雄黄微生物提取液对K562_ADM细胞P_糖蛋白和多药耐药基因表达的影响
K562细胞株侧群细胞分离及耐药蛋白和细胞周期的表达
K562细胞株侧群细胞分离及耐药蛋白和细胞周期的表达范瑞华;李惠民;郭殿选;高勇;陈小飞【摘要】背景:血液肿瘤细胞中的侧群细胞能够逃避细胞周期化疗药物的作用,可能与白血病复发有关.目的:鉴定人慢性粒细胞白血病细胞株K562中是否存在侧群细胞,并观察侧群细胞亚群与非侧群细胞亚群耐药蛋白、细胞周期表达的差异.方法:采用流式细胞术检测K562细胞株中是否存在侧群细胞;并分析K562侧群细胞和非侧群细胞两亚群间耐药蛋白P-gp、ABCG2以及细胞周期的表达情况.结果与结论:K562细胞株中均存在侧群细胞,这群细胞比例均少.侧群细胞亚群耐药蛋白ABCG2表达高于非侧群细胞亚群(P < 0.05),两亚群耐药蛋白P-gp中表达差异无显著性意义;侧群细胞亚群中G0/G1期细胞占80%,非侧群细胞亚群中G0/G1期细胞占43.7%.证实K562细胞株中确实存在较少比例的侧群细胞,其和主群细胞在耐药蛋白表达上有异质性,大部分处于静止期,可能富含和肿瘤耐药有关的白血病干细胞.%BACKGROUND: It is possible that leukemia relapse is related with side population (SP) cells, which can escape cell cyles phasespecific chemotherapeutic drugs .OBJECTIVE: To isolate and preliminarily identify whether the human chronic myeloid leukemia cell line-K562containsSPcellsor not, and to further research K562 SP cells and study the expression of multidrug resistance proteins and DNA content in twosubpopulations.METHODS: Flow cytometry with UV excitation light was used to detect the percentage of SP cells in logarithmic growthperiodK562, which were then sorted by the fluorescence activating cell sorter, and then SP and non-SP subpopulations were collected.The expression of multidrug resistance proteins were examined by flowcytometry technique in two subpopulations. DNA contentof two subpopulations was examined by flow cytometry.RESULTS AND CONCLUSION: The K562 cell line contained SP cells, and the proportion of SP cells was much lower. Althoughthere were no differences between these two subpopulations in P-gp expression, ABCG2+ cells expression in the SPsubpopulation was significant higher than that in the non-SP subpopulation (P < 0.05). The G0/G1 phase cells in theK562SPsubpopulation accounted for about 80% of the total cells. According to the significant differences in the expression of MDRproteins between the SP subpopulation and the non-SP subpopulation, and the majority in a quiescent period, it is possible thatleukemia stem cells are enriched in SP cells.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2011(015)045【总页数】4页(P8479-8482)【关键词】白血病干细胞;侧群细胞;流式细胞术;耐药蛋白;细胞周期【作者】范瑞华;李惠民;郭殿选;高勇;陈小飞【作者单位】淮安市第一人民医院肿瘤内科,江苏省淮安市,223300;昆明医学院第一附属医院血液内科,云南省昆明市,650031;淮安市第二人民医院老年病科,江苏省淮安市,223300;淮安市第一人民医院肿瘤内科,江苏省淮安市,223300;淮安市第一人民医院肿瘤内科,江苏省淮安市,223300【正文语种】中文【中图分类】R394.20 引言近年来对干细胞和肿瘤研究的深入，已表明干细胞自我更新和肿瘤生成有惊人的相似之处，而且肿瘤中某些数量极少的细胞具有干细胞特性，提出了肿瘤干细胞学说[1-2]，认为肿瘤干细胞是肿瘤转移、复发和耐药的根源。
雄黄微生物转化液
雄黄微生物转化液（抗白血病、抗肿瘤）
雄黄本身是一种水不溶性硫化砷矿，具有剂型单一、生物利用率低、临床用量大等缺点。
基于此，我们以甘肃优质道地矿物药雄黄为主要原料，成功的借助特定微生物的生物化学催化作用，建立起一套成熟的针对雄黄的微生物转化技术，将雄黄中的砷溶解出来，得到一种新型砷剂。
通过药理药效实验证实，该新型砷剂可以有效的通过阻滞细胞周期，在体内外诱导小鼠腹水瘤S180和肝癌细胞H22发生凋亡。
同时，对荷瘤小鼠的毒副作用较小，对肿瘤组织具有很强的选择性。
尤其对多种（多药耐药）白血病有良好的体外抑制作用。
目前实验证实，与雄黄相比，该砷剂有着更小的毒副作用和更强的抗肿瘤效果。
应用范围：1）抗白血病药物。
2）抗肿瘤药物。
3）中药复方替代开发，减毒增效。
以P_糖蛋白为靶点的肿瘤多药耐药逆转剂
文章编号: 1000-1336(2010)05-0699-05以Ｐ－糖蛋白为靶点的肿瘤多药耐药逆转剂谢 婷 冯璐璐 刘瑞媛 李发荣陕西师范大学生命科学学院，西安710062摘要：肿瘤的多药耐药性(m u lt id r u g r e s is ta n c e , MD R )是导致化疗失败的主要原因，因此寻找高效低毒的MD R 逆转剂已成为肿瘤药物开发领域的热点。
P -糖蛋白是引起多药耐药性产生的重要因素之一，也是目前肿瘤多药耐药逆转剂最重要的药物靶点。
本文介绍了P -糖蛋白的结构、功能和作用机制，以及以P -糖蛋白为靶标的肿瘤多药耐药逆转剂的开发现状。
关键词：多药耐药；P -糖蛋白；逆转剂中图分类号：收稿日期：2010-03-09陕西省自然科学基金项目(S J 08–Z T 10)资助作者简介：谢婷(1986-)，女，硕士生，E -m a i l :xieting1986@ ；冯璐璐(1984-)，女，硕士生, E-mail ：fenglulu@ ；刘瑞媛(1983-)，女，硕士生,E-mail: liuruiyuan@ ；李发荣(1972-)，男，副教授，通讯作者，E-mail: lifarong@化疗在肿瘤治疗中的地位非常重要，而化疗过程中产生的多药耐药性是肿瘤治疗的主要障碍[1]，也是多数肿瘤患者预后不佳的主要原因。
因此，寻找高效、低毒、作用靶点广泛的多药耐药逆转剂已成为肿瘤研究领域的热点。
肿瘤的多药耐药性(multidrug resistance, MDR)指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物出现耐药的同时，对其他结构各异、作用机制不同的抗肿瘤药物亦产生交叉耐药现象[2]。
引起肿瘤MDR 的机制很复杂，目前已知的机制有：谷胱甘肽S-转移酶的过度表达，DNA 拓扑异构酶II 表达上调或者DNA 拓扑异构酶II 基因突变，抑瘤基因p53的突变或Bcl-2基因的过表达，肺耐药相关基因及A T P 结合盒一类的膜转运蛋白如多药耐药相关蛋白、P-糖蛋白、乳腺癌耐药蛋白等的过表达等[3]。
略论shRNA对人白血病K562 ADM细胞多药耐药能力的完全逆转
表1 shRNA寡核苷酸片断的序列 （略）
图1 pGenSil-l质粒的结构。pGenSil-l质粒 （略）
1.4 细胞转染及稳定转染克隆的筛选 当K562/ADM细胞在六孔板内达到50%~60%满时进行转染。具体操作步骤按Lipofectamine 2000TM说明书建议的操作步骤进行。细胞转染48h后，将细胞转入直径10cm的培养板中并加入含400μg/ml G418的培养液（不含阿霉素）进行培养。3周以后，将稳定转染的克隆挑入96孔板中并扩增。期间利用荧光显微镜进行观察，稳定转染的克隆发绿色荧光；而没有稳定转染的细胞没有绿色荧光，丢弃这一部分细胞。
1.2 细胞培养 细胞在37°C、5%CO2、饱和湿度的二氧化碳培养箱中培养。培养液为含10%热灭活新生牛血清的RPMI1640细胞培养液。在K562/ADM细胞的培养液中加入浓度为1.0mg/L的阿霉素以维持其耐药性。
1.3 siRNA的设计及shRNA的构建 利用siRNA设计软件（网址摘要：http摘要://）设计了两条序列，分别针对MDR1基因（accession number摘要:M14758）的不同编码区域。MDR-A摘要:5′-AAC TTT GGC TGC CAT CAT CCA -3′;MDR-B摘要:5′- AAG GCC TAA TGC CGA ACA CAT-3′,分别针对MDR1 mRNA的第586-606及第3494-3514核苷酸区域。这两个序列分别被构建到一段短的双链DNA序列中（武汉晶赛公司合成，表1）。目的序列作为反义链，其正义链和反义链互补，中间间隔一段长9个核苷酸的发夹环，两端分别插入终止序列及Hind Ⅲ或BamH1酶切位点。然后将这两个序列分别插入pGenSil-l（武汉晶赛公司,图1）质粒中。反应按武汉晶赛公司建议的操作流程进行。
雄黄的研究进展
雄黄的研究进展【摘要】综述了雄黄的化学成份、炮制工艺、药代动力学、药理作用、临床应用及毒副反映，并对雄黄的制剂工艺进行了展望。
【关键词】雄黄; 化学成份；炮制工艺；药理作用；临床应用雄黄是中医内治外用经常使用药之一，最先收载于《神农本草经》，距今已有几千年历史。
雄黄又名石黄,其性辛温、味苦,有毒。
2005年版《中国药典》收载含雄黄的中成药共26种，约占药典成方总数的%［1］。
传统医学以为雄黄具有解毒、杀虫、燥湿、祛痰、截疟等功能。
自20世纪50年代以来，国内医者将含雄黄的复方制剂或单方用于医治血液系统疾病、恶性淋巴系统疾病乃至实体瘤，取得了明显的医治成效，引发人们普遍的关注。
本文就雄黄的化学成份、炮制工艺、药理作用机制、临床应用及毒副作用进行综述。
1 化学成份雄黄的要紧化学成份是As4S4 或As2S2，另外还含有少量三氧化二砷(As2O3)及五氧化二砷(As2O5)。
长期以来，关于雄黄的要紧成份的讨论一直没有中断，2000版《中国药典》规定雄黄的要紧成份为As2S2，其含量不得少于90%。
梁国刚等［2］以为雄黄的要紧成份是As4S4，只有在550～800℃时才分解成As2S2。
陈宪平等［3］利用电镜&-能谱仪对雄黄进行分析，扫描电子显微镜观看发觉，雄黄为柱状晶体或不规那么晶体；能谱仪测定发觉，雄黄中的要紧元素为砷和硫，其中砷与硫的重量百分比为:1。
2 炮制工艺由于雄黄在临床上的特殊功效及其毒性反映，自古就很重视它的炮制处置，仅古籍记载就有十余种［4］。
其中，利用历史较久的是汉代的干研法和宋朝的水飞法［5］。
1990年及1995年版药典的炮制方式为将雄黄粗品研成细粉或水飞,能够保留某些可溶性成份。
而2000年版药典规定应将可溶性成份全数除去,只剩下不溶于水的As2S2，而且规定了雄黄不得显示游离砷反映。
但大量的研究说明，As2O3在医治白血病等血液系统疾病时可有效抑制肿瘤细胞的增殖，提示雄黄的毒性成份可能是它的有效成份之一；另外，陆道培等［6］也研究发觉As4S4一样对肿瘤细胞有抑制作用，但难溶性As4S4药理活性的发挥需要一个更长的进程，在解决难溶性雄黄的生物利费用问题上，王晓波等［7］采纳球磨法制备纳米级雄黄粉体，发觉纳米雄黄与传统雄黄比较，生物利费用等方面具有明显优势。
siRNA对人红白血病细胞株(K562／ADM)阿霉素耐药性的影响
要 ］ 目的： 研究小分 子干扰 Ｒ Ａ片段 （ｍ ｌｉｔ ｅ ｎ Ｎ ｓ Ｎ 对人红 白血病细胞 株 （ ５ ２ Ａ Ｍ） Ｎ ｓ ａ ｅ ｒ ｇＲ Ａ，ｉ Ａ） ｌｎ ｒ ｉ ｆ Ｒ Ｋ ６／ Ｄ 细胞 ｍ ｒ 基 ｄｌ
因表达及功能的影响 ， 探索一新的耐药的逆转途径。方法 ： ｉＮ ｓ Ａ根椐 Ｇ ｎＢ ｎ Ｒ ｅｅ ａｋ已知序列设计 ， 在脂质体介导 下转染 Ｋ ６ ／ Ｄ ５２ Ａ Ｍ
ｐ ｔ ｆｄ ｕ ｅ ｉｔ ｎ ｅ ａ ｏ ｒ ｇ ｒ ｓｓ ｃ ．Ｍ ｅ ｈ ｄ Ｓ Ｒ ｈ ａ ｔ ｏ ｉ ＮＡ ａｇ ｔｄ ｍｄ ｌ ｇ ｎ ｅ ｅ ｓ ｎ ｅ ｉ ｄ ａ ｄ ｔ ｎ ｆ ｔｄ ｉ ｔ ６ ／ ｔｒ ｅｅ ｒ ｅ ｅ ｗ ｒ ｙ ｔ ｓｚ ｎ ｒ ｓｅ ｅ ｎｏ Ｋ５ ２ ＡＤＭ ｅ ｌ．Ｐ ｐ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｎ ｈ ｅ ａ ｃ ｃｌ ｓ ｇ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ａ ｄ
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林 医学 ２ ０ ０ ８年 ２月 第 ２ ９卷 第 ３期
人红 白血 病细 胞株 【 ６ ／ ＤＭ ） 霉素 耐药 性 的影 响 ｉ Ｒ Ｋ５ ２ Ａ 阿
周冬梅 ， 郑雄伟 ［ 摘 （ 福建省 肿瘤 医院， 福建 福州 ３０ １ ） ５０ ４
其 不 良反应 难 以有 效应 用。因此 ， 寻找 一种高效 、 毒 、 低 高特 异的耐 药 逆 转 方 法 就 显 得尤 为重 要 而 迫 切 … 。Ｒ Ａ干 扰 Ｎ （ Ｎ ｔｒ ｒ ， Ｎ ｉ是新近发展 起来 的一种封 闭基因表达 Ｒ Ａ ｉ ｅ ｅｃ Ｒ Ａ ） ｎｆ ｅ 的有效方法【 ， ｍ ｒ（ ２ 而 ｄｌ 多药耐药基因） 表达在肿瘤耐药 中 Ｊ 的 起重要作用 ， 故我们 以 ｍ ｒ 基 因高表达 的 Ｋ ６ ／ Ｄ 细胞 ｄｌ ５２ Ａ Ｍ
p-糖蛋白在人白血病多药耐药细胞株K562A02线粒体上表达的研究的开题报告
p-糖蛋白在人白血病多药耐药细胞株K562A02线粒体上表达的研究的开题报告【开题报告】一、选题背景及研究意义多药耐药是白血病治疗中一个普遍存在的问题，当前临床上使用的大多数抗肿瘤药物都存在多药耐药的现象，这就给临床治疗带来了很大的挑战。
因此，研究白血病多药耐药的分子机制已成为当前研究的热点问题之一。
P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）是一种跨膜输运蛋白，能够将多种化合物从内部输送到细胞外，包括许多抗癌药物。
P-糖蛋白在多药耐药的癌细胞中高度表达，已成为临床上诊断多药耐药的主要指标。
因此，研究P-糖蛋白在多药耐药白血病细胞中的表达和其对癌细胞的作用机制更加具有现实意义。
线粒体是细胞内储能和凋亡的重要场所，多药耐药癌细胞的线粒体功能异常是引起化疗患者治疗失败的一个主要因素。
因此，研究P-糖蛋白在白血病多药耐药细胞株K562A02线粒体上的表达及其对线粒体功能的影响将有助于深入了解多药耐药的分子机制。
二、研究目的本研究旨在探讨P-糖蛋白在人白血病多药耐药细胞株K562A02线粒体上的表达情况以及其对线粒体功能的影响，为临床治疗多药耐药白血病提供新的治疗策略。
三、研究内容与方法1、建立人白血病多药耐药细胞株K562A02模型将K562细胞株连续压制5-20次，筛选出具有多药耐药性的细胞株作为实验材料。
2、检测K562A02细胞株P-糖蛋白表达情况及线粒体功能Western blot和RT-qPCR方法检测K562A02细胞株P-糖蛋白的表达水平；采用荧光探针，检测K562A02细胞株线粒体功能如膜电位、呼吸、自由基等参数的变化。
3、通过基因克隆技术构建P-糖蛋白过表达和沉默的K562A02细胞株采用基因克隆技术将P-糖蛋白基因克隆至真核表达质粒，转染至K562A02细胞株中，通过Western blot检测P-糖蛋白的表达情况。
利用siRNA技术对P-糖蛋白进行沉默，通过Western blot及RT-qPCR检测P-糖蛋白的表达水平。
雄黄微生物浸出液在制备降低蛋白激酶B磷酸化水平药物中的应用
专利名称：雄黄微生物浸出液在制备降低蛋白激酶B磷酸化水平药物中的应用
专利类型：发明专利
发明人：李红玉,乔志伟,张靖靖,邹玥,李洋
申请号：CN202111456466.9
申请日：20211202
公开号：CN114053303A
公开日：
20220218
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于生物医药领域，涉及一种雄黄微生物浸出液的新用途，具体涉及一种雄黄微生物浸出液在制备降低蛋白激酶B磷酸化水平的药物中的应用。
本发明所提供的雄黄微生物浸出液可以显著降低细胞中蛋白激酶B的磷酸化水平，能够用于糖尿病和癌症的治疗。
申请人：兰州大学
地址：730000 甘肃省兰州市城关区天水南路222号兰州大学
国籍：CN
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重组人促红细胞生成素对K562／A02多药耐药和K562药物敏 …
重组人促红细胞生成素对K562／A02多药耐药和K562药物敏…祁明芳;刘静【期刊名称】《暨南大学学报：自然科学与医学版》【年(卷),期】1998(019)006【摘要】用ＭＴＴ法测定了重组人促红细胞生成素（ｒｈｕ－ＥＰＯ）对Ｋ５６２／Ａ０２多药耐药细胞系细胞和Ｋ５６２药物敏感细胞增殖的影响。
研究发现，Ｋ５６２／Ａ０２与浓度为０．０７８、０．１５６Ｕ／ｍＬ的促红素分别孵育时，其增殖活力比无ｒｈｕ－ＥＰＯ因子组低（Ｐ〈０．０１）；而Ｋ５６２与上述同样浓度的ｒｈｕ－ＥＰＯ孵育条件下，其增殖活力与无因子组比较差异无显著性意义（Ｐ〉０．０２）。
以上结果表明，ｒｈｕ－ＥＰＯ【总页数】1页(P83)【作者】祁明芳;刘静【作者单位】暨南大学医学院第一附属医院血液科;中国医学科学院血液学研究所药物研究室【正文语种】中文【中图分类】R733.705【相关文献】1.低频超声对阿霉素杀伤人白血病多药耐药细胞K562/A02作用的影响 [J], 孟庆齐;陈宝安;吴巍;邵泽叶;高峰;赵慧慧2.鬼臼毒素衍生物LN-13诱导多药耐药细胞K562／A02凋亡及其机制 [J], 高晨光;张猜;赵安妮;李楠;陈虹;曹波3.钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基-丁基)-小檗胺对人白血病细胞K562和K562/A02生长的抑制作用 [J], 邹凌琳;周圆;杨铭;代晓华;齐静;熊冬生;范冬梅;杨纯正;朱惠芳4.一种新型海洋生物活性物质逆转K562/A02细胞多药耐药的研究 [J], 张玉霞;梁琼;雍国新5.环孢菌素A联合汉防己甲素逆转人白血病耐药细胞株K562/A02细胞多药耐药的分子生物学机制 [J], 陈宝安;郭晶晶;程坚;高峰;丁家华;许文林;沈惠玲;孙新臣;成红艳;高冲;孙耘玉;王骏;赵刚;宋慧慧;鲍文;李国宏;刘莉洁;陈文姬;王雪梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
ADM细胞多药耐药的实验研究的开题报告
川芎嗪联合三氧化二砷逆转K562/ADM细胞多药耐
药的实验研究的开题报告
一、研究背景
多药耐药是目前治疗肿瘤的一大难题，使许多患者无法获得有效的
治疗。
三氧化二砷（ATO）是治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）的有效药物，但在其他类型的白血病治疗中其作用较弱。
研究发现，与单一药
物治疗相比，联合用药可以有效降低细胞耐药性，提高治疗效果。
川芎
嗪是一种来自黄芪科植物的化合物，具有神经保护、抗炎、抗氧化等多
种生物学功能。
在治疗神经退行性疾病中，川芎嗪已被广泛应用。
因此，本研究将探索川芎嗪联合三氧化二砷对多药耐药细胞的治疗效果。
二、研究目的
本研究旨在探讨川芎嗪联合三氧化二砷对K562/ADM多药耐药细胞
的治疗效果和机制，为治疗肿瘤耐药性提供新的治疗思路。
三、研究方法
1.细胞培养：将K562/ADM细胞分别在含有不同浓度的川芎嗪和三
氧化二砷的培养液中孵育24小时，分别用MTT法检测其细胞活力。
2.药物联合作用研究：将K562/ADM细胞分别在单一药物和药物联
合作用的培养液中孵育24小时，用流式细胞术检测其细胞周期和凋亡率。
3.分子机制分析：采用Western blot分析法，检测药物对PI3K/Akt
途径和核因子κB（NF-κB）信号通路的影响。
四、预期结果
预期结果为：川芎嗪联合三氧化二砷可以降低K562/ADM细胞的多
药耐药性，提高其对药物的敏感性；联合作用也可提高细胞周期停滞和
诱导细胞凋亡；Western blot结果将揭示川芎嗪和三氧化二砷对PI3K/Akt途径和NF-κB信号通路的影响。
A02多药耐药性的影响的开题报告
广枣黄酮类成分槲皮素和山萘酚对白血病细胞系K562/A02多药耐药性的影响的开题报告
题目：广枣黄酮类成分对白血病细胞系K562/A02多药耐药性的影响研究
研究背景：多药耐药性是白血病治疗中的一个重要问题。
广枣是一
种常用的中药，其黄酮类成分具有多种药理活性。
槲皮素和山萘酚是广
枣中主要的黄酮类成分，具有抗氧化、抗癌、抗病毒等活性。
本研究旨
在探究槲皮素和山萘酚是否能够影响白血病细胞系K562/A02的多药耐药性。
研究方法：使用MTT法测定槲皮素和山萘酚对K562/A02细胞的细
胞毒性；采用流式细胞术检测槲皮素和山萘酚对K562/A02细胞凋亡的影响；使用实时荧光定量PCR方法检测槲皮素和山萘酚对K562/A02细胞
中MDR1基因的表达水平的影响。
预期结果：本研究预计发现槲皮素和山萘酚可以抑制K562/A02细胞的生长和促进其凋亡，同时可能会抑制MDR1基因的表达，降低细胞的
多药耐药性。
这些结果可以为进一步开发白血病治疗药物提供理论依据。
研究意义：本研究可以为探索多药耐药性的分子机制提供思路，为
研发治疗白血病的新药物提供理论基础。
同时，研究结果也有望对广枣
黄酮类成分的临床应用提供参考。
中药雄黄微生物浸出及其浸出液对肝癌的体内外抗肿瘤作用研究的开题报告
中药雄黄微生物浸出及其浸出液对肝癌的体内外抗
肿瘤作用研究的开题报告
1. 研究背景和目的：
肝癌是一种严重的肿瘤疾病，其发病率和死亡率均居世界前列。
中药雄黄是一种常用的中药材，具有抗氧化、抗病毒和抗癌等多种药理作用，临床上常被用于治疗肝癌。
然而，目前对于雄黄中有效成分的研究尚不够充分，其作用机制也不明确。
因此，本研究旨在探讨雄黄中有效成分的微生物浸出方法及其对肝癌的体内外抗肿瘤作用。
2. 研究内容和方法：
本研究将采用微生物浸出法制备雄黄浸出液，并采用高效液相色谱法和质谱法对其成分进行分析鉴定。
随后，将使用体外的细胞实验和体内的小鼠模型，探究雄黄浸出液对肝癌细胞增殖、凋亡和转移的影响。
最后，将探讨雄黄浸出液可能的作用机制。
3. 预期结果：
通过本研究，我们将获得雄黄浸出液的有效成分及其作用机制，同时也可以探讨其对肝癌的体内外抗肿瘤作用。
这将为中药雄黄的药理作用提供新的证据，并为其临床应用提供更加科学的依据。
4. 研究意义：
肝癌是一种危害较大的肿瘤疾病，雄黄作为一种常用的中药材，具有较好的抗肿瘤作用，有望成为新型抗肿瘤药物的重要来源。
本研究为雄黄的药用价值提供了科学的佐证，同时为研发更加安全有效的抗肿瘤药物提供了新的思路。
雄黄对MRL／lpr狼疮小鼠抗ds—DNA抗体和T细胞表面分子CD69、CD25表达的影响
雄黄对MRL／lpr狼疮小鼠抗ds—DNA抗体和T细胞表面分子CD69、CD25表达的影响目的：初步观察雄黄对MRL/lpr狼疮小鼠SLE动物模型抗双链DNA抗体及T细胞表面分子CD69、CD25表达及其生存时间的影响。
方法：将MRL/lpr 狼疮小鼠随机分为空白（蒸馏水）对照组、纳米雄黄低中高剂量组，每天灌胃一次，分别在不同时间点采集血清和称重；在实验结束后，取外周淋巴结分离T 细胞并体外培养；放射免疫法测定血清抗ds-DNA抗体效价，流式细胞仪检测T 细胞表面活化分子CD69、CD25表达水平；并计算各个观察点的小鼠死亡率。
结果：雄黄治疗各组MRL/lpr小鼠生存时间比对照组明显延长，差异有统计学意义（P＜0.05）；雄黄低、中、高各组血清抗ds-DNA抗体总平均值显著低于对照组，其中高剂量与低剂量比较，差异也有统计学意义（P＜0.05）。
雄黄各剂量组T细胞表面的CD69和CD25表达水平较空白对照组有明显的降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论：雄黄可能通过抑制MRL/lpr小鼠T细胞表面的CD69和CD25表达以减少T细胞的活化，从而减少抗ds-DNA抗体的分泌，减轻小鼠自身免疫反应损伤，延缓SLE疾病发展进程。
雄黄为硫化物类矿物雄黄的矿石，又名黄金石。
《神农本草经》记载：“黄金石，辛温，主寒热，鼠瘘，恶疮，疽痔，死肌，杀白虫毒。
”《金匮要略》记载含有雄黄的升麻鳖甲汤用于治疗阴阳毒，而阴阳毒与系统性红斑狼疮（SLE）的症状很相似。
中医临床上主要用于祛風除湿，解毒杀虫。
雄黄既可入丸散作为复方使用，也可单独应用。
近年来，雄黄及其复方应用于白血病治疗，取得肯定的临床疗效，其基础研究也获得了可喜的成绩，展示了广阔的应用前景，使人们重新认识雄黄。
新近的研究表明，雄黄能增强内皮系统的吞噬功能，诱导肿瘤细胞凋亡[1-3]；成静等[4]报道三氧化二砷对小鼠免疫功能有抑制作用；朱小春等[5-6]报道雄黄的主要成分之一三氧化二砷剂可以减轻MRL/lpr狼疮小鼠的临床症状，提示雄黄也可能具有治疗SLE的作用。
雄黄诱导K_(562)细胞凋亡的研究
雄黄诱导K_(562)细胞凋亡的研究
张晨;黄世林;卢步峰;于丽敏
【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》
【年(卷),期】1999(5)3
【摘要】目的检测雄黄诱导Ｋ５６２细胞的能力。
方法应用形态学观察、ＤＮＡ电泳和流式细胞仪（ＦＣＭ）检测细胞凋亡。
利用ＦＣＭ分析细胞周期并测定Ｋ５６２细胞线粒体膜ＡＰＯ２．７蛋白表达。
结果雄黄可以诱导Ｋ５６２细胞产生凋亡现象，并导致Ｓ期细胞降低。
【总页数】2页(P30-31)
【关键词】雄黄;K562细胞;细胞凋亡
【作者】张晨;黄世林;卢步峰;于丽敏
【作者单位】中国人民解放军210医院血液病中医研究所;大连医科大学组胚教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
【相关文献】
1.脐血CD_3AK细胞诱导K_(562)细胞凋亡的实验研究 [J], 何秉燕;张渝侯;邹典定;邓华秀;李小明;肖永芳
2.三氧化二砷诱导K_(562)细胞凋亡的初步研究 [J], 张日;朱子玲;仇红霞;夏学鸣
3.当归多糖诱导K_(562)白血病细胞凋亡及相关凋亡基因的实验研究 [J], 曾炜炜;
邹典定
4.三氧化二砷对K_(562)细胞凋亡的诱导及生长抑制作用的研究 [J], 王淑婷;李清;刘超;赵瑾瑶;于丽敏;卢步峰;杨佩满;于曦;董少元;乔永平;朱晓杰;管晓东
5.As_2O_3诱导K_(562)细胞凋亡过程中细胞表面电荷变化的研究 [J], 苏永宏;彭晓;焦宁超;王东海
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雄黄对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞基因表达谱的作用
雄黄对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞基因表达谱的作用王梦昌;刘陕西;刘蓬勃【期刊名称】《中南大学学报（医学版）》【年(卷),期】2006(31)1【摘要】目的:应用cDNA芯片研究雄黄作用多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞后对其基因表达的影响.方法:应用包含4 096条人类基因的cDNA表达谱芯片,检测雄黄作用于RPMI 8226细胞前及48 h后基因的表达.结果: 在mRNA水平上,164条基因显著改变,53条基因上调,111条基因下调.结论:雄黄作用RPMI 8226细胞株后可引起一系列基因改变,许多基因涉及了多发性骨髓瘤的发病机制,其中BTG1,TXNIP及ALK1基因可能与RPMI 8226细胞的分化和凋亡有密切关系.【总页数】4页(P24-27)【作者】王梦昌;刘陕西;刘蓬勃【作者单位】西安交通大学第一医院血液科,西安,710061;西安交通大学第一医院血液科,西安,710061;Emory 大学病理与实验医学部,美国,亚特兰大,30022【正文语种】中文【中图分类】R733.3【相关文献】1.氟达拉滨、米托蒽醌对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226 KM3的增殖抑制作用[J], 秦群;肖希斌;谢兆霞2.雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226的体外抑制作用研究 [J], 谢勇3.雄黄对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞基因表达谱的作用 [J], 王孟昌;刘蓬勃4.艾拉莫德对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖和凋亡的影响 [J], 高秋英;侯丽敏;张玎;荀利如5.5-氮杂-2'-脱氧胞苷联合古曲霉素A对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞增殖、凋亡及DLC-1基因表达的影响(英文) [J], 郭靖;冯献启;聂淑敏;苏湛;史雪;崔忠光;张玲;刘世国;孟凡军;赵春亭因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
雄黄微生物浸出液抗肿瘤作用研究的开题报告
雄黄微生物浸出液抗肿瘤作用研究的开题报告一、课题背景肿瘤是指一类由体内细胞异常增殖形成的疾病，是严重威胁人类生命健康的疾病之一，也是全球公共卫生问题之一。
目前，化疗、放疗等传统治疗手段对肿瘤的治疗效果有限，而药物抗肿瘤疗法在治疗肿瘤方面显示出巨大优势。
因此，寻找新的抗肿瘤药物及开发新的抗肿瘤疗法具有重要意义。
雄黄是一种传统中药材，主要成分为硫化物和多种挥发油，具有抗菌、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用。
而由雄黄中提取的微生物浸出液，则是近年来新出现的一种植物源生物农药，具有杀菌、杀虫、促生长等功效。
近年来，研究发现雄黄微生物浸出液还具有良好的抗肿瘤作用，可通过调节免疫系统、抑制肿瘤细胞增殖等多种机制发挥抗肿瘤的作用。
二、研究问题与目的本研究旨在探究雄黄微生物浸出液的抗肿瘤作用及其可能的作用机制。
具体目的包括以下几个方面：1. 研究雄黄微生物浸出液对肿瘤细胞的生长抑制效果。
2. 探究雄黄微生物浸出液对肿瘤细胞凋亡的影响。
3. 研究雄黄微生物浸出液对肿瘤细胞凋亡相关蛋白表达的影响。
4. 探究雄黄微生物浸出液对免疫系统的调节作用及其抗肿瘤作用机制。
三、研究方法1. 细胞培养及处理：使用肿瘤细胞株进行体外实验，培养在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中，分别添加不同浓度的雄黄微生物浸出液进行处理。
2. 细胞生长抑制率检测：利用MTS法检测细胞存活率，计算细胞生长抑制率。
3. 细胞凋亡检测：利用流式细胞术检测细胞凋亡率。
4. 蛋白表达检测：利用Western blotting检测凋亡相关蛋白表达变化。
5. 免疫系统调节实验：利用小鼠模型研究雄黄微生物浸出液对免疫系统的调节作用，并探究其抗肿瘤作用机制。
四、预期成果及意义本研究预期可以得到以下几个方面的成果：1. 雄黄微生物浸出液具有明显的抗肿瘤作用。
2. 雄黄微生物浸出液可通过促进肿瘤细胞凋亡实现抗肿瘤的作用。
3. 雄黄微生物浸出液可抑制肿瘤细胞中凋亡抑制蛋白的表达。
雄黄的微生物浸出液抗肿瘤作用的开题报告
雄黄的微生物浸出液抗肿瘤作用的开题报告
题目：雄黄的微生物浸出液抗肿瘤作用的研究
摘要：雄黄是一种常见的中药材，具有抗菌、消炎、抗肿瘤等多种
药理作用。
本研究主要探讨雄黄的微生物浸出液对肿瘤的抑制作用及其
机制。
首先，通过高效液相色谱法（HPLC）对雄黄的化学成分进行分析。
接着，采用MTT法和流式细胞术（FCM）对雄黄微生物浸出液的抗肿瘤
作用进行评估。
最后，通过Western blot等技术探讨雄黄抗肿瘤的作用
机制。
研究方法：取雄黄干草制备微生物浸出液，采用HPLC法分析雄黄
的主要化学成分；对肿瘤细胞系进行细胞毒性试验，评估雄黄微生物浸
出液对肿瘤细胞的抑制作用；利用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡，采用Western blot技术检测相关蛋白的表达。
预期结果：预计雄黄微生物浸出液可以显著抑制肿瘤细胞的增殖和
生长，同时促进肿瘤细胞凋亡，并可能通过上调p53和Bcl-2等相关蛋白表达，下调CyclinD1等蛋白的表达等机制发挥其抗肿瘤作用。
意义：本研究可以为雄黄的应用提供一定的药理学理论支持，同时
为该中药的临床应用提供可靠的科学依据。
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K562PADM 细胞 是经阿 霉素 ( ADM ) 诱导、特 异性 高表 达 P- 糖 蛋 白 ( P- gp) 和 多药 耐 药 基 因 ( MDRI) 的白血病耐药细胞 株[ 1] , 对 ADM 等多种
化疗药物交叉耐药。研究表明, 雄黄和一线抗癌 药物 H3AsO3 一 样, 可以 诱导 K562PADM 细 胞凋 亡[ 2] 。与此同时, 这种砷硫化物在治疗白血病中 所表现出的显著疗效, 也使国内学者对其发挥药 理作用和机制产生了浓厚的研究兴趣。但是, 目 前研究中大多采用的雄黄, 为难溶性粗糙原粉或 纳米、微粉化技术制备的混悬液形式[ 3] , 这些形式 入药往往难于认识雄黄发挥药理作用的真正活性 成分, 造成了对其药理活性、作用机制、体内过程 等研究困难。本文采用微生物浸出技术制备了雄 黄微生物提取溶液( RBS) [ 4] , 通过微生物作用, 把 雄黄从固态 粉末转化 为溶液, 体外以 K562PADM 细胞为模型, 考察了该制 剂诱导 K562PADM 凋亡 作用以及 P- gp 和 MDRI mRNA 表达的变化, 初步 探讨 RBS 作用于耐药白血病细胞的分子机制。
NaCl 8. 0 g, KCl 0. 20 g, Na2HPO4 1. 15 g, KH2 PO4 0. 20 g, pH 7. 4) 洗 2 次。按 产品试剂盒的说明, 加入 FIT CPAnnexin V 和 PI, 轻轻混匀, 于 4 e 避 光放置 30 min, 加入结合液( Binding Buffer) , 在 1 h 内用流式细胞仪检测。 1. 7 FITC-Annexin VPPI 双染激光共聚焦显微术 观察细胞形态 细胞处理方法和双染步骤与上一 节相 同。 将 少 量 细 胞 悬 浮 在 PBS 中, 立 即 用 488 nm 和 543 nm 光激发, 在激光共 聚焦显微镜 下观察荧光。 1. 8 P-gp 表达测定 为观察 RBS 对 P- gp 表达的 确切影响, K562PADM 细胞先经 ADM ( 8. 6 LmolPL) 预处理, 强制性地诱导其 P-gp 表达水平增强, 去 除 ADM, 用 含 砷 总 量 为 2. 5 LmolPL RBS 处 理 24 h, RBS 洗涤阴性 对照, 立即 进行流式 细胞仪 ( FCM) 检测, 测定细胞 P- gp 蛋白表达的变化。 1. 9 RT-PCR 方法检 测相关基因 MDRI mRNA 表达水 平的 变化[6] 取上 述对 数生 长 期 K562P ADM 细胞, 调整细胞 密度为 1 @ 107PmL。取该细 胞悬液 200 LL 接种于 6 孔细胞培养板, 然后补加 1. 8 mL 含 一定 浓度 药 物的 新鲜 RPMI1640 培养 液, 另设对照组。置于 37 e 含 5% CO2 的培养箱 中培养至 24 h。收集细胞, 采用 Trizol 试剂提取 总 RNA, 经 M-MLV 反转录酶催化合成 cDNA, 并以 此为模板进行 PCR 扩增。
张景红1,2, 李红玉1
1兰州大学生命学院, 兰州 730000, 甘肃; 2华侨大学分子药物教育部工程研究中心, 泉州 362021, 福建
摘要 目的: 研究雄黄微生物提 取液( RBS) 诱导 K562PADM 细胞凋亡的作用, 并探讨其对 P- 糖蛋 白( P- gp) 和多 药耐 药基因 ( MDRI ) 表 达的影 响。 方法: 采 用 / 微 生 物 浸 出0 法 制 备 RBS, 并 以 H3AsO3 作为阳性对照, AnnexinV- PI 双染法检测细 胞凋亡; 流式细胞仪检测细胞 P- gp 表达率; 逆转 录聚合酶链技术( RT- PCR) 检测细胞 MDRI mRNA 表达水平。结果: RBS 可诱导多药耐药白血病细 胞发 生典型凋 亡, 抑制 P- gp 的表达, 下 调 MDRI mRNA 表达 水平。在 含砷量 相同的 条件下, RBS 诱导 效应 明显强 于 H3 AsO3 。结论: 诱 导细 胞凋 亡、下调 P-gpPMDRI 蛋白的表达, 可能是雄黄逆转 白血病耐药的重要分子机制。 关键词 雄黄微生物提取液; 耐药白血病细胞; 凋 亡; P- 糖蛋白; 多药耐药基因
H3 AsO3 溶液, 取 As2 O3 适 量, 用 1. 0 molPL NaOH 溶液配成 1. 0 mmolPL 贮存液。
Chin J Clin Pharmacol Ther 2009 Aug; 14( 8)
1. 4 细胞 培养 K562 和 K562PADM 细胞 用含 15% 胎 牛 血清 的 RPMI1640 培 养 液培 养 于 5% CO2、37 e 饱和湿度的培养箱中, K 562PADM 细胞 定期添加 ADM( 4. 0 LmolPL) 后, 在无 ADM 的条件 下培养 1 周后用于实验。 1. 5 K562PADM 细胞耐药性测定 K562 细胞( 1 @ 108PmL) 和 K562PADM 细胞( 2 @ 108PmL ) 接种于 96 孔 培养 板 中, 加入 不 同浓 度 的 ADM、RBS 和 H3AsO3 , 培养 24 h 后用 MTT 法检测, 计算 IC50 和 耐药倍数, 具体方法参见文献[5] 。 1. 6 FITC-Annexin VPPI 双染流式细胞术检测细 胞凋亡与坏死 收集处于对数生长期的细胞, 在 50 mL 细胞培养瓶中将细胞密度调整为 1 @ 106# mL- 1#瓶- 1 。加入适量 RBS 缓冲液( PBS, 每升含
MDRI 上游引物 5.- CCCATCATTGCAATAGCAGG3.
下游引物 5.- GTTCAAACTTCTGCTCCTGA-3. , 产
中国临床药理学与治 疗学 2009 Aug; 14( 8)
物长度为( 167 bp) 。 B- actin 上 游 引 物 5 .- GTGGGGCGCCCCAG-
2009-03-31 收稿 2009-07-14 修回 甘肃省科技攻关项 目( 2GS064-A 43-019-02) ; 福建省自 然科学基 金 项目( 2008J0102) ; 泉州市基金项目( 2008Z21) 张景红, 女, 副教授, 硕士生导师, 研究方向: 中药生物工程和肿 瘤 免疫学。 Tel: 13506922986 E-mail: zjh@ hqu. edu. cn 李红玉, 通信作者, 男, 博士生导师, 研究方向: 应用微生物研究。 Tel: 0931-8466942 E-mail : lihy2192 @ sina. com
# 856 #
( West Chester 公 司, 批 号: BS0182) ; 一甲 基 砷酸 [ CH4AsN aO3 #( 3P2) H2O, MMAV ] ( West Chester 公 司, 批号: 113701) ; 吡啶-2, 6- 二甲酸 ( Pyridine 2, 6dicarboxylic acid, PDC) ( Fluka 公司, 纯度 \98 烷基铵盐( CTAOH, 25% 的 甲醇溶液, Tokyo 公司, 批号: 11498) ; ADM 粉( Sigma 公 司, 批号: 070507) ; 其它试 剂均为国产分析 纯; 实验用水均为超纯水。 1. 2 仪 器 PACEPMDQ 高 效 毛 细 管 电 泳 仪 ( DAD, 二 级管 检测器, 美国 Beckman 公司 ) ; CO2
# 855 #
r 基础研究 r
中国临床药理学与治疗学 中国药理学会主办
CN 34-1206PR, ISSN 1009- 2501 E- mail: ccpt96@ 21cn. com 2009 Aug; 14( 8) : 855- 860
雄黄微生物提取液对 K562PADM 细胞 P- 糖蛋白和 多药耐药基因表达的影响
细胞培养箱( MCO- 15AC, 日本三洋公司) ; 倒置相 差显微镜( IX80, 美国 Olympus 公司产品) ; 超净工 作台( SW- CJ 一 ZFD, 苏州净化设备有限公司) ; 自 动酶联免疫检测仪( Bio-Tek X200, 美国 Bio-Tek 公 司产品) ; PCR 扩增仪( GeneAmp9700, 美国 Applied Biosystems 公 司产品) ; 流式 细胞仪 ( Coulter Epies XL, 美 国 Beekman- Coulter 公 司 ) ; 台 式 离 心 机 ( TDL-5, 上 海 安 亭 科 学 仪 器 厂) ; 高 温 烘 烤 箱 ( SuT6060, 德 国 Kendro 公司 产 品) ; 超 纯 水系 统 ( Mill-i Qaioeel, 美国 Millipore 公司) ; 凝胶图像分析 系统( Genius- 2 型, 英国 Syngene 公司) ; 激光共聚 焦显微镜( FV1000S, 美国 Olympus) 。 1. 3 试验药物制备 雄黄由甘肃省中医学院附 属医院药剂科提供( 杨锡仓主任中药师鉴定) , 按 5中国药典6 2005 年版的方法测定, As2S2 含量为
98. 56% , 符合药典规定。 氧化亚铁硫杆菌( Thiobacillus. ferrooxidans) , 由
兰州大学生物技术开发实验室筛选得到, 菌种保 藏号: CCTCC - M204057; K562PADM 和亲 本 细胞 ( K562) 由兰州大学医学实验中心惠赠。
RBS 提 取 液[4] 在 100 mL 改 良 9K 培 养 基 [ ( NH4 ) 2 SO4 , 3. 0 g; KCl, 0. 1 g; K2HPO4 , 0. 50 g;
1 材料与方法
1. 1 试 剂 RPMI1640 培养 基 ( GIBCO 公司, 批 号: 1459076) ; 胎牛血清( 杭州四季青生物公司, 批 号: 07060172) ; MTT ( Sigma 公司, 批 号: BS0401) ; AnnexinV- Propidium Iodide( PI) 双染试剂盒( 宝赛生 物技术有限公司, 批号: 0609082) ; Trizol 试剂 ( Invitrogen 公司, 批号: 0703012) ; PE 标记的抗 P- gp 抗 体( Immountech 公 司, 批 号: 071106) 、PE 标 记 的 IgG2a( Immountech 公司, 批号: 071318) ; M-MLV 一 步法 反 转 录 试 剂 盒 ( 上 海 生 工 公 司, 批 号: 075018) ; PCR marker ( 华美生 物工 程公 司, 批号: 075018) ; As2 O3 ( iAsIII , Sigma 公司, 批号: 070507) ; 砷 酸 钾 ( KH2AsO4, iAsV ) ( Sigma 公 司, 批 号: BS0621) ; 二甲基砷 酸[ ( CH3) 2AsO ( OH ) , DMAV]