C-SKI和SMAD3在大鼠皮肤成纤维细胞辐射性损伤中的变化及意义

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Ski在大鼠脊髓损伤后不同时间的表达变化

Ski在大鼠脊髓损伤后不同时间的表达变化周开升;张海鸿;朱彦东;赵鑫;郭永强;寇江力;汪静;李森;龙在云;伍亚民【摘要】Objective To explore the expression and the changes of ski with time in the injured spinal cord in rats. Methods Sixty adult female Sprague-Dawley rats were randomly divided into sham group (n=30) and injury group (n=30), each group were further divided into 1 week, 2 weeks, 4 weeks, 8 weeks and 12 weeks subgroups, with 6 rats in each subgroup. Spinal cord injury at T10 was established with modi-fied Allen's technique (10 g × 25 mm) in the in jury group. The hindlimbs behavior of rats was rated with Basso-Beattie-Bresnahan (BBB) scores 1 day, 3 days, 1 week, 2 weeks, 4 weeks, 8 weeks and 12 weeks after spinal cord injury. Three rats in each subgroup were stained with HE staining to observe the pathological changes of the spinal cord and the formation of cavity. The other 3 rats were analyzed with im-munofluorescence staining of ski and semi quantitative analysis. Results The BBB scores of each time point were less in the injury group than in the sham group (P<0.05). Necrosis was the major pathological change in the injury groups 1 and 2 weeks after injury;cystic cavity completely formed 4 weeks after injury, with dense scar tissue around it;there was no significant change in the cavity and scar 8 and 12 weeks after injury, however, the adjacent spinal cord was obviously thinner. Ski expressed little in the normal spinal cord, and expressed more and more after injury, peaked at 8 weeks and decreased then. Ski was mainly observed in white matter in the sham group and 12 weeks injurysubgroup, which was in gray matter 2, 4 and 8 weeks after injury. Ski was highly expressed around the cavity in injury center and formed high expression band. Conclusion Ski expresses after spinal cord injury in rats, that may be associated with the activation and prolif-eration of astrocytes and the formation of glial scar.%目的：探究ski在大鼠正常及损伤后脊髓中的表达及随时间变化的规律。

RNAi沉默Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞功能的影响的开题报告

RNAi沉默Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞功能的影
响的开题报告
题目：
RNAi沉默Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞功能的影响
背景：
瘢痕疙瘩是皮肤受损后产生的一种病理性疤痕。

成纤维细胞在该过程中扮演着关键角色。

瘢痕疙瘩的产生伴随着成纤维细胞的异常增生和赘生物质的沉积，进而导致皮肤的结构和功能异常。

Smad3是TGF-β
/Smad信号转导通路中的一员，参与调控成纤维细胞的增殖和分化。

已有研究表明，沉默Smad3可以抑制成纤维细胞增殖和赘生物质的沉积，降低瘢痕疙瘩的发生。

然而，沉默Smad3对成纤维细胞功能的影响仍不清楚。

研究目的：
本研究旨在探究RNAi沉默Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞功能的影响，包括增殖、分化、合成赘生物质的能力等。

研究方法：
1. 体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞；
2. 将成纤维细胞随机分为两组，一组进行Smad3 siRNA干扰，另一组进行对照；
3. 利用qPCR和Western blot等方法鉴定RNAi干扰效果；
4. 采用CCK-8、MTT和流式细胞术等方法评估成纤维细胞增殖和分化能力；
5. 利用ELISA和免疫荧光等方法测定成纤维细胞合成赘生物质的能力。

预期结果：
本研究预计通过RNAi沉默Smad3，可以抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和赘生物质合成等功能，为进一步阐明瘢痕疙瘩发生机制提供一定的实验依据。

辐射剂量与皮肤成纤维细胞氧化损伤及细胞周期变化的关系

１０ｇｍｌ碘化丙啶染色液０５ｍｌ置４℃ 避光０／的．，染３ｎ０ｍｉ，使用流式细胞仪检测，每组检测的样本
量为６个。
肤的成纤维细胞系Ｇ０３（Ｍ６９ＧＭ细胞）作为研究
１３统计学分析：采用Ｓ．２软件进行分析，．ＡＳ６１丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、细胞周期比例
Ｐｅｌｌｘ６系统的ＰｎａＥ基因座在６例鉴定中均为不ｅｔ
符合遗传规律的基因座，提示该基因座的多态性好、非父排除率高，因此在亲子鉴定中采用该基因座能有效提高鉴定的准确性。研究还发现有两例鉴
分型系统才得到排除亲子关系的结论，提示进行亲一
子鉴定尤其是二联体鉴定时，应配备多套遗传标记检测系统以及有能力进行各种遗传标记的检测，对ＳＴＲ基因座存在突变的案例进行准确分析，为亲子鉴定结果的正确判断提供依据。
福建医药杂志２１０１年ｌＯ月第３３卷第５期
ＦｊｎＭｅ，ｔｂｒ２１，１３，．ｕｉｄＪＯｃｏｅ０１Ｖｏ．３Ｎｏ５ａ
・
７７・
遗传规律的案例进行研究，发现３５例存在１个ＳＴＲ基因座突变，在Ｉｅｔｌｒ检测系统１ｄｎｉｅｉｆ５个

大鼠皮肤挫伤后Beclin1和LC3的表达

．
Ａｂｔａｔｓｃ：ＯｂｅｔｅＴｉｓｄｉｅｔｘｍｎｎｅｅｐｅｓｎｏｅｌａｄＬ３ｉｅｓｉｏｔｆｒｒｊｃｉｈｓｔｙａｍｄａｅａｉｇｔｘｒｓｉｆｃｉｌｎＣｔｋｆａａｅｖｕｉｈｏＢｎｎｈｎｒｔｃｎｓｅｉｕｙｎｔｂｅｖｇｔｅｒｃｓｏｔｈｇｓｏｓｔｉｕｒｒｕａＴｅｇｉｃｃｏｔｉｊｒｄａｏｓｒｎｏｅｓｆｕｏａｙｉｒｐｎｅｏｎｒｏａｍ．ｉｓｎｆａｅｉｕｖｎａｉｈｐａｐｎｅｊｙｔｈｒｉｉｎｎｄｇｏｉｏｔｕａａｄａｐｉｔｎｉｅｔｔｎｏｈｓｉｕｉｅｉｔａｗｒａｓｎｅｔａｄｉｓｆｒｍｐｌａｏｎｓｍａｏｆｔｅｐｔｎｒｔｎｅｌｅｏｉｓｇｔ．ａｎｓａｎｃｉｉｉｏｊｙｍｖｒｅ经历时间具有相关性；细胞自噬增强是对损伤的反应。
『键词１挫伤；关自噬；ｅｌｌＬ３免疫组化Ｂｃｉ；Ｃ：ｎ
『图分类号１Ｄ７５１中Ｆ９．
『文献标识码】『章编号】１ｏ — ６９２０）１０ｌ－３Ａ文０４５１（０７０ — ０ｌ０
Ｌ３ａｔｅｉｕｉｆｈｔｋｎａｄｆｒｎｐｓｔｕａｉｔｓＲｓｌｘｒｓｎｏｅｌａｄＬ３ｉＣｔｈｊｒｓｅｏｔｅｒｉｔｉｅｔｔｒｍｔｍｅ．ｅｕｔＥｐｅｉｆｃｎｎＣｎｙｔａｓｅ－ａｏｃｉｓｓｏＢｉｌｎｎｒｌｒｋｎｏｍｄａｌａｅｊｒａｔｉｄａａｖｒｗｌｖｌｂｔｅｖｌｔｔｄｔｅｅａｏｔｉｒｍｅｉｅｔｉｕｙｍｉａｅｔｅｌｅｍａａｓｉｔｙｆｒｎｎｎｙｏｅ，ｕｔｉｌｅｓｒｌｔ６ｒｅａｅｏｖｅｈｈｕｓａｅｊｒａｄｓｏｅｎｒａｉｇｓｏｇｅｐｅｓｎａｐｓｉｕｉｅｏａ。ｄｙ５ａｄｄｙ７ｏｒｆｒｉｕｎｈｗｄｉｃｅｓｔｎｘｒｓｏｔｏｔｎｒｔｆｙ３ｔｎｙｎｒｉｊｙｍｄａａ．ｎ

反义Smad3阻断TGF-β1信号转导对大鼠BMSC分化成平滑肌样细胞的影响

ｖａｈＴ－ｌＳｄｐｔｗａＣＮＹＣＩｎｗｉＨＥｉｔｅＧＦｐ／ｍａ３ａｈｙＨＥｉＡＷｅ —ｅ，ＳＮＧＪｎ，ｉ．ＤｅａｔｎｏＧｒｔｃ，ＴｅｎｈｅｐｅｇｐｒｍｅｔｆｅｉｒｓｈＮｉｔＰｏｌ＇ａｉｓ
ＨｓｉｌＳｈｏＭｅｉｎ，Ｓａｇａａｔｎｎｖｒｉ，Ｓａｇａ００１ｈｎｏｐｔ，ｃｏｌａｆｏｄｃｅｈｎｈｉｉｏｏｇＵｉｓｙｈｎｈｉ０１，ＣｉｉＪｅｔ２ａ
ｅｐｅｓｏｓｏｆｍｅｏｅｍａｒｗｓｎｈｍａｅｃｌＢＳｘｒｓｉｎｗａｎｒｄｉｂｎｒｏｍｅｅｃｙｌｔｍｅｌ（ＭＣ）ｂ — ＣＲｎｃｉｎｓｙＲＴＰａｄｉｍｍｕｏｙｏｈｍｉｔｎｃｔｃｅｓｙ．ＢＭＳｒＣｗａｉｉｅｔｈｅｒｕｓｎｎｔａｓｅｔｄｇｏｐｅｐｒｎａｒｕ（ＭＳｒｎｆｃｅｔｎｉｎｅＳｄｄｓｄｖｄｄｉｏｔｒｅｇｏｐ：ｏ — ｎｆｃｅｒｕ，ｘｅｉｔｌｏｐＢＣｔａｓｅｔｄｗｉａｔｅｓｍａ３ａ — ｎｒｍｅｇｈｓ
ＡｎｔｓｎｓｍａｌｃｈｅｄｉｅｅｉｉｆｒｔｂｏａｒｏｍｅｅｈｙｉｅｅＳｄ３ｂｏｋｓｔｆｒｎｔａｔｏｎｏａｎｅｍｒｗｓｎｃｍｌｔｍｅｌｉｏｓｏｏｈｍｕｓｌ－ｋｅｃｌａｅｃｌｓｎｔｍｔｃｅＨｅｌ
组；＿均予１ｇｍＬቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ浓度的ＴＦ１诱导１Ｗ。通过免疫细胞化学和实时定量ＰＲ比较反义Ｓｄ一组０ｎ／Ｇ一１３Ｃｍａ３干预后各组

氟伐他汀对大鼠角膜碱烧伤后Smad-3表达的影响

通讯作者：杨燕宁（Ｅｍａ￣ｌ：叩ｈｙｙｎ＠１６３．ｔｏｍ）
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３６６・
临床眼科杂志２０１４年第２２卷第４期
ＪｏｕｎａｒｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＯｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，２０１４，Ｖ０１．２２，Ｎｏ．４
ｃｏｎｅｒａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａ／ｎｉｎｇｓｈｏｗｄｅｔｈａｔｈｅｔｘｐｅｒｓｓｅｉｏｎｏｆＳｍａｄ－３Ｗ８．８ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｉｎｌｆｕｖａｓｔａｔｉｎｔｒｅａｔｄｅｒａｔｓ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＦｌｕｖａｓｔａｉｎｆＣｎａｒｅｄｕｃｅｈｅｔｓｅｖｅｒｉｔｙｏｆｏｒｃｎｅｌａｎｅｏｖａｓｅｕｌａｒｉｚａｔｉｎ。ａｏｎｄｈｅｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｍａｙｔｒｅ＿ｌａｔｅｄｏｔｔｈｅｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｆｏＳｍａｄ－３．
来减轻大鼠角膜碱烧伤后新生血管的生成。
氟伐他汀能通过下调Ｓｍａｄ－３的表达，
【关键词】氟伐他汀；角膜；碱烧伤；Ｓｍａｄ－３

sd大鼠放射性脊髓损伤后形态学变化及凋亡表达

论著ＳＤ大鼠放射性脊髓损伤后形态学变化及凋亡表达佟旭㊀徐倩倩㊀张拓㊀魏雪莲㊀车彦川㊀牟海军㊀李京㊀张娜ʌ摘要ɔ㊀目的㊀观察大剂量电子线放射治疗对ＳＤ大鼠脊髓损伤及其凋亡的影响ꎮ方法㊀将３０只ＳＤ大鼠随机分为对照组和实验组两组ꎬ每组各１５只ꎮ实验组采用５ＭｅＶ电子线照射胸部中段脊髓ꎬ照射剂量为５Ｇｙ/次ꎬ总剂量为４０Ｇｙꎮ照射结束后ꎬ心脏灌注取脊髓组织行ＨＥ染色和透射电镜观察脊髓组织的形态学变化ꎬ免疫组化检测凋亡相关蛋白Ｂａｘ㊁Ｂｃｌ－２和Ｃａｓｐａｓｅ－３的表达ꎬ流式检测其凋亡水平ꎮ结果㊀ＨＥ染色实验组的脊髓白质神经纤维紊乱排列ꎬ部分灰质细胞肿胀㊁破坏ꎬ细胞固缩ꎮ透射电镜结果为髓鞘板层模糊不清㊁粘连ꎮ免疫组化结果显示对照组凋亡基因Ｂｃｌ－２表达量多ꎬ实验组表达的Ｂａｘ和Ｃａｓｐａｓｅ－３阳性细胞增加(Ｐ<０.０５)ꎮ流式凋亡检测表明对照组的细胞凋亡率显著低于实验组(Ｐ<０.０５)ꎮ结论㊀大剂量电子线放射治疗会造成ＳＤ大鼠放射性脊髓损伤ꎬ凋亡相关蛋白在放射性脊髓中过表达ꎬ凋亡率明显增加ꎮʌ关键词ɔ㊀放射治疗ꎻ㊀脊髓损伤ꎻ㊀ＳＤ大鼠ꎻ㊀ｂａｘꎻ㊀ｂｃｌ－２ꎻ㊀ｃａｓｐａｓｅ－３[中图分类号]Ｒ６５１.２㊀[文献标识码]Ａ㊀ＤＯＩ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００２－１２５６.２０１９.２１.００２ＭｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｆｔｅｒｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙｉｎＳＤｒａｔｓ㊀ＴＯＮＧＸｕ.㊀ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙꎬｔｈｅｔｈｉｒｄａｆｆｉｌｉａｔｅｄｈｏｓｐｉｔａｌｏｆＱｉｑｉｈａｒＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＱｉｑｉｈａｒꎬＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇꎬ１６１０００ꎬＣｈｉｎａ.ʌＡｂｓｔｒａｃｔɔ㊀Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｈｉｇｈｄｏｓｅｅｌｅｃｔｒｏｎｂｅａｍｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙｏｎｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎＳＤｒａｔｓ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＴｈｉｒｔｙＳＤｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐꎬｆｉｆｔｅｅｎｒａｔｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ.Ｉｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐꎬ５ＭｅＶｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｗｉｒｅｗａｓｕｓｅｄｔｏｉｌｌｕｍｉｎａｔｅｔｈｅｍｉｄ－ｔｈｏｒａｃｉｃｓｐｉｎａｌｃｏｒｄꎬａｎｄｔｈｅｒａｄｉａｔｉｏｎｄｏｓｅｗａｓ５Ｇｙ/ｔｉｍｅꎬａｎｄｔｈｅｔｏｔａｌｄｏｓｅｗａｓ４０Ｇｙ.ＡｆｔｅｒｔｈｅｅｎｄｏｆｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎꎬｔｈｅｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｏｒＨＥｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｔｈｅｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｔｉｓｓｕｅｓ.Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓＢａｘꎬｂｃｌ－２ａｎｄｃａｓｐａｓｅ－３ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬａｎｄｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ＨＥｓｔａｉｎｉｎｇｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｉｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｔｈｅｗｈｉｔｅｍａｔｔｅｒｎｅｒｖｅｆｉｂｅｒｓｏｆｔｈｅｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｗｅｒｅａｒｒａｎｇｅｄｉｎｄｉｓｏｒｄｅｒꎬａｎｄｓｏｍｅｇｒａｙｍａｔｔｅｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｗｏｌｌｅｎꎬｄａｍａｇｅｄａｎｄｐｙｋｎｏｔｉｃ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｌａｍｉｎａｌａｙｅｒｏｆｍｙｅｌｉｎｓｈｅａｔｈｗａｓｂｌｕｒｒｅｄａｎｄａｄｈｅｒｅｄ.Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆａｐｏｐｔｏｔｉｃｇｅｎｅｂｃｌ－２ｗａｓｈｉｇｈｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐꎬｗｈｉｌｅｔｈｅｎｕｍｂｅｒｓｏｆＢａｘａｎｄｃａｓｐａｓｅ－３ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｌｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐ(Ｐ<０.０５).Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｏｆｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐ(Ｐ<０.０５).Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ㊀Ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅｒａｄｉａｔｉｏｎｔｈｅｒａｐｙｍａｙｃａｕｓｅｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙｉｎＳＤｒａｔｓꎬａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓａｒｅｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｔｈｅｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅｓｐｉｎａｌｃｏｒｄꎬａｎｄｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｉｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ.ʌＫｅｙｗｏｒｄｓɔ㊀Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙꎻ㊀Ｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙꎻ㊀ＳＤｒａｔꎻ㊀Ｂａｘꎻ㊀Ｂｃｌ－２ꎻ㊀Ｃａｓｐａｓｅ－３㊀㊀脊髓组织在受到放射线照射和多种因素联合作用下使神经元发生变性㊁坏死等改变而引发放射性脊髓炎ꎬ其发生是由于脊髓的受照射剂量超过了脊髓的耐受量所致ꎬ也是放射治疗中最严重的并发症之一ꎬ是患者在接受根治性放射治疗时存在的固有的潜在性危险ꎮ在临床放射治疗中ꎬ中枢神经系统是主要的剂量限制器官[１]ꎬ其发生放射性损伤可分㊀㊀基金项目:齐齐哈尔医学院科研基金资助项目(ＱＹ２０１３Ｌ－０６)㊀㊀作者单位:１６１０００黑龙江齐齐哈尔ꎬ齐齐哈尔医学院附属第三医院放疗科(佟旭㊁徐倩倩㊁张拓㊁李京㊁张娜)ꎬ齐齐哈尔医学院附属第三医院手术室(魏雪莲)ꎬ齐医创普细胞研究与转化中心(车彦川)ꎬ齐齐哈尔医学院附属第三医院呼吸三科(牟海军)㊀㊀通信作者:佟旭ꎬＥｍａｉｌ:ｃｎ＿ｔｏｎｇｘｕ＠１６３.ｃｏｍ为三类:(１)急性放射反应:症状较轻微可恢复ꎬ临床表现为头痛㊁恶心和体温升高等[２￣３]ꎮ(２)早期迟发反应:全脑或局部照射后出现的一过性㊁自限性疲劳感ꎬ有的患者可出现局部神经症状加重ꎬ继发出现总体神经学症状的加重[４]ꎮ(３)晚期反应:为不可逆反应ꎬ临床表现为运动㊁感觉和神经反射障碍等症状ꎮ轻度可有倦怠㊁精神功能障碍等ꎬ严重者可表现为明显痴呆[５]ꎮ本文着重研究ＳＤ大鼠放射性脊髓损伤后ꎬ长达半年时间ꎬ观察脊髓组织微观形态变化和细胞凋亡变化ꎬ旨在为临床放射治疗中预防放射性脊髓损伤提供重要的理论依据ꎮ一㊁材料与方法１.实验动物分组:在相同条件下饲养健康雌性ＳＤ大鼠３０只(由哈尔滨医科大学实验动物中心提供)ꎬ体重(２００ʃ２０)ｇꎮ采用随机分组法将３０只大鼠分为对照组和实验组两组ꎬ每组各１５只ꎮ２.药品及设备:ＤＭＥＭ/Ｆ１２培养基(ＨｙＣｌｏｎｅ)㊁胎牛血清(杭州四季青)ꎻ胰蛋白酶㊁青霉素㊁链霉素(碧云天)㊁ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ(Ｖａｚｙｍｅ)ꎻＶＳ－１３００Ｌ－Ｕ型净化工作台(苏净安泰)ꎻＣＯ２培养箱(Ｔｈｅｒｍｏ)ꎻ倒置相差显微镜(Ｏｌｙｍｐｕｓ)ꎬ多聚甲醛(上海溶剂厂)ꎬ苏木精(Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ)(上海标本模型厂)ꎬ伊红(Ｅｏｓｉｎ)(北京化工厂)ꎬＥｐｏｎ８１２包埋液(美国ＳＥＲＶＡ公司)ꎬ其中Ｃａｓｐａｓｅ－３一抗㊁ｂａｘ一抗㊁ｂｃｌ－２一抗㊁ＳＰ－９００１㊁ＳＰ－９００２和浓缩型ＤＡＢ试剂盒均购于武汉博士德公司ꎬＢＭＤ－１型模拟定位机(北京医疗器械研究所)ꎬＰｒｉｍｕｓ医用直线加速器(德国西门子公司)ꎬ光学显微镜(日本ＯＬＹＭＰＵＳ)ꎬＫＬＢ－Ｖ型超薄切片机(瑞典ＫＬＢ公司)ꎬＪＥＭ－３０００ＥＸ透射电子显微镜(日本电子株式会社)ꎬ流式细胞仪(ＢＤ)等ꎮ３.照射方法:用自制固定装置固定大鼠ꎬ进行定位并标记照射野中心ꎬ使每次照射范围相同ꎬＰｒｉｍｕｓ医用直线加速器照射大鼠胸段中部ꎬ脊髓深度(１ｃｍ)ꎬ照射野面积为２ｃｍˑ４ｃｍꎬ隔日一次照射ꎬ共８次ꎬ５Ｇｙ/次ꎬ累积剂量为４０Ｇｙꎬ剂量率３００ｃＧｙ/ｍｉｎꎬＳＳＤ＝１００ｃｍꎮ４.形态学观察:总照射剂量结束后ꎬ将根据体重比例配制好的水合氯醛进行腹腔注射麻醉ＳＤ大鼠ꎬ剪开大鼠胸腔和右心耳ꎬ从左心室进行插管ꎬ注射用生理盐水进行心室灌注㊁冲洗ꎬ灌注时应先快后慢ꎬ待右心耳流出清亮的灌洗液后ꎬ用３００ｍｌ４％多聚甲醛冲洗ꎬ冲洗时间为３０ｍｉｎꎮ灌注过程中可观察到ＳＤ大鼠四肢及尾部不断颤动ꎬ直至变硬停止ꎮ沿标记切口逐层打开ꎬ充分暴露脊髓组织ꎬ取损伤节段上下２ｃｍ左右的脊髓组织ꎬ分成两段约１ｍｍ３的组织块ꎬ上段固定于４％多聚甲醛溶液中ꎬ下段固定于２.５％戊二醛溶液中ꎮ固定后的上段脊髓组织ꎬ经乙醇脱水ꎬ二甲苯透明和石蜡包埋后ꎬ切成５~１０μｍ的薄片ꎬ进行ＨＥ染色ꎬ光镜观察ꎮ固定后的下段脊髓组织ꎬ依次进行１％锇酸行双固定ꎬ磷酸缓冲液清洗ꎬ乙醇脱水ꎬＥｐｏｎ８１２包埋液包埋后ꎬ制成约ｌ０ｎｍ半薄切片ꎬ再经甲苯胺蓝染色ꎬ光镜下定位ꎬ超薄切片ꎬ铀一铅盐双染色ꎬ透射电镜下观察ꎮ５.免疫组化检测:取材同ＨＥ染色ꎬ用ＳＡＢＣ法和ＤＡＢ显色进行如下操作:(ＡＢＣ法)一抗为１ʒ１００的ｃａｓｐａｓｅ－３㊁ｂａｘ和ｂｃｌ－２工作液ꎻ二抗分别为生物素标记的山羊抗兔及山羊抗小鼠ＩｇＧ工作液ꎮＤＡＢ显色剂显色进行镜下控制ꎬ均以细胞中出现棕黄色斑或颗粒为阳性细胞ꎮ随后将所得免疫组织切片在光学显微镜下作定性观察ꎬ每个标本随机选取６个视野(前角㊁后角各３个视野)在４００倍镜下进行观察ꎬ计数棕黄色阳性细胞总数ꎬ将所得数据进行统计学处理ꎮ６.统计学处理:采用ＳＰＳＳ１０.０统计软件进行数据分析ꎬ数据以( ｘʃｓ)表示ꎬ组间比较用ｔ检验ꎬＰ<０.０５为差异有统计学意义ꎮ二㊁结果１.光镜下观察结果:光镜下观察两组ＨＥ染色的脊髓形态学变化ꎮ对照组可见正常脊髓结构ꎬ灰质内神经元细胞核完整ꎬ尼氏体数量充足ꎬ血管壁形态清晰完全ꎬ髓神经纤维分布在白质内ꎬ结缔组织排列紧凑(图１)ꎮ实验组可见脊髓结构中有凌乱的神经纤维分布在白质内ꎬ细胞坏死㊁肿胀发生在部分白质内ꎬ部分神经元尼氏体数量减少ꎬ神经胶质细胞发生核固缩(图２)ꎮ２.电镜观察各组脊髓组织:电镜下观察两组脊髓超微组织结构变化ꎬ可见对照组脊髓髓鞘结构排列紧密有序ꎬ少突胶质细胞颜色正常ꎬ突触间隙和突触小泡正常ꎬ无细胞固缩和细胞核密度加大(图３㊁图４)ꎮ实验组髓鞘板层结构水肿粘连ꎬ模糊ꎬ少突胶质细胞周围颜色加深ꎬ突触间隙消失ꎬ突触小泡数量无明显变化ꎬ神经胶质细胞发生核固缩(图５㊁图６)ꎮ３.免疫组化检测结果:观察对照组和实验组脊髓组织中凋亡相关蛋白Ｂａｘ㊁Ｂｃｌ－２和Ｃａｓｐａｓｅ－３阳性细胞表达数量和单位面积(ｍｍ２)中阳性细胞表达的结果ꎮ对照组可见神经细胞中Ｂａｘ和Ｃａｓｐａｓｅ－３很少表达ꎬＢｃｌ－２表达增多ꎻ实验组中Ｂａｘ和Ｃａｓｐａｓｅ－３阳性细胞表达明显上升ꎬＢｃｌ－２表达减少ꎮ实验组与对照组比较ꎬＢａｘ㊁Ｂｃｌ－２和Ｃａｓｐａｓｅ－３阳性细胞过表达(Ｐ<０.０５)ꎮ见图７和表１ꎮ４.流式细胞凋亡检测结果:ＡｎｎｅｘｉｎＶ/ＰＩ法检出的实验组的细胞凋亡率显著高于对照组(Ｐ<０.０５)ꎮ见图８㊁图９ꎮ图１㊀对照组ＨＥ染色㊀㊀㊀㊀图２㊀实验组ＨＥ染色表１㊀Ｂａｘ㊁Ｂｃｌ－２和Ｃａｓｐａｓｅ－３阳性细胞数量( ｘʃｓꎬｎ/ｍｍ２)组别ＢａｘＢｃｌ－２Ｃａｓｐａｓｅ－３对照组(ｎ＝１５)４.３００ʃ１.５７１０.７５０ʃ３.７６∗３.０００ʃ１.０６实验组(ｎ＝１５)１３.０００ʃ１.００∗３.４６８ʃ１.２５９ꎬ８００ʃ４.６５∗㊀㊀注:与对照组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５图３㊀对照组脊髓组织的电镜观察㊀图４㊀对照组脊髓组织的电镜观察图５㊀实验组脊髓组织的电镜观察㊀图６㊀实验组脊髓组织的电镜观察图７㊀对照组和实验组Ｂａｘ㊁Ｂｃｌ－２和Ｃａｓｐａｓｅ－３图８㊀对照组细胞凋亡图㊀㊀㊀图９㊀实验组细胞凋亡图㊀㊀讨论㊀肿瘤放疗中后续并发症包括放射性脊髓损伤等ꎮ[６]以下三方面原因引起放射性脊髓损伤:(１)脊髓组织被外照射直接损伤ꎮ(２)放射损伤引起脊髓内动脉血管内皮缺血性改变ꎬ缺血性坏死ꎬ静脉闭塞由静脉内皮损伤导致ꎬ使局部坏死㊁出血㊁渗液等ꎮ(３)放射损伤使机体产生变态反应ꎮ截止到目前各类研究表明ꎬ脊髓白质脱髓鞘及软化(坏死)由放射性脊髓损伤引起[７]ꎮ白质损伤包括出血性坏死㊁凝固性或液化性坏死㊁有机物沉积㊁胶质瘫痕形成㊁细胞间水肿㊁单束及多束神经纤维脱髓鞘等ꎮ血管损伤包括梗塞及出血㊁纤维蛋白样坏死㊁血管通透性升高㊁血管周围纤维化及炎性改变㊁透明变性和毛细血管扩张等ꎮ而白质脱髓鞘及坏死㊁血管损伤被认为是人类放射性脊髓损伤特征性病理之一ꎮ本实验采用了大剂量分割照射脊髓的方法ꎬ实验组光镜下可见:神经纤维在白质内排列凌乱ꎬ部分细胞出现破裂㊁肿大㊁浸润炎细胞ꎬ部分见神经元尼氏体数量减少ꎬ神经胶质细胞发生固缩ꎮ电镜下观察可见:髓鞘的板层结构模糊不清㊁粘连㊁膨大㊁明显水肿ꎻ改变细胞器空泡变性ꎻ神经胶质细胞核固缩ꎮ与Ｓｃｈｕｔｈｅｉｓｓ[８]报道的实验结果保持一致ꎮ目前ꎬ急性外伤性脊髓损伤中凋亡基因的表达也逐渐受到了重视ꎮＧｅｎｏｖｅｓｅ[９]等进行了大鼠脊髓外伤的实验ꎬ实验结果表明中性粒细胞凋亡ꎬ细胞浸润在脊髓损伤区域出现ꎬ免疫组化结果显示Ｂａｘ表达量增多ꎮＮｅｓｉｃＴａｙｌｏｒ[１０]等进行了大鼠外伤性脊髓损伤的实验ꎬ结果显示测定的Ｂａｘ量表达增多ꎮＢａｒｉｎａｇｅ[１１]认为胶质细胞凋亡是脊髓损伤继发改变的重要组成部分ꎮ之后又有部分学者对脊髓损伤中神经元发生细胞凋亡进行了相关研究[１２]ꎮ赵伟峰[１３]等研究结果表明神经细胞凋亡的重要调节基因是Ｂａｘꎬ而Ｂａｘ数量的增多ꎬ对神经细胞的凋亡过程有很大影响ꎮＢｅａｔｔｉｅ进行的实验表明在脊髓损伤中Ｃａｓｐａｓｅ发挥重要作用ꎮ研究表明ꎬＣａｓｐａｓｅ通路中Ｃａｓｐａｓｅ－３是执行功能的ꎬ而Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ是上游信号ꎬ如果发生变化ꎬ也是间接说明问题ꎬ即可能会发生凋亡ꎬ也有可能信号在下传的过程被抑制ꎬ没有发生凋亡ꎮＬｉｕ和Ｃｉｔｒｏｎ通过实验表明神经细胞凋亡存在于脊髓损伤模型中并伴有Ｃａｓｐａｓｅ－３活性增强和Ｃａｓｐａｓｅ－３表达上调ꎬ神经细胞凋亡的减少可通过抑制Ｃａｓｐａｓｅ活性来实现ꎮ本实验结果表明ꎬ正常脊髓组织中Ｂａｘ及Ｃａｓｐａｓｅ－３的阳性细胞表达数量极少ꎬＢａｘ及Ｃａｓｐａｓｅ－３阳性细胞数量在放射性脊髓损伤后增多ꎮ大量阳性细胞在损伤段灰质神经元和白质胶质细胞均有表达ꎮ因此表明凋亡基因Ｂａｘ㊁Ｂｃｌ－２与Ｃａｓｐａｓｅ－３的过表达与放射性脊髓损伤有关ꎮ尚需进一步研究其作用机理ꎮ参㊀考㊀文㊀献[１]㊀ＳｃｈｌｔｈｅｉｓｓＴＥ.Ｒｅｐａｉｒｏｆｒａｄｉａｔｉｏｎｄａｍａｇｅａｎｄｒａｄｉａｔｉｏｎｉｎｊｕｒｙｔｏｔｈｅｓｐｉｎａｌｃｏｒｄ[Ｊ].ＡｄｖＥｘｐＭｅｄＢｉｏｌꎬ２０１２ꎬ７６０:８９￣１００.[２]㊀ＭｏｏｒｅＡＨꎬＯｌｓｃｈｏｗｋａＪＡꎬＷｉｌｌｉａｍｓＪＰꎬｅｔａｌ.Ｒａｄｉａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｅｄｅｍｃａｉｓｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｎｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ２ａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｍｏｕｓｅｂｒａｉｎ[Ｊ].ＲａｄｉａｔＲｅｓꎬ２００４ꎬ１６１:１５３￣１６０.[３]㊀ＢａｒｔａｎｕｓｚＶꎬＪｅｚｏｖａＤꎬＡｌａｊｕｊｉａｎＢꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｂｌｏｏｄｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｂａｒｒｉｅｒ:ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ[Ｊ].ＡｎｎＮｅｕｒａｌꎬ２００１ꎬ７０(２):１９４－２０６.[４]㊀ＴｏｆｉｌｏｎＰＪꎬＦｉｋｅＪＲ.Ｔｈｅｒａｄｉｏｒｅｓｐｏｎｓｅｏｆｔｈｅｃｅｎｔｒａｌｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍ:Ａｄｙｎａｍｉｃｐｒｏｃｅｓｓ[Ｊ].ＲａｄｉａｔＲｅｓꎬ２０００ꎬ１５３:３５７￣３７０. [５]㊀ＡｔｋｉｎｓｏｎＳＬꎬＬｉＹＱꎬＷｏｎｇＣＳ.Ａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅｉｒｒａｄｉａｔｅｄｒｏｄｅｎｔｓｐｉｎａｌｃｏｒｄ[Ｊ].ＩｎｔＪＲａｄｉａｔＯｎｃｏｌＢｉｏｌＰｈｙｓꎬ２００５ꎬ６２(２):５３５￣５４４. [６]㊀ＫａｍｉｒｙｏＴꎬＬｏｐｅｓＭＢꎬＫａｓｓｅｎＮＦꎬｅｔａｌ.Ｒａｄｉｏｓｕｒｇｅｒｙｉｎｄｕｃｅｄｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｐｒｅｃｅｄｅｎｅｃｒｏｓｉｓｏｆｔｈｅｂｒａｉｎｎｅｕｒｏｐｏｌ[Ｊ].Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙꎬ２００１ꎬ４９(２):４０９￣４１５.[７]㊀ＳｃｈｕｌｔｈｅｉｓｓＴＥꎬＳｔｅｐｈｅｎｓＬＣꎬＪｉａｎｇＧＬꎬｅｔａｌ.Ｒａｄｉａｔｉｏｎｍｙｅｌｏｐａｔｈｙｉｎｐｒｉｍａｔｅ[Ｊ].ＩｎｔＪＲａｄｉａｔＯｎｃｏｌＢｉｏｌＰｈｙｓꎬ１９９０ꎬ１９(４):９３５￣９４０.[８]㊀ＳｃｈｕｌｔｈｅｉｓｓＴＥ.Ｒａｄｉａｔｉｏｎｒｅｓｐｏｎｓｅｏｆｔｈｅｃｅｎｔｅａｌｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍ[Ｊ].ＩｎｔＪＲａｄｉａｔＯｎｃｏｌＢｉｏｌＰｈｙｓꎬ１９９５ꎬ３１:１０９３￣１１０２.[９]㊀ＧｅｎｏｖｅｓｅＴꎬＭａｚｚｏｎＥꎬＣｒｉｓａｆｕｌｌｉＣꎬｅｔａｌ.Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｍｅｌａｔｏｎｉｎａｎｄｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅｏｎｓｅｃｏｎｄａｒｙｉｎｊｕｒｙｉｎａｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍｉｃｅｍｏｄｅｌａｆｔｅｒｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｔｒａｕｍａ[Ｊ].ＪＰｉｎｅａｌＲｅｓꎬ２００７ꎬ４３(２):１４０￣１５３.[１０]㊀Ｎｅｓｉｃ－ＴａｙｌｏｒＯꎬＣｉｔｔｅｌｌｙＤꎬＹｅＺꎬｅｔａｌ.ＥｘｏｇｅｎｏｕｓＢｃｌ－ｘｌｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓｐａｒｅｓｎｅｕｒｏｎｓａｆｔｅｒｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙ[Ｊ].ＪＮｅｕｒｏｓｃｉＲｅｓꎬ２００５ꎬ７９(５):６２８￣６３７.[１１]㊀ＢａｒｉｎａｇｅＭ.Ｎｅｗｖｉｅｗｏｆｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ１９９６ꎬ２７４:１４６６￣１４７３.[１２]㊀ＣｒｏｗｅＭＪꎬＢｒｅｓｎａｈａｎＪＣꎬＳｈｕｍａｎＳＬꎬｅｔａｌ.Ａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｄｅｌａｙｅｄｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｆｔｅｒｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｓａｎｄｍｏｎｋｅｙｓ[Ｊ].ＮａｔＭｅｄꎬ１９９７ꎬ３(１):７３￣７６.[１３]㊀赵伟峰ꎬ任先军ꎬ邓天琼ꎬ等.兔颈髓急性牵张性损伤后神经细胞凋亡相关蛋白表达的意义[Ｊ].中国矫形外科杂志ꎬ２００４ꎬ１２(１０):７５３￣７５５.(收稿日期:２０１９￣０５￣２７)(本文编辑:卜明)皮肤癌组织ＩＬ－１０和ＣＣＬ２７蛋白表达水平与复发的关系分析许丹丹ʌ摘要ɔ㊀目的㊀探讨皮肤癌组织白细胞介素１０(ＩＬ－１０)和趋化因子２７(ＣＣＬ２７)蛋白表达水平与复发的关系ꎮ方法㊀选取２０１４年１月２０１６年６月本院收治的皮肤癌患者８８例为研究组ꎬ均采用氨基酮戊酸(ＡＬＡ)光动力照射治疗并随访至少１年ꎮ评价疗效并统计随访期间复发情况ꎮ以同期在本院进行整形或美容而切下正常皮肤３０例志愿者作为对照组ꎬ采用免疫组化法检测比较研究组皮肤癌组织和对照组正常皮肤组织ＩＬ－１０和ＣＣＬ２７蛋白表达阳性率ꎮ分析研究组患者皮肤癌组织ＩＬ－１０和ＣＣＬ２７蛋白表达水平与疗效和复发的关系ꎮ结果㊀研究组治疗有效率和复发率分别为９０.９１％(８０/８８)和１４.７７％(１３/８８)ꎮ与对照组正常皮肤比较ꎬ研究组皮肤癌组织ＩＬ－１０蛋白阳性表达率升高而ＣＣＬ２７蛋白阳性表达率降低(Ｐ<０.０５)ꎮ与研究组治疗有效患者比较ꎬ治疗无效患者皮肤癌组织ＩＬ－１０蛋白阳性表达率升高而ＣＣＬ２７蛋白阳性表达率降低(Ｐ<０.０５)ꎮ与研究组无复发患者比较ꎬ复发患者皮肤癌组织ＩＬ－１０蛋白阳性表达率升高而ＣＣＬ２７蛋白阳性表达率降低(Ｐ<０.０５)ꎮＳｐｅａｒｍａｎ相关分析结果显示ꎬ皮肤癌组织ＩＬ－１０和ＣＣＬ２７蛋白阳性表达率与其治疗有效率和复发率均密切相关(ＩＬ－１０:ｒ＝－０.８２６ꎬ０.８８５ꎻＣＣＬ２７:ｒ＝０.８３６ꎬ－０.８９８ꎬＰ<０.０５)ꎮ结论㊀皮肤癌组织ＩＬ－１０和ＣＣＬ２７蛋白表达水平与其疗效及复发均密切相关ꎬ可能作为其疗效和复发评估参考指标ꎮʌ关键词ɔ㊀皮肤癌ꎻ㊀白细胞介素１０ꎻ㊀趋化因子２７ꎻ㊀复发[中图分类号]Ｒ７３９.５㊀[文献标识码]Ａ㊀ＤＯＩ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００２－１２５６.２０１９.２１.００３㊀㊀皮肤癌的发生与紫外线照射密切相关ꎬ在临床常见ꎬ可发生于全身多个易暴露部位ꎬ治疗后可出现复发等不良预后状况[１￣２]ꎮ改善皮肤癌疗效和预后是目前急需解决问题ꎮ恶性肿瘤的发生发展与多种因子相关ꎬ其中白细胞介素１０(ＩＬ－１０)被证实与多种恶性肿瘤密切相关[３]ꎮ趋化因子亦被证实与恶性肿瘤相关[４]ꎮ本研究检测了皮肤癌患者癌组织ＩＬ－１０和趋化因子２７(ＣＣＬ２７)蛋白表达水平ꎬ并分析了其㊀㊀作者单位:４７５０００河南开封ꎬ河南大学淮河医院皮肤科与疗效和复发的关系ꎬ旨在为皮肤癌疗效和预后的评估干预提供指导ꎬ现报道如下ꎮ一㊁资料与方法１.一般资料:选取２０１４年１月２０１６年６月本院收治的皮肤癌患者８８例为研究组ꎮ纳入标准:患者均经组织病理检查确诊为皮肤癌ꎬ未经激光㊁冷冻或皮肤外用药物处理ꎬ性别不限ꎬ年龄１８岁~８０岁ꎬ无远处转移ꎮ排除标准:排除合并免疫系统疾病㊁肝肾功能障碍㊁湿疹㊁真菌感染等患者ꎮ研究组患者均符合纳入标准且无患者排除ꎬ８８例均为原发性鳞状。

培养硬皮病皮损成纤维细胞Smad3 DNA结合活性的研究

［要］目的：讨培养硬皮病成纤维细胞中磷酸化转录因子Ｓａ３的表达和转录因子Ｓａ３的摘探ｍｄｍｄ
ＤＡ结合活性和表达量。方法：Ｎ４例硬皮病患者和４例正常人对照进入本研究。采用ＷｅｔｒｌｔｓｎＢｏ检ｅ
８３
论著・
培养硬皮病皮损成纤维细胞Ｓａ３ＤＡｍｄＮ结合活性的研究
唐绍生，郑学毅，许剑荣，孙广政，曾仁山
（东省广州市第一人民医院皮肤科，东广广广州５０８）１１０
［ｓａｔＯｊｃｉｅＴｔｄｅａｏｎｎＮ —ｂｎｉｇａｔｉｆｒｎｃｐｉｃｒＡｂｔｃ］ｒｂｅｔ：ｏｓｙｔｍｕｔｄＤＡｉｄｎｃｉｔｏａｓｒｔｎｆｔｖｕｈａｖｙｔｉｏａｏ
ＳｄｎｃｌｒｄｆｒｂａｔｄｒｖｄｆｍａｉｎｓｗｔｃｅｏｅｍａＭｅｈｄ：ｕｔｒｄｆｒ — ｍａ３ｉｕｔｅｂｏｌｓｓｅｉｅｒｕｉｏｐｔｔｉｓｌｒｄｒ．ｅｈｔｏｓＣｌｅｉｏｕｂ
ｗｏｅｃｌｌｓｔｓｕｌａｘｒｃｓｗｅｅｅａｎｄｂｌｃｒｐｏｅｉｂｌｙｓｉｓａｓｆｒｒ — ｈｌｅｌｙａｅ；ｎｃｅｒｅｔｔｒｘｍｉｅｙｅｅｔｈｒｔｍｏｉｔｈｆａｓｙｏｅａｏｃｉｔ
ｂａｔｒｍｔｏｅｍ

鼠胚胎成纤维细胞三维培养修复大鼠全层皮肤缺损的效果及其机制

鼠胚胎成纤维细胞三维培养修复大鼠全层皮肤缺损的效果及其机制目的观察鼠胚胎成纤维细胞三维培养修复大鼠全层皮肤缺损的效果，并对其机制进行分析。

方法采用组织块法培养鼠胚胎成纤维细胞，将鼠尾胶原溶液和以血清重悬的鼠胚胎成纤维细胞溶液混合后形成凝胶构建组织工程皮肤，移植于大鼠背部全层皮肤缺损创面。

实验组30只全层皮肤缺损大鼠采用组织工程皮肤进行修复。

对照组30只全层皮肤缺损大鼠不做任何处理。

两组创面分别进行HE染色和免疫组织化学染色，计算微血管密度，观察其愈合过程。

结果术后20 d实验组用组织工程皮肤覆盖的大鼠背部创面已完全愈合，新生上皮外观与结构和正常皮肤相似；对照组创面仍有痂皮覆盖，去除痂皮可见肉芽组织红润致密，创面周围新生上皮呈粉红色，边缘锐利皱缩。

实验组创面组织中CD31表达及微血管密度均明显高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。

结论鼠胚胎成纤维细胞三维培养对动物皮肤全层缺损的修复有很好的效果，在修复皮肤损伤方面具有良好的临床应用前景。

[Abstract] Objective To investigate the effect and mechanism of three dimensional culture of rat embryonic fibroblasts in the treatment of full-thickness skin defect in rats. Methods Full-thickness skin wound was created on the back of rats. Tissue block method was used to culture rat embryonic fibroblast cells. The rat embryonic fibroblast cells resuspended in serum were mixed with tail collagen solution to structure tissue engineered skin. In the experimental group，full thickness skin defect rats （n=30）were transplanted with tissue engineered skin in the wound area. In the control group，full-thickness skin defect rats （n=30）were not given any special treatment. The microvascular density was calculated and the healing process was observed by HE staining and immunohistochemistry method. Results 20 d after operation，in the experimental group the wound areas transplanted with tissue engineering skin on the back of rat were completely healed；the appearances and structures of newborn epithelium were similar to the normal skin. The wounds of the control group did not show healing and were covered with scar；removing scab skin visibled granulation tissues were ruddy and compact；there were pink wounds around new epithelium，and shrinkage around tissue edges. In the experimental group，and the expression of CD31 and microvessel density in wound tissues were significantly higher than those in the control group （P < 0.05）. Conclusion Three dimensional culture of rat embryonic fibroblast cells has good curative effect for repairing the whole layer of skin defect in rats. This culture method may have a good clinical application prospects in the repair of skin damage.[Key words] Embryo fibroblast；Three-dimensional culture；Skin defect；Microvessel density皮肤是体内各种组织和器官免受物理性、机械性、化学性和病原微生物性的侵袭的屏障。

慢病毒介导的Ski基因敲减抑制大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕的形成并促进轴突再生和功能恢复

慢病毒介导的Ski基因敲减抑制大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕的形成并促进轴突再生和功能恢复慢病毒介导的Ski基因敲减抑制大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕的形成并促进轴突再生和功能恢复脊髓损伤是一种严重的神经系统损伤，常导致持久性的运动、感觉和自主神经功能障碍。

胶质瘢痕形成是脊髓损伤后的重要病理过程之一，它限制了轴突再生和功能恢复。

因此，寻找方法来抑制胶质瘢痕形成并促进轴突再生和功能恢复，对脊髓损伤的治疗具有重要意义。

在本研究中，我们选择了Ski基因作为目标，使用慢病毒介导技术对大鼠进行Ski基因敲减。

通过构建慢病毒载体携带Ski基因shRNA，我们成功地将该载体注射到大鼠脊髓损伤部位。

通过实时荧光定量PCR和免疫组化染色的方法，我们验证了Ski基因的敲减效果。

我们发现，在Ski基因敲减后的大鼠脊髓损伤部位，形成的胶质瘢痕明显减少。

显微镜下观察到，敲减组大鼠的胶质瘢痕面积较对照组明显减少。

免疫组化染色结果显示，在敲减组大鼠中，星形胶质细胞和坐骨神经鞘脂蛋白（MBP）阳性区域显著增加，而胶质瘢痕相关蛋白GFAP的表达则明显降低。

此外，我们进一步研究了Ski基因敲减对轴突再生和功能恢复的影响。

通过传统的死神染色和轴突标志蛋白免疫组化染色，我们观察到敲减组大鼠中的轴突再生情况明显优于对照组。

而在行为学测试中，敲减组大鼠的步态和行动功能明显改善，与对照组相比差异显著。

本研究的结果表明，慢病毒介导的Ski基因敲减可以抑制大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕的形成，并促进轴突再生和功能恢复。

这种方法提供了一种新的治疗策略，有望在临床应用中帮助脊髓损伤患者实现神经系统功能的恢复。

尽管本研究取得了积极的成果，但仍面临一些挑战。

首先，Ski基因敲减的短期和长期效果有待进一步研究。

其次，Ski基因敲减对于胶质细胞和其他细胞类型的影响还需要深入研究。

此外，临床应用中的安全性和有效性等问题需要进行更多的临床试验和研究。

综上所述，本研究结果表明，慢病毒介导的Ski基因敲减可以抑制大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕的形成，并促进轴突再生和功能恢复。

TGF-β1信号通路负调控因子Ski

㊃综述㊃d o i:10.3969/j.i s s n.1671-8348.2023.12.022T G F-β1信号通路负调控因子S k i/S n o N与肾纤维化的相关性*赵杰1综述,张琳琳2审校(1安徽医科大学第一附属医院中医科232200;2安徽省亳州市中医院肛肠科236800) [摘要]肾纤维化是所有慢性肾脏病的最终通路,转化生长因子β1(T G F-β1)表达增加对其发生发展及预后都有很大影响,而原癌蛋白S k i家族的S k i/S n o N就是这一信号通路的关键负调控因子㊂本文就T G F-β1通路负调节因子的缺失如何加剧肾损害的形成进行了综述,并讨论了恢复S k i/S n o N的表达在改善肾纤维化中的治疗价值,提出了抑制慢性肾脏病T G F-β1过度激活的新方法,并为今后肾纤维化的诊断㊁治疗提供参考㊂[关键词]肾纤维化;信号通路;负调控;S k i/S n o N[中图法分类号] R587.2[文献标识码] A[文章编号]1671-8348(2023)12-1882-05C o r r e l a t i o n b e t w e e n S k i/S n o N,a n e g a t i v e r e g u l a t o r o f T G F-β1s i g n a l i n g p a t h w a y,a n d r e n a l f i b r o s i s*Z HA O J i e1,Z HA N G L i n l i n2(1.D e p a r t m e n t o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e,T h e F i r s t A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f A n h u i M e d i c a lU n i v e r s i t y,H e f e i,A n h u i232200,C h i n a;2.D e p a r t m e n t o f P r o c t o l o g y,B o z h o u H o s p i t a l o fT r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e,H B O z h o u,A n h u i236800,C h i n a)[A b s t r a c t] R e n a l f i b r o s i s i s t h e f i n a l p a t h w a y i n a l l c h r o n i c k i d n e y d i s e a s e s.E l e v a t e d e x p r e s s i o n o f t r a n s f o r m i n g g r o w t h f a c t o rβ1(T G F-β1)i s i n d i s p e n s a b l e f o r i t s d e v e l o p m e n t a n d p r o g n o s i s.S k i/S n o N o f t h e p r o t o-o n c o p r o t e i n S k i f a m i l y i s a k e y n e g a t i v e r e g u l a t o r o f t h i s s i g n a l i n g p a t h w a y.T h i s r e v i e w a d d r e s s e s h o w t h e l o s s o f t h e s e n e g a t i v e r e g u l a t o r s o f t h e T G F-β1p a t h w a y e x a c e r b a t e s t h e r e n a l l e s i o n f o r m a t i o n a n d d i s c u s-s e s t h e t h e r a p e u t i c v a l u e o f r e s t o r i n g t h e e x p r e s s i o n o f S k i/S n o N i n a m e l i o r a t i n g f i b r o s i s.T h u s,a n e w m e t h o d t o i n h i b i t T G F-β1o v e r a c t i v a t i o n i n c h r o n i c k i d n e y i s p r o p o s e d a n d i t p r o v i d e s a r e f e r e n c e f o r f u t u r e d i a g n o s i s a n d t r e a t m e n t o f r e n a l f i b r o s i s.[K e y w o r d s]r e n a l f i b r o s i s;s i g n a l i n g p a t h w a y;n e g a t i v e c o n t r o l;S k i/S n o N随着罹患高血压㊁糖尿病等人数的增加,肾脏病的发病率也逐年攀升,据估计目前全球肾脏病患者超过8.5亿人㊂肾脏替代治疗资源匮乏,肾脏纤维化药物治疗手段有限,都让慢性肾脏病(c h r o n i c k i d n e y d i s e a s e,C K D)相关的全球医疗卫生形势更加严峻[1-2]㊂转化生长因子β1(t r a n s f o r m i n g g r o w t h f a c t o r β1,T G F-β1)是目前公认最强的促纤维化因子之一,而抑制该信号通路的表达是减慢甚至终止肾纤维化进展的有效药物靶点㊂S k i是从感染禽类S l o a n-K e t t e r-i n g病毒内分离得到的,能对T G F-β1通路起到负性调控作用㊂因此,深入研究S k i在肾纤维化中的作用机制,将有助于开发药物作用新靶点,为肾纤维化的防治提供一个新的治疗思路㊂1 T G F-β1在肾纤维化及C K D中的作用糖尿病㊁高血压㊁缺血再灌注损伤㊁肾毒性药物以及梗阻等因素是造成肾小管上皮细胞损害的主要因素,以细胞分化不良㊁细胞周期G2期阻滞㊁甚或凋亡的发生为主要特征[3]㊂持续的损伤因素也会导致浸润的炎性细胞及休止期的存活上皮细胞分泌促炎/促纤维化因子如T G F-β1等,刺激固有间质细胞和外周血管内皮细胞的转化㊂肾外伤及后续的缺氧会引起小管外周血管的丢失和肾实质骨架的破坏,诱发肾脏细胞外基质的堆积,从而具备了进展性C K D的主要条件组织纤维化[4]㊂这也是所有C K D的最终共同途径,不可逆地发展为需要肾移植或者透析的终末期肾病,对全球的公共卫生事业造成了巨大的威胁和经济负担㊂T G F-β1是目前研究热度最高的纤维化疾病相关因子,跟人体绝大多数器官纤维化进程密切相关,也是导致C K D恶化的最主要因素[5-8]㊂包括糖尿病㊁高血压㊁梗阻㊁缺血及肾脏纤维化过程中T G F-β1及磷2881重庆医学2023年6月第52卷第12期*基金项目:国家自然科学基金青年项目(81903994)㊂作者简介:赵杰(1988-),副主任医师,博士,主要从事中医药防治慢性病的研究㊂Copyright©博看网. All Rights Reserved.酸化S MA D3的合成/分泌都明显升高[9]㊂肾小管上皮中T G F-β1特异性升高能诱发肾纤维化,也反映了T G F-β1/S MA D3信号通路在C K D发生中的重要性㊂在各种不同的系统模型中都证实T G F-β1的异常激活参与了上皮细胞分化不良㊁细胞周期阻滞㊁纤维细胞生长和基质的合成,从而导致与纤维化疾病的进展密切相关的病理过程的发生[5]㊂2S k i/S n o N对T G F-β1信号通路的负调控T G F-β1信号传导受到多个层次的靶向受体和细胞内介质的调节,原癌蛋白S k i家族的c-S k i/S n o N就是S MA D重要的负调节因子㊂S k i/S n o N是一类具有高度同源性的核内癌蛋白,可以在多种细胞组织中高表达,与各种器官组织纤维化㊁瘢痕的形成㊁肿瘤的发生密切相关㊂S k i在人体中存在着其同源基因c-s k i,家族成员包括S k i㊁S n o N㊁S n o N2㊁S n o I㊁S n o A㊁C O R L-1㊁D A C H1/D a c h1㊁D A C H2/D a c h2㊁F u s s e l-15㊁F u s s e l-18㊁D A F-5㊁D a c h s h u n d和F u s e l㊂S k i/ S n o N通过与S MA D3/4的C末端结合,竞争性抑制其共聚体的形成和磷酸化,在胚胎发生和组织分化过程中对T G F-β1信号传导进行负向调节㊂S k i只与靶基因激活和抑制必需的D N A和转录因子的复合体结合,因此在功能上更像是转录的协同调控因子[10]㊂S k i是S m a d s和G l i3转录因子的有效抑制剂,在小鼠胚胎发育过程中与H D A C s㊁N C o R和m S i n3A相关联㊂S k i蛋白通过与激活S m a d s的竞争结合C R E B蛋白(C B P)区域结合而干扰T G F-β1信号传导㊂S k i也可能通过与小鼠成肌细胞内同源结构域相互作用蛋白激酶2(H I P K2)的相互作用抑制B M P 靶基因的表达,从而下调T G F-β1信号通路[11]㊂转录基因沉默也通过S k i与其他因子的相互作用介导,如P R MT5㊁H D A C3㊁R b㊁M e C P2和M a d,以及与甲状腺激素受体β(T Rβ)的相互作用[12-13]㊂同样,S n o N蛋白也是重要的转录协同调控因子,它与S m a d s结合抑制包括其自身基因S k i l的表达[14]㊂到目前为止,一些基因已被确定为S n o N/S m a d复合体的靶标,包括编码S m a d7㊁S n o N㊁F G F8㊁G S C㊁M I X L1和A F P㊂其他受S n o N调控的基因编码有m i R720㊁m i R274A㊁m i R1274B㊁A D AM12㊁P L S C R1㊁C c d1和p S2[15-16]㊂S k i同时也是一种重要的共激活因子,在其与核因子1(N F1)家族转录因子的关联被证明后得到广泛关注㊂比如,S k i通过β-c a t e n i n信号转导促进M i t f 和N r-C AM基因在黑素瘤中的表达㊂S k i还通过与特定转录因子(如M y o D㊁S i x1和E y a3)形成复合物,促进肌成基因的表达和肌生成㊂S n o N还可以作为S m a d s和其他转录因子的共激活因子,但这种能力取决于特定的靶基因;例如,S n o N是雌激素受体(E R)的共激活因子,可增强乳腺癌细胞中的雌激素信号通路[17]㊂然而,S k i和S n o N调控基因转录的机制复杂,仍需要更多的研究来进一步揭示㊂相应的,T G F-β1也通过多种机制调控S k i基因的表达:在基础条件下,S n o N/S k i/S m a d4复合物结合并抑制S k i基因启动子;短时间的T G F-β1刺激后, S n o N和S k i蛋白通过蛋白酶体降解;而激活的S m a d2/S m a d4复合物取代了S k i基因启动子上的S n o N/S k i复合物并促进其诱导㊂T G F-β1作用约1.5 h后,S n o N m R N A和蛋白水平均升高,继而形成一个负反馈环,S n o N蛋白与S k i基因启动子结合,抑制自身的表达[14]㊂有趣的是,人类S k i基因也包含1个位于A T G(+1)上游约3.6k b和T R E1上游约1k b处的超增强子;O c t4/S o x2/N a n o g(O S N)转录因子和激活S m a d s的S k i启动子对S k i超增强子的协同调控似乎是维持干细胞多能性所必需的[18]㊂经典T G F-β/ S m a d信号通路与其他信号通路交互作用,从而有效实现其大部分生物学功能,这些信号通路包括W n t㊁N o t c h㊁H i p p o㊁P I3K-A K T㊁P K C㊁MA P K s和J A K-S T A T等㊂S k i和S n o N蛋白表达的调控是这种交互作用的一部分,因此,T G F-β/R-S m a d轴㊁激活素(a c-t i v i n)[19]㊁节点(n o d a l)[20]㊁H G F/C R E B/S p1轴和催乳素(p r o l a c t i n)/S t a t5轴是在特定细胞类型中能够增强S n o N蛋白表达的信号通路㊂许多其他信号也对S n o N蛋白水平有着调控作用,但具体的机制有待进一步研究阐明㊂综上所述,T G F-β与许多其他可能调控S k i/ S n o N蛋白表达和/或丰度的信号通路交互作用;与此同时,S k i和S n o N通过调控反馈环来调控细胞,从而对这些信号通路存在着不同程度的影响㊂3肾纤维化时S k i/S n o N的表达下调基本上所有C K D的进展形式都以肾小球和肾小管间质中细胞外基质堆积为特征㊂肾纤维化是所有C K D的最终通路,以不可逆的组织疤痕造成肾小球和肾小管基质的纤维化为其共同病理特征[21]㊂虽然导致肾纤维化的机制有待阐明,但目前的研究表明, T G F-β1是这一过程的主要调节因子㊂而其下游的S MA D3会将A P C和C d h1募集到S n o N,从而为靶向S n o N的泛素化和降解提供了另一种机制㊂S MA D 与S k i/S n o N结合区域同时也是S MA D2/34共聚体解体的重要部分,如果该部分出现变异,则会对S MA D2/3失去负向调节㊂这也证实了S k i/S n o N与S MA D3及S MA D4结合对于T G F-β1介导的生物学效应是不可或缺的㊂S k i和S n o N各自能够对包括C K D病理模型在内的不同的细胞分化进行调节,从而发挥抗纤维化作用㊂在单侧输尿管梗阻模型中,小管的S k i/S n o N表达和核转录水平下调,但在结扎的肾脏中S k i/S n o N3881重庆医学2023年6月第52卷第12期Copyright©博看网. All Rights Reserved.m R N A转录水平不是增高就是保持不变,也间接证实了在梗阻发生时S k i/S n o N的蛋白酶体降解[22]㊂虽然机制尚未明确,但是研究[23]发现在U U O梗阻模型中S k i/S n o N及S m u r f2的泛素化降解明显高于对照组㊂免疫共沉淀显示S m u r f2可以与S n o N在胞内外形成复合体,而T G F-β1信号通路则能够通过泛素化水解途径下调S k i和S n o N蛋白,类似于梗阻性肾病时的情况,即便在细胞因子的作用下S n o N的m R-N A表达水平增高㊂用MG132抑制剂阻断S n o N降解的时候就可以减轻T G F-β1驱动的α-平滑肌肌动蛋白(α-S MA)和纤连蛋白的表达㊂基因敲除S m u r f2也能统一升高S n o N蛋白水平,抑制T G F-β1靶向基因转录,增加人肾小管上皮细胞对低浓度的T G F-β1刺激的敏感性㊂相反的,S k i和S n o N的过表达,下调了T G F-β1介导的上皮间质转分化(e p i t h e l i a l-t o-m e s e n c h y m a l t r a n s i t i o n,E MT)和促纤维化基因的表达㊂因此,T G F-β1通过诱导S k i/S n o N的转录自我调节,而S m u r f依赖的蛋白水解㊁降解的抑制剂可以拮抗这一作用,导致如肿瘤或者纤维化时T G F-β1信号通路异常㊂糖尿病时S n o N蛋白的缺失加剧了肾纤维化的进展㊂敲除S n o N基因促进了高糖介导的肾小管上皮细胞E MT的发生,而当其异常表达能够减少E MT和纤维化[24-25]㊂T G F-β1/S MA D介导的S m u r f2蛋白上调时能够驱动高糖刺激下的大鼠肾细胞和糖尿病大鼠的S n o N蛋白降解,提示高血糖介导的T G F-β1信号可促进糖尿病肾病过程中S n o N的降解[26-27]㊂在有些糖尿病肾病或者其他原因引起肾病状态下,部分小分子R N A也可以调节S k i和S n o N的降解㊂研究[28]表明,糖尿病肾病和高糖刺激下的H K2细胞中,均可发现m i R-23a升高与S n o N降解有关㊂而当敲除m i R-23a时,S n o N的表达增加,抑制高糖诱导的E MT㊁下调H K2细胞的纤维化反应㊂通过s i R-N A沉默S o n N基因,部分逆转了高糖时m i R-23a下调的保护作用[28]㊂同样的,T G F-β1刺激后,人肾脏上皮细胞的m i R-130a-3p表达增高,与S o n N表达下降有关[29]㊂m i R-130a-3p通过直接与S n o N m R N A 的3U T R结合,能够调节纤维化反应,抑制其转录;而防止S n o N转录的丢失,能够抑制m i R-130a-3p,减轻T G F-β1靶向基因的激活和E MT基因表型的获得[29]㊂这些研究提示小分子R N A介导的S n o N信号不稳定性与其降解密切相关㊂受S MA D3调节的m i R-21下游的T G F-β1放大纤维化效应,而沉默m i R-21减轻了慢性肾脏病[30-31]㊂在S T Z糖尿病大鼠模型中m i R-21的表达增加,与S n o N蛋白水平呈负相关㊂S n o N结合m i R-21启动子,从而阻止其与大鼠上皮细胞中S MA D3结合和转录[32]㊂因此,S k i和S n o N表达的缺失可能有助于m i R-21的诱导,加剧E MT和肾小管功能障碍㊂B M P-7通过阻止S n o N丢失部分抑制T G F-β1信号转导,进而抑制S MA D3与靶基因的结合和随后的纤维化重编程[33]㊂在高糖条件下,将重组B M P-7添加到大鼠小管上皮细胞中,也可以防止S n o N的表达缺失,并可减弱纤维化反应[34]㊂在这种情况下, B M P-7上调S n o N转录㊂尽管相关的机制尚未被阐明,B M P-7可能是通过增强S n o N转录的丰度而不是阻断泛素驱动的机制来抑制S m u r f-2[35-36]㊂总之,依赖于蛋白质降解的(如S m u r f-2)和不依赖于蛋白质降解的途径均可导致S k i和S n o N水平的降低㊂而在肾脏病理过程中,T G F-β1均能够调节其中任何一种来促进S k i/S n o N缺失㊂虽然S k i和S n o N在人类肾脏疾病中的参与程度还不完全清楚,但保证该蛋白的表达似乎是缓解肾脏在T G F-β1过度激活和随后的适应性不良修复的方法㊂4S k i/S n o N是慢性肾脏病治疗新靶点进行性纤维化可能是慢性肾脏病肾小球和肾小管结构破坏的主要驱动力,而抑制中间的主要介质可能会减缓细胞外基质的堆积,从而有效阻止慢性肾脏病的进展㊂T G F-β1是基质合成㊁抑制基质降解和肌成纤维细胞激活的最主要驱动因子,是组织器官纤维化进展的关键㊂为了延缓纤维化进程,人们广泛应用各种生物化学物质来调控T G F-β1信号通路,如各种反义寡核苷酸㊁抗体和激酶抑制剂等㊂但是,由于这一信号通路生物学效应广泛㊁与其他多个通路存在交互作用,单纯的抑制某个因子不仅影响生物体生长发育及各项生理功能,更是存在很多不可预知的毒副作用,这让T G F-β1靶向药物的研制困难重重[37]㊂此外,必须慎重选择T G F-β1通路抑制剂在治疗中的适用范围,由于S m a d s对这些蛋白的稳定性调控的丧失,T G F-β1信号阻断已被证明会导致S k i和S n o N的上调㊂由于S k i和S n o N参与了许多生理过程的内稳态,二者的失控也会引起如纤维化和癌症等疾病的发生㊂肾脏纤维化时S k i/S n o N下降,导致T G F-β1信号过度激活㊂因此,上调S k i和S n o N表达以拮抗T G F-β1促纤维化作用的治疗策略,将有益于纤维化及相关疾病(如糖尿病肾病)的治疗㊂有研究用抑制S k i/S n o N水解酶(如MG132)抑制糖尿病肾病大鼠的纤维化损伤[38]㊂其他研究使用生物碱类,如氧化苦参碱阻断肾小管间质纤维化细胞模型中S n o N的下调[39-40],使用ω-3脂肪酸的处理肺纤维化从而增加了S n o N的表达㊂在组织器官再生研究方面,有学者认为S k i和S n o N的上调可能通过拮抗T G F-β1的抗增殖作用,从而有望促进组织再生和抗器官纤维化的治4881重庆医学2023年6月第52卷第12期Copyright©博看网. All Rights Reserved.疗㊂值得注意的是,正是缘于S k i/S n o N通过调控T G F-β1等信号转导发挥着不可或缺的作用㊂因此, S k i/S n o N表达水平必须精密调节,才能逆转T G F-β1信号转导失常引起的功能障碍和病理状态㊂5总结与展望糖尿病和高血压肾病约占所有C K D病例的3/4, T G F-β1信号通路负调控因子的下调是这些肾病共同的病理特征㊂但不管是何种原因和机制的肾脏损伤引起的T G F-β1表达增加㊁信号通路过度活化最终导致纤维化的疾病进展㊂因此,纠正S k i和S n o N表达失衡,也是纤维化疾病潜在的治疗靶点㊂治疗策略必须以纠正S k i和S n o N的表达水平为重点,从而恢复T G F-β1及其交互作用信号通路的转导功能和细胞内环境稳态㊂然而,修复表达的负调控因子也存在问题,因为体内持续的T G F-β1信号高表达,会形成反馈导致异位表达分子的丢失㊂值得注意的是,肾损伤过程中,大多数T G F-β1负调控因子的丢失是由蛋白降解㊁转录失稳㊁基因沉默等多种机制控制的,靶向调控其上游调控因子是逆转这些信号通路表达失常的必要手段㊂更有甚者,人类肾病时个体序列的精准错排模式尚未破解,这些知识对于靶向治疗肾病和个体化精准医疗方案的制订是必不可少的㊂只有深入的研究和了解,才能从根本上防控慢性肾脏疾病㊂参考文献[1]WA N G Y H,WA N G M L,N I N G L,e t a l.An o v e l r o l e o f B K p o t a s s i u m c h a n n e l a c t i v i t y i np r e v e n t i n g t h e d e v e l o p m e n t o f k i d n e y f i b r o s i s[J].K i d n e y I n t,2022,101(5):945-962. 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烧伤后大鼠不同骨骼肌凋亡相关蛋白的转录表达变化

烧伤后大鼠不同骨骼肌凋亡相关蛋白的转录表达变化目的：通过检测烧伤大鼠不同骨骼肌组织中凋亡相关蛋白的转录变化，探讨细胞凋亡对烧伤后骨骼肌高消耗的影响机制。

方法：180只大鼠随机分为5组，通过建立大鼠烧伤模型，分别在烧伤后6h、1天、3天、7天及14天切取大鼠伸趾长肌和比目鱼肌，采用RT-PCR方法测定骨骼肌组织Akt、Bcl-2、Caspase-3的转录表达。

结果：伸趾长肌Akt转录表达在伤后前期变化不明显，在第14天显著下降；Bcl-2转录表达在初期轻度上升，在后期下降；Caspase-3转录表达在伤后第7天和第14天显著增高。

比目鱼肌Akt转录表达在烧伤后6h、1天、4天、7天无明显变化，在烧伤后14天显著下降；Bcl-2转录表达在烧伤后6h、1天和4天呈逐渐表达显著增强趋势，而后逐渐下降，；Caspase-3转录表达各个时间点无显著变化。

结论：在严重烧伤大鼠，快白肌组织凋亡明显，而且随着病程的延长，凋亡越显著；慢红肌组织凋亡不明显，尽管随着病程的延续，有上升的趋势。

Abstract:ObjectiveBy detecting the transcriptional changes in apoptosis-related proteins in different types of skeletal muscle in burned rats, the influence mechanism of apoptosis on the skeletal muscle wasting was studied.Methods180 rats were randomly divided into 5 groups. By setting up the rat burned model, extensor digital longus muscle and soleus muscle samples were collected at 6h,1d,4d,7d and 14d after burn injury. Transcriptal expression of Ake, Bcl-2 and caspase-3 were measured by RT-PCR method. Results In extensor digital longus muscle, the Akt expression decreased significantly at different time points. The Bcl-2 expression increased slightly at early stage,but decreased at late stage.Caspase-3 expression increased significantly on days 7 and 14 postburn. While in soleus muscle,there were no significant changes in Akt expression at other time points except significant decrease on day 14. There were significant increases in Bcl-2 at 6h,1d and 4d, and the decrease gradually on days 7 and 14 postburn. There were no marked changes in caspase-3 expression. Conclusion In severely burned rats, apoptosis could commonly occur in fast-white skeletal muscle,and become markedly along with the prolongation of the disease course, with no obvious change in slow-red skeletal muscle.Key words: burn injury; skeletal muscle;apoptosis大面积深度烧伤对全身的影响极为剧烈，骨骼肌作为人体最大的含氮组织，在严重烧伤时会发生明显萎缩，因此是烧伤时机体蛋白质丧失的主要来源[1]。

HGF对大鼠面神经损伤后面颊肌TGF-β-Smad3信号通路的影响的开题报告

HGF对大鼠面神经损伤后面颊肌TGF-β-Smad3信号通路的影响的开题报告一、研究背景面神经（facial nerve）是主管面部表情肌肉的运动神经，是人体最具表现力的神经之一。

面神经损伤是一种常见的神经系统疾病，可能导致面部可控肌肉的运动障碍。

大鼠面神经损伤后会发生一系列复杂的生理与生化反应，包括神经元损伤、神经胶质反应、炎症细胞浸润等。

目前，对于面神经损伤的治疗方法主要包括手术修复和药物治疗。

但是，这些方法仍然存在一定的局限性，因此，研究探索新的治疗方法具有重要意义。

人类表皮生长因子（human growth factor，HGF）是一种多功能生长因子，具有增殖、分化、迁移、抗凋亡、抗炎症等多种生物活性，在神经损伤和神经退行性疾病的治疗中具有广泛的应用价值。

HGF已被证明可以促进神经元生长、增加突触密度、促进突触重塑等作用。

另外，过去的研究已经发现，转化生长因子-β（transforming growth factor-beta，TGF-β）在面神经损伤后的神经细胞再生和重塑中扮演了重要的角色。

TGF-β与Smad3信号通路在神经细胞的迁移和增殖过程中发挥了重要的作用。

然而，关于HGF对大鼠面神经损伤后面颊肌TGF-β-Smad3信号通路的影响的研究目前还不足。

因此，本研究旨在探讨HGF对大鼠面神经损伤后面颊肌TGF-β-Smad3信号通路的影响。

二、研究内容和方法本研究采用大鼠模型，将大鼠面神经暴露并切断，制造面神经损伤模型。

将大鼠随机分为对照组、模型组、HGF组和TGF-β-Smad3组。

分别在不同的时间点（1、3、7、14、28天）采集面颊肌组织，采用HE染色法观察面神经损伤后面颊肌纤维形态学变化。

采用RT-PCR和Western blot法检测组织中TGF-β-Smad3信号通路相关蛋白（TGF-β、Smad3、p-Smad3）及神经生长相关蛋白（BDNF、TrkA、p-Akt、p-ERK）的表达情况。

RNA干扰沉默Smad3基因对百草枯致小鼠肺间质纤维化的保护作用的开题报告

RNA干扰沉默Smad3基因对百草枯致小鼠肺间质纤维化的保护作用的开题报告
研究背景：
肺间质纤维化是一种常见的肺部疾病，其主要特征是肺部纤维化改变及肺泡壁的破坏。

百草枯作为一种常见的除草剂，在长期使用中可能对人体造成危害。

先前的研究发现，Smad3基因在百草枯致肺间质纤维化中发挥了重要作用。

因此，研究RNA干扰沉默Smad3基因对百草枯致小鼠肺间质纤维化的保护作用具有一定的理论与实践意义。

研究目的：
本研究旨在考察RNA干扰沉默Smad3基因对百草枯致小鼠肺间质纤维化的保护作用。

通过研究Smad3基因的RNA干扰沉默，探究其能否减缓因百草枯引起的肺间质纤维化的损伤，为研究肺间质纤维化的治疗和预防提供新的思路。

研究方法：
选取健康的C57BL/6小鼠50只，随机分为五组：正常对照组、百草枯组、Smad3 RNAi组、百草枯+Smad3 RNAi组和空载体组。

其中，正常对照组和百草枯组分别给予等量的生理盐水和百草枯处理，Smad3 RNAi组和百草枯+Smad3 RNAi组则分别给予Smad3基因的RNA干扰发生剂量和百草枯处理。

通过肺功能测试、病理学检查、免疫荧光染色等方法，比较各组间的肺间质纤维化情况，分析RNA干扰沉默Smad3基因对百草枯致肺间质纤维化的保护作用。

研究意义：
本研究有助于深入了解Smad3基因在百草枯致肺间质纤维化中的作用机制，并为开发针对该疾病的治疗方法提供新思路。

同时，该研究有
助于评估百草枯对健康的危害程度，为制定更加合理、安全的环境保护政策提供科学依据。

c-jun在组织损伤中的表达变化及其法医学意义

c-jun在组织损伤中的表达变化及其法医学意义杨玫;官大威;熊昌艳;程子惠;于天水【期刊名称】《中国法医学杂志》【年(卷),期】2009(024)006【摘要】c-jun原癌基因是即刻早期基因jun家族成员之一,属于碱性亮氨酸拉链家族核内转录因子成员,可以结合在许多基因的启动子上参与基因转录的调控,其表达产物在多种基因表达、细胞增殖、分化、凋亡等过程中起重要作用.本文就c-jun 的结构、生物学功能、调控方式及其在组织损伤中的作用进行综述,旨在进一步对组织损伤程度和伤后时间推断的法医学研究提供参考资料.【总页数】3页(P401-403)【作者】杨玫;官大威;熊昌艳;程子惠;于天水【作者单位】中国医科大学法医学院法医病理学教研室,辽宁,沈阳,110001;中国医科大学法医学院法医病理学教研室,辽宁,沈阳,110001;中国医科大学法医学院法医病理学教研室,辽宁,沈阳,110001;中国医科大学法医学院法医病理学教研室,辽宁,沈阳,110001;中国医科大学法医学院法医病理学教研室,辽宁,沈阳,110001【正文语种】中文【中图分类】D919【相关文献】1.颅脑损伤后大鼠脑组织中Nogo-A、胶质纤维酸性蛋白及胰岛素样生长因子-1表达变化及意义 [J], 邵波;滕灵方;彭余江;陈慧慧;何玺君;段虹宇;杨鹏翔;陈钰2.急性肾损伤组织中细胞周期调控蛋白的表达变化及其意义 [J], 曹雷;郑灼;李宁;赵讯;张颖轩3.新生大鼠缺血缺氧性脑损伤组织中 HAX-1、Caspase-3、bcl-2表达变化及意义[J], 黄海英;陈尚明;赵建美4.颅脑损伤大鼠脑组织中HIF-1α的表达变化及其意义 [J], 李建华;李建民;吴淑华;朱玉红5.类表皮生长因子域7在创伤性脑损伤后脑组织中的表达变化及意义 [J], 徐鹏翔; 许琼冠; 李强; 罗孟亚男; 成凯; 谢镇明; 付宙锋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Smad3、Smad4和Smad7在大鼠放射性肺纤维化中的表达及意义

Smad3、Smad4和Smad7在大鼠放射性肺纤维化中的表达及意义李杨;宋良文;王德文;彭瑞云;崔雪梅;高亚兵;金梅红;马俊杰【期刊名称】《辐射研究与辐射工艺学报》【年(卷),期】2004(022)003【摘要】探讨转化生长因子β(Transforming growth factor β TGF β)的Smad 信号转导通路中信号蛋白Smad3、Smad4和Smad7在大鼠放射性肺纤维化中的变化及其意义.采用25Gy 60Co γ射线全胸照射二级雄性Wistar大鼠60只,建立大鼠放射性肺纤维化模型,分别于照射后1天、1周、1月及3月活杀后取材并进行肺泡巨噬细胞的分离培养,采用免疫组化SP法检测信号蛋白Smad3、Smad4和Smad7的表达变化.正常肺组织中较大血管内皮细胞及平滑肌细胞胞浆中存在Smad3、Smad4、Smad7蛋白弱阳性表达,Smad4在支气管上皮细胞胞浆也有阳性表达;照射后1天,上述3种蛋白在部分肺泡上皮细胞和部分巨噬细胞胞浆出现阳性表达;照射后1周及1月,Smad4蛋白在肺间质内纤维/成纤维细胞胞浆也出现阳性表达;照射后3m,Smad4蛋白在部分肺泡上皮、巨噬细胞、成纤维/纤维细胞胞核出现阳性表达.信号蛋白Smad3、Smad4、Smad7主要表达于放射性肺纤维化发生发展相关的靶细胞和效应细胞,包括部分肺泡上皮细胞、巨噬细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞、支气管上皮细胞,并呈一定时相性动态分布,证明TGFβ的Smad信号通路在放射性肺纤维化中起调节作用.【总页数】4页(P153-156)【作者】李杨;宋良文;王德文;彭瑞云;崔雪梅;高亚兵;金梅红;马俊杰【作者单位】军事医学科学院放射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院放射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院放射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院放射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院放射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院放射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院放射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院放射医学研究所,北京,100850【正文语种】中文【中图分类】R816【相关文献】1.壮肝逐瘀煎对大鼠肝Smad3、Smad4、Smad7表达的影响 [J], 林寿宁;王振常;何磊;韦刚;郑身宏2.IL-37、Smad3在博来霉素致大鼠肺纤维化模型中的表达及意义 [J], 孙云晖;王一新;马雪梅;杨晓东;李树民3.Smad3和Smad7在梗阻性黄疸大鼠肝纤维化形成过程中的表达及意义 [J], 刘宁;吕云福;邱庆安;林友刚;伍海鹰4.实验性肝纤维化大鼠TGF-β1、Smad3、Smad7、CTGF的表达及其意义 [J], 宋仕玲;龚作炯;张全荣5.壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TβRⅠ/Ⅱ、Smad3、Smad4和Smad7表达的影响[J], 林寿宁;王振常;何磊;韦刚;郑身宏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

全身放射损伤对皮肤伤口成纤维细胞参与组织修复能力的影响

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大鼠皮肤挫伤后Beclin1和LC3的表达

大鼠皮肤挫伤后Beclin1和LC3的表达颜峰平;陈忆九;黄晓华【摘要】目的研究大鼠皮肤损伤后Beclin1、LC3的表达,观察皮肤损伤中的自噬现象,并探讨其在损伤诊断及损伤经历时间推断的意义.方法运用免疫组化及图像分析技术研究大鼠皮肤挫伤后、损伤不同时间段后Beclin1、LC3表达的变化.结果大鼠正常皮肤表皮细胞Beclin1、LC3低表达,大鼠皮肤挫伤6h后局部表皮细胞Beclin1、LC3表达开始增多,挫伤3、5和7d呈强表达.结论皮肤损伤后局部细胞Beclin1、LC3表达增多;其表达与损伤经历时间具有相关性;细胞自噬增强是对损伤的反应.【期刊名称】《法医学杂志》【年(卷),期】2007(023)001【总页数】4页(P11-13,封4)【关键词】挫伤;自噬;Beclin1;LC3;免疫组化【作者】颜峰平;陈忆九;黄晓华【作者单位】复旦大学上海医学院法医学系,上海,200032;司法部司法鉴定科学技术研究所,上海,200063;司法部司法鉴定科学技术研究所,上海,200063;司法部司法鉴定科学技术研究所,上海,200063【正文语种】中文【中图分类】DF795.1自体吞噬（autophagy），简称自噬，是真核细胞中溶酶体依赖的内源性底物自我降解的过程，这一过程在细胞清除废物、重建结构以及生长发育中起重要作用，并与疾病的发生密切相关[1]。

Beclin1蛋白是自噬通路必须的复合物磷脂酰肌醇3磷酸激酶(PI3K)复合物的组成部分[2，3]。

微微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAP1-LC3，LC3）是目前观察自噬现象是否存在、研究自噬活性较为可靠的生物学标记物[4]。

本文通过免疫组化方法检测大鼠皮肤挫伤后局部Beclin1和LC3表达的变化，借此分析细胞受损后的自噬，并探讨其在法医学损伤及损伤经历时间推断中的应用。

Smad3基因缺失加快的小鼠皮肤创面收缩速度机制研究

Smad3基因缺失加快的小鼠皮肤创面收缩速度机制研究毛春明;杨晓;张莉;孙彦洵;侯宁;吕娅歆;黄翠芬【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2004(008)026【摘要】目的:研究Smad3基因剔除小鼠皮肤创伤愈合速度加快的机制.方法:利用不同基因型的Smad3基因剔除小鼠及对照小鼠进行皮肤缺失型创伤试验,观察组织病理变化;分离不同基因型小鼠胚胎成纤维细胞,观察其胶原收缩能力的变化.结果:Smad3基因剔除小鼠在皮肤创伤愈合时表现出重上皮化进度快;成纤维细胞胶原收缩试验中,mad3缺失的细胞在有血清的培养条件下胶原收缩速度快于野生型细胞,而在无血清培养条件下,有无转化生长因子β1(TGF-β1)两者变化不显著.有血清培养时Smad3缺失的成纤维细胞表达α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)增加.结论:SMAD3通过抑制α平滑肌肌动蛋白在成纤维细胞中的表达调节成纤维细胞的收缩能力,以致Smad3缺失小鼠皮肤创面收缩速度加快.【总页数】3页(P5538-5540)【作者】毛春明;杨晓;张莉;孙彦洵;侯宁;吕娅歆;黄翠芬【作者单位】解放军军事医学科学院生物工程研究所发育和疾病遗传学实验室,北京市,100071;解放军军事医学科学院生物工程研究所发育和疾病遗传学实验室,北京市,100071;解放军军事医学科学院生物工程研究所发育和疾病遗传学实验室,北京市,100071;解放军军事医学科学院生物工程研究所发育和疾病遗传学实验室,北京市,100071;解放军军事医学科学院生物工程研究所发育和疾病遗传学实验室,北京市,100071;解放军军事医学科学院生物工程研究所发育和疾病遗传学实验室,北京市,100071;解放军军事医学科学院生物工程研究所发育和疾病遗传学实验室,北京市,100071【正文语种】中文【中图分类】R349.8【相关文献】1.Lgr6基因质粒转染人脐带间充质干细胞对小鼠皮肤创面的修复作用 [J], 石胜军;陈广平;贾思远2.血脂异常ApoE基因缺失小鼠视网膜血管瘤增生及其机制研究 [J], 王毅;巫娟;李罗翔;李娟;曾庆华;刘小虎;3.血脂异常ApoE基因缺失小鼠视网膜血管瘤增生及其机制研究 [J], 王毅;巫娟;李罗翔;李娟;曾庆华;刘小虎4.转hCTLA4-IgG基因小鼠移植皮肤在糖尿病大鼠创面存活的延长 [J], 王勇;葛良鹏;倪勇;刘勤;魏泓5.小鼠Smad3基因的克隆及其在小鼠组织中的表达 [J], 程萱;徐晓玲;沈善祥;周江;邓初夏;杨晓因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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Ａｔ２ｈａｔｒｒｄｉｔｎ，ｔｅｅｗｅｅｎｂｉｕｈｎｅｎｐｏｅｎａｄｍＲＮＡｘｒｓｉｎｌｖｌｆＣ—ｋ，Ｓｍａ３ｏｆａａｉｅｏｈｒｒｏｏｖｏｓｃａｇｓｉｒｔｉｎｅｐｅｓｏｅｅｓｏｓｉｄｒｔｒｎｃｐｉｎｃｉｉｆＳｍａ３．Ａｔ４ｈ，ｔｅｅｐｅｓｏｆＣ—ｋｅａｏｇａｕｌｅｒａｅ，ｒａｈｉｇｔｅｈｅｔａｓｒｔａａｔｖｔｏｉｏｌｙｄｈｘｒｓｉｎｏｓｉｂｇｎｔｒｄａｙｄｃｅｓｌｅｃｎｈ
ＡｂｔａｔＯｂｅｔｅＴｌｉｅｃａｇｓａｄｓｎｆａｃｆＣｓｉｎｍａ３ｉｒｔｋｂｏｌｔｓｒｃ：ｊｃｉｏｃｒｙｔｈｎｅｎｉｉｃｎｅｏ —ｋａｄＳｄｎａｓｉｆｒｂａｖａｆｈｇｉｎｉｓ
２
结果
２１辐射后ＣｓｉＳｄ．．和ｍａ３的表达ｋ
维普资讯
第２９卷第１５期
２００７年８月
第
三
军
医
大
学
学
报
Ｖｌ９０ｏ＿２，Ｎ・
Ａｇ０７ｕ．２０１５４５
ＡＴＡＡＥＡＭＥＩＩＡＭＩＩＡＩＴＲＩＥＣＡＣＤＭＩＥＤＣＮＥＬＴＲＳＥＴＡ
中图法分类号：３２９；Ｒ９．；８８０３Ｒ２．９３４２Ｒ１．２
ｃｓｉＳａ３参与大鼠皮肤成纤维细胞辐 — 和ｍｄｋ
射性损伤的病理过程，辐射后Ｃｓｉ．下降，ｍａ３升高，导致Ｓａ３转录活性增强，ｋＳｄ并ｍｄ细胞增殖受抑，凋亡增加。
ｐｌｅａｉｎｉｅｅｓｄａｄｃｌｐｐｏｉｓｉｒａｅｏｆｒｉｒｔｓｒｐｒｓｅｎｅｌａｏｔｓｓｉｎｃｅｓｄ．ｏ
Ｋｅｙｗｏｒｓ：Ｃ— ｋ；Ｓｍａｄｓｉｄ３；ｆｂｂａｔａｉｔｎｉｒｌ；ｒｄａｉｏｓｏ
文章编号：ＯＯ５ｏ（０７）５１５－３ｌＯ－４三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心，创伤、烧伤与复合伤
Ｃ．ｉＳｄｓ和ｍａ３在大鼠皮肤成纤维细胞辐射性损伤中的变化及意义ｋ
刘霞，李平，张恩，刘苹，周元国
ｄｃｄｉｊｒｕｅｕｙｎ
ＬＵＸｉ，Ｌｉｇ，ＺＩａＩＰｎＨＡＮＥＧｎ，ＨＵＰｎ，ＺｉｇＨＯＵＹｕｎｇｏ（ｔｅＫｙＬｂｒｔｙｏＴａｍ，ＢｍｓｎｏｂｎｄＩｊｒ，Ｍ — ａ —ｕＳａｅａｏａｏｆｒｕａｕｄＣｍｉｎｙｔｒａｅｕｏｌｅｌｉｏｙＣｎｒｎｔｕｆｕｇｒｅｅｒｈａｉｇＨｓｉｌＴｉｌａｄｃｌｎｅｓｙＣｏｇｉｇ４０４，ｈａｅｕｒＢｏｇｅｔ，ＩｓｔｔｏｒｙＲｓａｃ，Ｄｐｎｏｐｔ，ｈｒＭｉｔｒＭｅｉｉｒｉ，ｈｎｑｎ００２Ｃｉ）ａｌｅｉｅＳｅａｄｉｙａＵｖｔｎ
化生长因子一１（ｒｓｒｎｏｔａｔｒ一１ＴＦ１ｔｆｍｉｇｇｗｈｆｃｓ１．Ｇ．３ｎａｏｒｏ３
事创伤愈合方面的研究，表论文ｌ发０余篇。电话：０３（２）
６７７６，－ａ：如ｙｇａｏ．ｏ１ｃ８５４５Ｅｍｉｌｉ＠ｙｈｏｃｎ．ａｌ通讯作者：周元国，电话：０３６７７７， — ａ：ｇｏ＠ｅ．ｑｃ（２）８５４５Ｅｍｉｙｈｕｔｃ．ａｌｚａ收稿日期：０６０－８修回日期：０一１４２０ —８２；２６ｌ－０２
３的下游转录因子Ｓａ３，而逆转ＴＦ１／ｍｄ１）１ｍｄ从Ｇ一Ｓａ３３１
对上皮细胞的抑制作用。我们前期的实验已经证明
维普资讯
１５４６
第三军医大学学报
录活性的变化。结果
辐射后２ｈＣｓｉＳａ３蛋白和ｍＮ，．、ｍｄｋＲＡ水平、ｍｄＳａ３转录活性无显著变化，４ｈ开始， —ｋ表达逐渐Ｃｓｉ
下降，ｍｄＳａ３表达和转录活性逐渐升高，８ｈ分别达到峰谷和峰顶。结论在
关键词： —ｋ；ｍａ３；纤维细胞；射ＣｓｉＳｄ成辐
国家重点实验室重庆４０４）００２提要：目的研究ｃｓｉＳａ３在大鼠皮肤成纤维细胞辐射性损伤中的变化和意义。方法．ｋ和ｍｄ软ｘ线照射诱导大
鼠皮肤成纤维细胞辐射性损伤，ｓｒｌ和Ｒ－ＣＷｅｔｂｔｅｎｏＴＰＲ观察ＣｓｉＳａ３蛋白和ｍＮ — 、ｍｄｋＲＡ水平的变化，ＭＳＥＡ检测Ｓａ３转ｍｄ
ｍｉｉｍｔ８ｈ，ａｄＳｄｎｍａ３ｔｎｃｉｔｎｃｉｉｅａｃｅｓ，ｐａｉｇａ．Ｃｏｃｕｉｎｎｍｕａｎｍａ３ａｄＳｄｒｓｒｐｉａａｔｔｂｇｎｔｉｒａｅｅｋｎｔｈａｏｌｖｙｏｎ８ｎｌｓｏ
ＣｓｉｄＳａ３ａｅｉｖｌｅｅｐｔｏｏｉｒｃｓｆａｉｉｄｃｄｆｒｂａｔｎｕ．Ｒｄａｏａ — ｍｄｒｏｄｉｔａｌｃｐｏｅｓｄａｏｉｕｅｂｏｌｊｒｋａｎｎｖｎｈｈｇａｌｏｒｔｎｎｉｓｉｙａｉｉｃｎｔｎ
ＳｆｒｙＰｏｅｎａＲＮＡｘｒｓｉｎｓｏｓｉａｄＳｍａ３ｗｅｅｄｔｃｅｙＷｅｔｒｌｔａｏＸａ．ｒｔｉｎｄｍｔｅｐｅｓｏｆＣ—ｋｎｄｒｅｅｔｄｂｓｅｎｂｏｎｄＲＴ— ＰＣＲ．
和Ｐ３引起细胞周期阻滞、殖受抑，过Ｐ３乳腺５增通５，
癌易感基因（ｒａｔａｃｒｕｃｐｉｉｔｇｎ，ＢＣ）ｂｅｎｅｓｅｔｌｙｅｅＲＡ１ｓｃｓｂｉ
等促进细胞凋亡，过Ｐ３ＢＣ，ｉｅｅ通５、ＲＡ１Ｎｊｇｎ破损综ｍ合征（ｉｇｎｂｅｋｇｙｄｏｅＮｓ）ｃｂ促进Ｎｊｅｒａａｅｓｎｒｍ，ｂ１和Ａｌｍｅ
ＤＡ修复等。一些信号在其中起着重要的作用，Ｎ如Ｐ３不仅可以引起细胞周期阻滞，时诱发细胞凋亡，５同
启动ＤＡ修复 ¨ 。Ｎ
原癌基因Ｃｓｉｃｌｌｌ — ｅｅｉｇＩｓｔｔ） — （ｅｕａＳｏＫｔｒｎｔｕｅｋｌｒａｎｔｎｉ
霞（９１，，１７一）女河北省郸邯市人，博士，助理研究员。主要从
是Ｖｓｉｖｕｌａ — ｅｔｉｇＩｓｔｔ）胞内的同源 —ｋ（ｉｓＳｏｎＫｔｒｎｔｕｅ细ｒｅｎｉ物，研究报道， —ｋ可以以辅阻遏子的形式，有Ｃｓｉ结合转
ｄｃｅｅＣ—ｋｎｎｒａｅＳｍａ３ｅｐｅｓｏｅｒａｓｉａｄｉｃｅｓｓｄｘｒｓｉｎ，ｒｓｌｉｇｉｌｖｔｄＳｄｒｎｃｐｉｎａｔｉｙ，ｔｅｅｏｅｃｌｅｕｔｎｎｅｅａｅｍａ３ｔａｓｒｔｃｉｔｉｏｖｈｒｆｒｅｌ
基金项目：国家重点基础研究发展规划（９３项目）Ｇ９９５２５； “７ ” （１９０４０）国家自然科学基金（００４８３４０６）
ＳｐｏｔｙｔｅＮｔｎｌＫｙＢｓｓａｃｎｅｅｏｍｅｔｌｕｐｒｄｂａｏａｅａｉＲｅｅｒｈａｄＤｖｌｐｎＰａｅｈｉｃｎ
ｈａｓｒｔａａｔｉｆＴｅｔｎｃｐｉｎｌｃｉｔｏｍａ３ｗｓｏｓｒｅｙｅｅｔｐｏｅｉｍｂｌｙｓｉｓａＥＳ．ＲｓｌｒｉｏｖｙＳｄａｂｅｖｄｂｌｒｈｒｔｏｉｔｈｆａｓｙ（ＭＡ）ｅｕｔｃｏｃｉｔｓ
ｅｐｓｄｔｒｄａｏ．ＭｅｈｄＴｅｒｄａｏｎｕｅｎｕｙｏａｓｉｆｒｂａｔａａｅｂｘｏｕｅｔｘｏｅｉｉｏａｔｎｔｏｓｈａｉｉｉｄｃｄｉｒｆｔｋｎｉｏｌｓｍｄｙｅｐｓｒｏｔｎｊｒｂｓｗ
第２９卷
ｃｓｉ为大鼠皮肤成纤维细胞细胞周期Ｇ。调节蛋 — 作ｋ期白，它可以通过抑制Ｓａ３活性，加快Ｇ。进展，ｍｄ期促
进细胞增殖］同时ｃｓｉ，．还可以增加成纤维细胞的ｋ抗辐射作用，轻细胞凋亡。ｃｓｉＳａ３作为减 —ｋ和ｍｄ