实验4肠道杆菌——【医学微生物学精品讲义】

－
+
+
－
－/+
++
+
+
铁质双糖琼脂基上各种肠道杆菌的生长情况 斜面 + － － － －
底部 + － + + +
H2S
初步鉴定
－
非病原菌
－
非病原菌
+/－
副伤寒杆菌及其他沙门氏菌
+
伤寒杆菌
－
痢疾杆菌
肠道杆菌在KI培养基上的培养特性
生化反应2——Indol实验
Indol实验
血清学鉴定1一玻片凝集
(一)实验目的与原理 (二)实验材料 1、抗体1:10稀释的痢疾杆菌诊断血清。 2、抗原:待检病原菌24小时斜面培养物。 3、其它:生理盐水、载玻片、接种环等 (三)实验方法
• 6）加入抗原 第1排各管加伤寒杆菌H抗原0.5ml；
•
第2排各管加伤寒杆菌O抗原0.5ml；
•
第3排各管加甲型伤寒杆(A)菌抗原0.5ml；
•
第4排各管加乙型伤寒杆菌(B)抗原0.5ml；
•
第5排各管加丙型伤寒杆菌(C)抗原0.5ml。
• 此时各管的病人血清稀释度又增加一倍，依次为1:40， 1:80，1:160,1：320，1:640，每管总量1.0ml。
动力检测
常见肠道杆菌的生化反应鉴别表
菌名
葡萄 糖
甘 露 醇
乳 糖
靛 基 质
甲基
VP
枸椽
硫化
尿素
动
红
试验
酸盐
氢
分解
力
福氏志贺菌 伤寒沙门菌
+
+
－
－ /+
+
－
－
－
－
－
+
+
－
－
+
－
－/+
+
－
+
乙型副伤寒沙门菌
⊕
⊕
－
－
+
－
－
++
－
+
大肠杆菌
⊕
⊕
⊕
+
+
－
－
－
－
+
产气杆菌
⊕
⊕
⊕
－
－
+
+
－
－
+
普通变形杆菌
⊕
－
血清学鉴定2一试管凝集
• Widal实验 (一)实验目的与原理 (二)实验材料 (三)实验方法
• 1）取小试管30支，于试管架上排成5排，每排6支。 并分别标记血清稀释度及种类于试管上。
• 2）每支试管中分别加入生理盐水0.5ml。 • 3）另取一支洁净中试管，先加入生理盐2.7ml，再 加入病人血清0.3ml，吸吹三次充分混匀，此时血清稀 释倍数为1:10。 • 4）吸取1:10稀释血清2.5ml分别加入各排第1管中， 每管0.5ml。 • 5）于第1排第1管内用1ml吸管吸吹三次充分混匀， 再吸出0.5ml到第2管作等倍稀释，并依次类推直至第5 管为止。再从第5管吸出0.5ml弃去（见图6-4）。后4 排稀释方法相同。每排各管的血清稀释度分别为1:20， 1:40，1:80，1:160,1：320。每排第6管不加血清，各 管0.5ml生理盐水作为抗原对照。
实验四 肠道杆菌
肠道杆菌
• 一、肠道杆菌的形态及染色性 • 二、肠道杆菌的培养特性 • 三、肠道杆菌的生化反应特点 • 四、Widal实验
肠道杆菌的形态及染色片
肠道菌的菌落形态
• EMB • 大肠杆菌：菌落呈紫黑色，有金属光泽。 • 伤寒杆菌\ 痢疾杆菌：菌落无色半透明。 • SS • 大肠杆菌： 大而不透明的红色菌落。 • 伤寒杆菌\ 痢疾杆菌：中等大小淡黄色菌落。
大肠杆菌（EMB培养基）
ห้องสมุดไป่ตู้
肠道致病菌（SS培养基）
粪便标本中致病性肠道杆菌的分离与鉴定
生化反应1——单糖发酵
• 葡萄糖及乳糖发酵 一）实验目的与原理 • 了解糖发酵试验方法 二）实验材料
1、菌种：大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌培养物 2、培养基：乳糖及葡萄糖发酵管 三）实验方法 １、用接种环将大肠杆菌、伤寒杆菌分别各接种于葡 萄糖及乳糖发酵管中（方法同前）。 2、37孵育18~24小时，取出观察结果。
• 7）振荡混匀，置37℃温箱中18～24h，取出观察并记 录结果。
• 8）观察结果：先观察对照管，应无凝集现象。再从各排 第1～5管依次观察，以能见到明显凝集现象的血清最高 稀释度，即为该血清对某种抗原的凝集效价。“H”抗原 呈絮状凝集，“O”抗原呈颗粒状凝集（见图6-5）。分别 记录结果，并进行分析。