ａ ｕ ｔ ｏ ａ ｎ ｉ ｔ ｂ ｏ ｄ ｙ ｃ ａ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｈ ｅ ｇ ｅ ｒ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ａ ｐ ｏ ｐ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ｉ ｎ ｒ ａ ｔ ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｓ
ｍ ａ ｎ ｄ ， Ｐ Ｌ Ａ ，Ｎ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ ２ １ ０ ０ ０ ２ ， Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ； ２ ． Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｆＬ ｏ ｆ ｉ ｅ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｃｅ ｎ ， Ｎ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｎ ｏ ｒ ｍ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｎ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ ２ １ ０ ０ ９ ７ ， ｉ ｆ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ） Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ： Ｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｍ ｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｉ ｓ ｍ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｐ ｏ ｏ ｒ ｓ ｐ ｅ ｒ ｍ ａ ｔ ｏ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｉ ｓ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｍ ｏ ｄ ｅ ｌ ｒ ａ ｔ ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｓ
《妊娠期暴露疟原虫抗原PfCSP对子代鼠疫苗免疫影响的研究》
《妊娠期暴露疟原虫抗原PfCSP对子代鼠疫苗免疫影响的研究》一、引言疟疾是一种由疟原虫引起的全球性传染病，每年造成大量的人员伤亡和健康问题。
针对疟疾的防控和治疗，疫苗的研发和应用显得尤为重要。
然而，在妊娠期母体暴露于疟原虫抗原的情况下，其对子代免疫系统的影响尚未完全明确。
本研究以子代鼠为研究对象，探讨妊娠期暴露疟原虫抗原PfCSP对子代鼠疫苗免疫的影响。
二、材料与方法1. 实验材料本实验选用雌性BALB/c小鼠作为研究对象，购自专业实验动物养殖公司。
疟原虫抗原PfCSP购自专业生物试剂公司。
实验用疫苗为针对疟疾的灭活疫苗。
2. 实验方法将小鼠随机分为四组：对照组（无疟原虫抗原暴露）、暴露组（妊娠期暴露疟原虫抗原PfCSP）、疫苗组（子代鼠接种疟疾疫苗）、联合组（妊娠期暴露疟原虫抗原PfCSP且子代鼠接种疟疾疫苗）。
观察各组子代鼠的免疫反应及疫苗效果。
三、实验结果1. 免疫反应分析通过对各组子代鼠的免疫反应进行分析，我们发现，暴露组子代鼠在妊娠期暴露于疟原虫抗原PfCSP后，其体内免疫系统发生了显著变化。
而联合组子代鼠在接种疫苗后，其免疫反应也表现出了显著的提高。
2. 疫苗效果评估通过对比各组子代鼠接种疫苗后的抗体水平、免疫记忆及对疟原虫的抵抗力，我们发现联合组的疫苗效果最为显著。
妊娠期暴露疟原虫抗原PfCSP的子代鼠在接种疫苗后，其抗体水平更高，免疫记忆更持久，对疟原虫的抵抗力也更强。
四、讨论本研究表明，妊娠期母体暴露于疟原虫抗原PfCSP对子代鼠的疫苗免疫具有积极的影响。
这可能是由于母体在妊娠期暴露于疟原虫抗原后，其体内的免疫系统产生了针对该抗原的记忆性免疫反应，使得子代鼠在接种疫苗时能够更快地产生抗体，提高免疫记忆和抵抗力。
然而，本研究仍存在一定局限性。
首先，实验对象为小鼠，其免疫系统与人类存在一定差异；其次，本研究仅关注了妊娠期母体暴露疟原虫抗原PfCSP对子代鼠疫苗免疫的影响，未考虑其他因素如母体营养状况、环境因素等对实验结果的影响。
FSHR B细胞表位筛选及其多肽疫苗抗生育作用的研究的开题报告
FSHR B细胞表位筛选及其多肽疫苗抗生育作用的研究的开题报告开题报告一、项目名称：FSHR B细胞表位筛选及其多肽疫苗抗生育作用的研究。
二、研究背景和意义：FSHR (Follicle-stimulating hormone receptor) 是卵泡刺激素受体，位于卵巢和睾丸中的颗粒细胞及精细胞膜上，与卵泡刺激素结合后形成信号通路，参与大多数哺乳动物的生殖调节。
由于FSHR的狭窄分布和局限性功能，为目标靶点研究及潜在治疗提供了有力工具。
近年来，研究显示FSHR在自身免疫性疾病、生育周期异常、多囊卵巢综合征（PCOS）等多种疾病中都扮演着重要的角色。
研究显示免疫系统可能从FSHR蛋白上识别FSHR表位，激活自身免疫机制，导致FSHR表位特异性抗体产生。
这些抗体对FSHR蛋白的免疫反应可导致人体炎症反应加剧，从而影响生育，影响人体的健康。
因此，寻找能够识别FSHR表位并具有免疫学活性的多肽，结合研究FSHR与自身免疫性疾病之间的关系，有望为其相关疾病的治疗提供一种新思路。
同时，对于疫苗研发而言，免疫学活性的多肽极具应用价值，有望开发出新的FSHR免疫原，为相关疾病的疫苗开发提供较为可行的途径。
三、研究内容和方法：本研究计划通过生物信息学分析，筛选出适宜FSHR表位结构的肽段，并对其进行克隆、表达与纯化；接着，采用酵母表面展示技术筛选出能够特异性结合FSHR的多肽，并通过生物物理化学手段对各组分进行评价；最后通过体内实验评估所得多肽疫苗在体内抗生育作用的效果。
四、预期结果：预计通过本研究将获得以下结果：1. 筛选出适宜FSHR表位结构的肽段并克隆、表达、纯化；2. 筛选出能够特异性结合FSHR的多肽；3. 在体内实验中评估所得多肽疫苗的抗生育作用效果；4. 建立起一套稳定、可靠、规范的多肽疫苗抗生育作用评价系统；5. 为进一步研究FSHR在免疫性疾病中的作用以及其相关疫苗的开发提供基础。
五、预期贡献：本研究的意义在于深入理解FSHR在多种哺乳动物生殖调节、自身免疫性疾病、生育周期异常以及PCOS等疾病中的作用，为基于免疫细胞表位的免疫调节研究提供新视角，并为相关疫苗的开发提供实验基础和理论支持，有望为相关疾病的预防和治疗提供更加可靠和有效的手段。
分析主动免疫GTD对SD雌鼠生殖功能的影响-动物学论文-生物学论文
分析主动免疫GTD对SD雌鼠生殖功能的影响-动物学论文-生物学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone，GnRH)是由下丘脑合成并释放的十肽激素，通过垂体门脉系统作用于垂体前叶的GnRH受体，促使垂体合成并释放促黄体激素(Luteotropic hormone，LH)和促卵泡激素(Follicle-stimulating hormone，FSH)，在性腺生长发育以及生殖过程中起重要调节作用。
外源GnRH主动免疫，能刺激动物机体产生大量抗GnRH特异性抗体，引起生殖内分泌系统失衡，从而改变下丘脑－垂体－性腺轴的正常反馈调节关系，减少生殖激素的合成和分泌，致使被免疫动物性腺萎缩、重量减轻，并降低配子质量，终止配子发育，使生殖功能降低甚至消失，达到去势效果。
在畜牧业生产中，GnRH免疫去势可去除猪肉中由雄烯酮引起的膻味;减少公猪、公牛、公羊间的攻击性行为、提升肉质品质;也可消除母畜性成熟后周期性发情造成的无计划怀孕对育肥效果的影响;免疫去势还能避免外科阉割给动物带来的应激、感染等不利影响，也符合日趋合法化的动物福利的要求，具有良好的市场前景。
而动物经GnRH主动免疫后，调控信号如何到达下丘脑－垂体－性腺轴?下丘脑－垂体－性腺轴又如何发挥作用调控动物的生殖状态从而达到去势效果?关于这一问题，最早由Meloen等提出理论上可能存在的多方面因素;后逐渐形成3种假说:免疫中和假说、GnRH合成/分泌下调假说以及GnRH受体表达下调假说。
另外，由于GnRH主动免疫通过打破生殖轴的正常反馈调节关系，使其长期处于动态失衡状态，因此，研究下丘脑－垂体－性腺轴与激素分泌之间的调控关系有助于厘清GnRH主动免疫的机理，但相关研究鲜有报道。
本研究以SD大鼠为模型，动态研究GnRH主动免疫对SD大鼠生殖激素分泌以及下丘脑－垂体－卵巢轴相关生殖基因表达的影响，以探讨GnRH主动免疫去势的分子机理。
PKC信号传导系统介导FSH刺激卵巢癌细胞增殖的作用
中国协和医科大学博士学位论文PKC信号传导系统介导FSH刺激卵巢癌细胞增殖的作用姓名：盛林申请学位级别：博士专业：肿瘤学指导教师：沈铿;刘东远2002.1.1：±旦堡塑匿型奎兰堕主兰望些丝塞——————————————＿二．！二一缩写词ｍｍｎｍｋｇｍｇｕｇｎｇＬｍｌｕｌＭ删ＵＭＮＭｍＡＶＩＵｏＤ缩略词表ＡＢＢＲＥＶＩＡＴｌ０Ｎ英文全称ＩＭｉｌｌｉｍｅｔｅｒＮａｎｏｍｅｔｅｒＫｉｌｏｇｒａｍＭｉｌｌｉｇｒａｍＭｉｃｒｏｇｒａｍＮａｎｏｇｒａｍＬｉｔｅｒＭｉｌｌｉｌｉｔｅｒＭｉｃｒｏｌｉｔｅｒＭｏｌｐｅｒｌｉｔｅｒ中文全称毫米纳米千克毫克微克纳克升毫升微升摩尔每升Ｍｉｌｌｉ．ｔｏｏｌｐｅｒｌｉｔｅｒ毫摩尔每升Ｍｉｃｒｏ．ｔｏｏｌｐｅｒｌｉｔｅｒ微摩尔每升Ｎａｎｏ—ｍｏｌｐｅｒｌｉｔｅｒｍｉｌｌｉａｍｐｅｒｅＶ｜０１ｔＩｎｔｅｍａｔｉｏｎａｌｕｎｉｔＯｐｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔｙ纳摩尔每升毫安伏特国际单位光密度主里堡塑堕型查兰堕主兰兰些堕皇——————————————＿二三二一ＢｐＫｂＲｐｍＢＳＡＣＤＮＡＤＡＢＤＥＰＣＤＭＳ０ＤＮＡ（ＩＮＴＰＤＴＴＥＢＥＤＴＡＦＳＨＦＳＨ．ＲＬＨⅣ瓜ＮＡＭＴＴ０ＳＥＰＢＳＢａｓｅｐａｉｒＫｉｌｏ－ｂａｓｅｐａｉｒＲｏｔａｔｉｏｎｐｅｒｍｉｎｕｔｅＢｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎＣｏｍｐｌｅｍｅｍａｒｙＤＮＡ３，３＇－ｄｉａｍｉｎｂｅｚｉｄｉｎｅ碱基对千碱基对转每分牛血清白蛋白互补ＤＮＡ二氨基联苯胺Ｄｉｅｔｈｙｌｐｙｒｏｃａｒｂｏｎａｔｅ焦碳酸二乙酯Ｄｉｍｅｙｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ二甲基亚砜Ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ脱氧核糖核酸Ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ脱氧核苷三磷酸ＤｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌＥｔｈｉｄｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ二硫苏糖醇溴化乙锭Ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃａｃｉｄ乙二胺四乙酸Ｆｏｌｌｉｃｌｅ．ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅ卵泡刺激素Ｆｏｌｌｉｃｌｅ．ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ卵泡刺激素受体ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅｍｅｓｓｅｎｇｅｒＲＮＡ黄体生成素信使ＲＮＡ３－［４，５一Ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚ０１］一２，５—３－（４，５一二甲基噻唑一２）－ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ２，５－二苯基四氮唑溴盐Ｏｖａｒｉａｎｓｕｒｆａｃｅｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ卵巢表面上皮Ｐｈｏｓｈａｔｅ。
大鼠卵泡刺素(FSH)酶联免疫分析
大鼠卵泡刺激素（FSH）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.7 IU/L -24 IU/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中卵泡刺激素（FSH）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠卵泡刺激素（FSH）水平。
用纯化的大鼠卵泡刺激素（FSH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入卵泡刺激素（FSH），再与HRP标记的卵泡刺激素（FSH）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的卵泡刺激素（FSH）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠卵泡刺激素（FSH）浓度。
试剂盒组成1 2 3 4 5 6 30倍浓缩洗涤液酶标试剂20ml×1瓶6ml×1瓶12孔×8条6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶78终止液6ml×1瓶0.5ml×1瓶1.5ml×1瓶1份标准品（48 IU/L）标准品稀释液说明书酶标包被板样品稀释液显色剂A液显色剂B液9101112封板膜2张密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
24 IU/L 12 IU/L 6 IU/L 5号标准品4号标准品3号标准品2号标准品1号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液3 IU/L1.5 IU/L2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
呢岸学校高三生物期末大试题(含解析)
咐呼州鸣咏市呢岸学校十校高三期末大理科综合生物【题文】1．细胞是生物体结构和功能的基本单位。
下列有关细胞的成分、结构和功能的叙述正确的是( ) A．原核细胞与真核细胞遗传物质的碱基种类相同，细胞增殖方式不同B.组成生物体的大分子都是以碳链或氮链作为基本骨架C.构成细胞膜的磷脂分子和蛋白质分子都是可以运动的D。
由于酶具有专一性，所以蛋白酶能水解所有的肽键【答案】【知识点】B3 细胞的结构及功能综合【答案解析】A解析：原核细胞通过二分裂方式增殖，真核细胞的增殖方式有三种：有丝分裂、无丝分裂、减数分裂，A正确；组成生物体的大分子都是以碳链作为基本骨架，B错误；构成细胞膜的磷脂分子是可以运动的，蛋白质分子大多是可以运动的，C错误；蛋白酶只能水解一些特氨基酸间的肽键，不能水解所有的肽键。
【思路】注意对相关知识的理解需全面准确。
【题文】2．效T细胞发挥免疫作用主要是通过诱导靶细胞（如肿瘤细胞、病毒感染的宿主细胞）的凋亡来实现。
原理如图所示，其中FasL又称死亡因子，其基因只在效T细胞中表达，Fas又称死亡因子受体，其基因可在各种细胞中表达。
下列相关叙述不正确的是 ( )A, Fas和FasL的成分都是糖蛋白,它们的结合体现了细胞膜的信息传递功能B.Fas基因和FasL基因存在于各种体细胞，不同细胞表达的差异体现了细胞分化的原理C. 被HIV感染的T细胞中Fas基因表达会增强，使T细胞成为效T细胞攻击的靶细胞D.可通过增强体内效T细胞FasL基因的表达或抑制癌细胞Fas基因的表达治疗肿瘤【答案】【知识点】H5 免疫调节及免疫失调【答案解析】D解析：根据题干信息， Fas基因可在包括T细胞在内的所有细胞内表达，癌变细胞中Fas 基因表达可合成Fas，同时作为抗原引起免疫反产生效T细胞，通过FasL与Fas结合引起肿瘤细胞凋亡，因而是增强效T细胞FasL基因的表达或增强癌细胞Fas基因的表达治疗肿瘤，不能抑制癌细胞的Fas基因的表达。
GnRH类似物疫苗免疫去势效果的影响因素
GnRH类似物疫苗免疫去势效果的影响因素邢雪静; 尹国安【期刊名称】《《畜牧与饲料科学》》【年(卷),期】2019(040)011【总页数】4页(P61-64)【关键词】促性腺激素释放激素; 免疫去势; 并列二聚体; 偶联蛋白; 佐剂; 疫苗【作者】邢雪静; 尹国安【作者单位】黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆 163319【正文语种】中文【中图分类】S852.5去势可以使家畜变得性情温顺而便于管理，也可去除公畜的膻味，还可控制野生动物和流浪宠物过度繁殖［1-2］。
免疫去势是用促性腺激素释放激素（gonadotropin-releasing hormone，GnRH）类似物疫苗免疫的方法抑制性器官发育。
免疫去势是通过使用免疫学方法扰乱下丘脑—垂体—性腺轴的激素平衡，降低 GnRH、LH、FSH 等的激素水平，抑制性腺发育，控制性行为，避免了手术去势造成的出血感染等问题，具有安全、方便、应激小的优点。
目前，世界范围内商品化GnRH 类似物疫苗主要有辉瑞制药有限公司的Improvac 疫苗，用于去除公猪膻味，需要在屠宰前 4 周和 8 周 2 次皮下注射（剂量：2 mL/次）［3］。
在方富贵等［4-5］的研究中，用乳化后的GnRH 并列二聚体免疫成年雄兔，造成睾丸萎缩严重；曹忠君［6］使用 GnRH-TD-BSA免疫公、母猫，导致公猫睾丸严重萎缩、母猫子宫和卵巢发育不良，都可以说明GnRH 用于免疫去势是可行的。
1 抗原结构1.1 GnRH类似物的结构GnRH 是分子量仅为1 181 Da 的半抗原，通过增大分子量和改变结构可以增强其抗原性。
国内外很多学者在该领域已经研究多年，早期大多数研究都是采用GnRH 单体或并列体作为免疫原，效果并不理想，目前在合成肽疫苗中大多数采用GnRH并列二聚物。
Meloen 等［7］将两分子GnRH连接形成并列体后进行二聚化形成促性腺激素释放激素并列二聚物（G6K-GnRH-Tandem-Dimer，GnRH-TDK）。
动物免疫学郭鑫例题习题
10．特异性免疫应答的三大特点是▁▁▁▁、▁▁▁▁和▁▁▁▁。
11.抗原通过▁▁▁▁进入淋巴结，通过▁▁▁▁进入脾脏。
12．抗原递呈细胞主要包括▁▁▁▁细胞、▁▁▁▁细胞、▁▁▁▁细胞和▁▁▁▁细胞。
13．补体▁▁▁▁成分的▁▁▁▁亚单位与抗原抗体复合物结合。
A．多糖B．多肽
C．血浆D．类脂
22．关于TD抗原的正确描述是（）
A．是指在胸腺中加工处理的抗原
B．可直接激活B细胞产生抗体
C．既能引起细胞免疫应答，又能引起体液免疫应答
D．不能诱导产生免疫记忆
23．桥梁凝集反应可用来检测（）
A．完全抗原B．半抗原
C．完全抗体D．不完全抗体
24．下列抗原中属于隐蔽抗原的是（）
22．构成先天非特异性免疫的因素包括▁▁▁▁▁、▁▁▁▁▁、▁▁▁▁▁、▁▁▁▁▁。
23．参与免疫应答的核心细胞是▁▁▁▁▁淋巴细胞和▁▁▁▁▁淋巴细胞。
24．抗原表位的大小主要受▁▁▁▁▁和▁▁▁▁▁所制约。
25．组织和体液中的抗微生物物质包括▁▁▁▁▁、▁▁▁▁▁、▁▁▁▁▁、乙型溶素、防御素等。
A．人工主动免疫
B．人工被动免疫
C．天然主动免疫
D．天然被动免疫
51．不能用来检测可溶性抗原的试验是（）
A．直接凝集试验
B．间接凝集试验
C．协同凝集试验
D．琼脂免疫扩散试验
52．接种牛痘疫苗后可产生对天花的抵抗性，这反映了（）
A．抗原的特异性
B．抗原的交叉反应
C．先天免疫
D．主动保护
53．抗体与补体结合的部位是（）
47．▁▁▁▁▁介导体液免疫反应，▁▁▁▁▁▁介导细胞免疫反应。
补经合剂对初老大鼠卵巢FSH受体和子宫E、P受体的影响
补经合剂对初老大鼠卵巢FSH受体和子宫E、P受体的影响金沈锐;徐晓娟;秦旭华;杨家林【期刊名称】《中医杂志》【年(卷),期】2003(44)3【摘要】目的:以补经合剂对初老大鼠卵巢、子宫内膜受体的影响,拟从分子生物学水平进一步阐明该方的作用机理。
方法:以雌性初老大鼠为自然肾虚模型,采用免疫组织化学方法观察该药对肾虚大鼠卵巢的卵泡刺激素受体(FSHR)和子宫内膜的雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的影响。
结果:补经合剂高剂量组(相当于31g原生药/kg)能正向调节大鼠卵巢中卵泡和黄体的FSHR的水平(P<0.05或P<0.01);同时补经合剂高、低剂量组(相当于7.8g原生药/kg)也能正向调节大鼠子宫ER水平,以低剂量组更为明显(P<0.05);补经合剂高剂量组还能正向调节子宫内膜上皮PR 的水平(P<0.05)。
结论:补经合剂临床上用于治疗月经后期或伴量少的机理,可能与该药正向调节卵巢FSHR和子宫内膜ER、PR的水平有关。
【总页数】2页(P222-223)【关键词】补经合剂;初老大鼠;卵巢;FSH受体;子宫【作者】金沈锐;徐晓娟;秦旭华;杨家林【作者单位】成都中医药大学基础医学院生化与分子生物学教研室【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.电针结合克罗米芬对多囊卵巢综合征大鼠子宫内膜胰岛素受体和胰岛素受体底物1蛋白表达及胚泡着床的影响 [J], 赖毛华;马红霞;宋兴华2.补经合剂对初老大鼠血清激素水平和卵巢、子宫病理形态学的影响 [J], 徐晓娟;金沈锐;秦旭华;杨家林3.来曲唑诱导多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织中FSH受体的表达及其意义 [J], 郭洪胜;安长新;陈东4.PMSG和FSH同期发情处理对小鼠子宫、卵巢和输卵管中雌激素α受体分布的影响 [J], 林自力;高雅;邓桂馨;梁鸿斌;张鸿波;刘云海;倪和民;郭勇;王志刚5.PMSG或FSH同期发情处理对小鼠卵巢、输卵管和子宫中孕激素受体分布的影响 [J], 林自力;倪和民;郭勇;梁鸿斌;尹艳云;邓桂馨;刘云海因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
卵泡刺激素受体研究进展
卵泡刺激素受体研究进展丰培金;牛淑玲;周虚【期刊名称】《生殖医学杂志》【年(卷),期】2003(012)005【摘要】卵泡刺激素(FSH)是哺乳动物重要的生殖激素,其生理作用是通过其受体(FSHR)介导的.FSHR属于G蛋白偶联受体超家族中的糖蛋白亚家族成员,它的细胞外域具有FSH特异性结合位点,细胞外域有3或4个潜在的糖基化位点,这些糖基对受体的折叠及转运激素至膜表面是必须的;其跨膜域参与蛋白激酶A(PKA)介导的信号转导,启动受体活化后的胞内事件;受体的脱敏可导致受体解偶联和受体数量下调.大多数哺乳动物FSHR cDNA开放阅读框由2 085个核苷酸构成,人和大鼠FSHR基因为单拷贝基因,它包含10个外显子和9个内含子,其5'侧翼区缺乏规则的TAT或CCAAT启动子元件,在3'末端非翻译区含有2个推断的多聚腺苷酸信号.FSHR存在活性突变和非活性突变,FSHR不足可导致原发性不育.【总页数】6页(P311-316)【作者】丰培金;牛淑玲;周虚【作者单位】解放军军需大学兽医学院,吉林长春,130062;解放军军需大学兽医学院,吉林长春,130062;解放军军需大学兽医学院,吉林长春,130062【正文语种】中文【中图分类】R339.2【相关文献】1.卵泡刺激素受体基因多态性的研究进展 [J], 夏丽娜;孙晓溪2.卵泡刺激素受体基因与卵巢功能的研究进展 [J], 夏良斌;欧阳静萍3.补肾促排方对大鼠卵巢颗粒细胞黄体生成素受体和卵泡刺激素受体的影响 [J], 张炳婕;冯艳红;张兰;夏慧芳;赵丽华;宫亚萍;田园;曹细萍;潘珂4.卵泡刺激素受体在胎盘血管形成及维持妊娠中的作用 [J], 王舒可;郑梅玲5.卵泡刺激素受体基因多态性对女性卵巢功能影响的研究进展 [J], 颜元良;龚志成因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
FSH和FSHR在雌性哺乳动物繁殖中的作用
FSH和FSHR在雌性哺乳动物繁殖中的作用宋甲昌;王英华;钟永庆;闫华颖【期刊名称】《上海畜牧兽医通讯》【年(卷),期】2009(000)001【摘要】卵泡刺激素（Follicle Stimulating Hormone，FSH）是一种由垂体分泌的糖蛋白激素。
在雌性哺乳动物主要的生理作用是刺激卵泡发育和排卵；卵泡刺激素受体（Follicle Stimulating Hormone，FSHR）是FSH的特异性受体，FSH 发挥作用必须由FSHR来介导。
FSHR属于G蛋白偶联受体家族中的成员，通过cAMP通路介导FSH的信号转导。
二者对提高雌性哺乳动物的产仔数具有重要的作用。
【总页数】2页(P50-51)【作者】宋甲昌;王英华;钟永庆;闫华颖【作者单位】山东省荣成市畜牧局荫子畜牧兽医站,威海,264301;黄岛出入境检验检疫局,青岛,266555;山东省荣成市畜牧局荫子畜牧兽医站,威海,264301;山东省荣成市畜牧局荫子畜牧兽医站,威海,264301【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.Alarelin免疫绵羊对垂体GnRHR、FSHR和LHR基因表达与生殖激素分泌的作用 [J], 魏锁成;巩转娣;董江陵;谢坤;李琼毅;韦敏2.骨形态发生蛋白及其受体在哺乳动物繁殖中的作用 [J], 肖朝庭;储明星;傅衍3.雌性哺乳动物FSH及其受体 [J], 赵驻军;张国磊4.Genistein对雌性大鼠卵巢颗粒细胞FSHR基因表达的影响 [J], 温海霞;张亚楠5.地萸补肾固冲方对未成年雌性大鼠卵巢组织中FSHR和LHR的影响 [J], 刘方洲; 张雪侠; 郭晓燕; 李士瑾因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
转铁蛋白抑制大鼠卵泡颗粒细胞FSH受体的结合与维持
转铁蛋白抑制大鼠卵泡颗粒细胞FSH受体的结合与维持喻晶华;郭建;郭璟
【期刊名称】《生理学报》
【年(卷),期】1992(44)5
【摘要】转铁蛋白能抑制大鼠卵泡颗粒细胞的分化,但其机理尚不清楚。
本实验用已烯雌酚处理后分离的大鼠颗粒细胞,观察了转铁蛋白对FSH结合到颗粒细胞,以及在培养过程中对颗粒细胞FSH受体量维持的影响。
结果表明,生理浓度范围的转铁蛋白部分地阻断了^(125)I-rFSH结合到颗粒细胞上;将转铁蛋白与FSH一起处理细胞,发现它能剂量依赖性地抑制FSH对颗粒细胞FSH受体的维持作用,并表现为孕酮及雌二醇的分泌减少。
【总页数】6页(P496-501)
【关键词】转铁蛋白;颗粒细胞;受体;FSH;卵泡
【作者】喻晶华;郭建;郭璟
【作者单位】四川省计划生育科学研究所生理室世界卫生组织人类生殖研究合作中心
【正文语种】中文
【中图分类】R339.22
【相关文献】
1.转铁蛋白抑制FSH刺激大氧卵泡颗粒细胞分化的细胞内主要机制 [J], 喻晶华
2.转铁蛋白对FSH诱导卵泡颗粒细胞分化的抑制作用及其机理 [J], 喻晶华;郭建;
郭璟;曾福祥;唐光华
3.Interleukin-1β对促卵泡生成素(FSH)诱导大鼠颗粒细胞雌激素生成的抑制作用[J], 周美华;A.Brenda Galway
4.活化素和卵泡抑素对绍鸭卵泡颗粒细胞FSH受体mRNA表达作用的研究 [J], 傅衍;牛冬;阮晖;余旭平;陈功;何国庆
5.转铁蛋白抑制FSH刺激大鼠卵泡颗粒细胞分化的细胞内主要机制 [J], 喻晶华;郭璟;郭建;曾福祥
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Interleukin-1β对促卵泡生成素(FSH)诱导大鼠颗粒细胞雌激素生成的抑制作用
Interleukin-1β对促卵泡生成素(FSH)诱导大鼠颗粒细胞雌激素生成的抑制作用周美华;A.Brenda Galway【期刊名称】《生理学报》【年(卷),期】1991(43)1【摘要】本文利用颗粒细胞的体外培养方法研究了 Interleukin-1β 对 FSH 诱导颗粒细胞雌激素生成的影响。
颗粒细胞得自未成熟的、经雌激素处理的大鼠,加入FSH 及同时加入不同浓度的 Interleukin-1β 后,体外培养三日,观察 Interleukin-1β 对雌激素生成的影响。
结果可见 FSH 刺激颗粒细胞雌激素生成作用随 FSH 剂量的增加而随之增加。
Interleukin-1β 单独处理并不影响雌激素的生物合成。
但若同时应用 Interleukin-1β 和 FSH 处理,则可见 Inter-eukin-1β 抑制 FSH 诱导颗粒细胞雌激素生成作用,且此抑制作用强度呈剂量依赖性。
其最大的抑制作用达83%。
该抑制作用在加药处理后48h 即很明显。
Interleukin-1β 抑制 fors-kolin 和(Bu)_2 cAMP 引起的雌激素的生成,这表明 Interleukin-1β 的作用点在 cAMP 生成之后。
本文结果提示 Interleukin-1β 使颗粒细胞雌激素生成下降的作用有可能参予卵泡的闭锁机制,尤其当机体在遭受炎症、感染期间,Interleukin-1β 是卵巢功能受损的一个可能参予因子。
【总页数】6页(P67-72)【关键词】颗粒细胞;雌激素生成;白细胞介素【作者】周美华;A.Brenda Galway【作者单位】上海医科大学药理教研室;Department of Reproductive Medicine M-025,University of California San Diego,La Jolla,California 92093【正文语种】中文【中图分类】R339.22【相关文献】1.消抗灵对大鼠hcG诱导的颗粒细胞雌孕激素生成的影响 [J], 王春梅;王伟2.血管紧张素(1-7)对胆管结扎诱导的肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用 [J], 宁佐伟;张文雍;李洋;蔡双明;张莉莉;李旭3.肿瘤抑素Tum5对人脐静脉血管内皮细胞血管生成活性以及碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管的抑制作用 [J], 郑嘉琳;贾育蓉;郭星艺;张琰;漆晨;孙靖;张红4.热休克预处理大鼠骨髓间充质干细胞对化疗诱导卵巢颗粒细胞凋亡的抑制作用[J], 汪庆如; 李欣然; 王清; 谢嘉欣; 付霞霏5.转铁蛋白对FSH诱导卵泡颗粒细胞分化的抑制作用及其机理 [J], 喻晶华;郭建;郭璟;曾福祥;唐光华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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ＰＭＳＦ）透
析３次，每次２ ｈ。经透析的重组蛋白溶液，通过
超滤浓缩，以作为免疫或检测用抗原。获取的重组 蛋白经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳鉴定，并参照蛋白标准，经考 马斯亮蓝染色后定量。获取的重组蛋白Ｈｉｓ．ｒＦＳＨＲ 作为免疫原，而ＧＳＴ—ｒＦＳＨＲ作为检测抗原。
功能而导致卵巢功能衰退，以构建ＰＯＦ实验动物
［通讯作者］孙兆贵，博士，研究员，博士生导师，
Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｕｎｚｇｂｉｏ＠ｙａｈｏｏ．ｃｎ
模型，可模拟人类ＰＯＦ的主要临床表现，更适用
万方数据
实验动物与比较医学Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ａｎｉｍａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
１３
于建立性成熟前卵巢早衰的治疗方案和特异治疗药
检测用ＴＭＢ（货号８６０３３６）弗氏佐剂均购自Ｓｉｇｍａ公 司，ＨＲＰ标记的驴抗兔一ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）及ＨＲＰ标记的驴
抗大鼠．ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二抗购自ＰＴＧ公司；蛋白分子量 Ｍａｒｋｅｒ（ＳＭ０６７１）购自上海麦约尔生物技术有限公 司；ＦＳＨ测定ＥＬＩＳＡ试剂盒购自上海逸峰生物科技 有限公司。质粒ｐＥＴ．２８ａ（＋）和ｐＧＥＸ４Ｔ一３均为本 实验室保存。
１５ ｓ：７２℃，４０ Ｓ１ １０ ｓ；６０℃，
方法克隆胞外区片段，构建原核表达质粒进行表
达，并通过蛋白质结构分析，预测了可能与ＦＳＨ 配体结合的三个肽段，分别对性成熟前雌性ＳＤ大
鼠进行免疫，诱导产生高滴度的特异性抗ＦＳＨＲ抗 体，观察对大鼠发情周期的影响，并检测血液ＦＳＨ 及雌激素水平变化情况，探讨自身免疫反应对大鼠
ＦＳＨ是一种异二聚体糖蛋白，由腺垂体合成 分泌，直接参与调控卵巢功能，包括卵泡发育与
性激素的合成分泌，其调节作用通过卵泡颗粒细胞
识别结合ＦＳＨ的区域；然后是由２６４个氨基酸组成
的含有７个跨膜螺旋结构的跨膜区；最后是由羧基末 端６５个氨基酸（大鼠６３个氨基酸）组成的胞内区，为 信息传递所必需【ｚ．３】。在卵泡发育过程中，颗粒细 胞膜上的ＦＳＨＲ数量保持相对的恒定，如果ＦＳＨＲ 功能被抑制，卵泡因发育障碍而发生异常闭锁，
ｒ／ｍｉｎ、４℃离心３０ ｍｉｎ分离血清，用于抗
体滴度检测。每经过７ ｄ取血１次，监测抗体水平 变化情况，持续６周。 重组表达的ＧＳＴ融合蛋白ＧＳＴ—ｒＦＳＨＲ，经纯 化，溶于包被液，配成１０ ｍｇ／ｍｌ的终浓度，按每 孔１００ ｍｌ包被溶液加入９６孔酶标板（上海萃华生物
物的筛选。 本研究从大鼠卵巢组织提取总ＲＮＡ，ＲＴ．ＰＣＲ
存。以自行设计的ｒＦＳＨＲ引物：上游引物，５＇－ＧＧＴ－ ＧＧＡＴＣＣＴ兀℃ＴＣＴ（ⅪＣＡＡＧＡＣＡＧＣＡＡ．３’，下游引 物，５’一ＧＡｒＩ：ＴＣＧＡＧＴＩＴＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＴＣＡＣ』气ＴＣ一 ３’，扩增ＦＳＨＲ胞外区片段，对应１３．３３３位氨基酸 残基。取１ ｍｌ以上ｃＤＮＡ为模板，用高保真酶 （ＤＲ０１０，Ｔａｋａｒａ公司）通过ＰＣＲ获取目标ｃＤＮＡ片 段，反应条件为：９８℃，１５ ｓ；［９８℃，１０
感受态菌，以表达ＦＳＨＲ的胞外区段（ＥＣＤ）的ＧＳＴ或 ｈｉｓ标记的融合蛋白。当细菌浓度达到Ａｍ为Ｏ．８。０．９， 加ＩＰＴＧ至终浓度１ ｍｍｏｌ／Ｌ诱导表达４ ｈ，以获取最 佳的表达量。然后于４℃，６ ０００×ｇ离心１０ 收集菌体以备分离重组表达蛋白。
ｍｉｎ，
购自上海西普尔一必凯实验动物有限责任公司
卵巢，解剖镜下分离卵丘复合体。用口吸管吸取 卵丘复合体，放入２００ ｍｌ含体积分数４％多聚甲醛
点注射主动免疫。在不同的时间节点免疫，共３ 次。初次免疫使用完全弗氏佐剂，抗原剂量为５００
ｍｇ蛋白每只大鼠。第２次免疫于初次免疫后第１４
的９６孔板中，室温固定４０ ｍｉｎ，然后将卵丘复合体
转移至２００ ｒｎｌ透膜液（含体积分数０．３％ＢＳＡ、体积 分数０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ一１００的ＰＢＳ）中４℃过夜。透膜后
８．０１，１００ ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ，１ ｍｍｏｌ／Ｌ
ＰＭＳＦ）重悬收集的菌体，冰上超
Ｓ，
声（宁波新芝生物科技股份有限公司），按超声２０
问隔４０ Ｓ，循环２０次，功率维持在约２００ Ｗ，以裂解 菌体。经４℃，１０ ０００×ｇ离心１０ ｍｉｎ，取沉淀 以获取包涵体。包涵体经洗涤，用含７ ｍｏｌ／Ｌ尿素 的裂解液重悬，冰上超声，离心取包涵体的裂解上清
ＥＬＩＳＡ检测血清ＦＳＨＲ抗体滴度 于第３次免疫后１周，即５９日龄时，经舌下
静脉取血０．１ ｍｌ，３７℃温育１ ｈ，４℃静置过夜，
ｌ ５００
的大鼠抗血清中，３７℃孵育４０ ｍｉｎ。大鼠抗血清 一抗结合后的卵丘复合体，经洗涤液洗涤三次后，
加入２００ ｍｌ用封闭液按１：５０稀释ＦＩＴＣ一羊抗大鼠 ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（ＰＴＧ公司，ＳＡ００００３—１１）二抗中，３７℃
从而导致卵巢功能的减退。
上ＦＳＨ受体（ＦＳＨＲ）信号转导途径介导Ⅲ。ＦＳＨＲ是 一种典型的Ｇ蛋白偶联受体，与ＦＳＨ结合后，通 过Ｇ蛋白介导的腺苷环化酶一环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）信
号级联反应，促进颗粒细胞中芳香化酶的合成， 进而促进雌激素的合成分泌。人ＦＳＨＲ是由６９５个
卵巢早衰（ＰＯＦ）…的主要临床特征之一就是患
万方数据
１４
实验动物与比较医学Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ
ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
１．３．２
ＦＳＨＲ配体结合部位免疫原性肽段预测与合
１．０
（取９．８ ｍｌ磷酸一柠檬酸溶液，ｐＨ ５．０，依次加入
０．２
成利用ＢｅｐｉＰｒｅｄ源自Ｓｅｒｖｅｒ软件，预测获得可能
ｍｌ的５
ｍｇ／ｍｌ
［ＳＣＸＫ（沪）２００８—００１６］。饲养于上海市计划生育科
学研究所啮齿类实验动物房［ＳＹＸＫ（沪）２００８—００２７］。
饲养环境温度控制在２４±２℃，相对湿度４０％～５０％， 饲喂颗粒料，自由饮水。 １．２主要试剂
每克湿菌体加入５ ｍｌ裂解缓冲液（５０
Ｔｒｉｓ—ＨＣＩ（ｐＨ
ＥＤＴＡ，０．１ ｍｍｏｌ／Ｌ
蛋白。电泳完毕，取出透析袋内蛋白凝胶，保留
其中的液体，对６００ ｍｌ缓冲液（５ （ｐＨ８．０），体积分数０．９％ＮａＣＩ，０．１
ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ—ＣＩ ｍｍｏｌ／Ｌ
１．３大鼠主动免疫用ＦＳＨＲ抗原的制备 １．３．１大鼠ＦＳＨＲ胞外区片段的重组表达与抗原制 备用Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取ＳＤ大鼠卵巢组织总ＲＮＡ，
者血液中ＦＳＨ水平的异常升高，提示ＰＯＦ患者卵
氨基酸（大鼠６９２个氨基酸）组成的一条肽链，其氨
基末端１７个氨基酸为疏水性信号肽，紧接着是由
巢组织对ＦＳＨ的敏感性降低或消失。已有基于人群 的研究证实，ＦＳＨＲ基因突变会导致遗传性卵巢早
衰【５】，而且在近１０％的ＰＯＦ患者血清中，检测到
３４９个氨基酸（大鼠３４８个氨基酸）组成的胞外区，是
的生殖的影响。
３０个循环；７２℃，１０ ｍｉｎ；４℃，
Ｉ
ｍｉｎ。ＰＣＲ反应产物经体积分数１．２％琼脂糖电
泳分离获取ｒＦＳＨＲ片段，用限制性内切酶ＢａｍＨ
和Ｘｈｏ Ｉ双酶切，接入载体ｐＧＥＸ４Ｔ一３或ｐＥＴ．２８ａ
１材料与方法
１．１实验动物与饲养条件 ＳＰＦ级４周龄ＳＤ雌性大鼠，体质量４５±５
ｇ，
（＋）质粒，构建重组表达质粒，经ＤＮＡ序列测定， 核实构建质粒的序列及阅读框正确。 测序正确的重组表达质粒（ｐＧＥＸ４Ｔ一３一ｒＦＳＨＲ— ＥＣＤ和ｐＥＴ一２８ａ（＋）一ｒＦＳＨＲ—ＥＣＤ）转化大肠杆菌ＤＥ３
日，即４２日龄进行，改用不完全弗氏佐剂，抗原剂量
为２００ ｍｇ蛋白；第３次免疫于第２次免疫后第１０日， ５２日龄进行，佐剂和剂量同２次免疫。
１．５
的卵丘复合体经三次洗涤（洗涤液：体积分数０．０１％
ＴｒｉｔｏｎＸ．１００的ＰＢＳ）后，转移至２００ ｍｌ封闭液（体积分 数０．３％ＢＳＡ、１５０ ｍｍｏｌ／Ｌ甘氨酸的ＰＢＳ）中，在３７℃ 封闭４０ｍｉｎ；然后加入２００ｍｌ用封闭液按１：５０稀释
大的血清稀释倍数。
１．６
白ＫＬＨ连接作为免疫原，与ＢＳＡ连接作为检测抗原。
１．４
ＳＤ大鼠免疫程序
取雌性ＳＤ大鼠，于２８日龄进行初次免疫。
ｒＦＳＨＲ主动免疫大鼠血清抗体对卵母细胞一卵
丘复合体ＦＳＨＲ的识别 颈椎脱臼法处死５周龄的雌性ＳＤ大鼠，取出
将抗原用生理盐水稀释，与等体积的佐剂混合， 充分乳化，注射体积为每只３００ ｍｌ，腹部皮下多
液。加入６×上样缓冲液，于沸水中煮５ ｍｉｎ，离心 去除沉淀物。
利用制备电泳，自包涵体裂解液分离重组蛋 白。将经０．２５ ｍｏｌ／Ｌ的ＫＣｌ浸染显示的蛋白条带切 下后装入处理好的透析袋中，加入６ ｍｌ生理盐水， 置于ＤＮＡ电泳槽中，以０．１×蛋白电泳缓冲液电 泳，恒定电压１ ００ Ｖ，电泳约３ ｈ，以游离重组
ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ
ＨＳＬＰＮＨ２１９。为了下一步免疫，多肽片段在合成时在 氨基末端或羧基末端加入甲硫氨酸（含一ＳＨ）。各肽段
委托北京康为世纪生物科技有限公司合成，与载体蛋
用酶标仪ＥＬｘ．８００（ＢＩＯ—ＴＥＫ
Ｉｎｃ．）测定
Ａａｓｏ值，以计算抗体滴度。将抗体滴度定义为实验 组和阴性对照组（未免疫血清）光吸收比值≥２．１时最
ＴＭＢ，和１０
ｍｌ
３０％Ｈ２０２，混匀
具有免疫原性的３条肽段：（１）Ｃ一】７ＤＳＫｖＴＥＩＰＴＤＬ２７： （２）１８２ＮＬＳＤＮＮＮＬＥＥＬＰＮｌ９４＿Ｃ；（３）Ｃ－２０７ＤＩＳＲＴＫＶ．
即刻使用），再置于湿盒中，于３７℃温育２０ ｒａｉｎ。每 ？ＬＤＩ：Ｉ
５０
ｍｌ反应中止液，即２ ｍｏｌ／Ｌ硫酸终止反应。
ｍｍｏｌ／Ｌ