7 2 08年04医检-细胞因子及其受体检测(2008.3.21)
细胞因子7项检测的说明
细胞因子7项检测的说明1. 什么是细胞因子检测？好啦，今天咱们来聊聊一个听起来挺高大上的话题——细胞因子检测。
别担心，不用背什么复杂的术语，咱们就像在茶馆聊天一样，轻松愉快。
细胞因子，简单来说就是咱们身体里的一些小信使，它们帮助调节免疫系统，像个小精灵一样，在体内穿梭，传递信息。
细胞因子检测就像是给这些小精灵做个体检，看看它们的状态如何，能不能把咱们的免疫系统调得更加给力。
1.1 检测的意义说到检测的意义，简直就是一部大片啊！想象一下，你在打游戏，突然屏幕上出现了一个小提示：“你的角色状态不佳，快去补给！”这就是细胞因子检测的作用。
通过检测，我们可以了解到身体的免疫反应是否正常，是否存在潜在的疾病，甚至可以提前预判一些问题，像个神预言家一样，给咱们的健康把把关。
1.2 细胞因子的种类细胞因子可多了，七项检测听上去就像一场音乐会，里面有主唱、吉他手、鼓手等等。
它们分别是：肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素（IL1、IL2、IL6、IL10），还有干扰素（IFN）。
每一项都有自己的特点，像不同乐器演奏出的旋律，合在一起才能奏响健康的交响曲。
2. 检测的过程说到检测，很多人会担心，啊呀，要抽血吗？对的，没错，细胞因子检测确实是需要抽血的，听起来有点紧张，但实际上，抽血就像是捡个小便宜，可能有点疼，但为了健康，值得啊。
首先，你得去医院或者诊所，前台的小姑娘会给你登记，像是在填一份VIP通行证，接着就是护士小姐姐出场，温柔地告诉你，稍微捏一下拳头，深呼吸，不用太紧张哦。
然后就抽一管血，咕咚一下，搞定！2.1 检测结果解读等着结果的时候，就像等快递，心里七上八下的。
结果出来后，你可能会看到一些数据，别慌，这些数字就像考试卷上的分数，医生会根据你的情况来给你解读。
比如说，如果某项细胞因子的水平偏高，那可能说明你的身体在和某种疾病作斗争，或者免疫系统在“开会”呢。
如果一切正常，那就恭喜你，继续保持健康的生活方式，咱们要做个“健康达人”！2.2 注意事项不过，做检测也有一些小窍门，首先，最好提前预约，不然一到医院就像去赶集，热闹得很。
细胞因子12项检测解读
细胞因子12项检测解读细胞因子是生命体特有的营养物质，有着诸多功能，它们被广泛地应用于医学诊断、抗癌治疗、免疫调节、以及自身免疫等多种领域。
近年来，细胞因子检测日益受到重视，因为它可以有效地提供有关慢性病影响的重要信息。
细胞因子12项检测是对常用细胞因子水平进行检测的常规化学检测，其中包括TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IFN-γ、MANF和MMP-9。
TNF-α是一种炎症因子，主要调节免疫反应，通常受到慢性炎症的影响。
相比之下，IL-1β是一种关键的细胞因子，主要参与免疫反应和炎症反应。
IL-2和IL-4能够调节效应T细胞活动，促进抗原特异性免疫反应。
IL-5是促进B 细胞分化和抗体合成的重要细胞因子，而IL-10能够调节免疫细胞活动，减少炎症反应的发生。
IL-6参与炎症反应的发生，促进抗原特异性T细胞活动，而IL-8则能够诱导白细胞介导的炎症反应。
IL-12能够促进细胞因子的分泌，而IFN-γ是促进细胞因子的释放的重要细胞因子。
MANF是一种重要的细胞因子，能够克服抗原特异性免疫反应。
最后，MMP-9是一种重要的基因细胞因子，也可以调节免疫反应。
细胞因子12项检测能够检测上述12个细胞因子的水平，它们最常被用于诊断和治疗多种慢性病，尤其是自身免疫疾病。
此外，它也可以帮助医生更好地了解患者的健康状况，从而更好地进行治疗。
这项检测需要收集血液样本，经过特殊半定量分析来测量上述12个细胞因子水平。
通常情况下，这12个细胞因子的水平可以提供多样的发病状况的信息，帮助医生确定病因并诊断和治疗疾病。
细胞因子12项检测不仅可以帮助医生了解疾病的病因，还可以更深入地了解患者的身体状况，帮助医生判断患者的疾病是否正在治疗。
例如，通过IL-2、IL-4和IL-10的水平变化，可以评估患者的炎症状况，甚至可以识别出潜在的慢性病；也可以通过IL-6和IL-8的水平变化来评估患者的免疫状态，从而给出更加有效的治疗方案。
细胞因子检测是检查什么的？
细胞因子检测是检查什么的？免疫系统是人体抵御疾病入侵的重要防线，而细胞因子作为免疫系统中的重要调节分子，对于维持免疫平衡和正常功能起着关键作用。
细胞因子检测是一种现代医学手段，通过测量体内特定细胞因子的水平，帮助医生评估患者的免疫状态、诊断疾病并制定个体化治疗方案。
一.让我们一起来了解什么是细胞因子细胞因子是一种生物素类蛋白质，是由细胞分泌的，具有广泛的生物活性分子。
它们在机体的免疫系统中扮演着重要的角色，调节和控制免疫细胞的生长、分化、功能和生存。
细胞因子可分为许多类型，包括肿瘤坏死因子、干扰素、白细胞介素、趋化因子等。
它们可以促进细胞增殖、分化、迁移、存活，促进炎症反应、抗病毒防御、组织修复等生物过程。
在各种疾病中，例如恶性肿瘤、自身免疫病、感染等，细胞因子的异常水平可能导致免疫功能失调和疾病进展。
因此，细胞因子被广泛地应用于检测和治疗疾病，如肝炎、艾滋病、乳腺癌、骨髓移植和器官移植等。
对于细胞因子的深入研究和应用，将有助于更好地理解和治疗各种疾病。
二.你知道医院检实验室测细胞因子的方法有哪些吗？细胞因子检测是通过测量体内特定细胞因子的水平来评估免疫状态的方法。
1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：将检测细胞因子蛋白特异性的抗体固定在微孔板上，与待检样品中的细胞因子结合后再加上二抗或底物，通过波长的变化来测定细胞因子的含量。
2. 流式细胞术（FACS）：用流式细胞术检测特定免疫细胞表面的特异性标志物，并测定其在单个细胞水平上细胞因子含量的方法。
3.蛋白质芯片技术：将细胞因子蛋白分子固定在芯片上，通过荧光标记或质谱技术检测特定抗体与蛋白结合的信号强度，从而定量测量细胞因子的浓度。
4. RT-PCR技术：通过反转录先把RNA转变为cDNA，再通过PCR扩增细胞因子的mRNA数量，从而间接定量细胞因子的含量。
三.为什么医生会开具细胞因子相关检查，有何作用呢？医生会开具细胞因子相关检查是为了了解患者体内某些细胞因子的水平是否异常，以帮助诊断和治疗一些疾病。
细胞因子受体
细胞因子受体细胞因子是由多种细胞产生的，具有广泛调节细胞功能作用的多肽分子，细胞因子不仅作用于免疫系统和造血系统，还广泛作用于神经、内分泌系统，对细胞间相互作用、细胞的增殖分化和效应功能有重要的调节作用。
细胞因子发挥广泛多样的生物学功能是通过与靶细胞膜表面的受体相结合并将信号传递到细胞内部。
因此，了解细胞因子受体的结构和功能对于深入研究细胞因子的生物学功能是必不可少的。
随着对细胞因子受体的深入研究，发现了细胞因子受体不同亚单位中有共用链现象，这对阐明众多细胞因子生物学活性的相似性和差异性从受体水平上提供了依据。
绝大多数细胞因子受体存在着可溶性形式，掌握可溶性细胞因子受体产生的规律及其生理和病理意义，必将扩展人们对细胞因子网络作用的认识。
检测细胞因子及其受体的水平已成为基础和临床免疫学研究中的一个重要的方面。
一、细胞因子受体的结构和分类根据细胞因子受体cDNA序列以及受体胞膜外区氨基酸序列的同源性和结构特征，可将细胞因子受体主要分为四种类型: 免疫球蛋白超家族(IGSF)、造血细胞因子受体超家族、神经生长因子受体超家族和趋化因子受体。
此外，还有些细胞因子受体的结构尚未完全搞清，如IL-10R、IL-12R等；有的细胞因子受体结构虽已搞清，但尚未归类，如IL-2Rα链(CD25)。
(一)免疫球蛋白超家族该家族成员胞膜外部分均具有一个或数个免疫球蛋白(Ig)样结构域的，有关Ig超家族的结构特点参见第三章。
目前已知，属于IGSF成员的细胞因子受体有IL-1RtⅠ(CD121a)、IL-1RtⅡ(CD121b)、IL-6Rα链(CD126)、gp130(CDw130)、G-CSFR、M-CSFR(CD115)、SCFR(CD117)和PDGFR，并可分为几种不同的结构类型，不同IGSF结构类型的受体其信号转导途径也有差别。
(1)M-CSFR、SCFR和PDGFR:胞膜外区均含有5个Ig样结构域，其中靠近胞膜区为1个V样结构，其余4个为C2样结构。
细胞因子检测
细胞因子检测细胞因子就是由免疫细胞与某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌得一类生物活性物质分泌得蛋白质,在体内广泛参与免疫调节及炎症反应、组织修复、刺激造血系统、刺激细胞得增殖与凋亡等重要生理活动,•在抵抗外来病原及维持机体内环境平衡中均起重要作用、某些刺激因子也可导致一些细胞因子超量表达,或表达减少,从而参与疾病得发病及病理过程。
1、免疫学检测法其基本原理就是将细胞因子作为抗原进行定量检测。
•如免疫斑点法、ELISA法、ＲIＡ法与免疫印迹法等均已用于细胞因子得检测。
2。
、生物学测定法其原理就是根据细胞因子对特定得依赖性细胞株(即靶细胞)•得促增殖作用,以增殖细胞中得DNA得合成或酶活性为指标,间接推算出细胞因子得活性单位,如对IＬ-1、ＩL-2等细胞因子活性得检测。
亦可根据某些细胞因子对特定靶细胞得杀伤效应或对病毒得抑制作用进行测定,如对肿瘤坏死因子及干扰素得生物活性测定。
3、分子生物学测定法目前采用得技术有各种印迹法、斑点杂交、原位杂交与ＰCＲ等。
通过检测细胞内细胞因子得基因组成或mRNA量,推算出细胞因子得合成量、一、IL-1得检测(生物活性测定)产生IL—1得细胞种类很多,其中最主要得为单核－巨噬细胞、ＩL—1可分为IL —１α(•也称酸性IL—１,pI=5。
0)与IL－1β(中性ＩL－1,pI=7。
0)、两者得分子量与生物活性相似,•只能用抗体检测方法才能区别,常用得生物学测定法对两者都适用。
ＩＬ-1•得生物学活性广泛,其检测方法亦较多,包括有小鼠胸腺细胞增殖法、D10Ｇ4、1细胞增殖法及L929细胞增殖法等。
ＩL-1反应细胞增殖可以通过活性染料染色,显微镜直接计数,3H-TdＲ或125I—ＵdR得ＤＮA掺入量或以活性细胞代谢率为指标来表示。
本试验介绍Ｌ929细胞增殖MTT比色法、(一)IＬ-1得诱生体外试验可用ＬPS等有丝分裂原诱导单核-巨噬细胞产生IL-1,或用P3８8D1(鼠),TＨP-1(人)细胞株制备ＩL－1、本试验以小鼠巨噬细胞制备IL—１。
细胞因子检测方法
细胞因子检测方法细胞因子是一类负责细胞之间相互通讯的蛋白质分子，在生物体中起着重要的调节和调控作用。
细胞因子检测是研究细胞因子功能及其相关疾病机制的重要手段。
本文将介绍常见的细胞因子检测方法，包括免疫学方法、PCR方法以及生物芯片技术。
免疫学方法是常用的细胞因子检测方法之一。
这种方法基于细胞因子与抗原抗体的特异性结合来进行检测。
常见的免疫学方法包括酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫荧光法和免疫组化染色法等。
ELISA是最常用的细胞因子检测方法之一。
该方法利用酶标记的抗体与待测的细胞因子特异性结合，通过酶的催化作用使底物发生显色反应，从而进行定量测定。
ELISA方法具有高灵敏度、高特异性和较大的线性测定范围，广泛应用于临床实验室检测细胞因子水平。
免疫荧光法是通过荧光标记的抗体与待测的细胞因子结合，并通过荧光显微镜观察标记信号来进行检测。
该方法具有高灵敏度和高特异性，可以用于检测细胞因子的定位和分布，广泛应用于生物医学研究中。
免疫组化染色法是一种利用酶标记或荧光标记的抗体与待测的细胞因子结合，并利用酶的催化作用进行染色反应的方法。
通过染色的程度可以判断细胞因子的表达水平及分布情况。
这种方法常用于组织学研究和病理学鉴定中。
PCR方法是一种通过扩增特定DNA序列来进行细胞因子检测的方法。
该方法适用于细胞因子的基因表达研究。
常见的PCR技术包括逆转录PCR、实时荧光定量PCR和单细胞PCR等。
逆转录PCR是一种将RNA转录为cDNA并进行扩增的方法。
该方法通过反转录酶将RNA转录为cDNA，再利用DNA聚合酶扩增所得的cDNA，最终通过凝胶电泳或其它方法来检测细胞因子的基因表达水平。
实时荧光定量PCR是一种可以实时监测DNA扩增过程的PCR方法。
该方法基于荧光信号的累积产生来实时监测扩增产品的数量，从而测量初始模板的绝对量或相对量。
单细胞PCR是一种可以在单个细胞水平检测细胞因子基因表达的PCR方法。
该方法通过将单个细胞在微小反应体系中进行逆转录、扩增和检测，从而实现对细胞因子在单个细胞中的表达水平研究。
细胞因子检测的原理和方法概述
细胞因子检测的原理和方法概述细胞因子是一类重要的信号分子，用于细胞间的相互通信和调节。
在生物体内，细胞因子的异常水平与多种疾病的发生和发展密切相关，因此对细胞因子进行检测具有重要的临床和研究意义。
本文将概述细胞因子检测的原理和方法，帮助读者了解这一领域的基本知识。
细胞因子的检测原理主要基于它们在细胞间的相互作用和信号传递过程中所扮演的角色。
细胞因子可以通过多种方式进行检测，其中常见的方法包括免疫学方法、分子生物学方法和生物化学方法等。
免疫学方法是最常用的细胞因子检测方法之一。
其中，酶联免疫吸附试验（ELISA）是最经典的免疫学方法之一。
ELISA利用酶标记的抗体对目标细胞因子进行定量分析。
这种方法的原理是将待检测的细胞因子与固相抗体结合，然后用酶标记的抗体进行二次结合，最后通过染色反应来测定细胞因子的浓度。
ELISA方法具有高灵敏度和高特异性的优点，广泛应用于临床诊断和疾病监测。
分子生物学方法也被广泛应用于细胞因子的检测。
PCR（聚合酶链反应）是其中最常用的方法之一。
PCR基于DNA合成酶的催化作用，可以快速扩增并检测目标细胞因子的核酸序列。
与ELISA相比，PCR方法具有更高的敏感性和特异性，能够检测到更低浓度的细胞因子。
同时，PCR还可以结合其他分子生物学技术如实时荧光定量PCR来实现更准确的定量分析。
此外，生物化学方法也可用于细胞因子的检测。
其中较常用的方法是质谱法。
质谱法基于细胞因子的质量-电荷比，利用质谱仪分析待测细胞因子的分子结构和质量。
质谱法具有高分辨率和高准确性的优点，能够对细胞因子进行精确的定量分析。
总结起来，细胞因子检测的原理和方法多种多样，常见的方法包括免疫学方法、分子生物学方法和生物化学方法等。
这些方法具有不同的特点和优势，可以根据具体需求选择适合的方法进行细胞因子的检测。
细胞因子的准确检测有助于早期发现疾病、评估疾病的严重程度以及指导治疗方案的制定，对于临床医学和生物研究具有重要意义。
10种常用细胞因子检测方法盘点
10种常用细胞因子检测方法盘点研究细胞因子为临床上疾病的预防、诊断、机理研究以及治疗等奠定了良好的基础，应用前景非常广泛。
目前检测细胞因子的方法有很多，根据检测原理和手段的不同，检测技术大致可分为四类：免疫学方法、生物学方法、分子生物学方法及质谱法。
细胞因子是由免疫细胞（如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等）和某些非免疫细胞（内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等）经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。
细胞因子一般通过结合相应受体调节细胞生长、分化和效应，调控免疫应答。
这些细胞因子的种类很多，包括肿瘤坏死因子—α(TNF-α)、白介素—1β(IL-1β)、白介素—6(IL-6)、转化生长因子—β(TGF-β)等。
细胞因子(cytokine，CK)是主要由机体中固有免疫细胞和适应性免疫细胞合成、分泌的一类具有多种活性功能的小分子多肽或糖蛋白。
细胞因子能介导细胞间的相互作用，具有多种生物学功能，如调节细胞生长、分化成熟、功能维持、调节免疫应答、参与炎症反应、创伤愈合和肿瘤消长等。
研究细胞因子为临床上疾病的预防、诊断、机理研究以及治疗等奠定了良好的基础，应用前景非常广泛。
目前检测细胞因子的方法有很多，根据检测原理和手段的不同，检测技术大致可分为四类：免疫学方法、生物学方法、分子生物学方法及质谱法。
本篇我们就和大家一起来汇总一下10种方法的技术原理及方法特点：1、7种基于免疫学的常用的细胞因子检测方法Western Blot法、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、酶联免疫斑点技术（ELISpot）、超敏电化学发光技术（MSD）、Luminex液相芯片检测技、Olink技术、Simoa技术（Simoa）7种常用的细胞因子检测方法差异对比2、2种基于生物学的检测方法反转录·聚合酶链反应（RT-PCR）Cytometric Bead Array（CBA）系统3、质谱法4、12项细胞因子检测的临床意义一、基于免疫学的检测方法炎症因子作为一种蛋白质抗原，可以特异性与其单克隆抗体结合，利用抗原抗体反应检测细胞因子，近年来发展比较快，其方法包括Western Blot法、酶联免疫吸附测定法、酶联免疫斑点技术、超敏电化学发光技术、Luminex液相芯片检测技术、Olink技术、Simoa技术。
细胞因子和细胞因子受体
2.集落刺激因子 (Colony-Stimulating Factor, CSF)
•
能够刺激多能造血干细胞和不同发育阶段的造血祖细胞增殖
分化，并在半固体培养基中形成相应细胞集落的细胞因子。
• 根据刺激不同造血细胞系或不同分化阶段的细胞有不同的命名
名称 SCF（干细胞因子）
主要产生细胞
• IL-2受体：CD25(α)；CDl22(β)；CDl32(γc)
IL-2的生物学活性
• 作用具有沿种系谱向上有约束性，向下无约束性：
1、促进活化的T细胞进入S期，维持细胞的增殖，刺激产生： MHCII，IFN-γ，IL-4、5、6，LT-α，CSF。
2、促进杀伤细胞分化和效应：CTL，NK，LAK； 诱导杀伤细胞： IFN-γ，TNF-α产生，增强CTL穿孔素表达
EPO（红细胞生成素）
TPO（血小板生成素）
肾脏细胞
肾，肝
红细胞
血小板
G-CSF(粒细胞集落刺激因子)
• 1983年命名,1986年克隆成功. • 人G-CSF基因位于17号染色体, • 人类有两种不同的G-CSF DNA,分别编码含207和204
个氨基酸的前体蛋白,均有30个氨基酸的先导序列,除了 在35位插入了3个氨基酸外,其余序列一样. • 有5个半胱氨酸36=42,64=74,17游离. • 来源 • 多种细胞可产生 • 内毒素、TNF-α、IL-1、IFN-γ活化单核/巨噬细胞可 产生， • 刺激成纤维、内皮细胞也可产生， • 某些肿瘤细胞可产生
传统生物学策略
生物活性
别离纯化
蛋白质
cDNA克隆
基因
检测表型
细胞
构建
动物模型
临床相关
细胞因子检测的重要性及应用前景
细胞因子检测的重要性及应用前景细胞因子检测是一种重要的实验技术，用于评估细胞内外信息传递的程度，并提供了许多关于细胞功能和疾病机制的重要信息。
细胞因子是一类由细胞产生，并在体内发挥调节细胞生长、发育、分化、死亡等功能的分子信号。
细胞因子的异常调节与多种疾病的发生和发展密切相关。
因此，细胞因子检测可以为临床诊断和治疗提供有力的支持。
细胞因子检测的重要性在于它能够提供关于机体免疫功能状态的信息。
细胞因子在免疫调节中起着至关重要的作用，包括维持和调控免疫平衡、抵抗感染和控制炎症反应等。
通过定量检测细胞因子的水平，可以评估机体的免疫功能状态，为预防、诊断和治疗疾病提供重要的指导。
例如，在免疫缺陷病人中，特定细胞因子的检测可以帮助确定免疫系统的功能缺陷或炎症病理过程，从而引导治疗方案的选择和监测治疗效果。
另外，细胞因子检测还能够揭示疾病的发生机制。
许多疾病的发展都与细胞因子的异常调节有关。
通过检测特定细胞因子的水平，可以了解疾病的发病机制和进展过程，为疾病的早期诊断和治疗提供重要参考。
例如，在某些自身免疫性疾病中，特定细胞因子的过度产生导致免疫系统攻击正常组织，了解细胞因子的水平变化可以帮助确定病情严重程度和制定个体化的治疗方案。
细胞因子检测的应用前景非常广阔。
随着生物技术和分子生物学的发展，检测细胞因子的方法也得到了不断改进。
传统的细胞因子检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和流式细胞术。
近年来，基于免疫荧光、质谱、蛋白芯片和单细胞技术的新方法不断涌现，大大提高了细胞因子检测的灵敏度和准确性。
在临床方面，细胞因子检测可以用于疾病的早期诊断、疾病的分期和预后评估，以及治疗方案的选择和效果监测。
例如，在肿瘤研究中，通过检测肿瘤相关细胞因子的水平，可以帮助确定肿瘤的类型、分期和治疗反应，从而指导个体化的肿瘤治疗。
此外，细胞因子检测还可以应用于感染性疾病的诊断和监测、免疫缺陷病的早期筛查和治疗效果的评估，以及自身免疫性疾病的诊断和治疗。
十二项细胞因子检测（流式法）的临床意义与检验须知
十二项细胞因子检测（流式法）的临床意义与检验须知为提高我院疾病诊断技术水平，从即日起，检验科利用流式高通量检测技术开展十二项免疫功能相关细胞因子联合检测项目。
本项目将为感染、肿瘤、自身免疫病、妇产科和生殖医学科相关疾病等多种临床疾病的诊治提供重要依据，为前来医院就诊的临床患者提供更为优质全面的检验服务。
细胞因子是由免疫细胞（如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等）及某些非免疫细胞（内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等）经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质，参与机体免疫反应和炎症反应，包括白介素、干扰素、肿瘤坏死因子等。
不同患者在感染过程中反应不同，如感染流感后，机体免疫反应过强，促炎性细胞因子过度释放，引起严重免疫病理损伤称之为“细胞因子风暴”。
“细胞因子风暴”的目标是清除病毒，但也可能导致患者自身的机体损伤。
在流感发展成重症前，采取临床干预至关重要，因此需监测细胞因子，及早识别并监测过度炎症反应，能够为临床的诊疗提供有力帮助。
细胞因子监测范围主要包括感染、肿瘤、自身免疫性疾病、手足口病、胰腺炎或不明原因发热患者；抗生素、免疫调节剂、激素用药前、用药后；手术后；ICU患者等。
一、适用科室：肿瘤科、ICU、呼吸科、感染科、风湿免疫科、血液科、器官移植科、放化疗科、外科、皮肤科、肾内科、眼科、妇科等科室均可以开展，其结果可以为疾病的辅助诊断、指导用药、监测疗效及预后提供参考。
细胞因子12项包括：IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-17、TNF-α、IFN-γ、IFN-α。
方法学：流式免疫荧光法二、收费标准：513元∕人（甲类医保）三、医嘱：医生工作站直接搜索“细胞因子12项”四、抽血要求及报告时限：1-2ml EDTA抗凝血浆（紫管）×1管，无需空腹，随时送检，当日或次日下午4点发出检验报告。
五、临床意义：细胞因子临床意义IL-1β可促进成纤维细胞增殖和胶原合成，参与纤维化；对胰岛β细胞有毒性，与Ⅰ型糖尿病有关；可刺激神经胶质细胞增生，形成瘢痕，与癫痫发病有关；有抗肿瘤作用，能协同IL-2、IFN-γ诱导CTL和NK细胞的杀伤活；与自身免疫病和抑制排斥有关。
细胞因子检测方法
细胞因子检测方法
细胞因子是一种介导细胞间相互作用的小分子信号物质，具有在机体免疫、炎性反应、生物钟同步、细胞分化、生殖发育等方面的重要功能。
因此，细胞因子的检测对于了解疾病发生、发展机制以及药物治疗的疗效等方面具有重要意义。
以下是几种常见的细胞因子检测方法：
1. 酶联免疫吸附试验(ELISA)：该方法利用特异性抗体与细胞因子结合，通过酶标记测定其浓度。
具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点，是目前最常用的检测方法。
2. 流式细胞术：该方法利用荧光标记的特异性单克隆抗体对细胞因子进行检测，可以同时检测多种细胞因子，但操作较复杂，需要较高的技术水平。
3. 放射免疫分析(RIA)：该方法利用放射性同位素标记的抗体与细胞因子结合并通过放射检测器测定放射性计数率来检测其浓度，具有高灵敏度和高特异性，但需要操作较为繁琐，使用范围较窄。
4. 生物传感器检测法：该方法利用细胞因子与生物传感器相互作用后产生电化学信号来进行检测，具有快速、灵敏度高、实时检测等优点，但需要设计和构建生物传感器。
5. 质谱法检测：该方法利用质谱仪检测分子的质量和分子类别，可以对多种细
胞因子同时进行检测，但需要较为昂贵的设备和较高的技术水平。
总之，选择适宜的细胞因子检测方法需要考虑实验室设备、技术水平、检测样本和需要检测的细胞因子等多个因素。
细胞因子12项检测解读
细胞因子12项检测解读
细胞因子检测是由细胞研究中所使用的一种技术，其主要用于通过检测和分析细胞中各种活性并反映其功能状态的定量分析，该技术可以提供有关细胞形态学与生物学特性的比较，还可以预测细胞的行为。
细胞因子检测有助于更深入地了解细胞功能，为基础研究提供实验性支持，而且有助于揭示有关细胞功能的重要调控机制。
细胞因子12项检测是一种常用的检测方法，它是通过使用酶联免疫吸附检测调节细胞活性的有效方法。
检测的包括12种重要细胞因子，这12种细胞因子可以反映细胞的活性，即外界信号的反应。
该检测可以用于细胞的研究，如诊断癌症、肿瘤的增殖、转移等。
通过检测12种细胞因子，可以研究细胞的生长发育、增殖、转录、基因表达和信号转导等各种行为。
细胞因子12项检测可以帮助科学家进一步探索细胞的相关信息，如细胞活性、形态和表型。
它们可以进一步探究细胞在由外界刺激而有所变化时的功能机制，以及疾病治疗等方面的调控机制。
细胞因子12项检测有很多好处，可以显着提高实验的灵敏度，使基础研究的技术更加可靠。
它可以有效检测细胞的表达水平，特别是癌症相关的肿瘤细胞。
此外，它可以帮助科学家了解癌症发生机制和其他疾病的发病机制，以发展新的治疗策略。
此外，该检测还可以有利于提高新药的研发，从而提高临床治疗的效率。
最后，细胞因子12项检测是一种实用性、灵敏性较高的检测技术，可以帮助科学家解决各种生物学问题。
它的优势在于可以有效地
检测细胞活性的变化，从而更好地认识细胞的行为、病变及其机理。
它可以提供有关细胞功能的实验数据和定量分析，为细胞领域的研究和发展提供技术支持。
细胞因子检测在免疫监测中的重要性分析
细胞因子检测在免疫监测中的重要性分析细胞因子是一类分泌性蛋白质，在免疫系统中起到相互调节和传递信息的重要角色。
免疫监测是评估个体免疫功能状态的关键方法，而细胞因子检测作为其中的重要组成部分，能够提供关键的免疫信息。
本文将对细胞因子检测在免疫监测中的重要性进行分析。
首先，细胞因子检测能够帮助评估免疫系统的活性。
免疫系统的正常功能对于抵御病原体和维持机体内稳态至关重要。
许多疾病的发生与免疫系统的功能紊乱有关，而细胞因子作为免疫系统重要信号的调控因素，可以反映免疫活性的变化。
通过检测关键细胞因子的水平，可以了解免疫系统的激活程度、炎症反应的程度以及机体对病原体的防御能力，对于早期发现疾病和监测治疗效果具有重要意义。
其次，细胞因子检测对于免疫系统相关疾病的诊断和治疗具有指导作用。
许多免疫系统相关疾病，如自身免疫性疾病、过敏性疾病、恶性肿瘤等，都与细胞因子的异常表达或分泌有关。
通过对特定细胞因子的检测，可以帮助医生确定疾病类型、分析疾病的发展趋势，并为个体化治疗方案的制定提供依据。
例如，在某些炎症性疾病中，IL-6和TNF-α的高水平可以作为疾病活动性的指标，用于评估患者的病情、判断治疗效果和预测预后。
此外，细胞因子检测还可以用于免疫治疗的监测与调整。
免疫治疗是一种通过干预免疫系统功能来治疗疾病的方法，如免疫抑制剂的应用、细胞因子疗法等。
而细胞因子检测可以帮助评估治疗效果，指导治疗方案的调整。
通过监测治疗前后的关键细胞因子水平变化，可以判断治疗是否有效，及时调整治疗方案，提高治疗效果，并避免不必要的副作用和风险。
另外，细胞因子检测还有助于预测免疫相关疾病的风险和预后。
个体在免疫系统方面的遗传差异以及外界环境的影响，可能导致不同个体免疫系统的功能差异。
通过检测一些与疾病发展相关的细胞因子，可以帮助我们识别易感人群，并进行个体化健康管理。
同时，细胞因子的检测还可以用于评估疾病的预后。
一些细胞因子的表达水平变化与疾病的进展和转归有关，通过监测这些指标，可以帮助医生判断疾病的预后，制定更合理的治疗计划。
细胞因子检测的意义及方法比较
细胞因⼦检测的意义及⽅法⽐较导读：细胞因⼦检测的意义及检测⽅法⽐较，是1957年发现的细胞因⼦，最初发现某⼀种病毒导读：感染的细胞能产⽣⼀种物质可⼲扰另⼀种病毒的感染和复制，他们分别由⽩细胞、成纤维细胞和活化T细胞所产⽣，这⾥主要利⽤⽣物分析法和免疫分析法进⾏检测，细胞因⼦是免疫原、丝裂原或其他刺激剂诱导多种细胞产⽣的低分⼦量可溶性蛋⽩质，具有调节和⾎细胞⽣成、细胞⽣长以及损伤组织修复等多种功能，细胞因⼦可被分为⽩细胞介素、⼲扰素、细胞因⼦检测的意义及检测⽅法⽐较摘要：⼲扰素（interferon, IFN)是1957年发现的细胞因⼦，最初发现某⼀种病毒感染的细胞能产⽣⼀种物质可⼲扰另⼀种病毒的感染和复制，因此⽽得名。
根据⼲扰素产⽣的来源和结构不同，可分为IFN-α、IFN-β和IFN-γ，他们分别由⽩细胞、成纤维细胞和活化T细胞所产⽣。
各种不同的IFN⽣物学活性基本相同，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作⽤。
这⾥主要利⽤⽣物分析法和免疫分析法进⾏检测。
关键词：⼲扰素⽣物分析法免疫分析法正⽂：细胞因⼦是免疫原、丝裂原或其他刺激剂诱导多种细胞产⽣的低分⼦量可溶性蛋⽩质，具有调节和⾎细胞⽣成、细胞⽣长以及损伤组织修复等多种功能。
细胞因⼦可被分为⽩细胞介素、⼲扰素、肿瘤坏死因⼦超家族、集落刺激因⼦、趋化因⼦、⽣长因⼦等。
众多细胞因⼦在体内通过旁分泌、⾃分泌或内分泌等⽅式发挥作⽤，具有多效性、重叠性、拮抗性、协同性等多种⽣理特性，形成了⼗分复杂的细胞因⼦调节⽹络，参与⼈体多种重要的⽣理功能。
所以细胞因⼦检测是判断机体免疫功能的⼀个重要指标，对于疾病的诊断、病程观察、疗效判断及细胞因⼦治疗监测等都有重要意义。
⽣物分析法有两种：1.依赖性细胞株：利⽤⼀些肿瘤细胞株必须依赖于细胞因⼦⽅能在体外增殖的特性进⾏检测，但是⼲扰素的测定利⽤此法并不简便，所以不当采⽤。
2.功能检测：利⽤⼀些细胞因⼦的功能特性，可建⽴相应的活性测定⽅法。
细胞因子检测
细胞因子检测
细胞因子检测是一种重要的生物医学检测方法，用于分析生物体内不同细胞产
生的特定蛋白质分子。
细胞因子是一类能调节细胞功能的蛋白质，广泛参与调节免疫反应、细胞增殖和凋亡等生物过程。
通过检测细胞因子的水平，可以帮助医生诊断疾病、评估疗效，以及指导个体化治疗方案的制定。
在细胞因子检测中，常用的方法包括酶联免疫吸附法（ELISA）、流式细胞术、蛋白质芯片技术等。
ELISA是一种常见的定量检测方法，通过将待检测样本加入带
有特异性抗体的酶标记物后，再加入底物使酶发色，通过颜色的变化来反映细胞因子的含量。
流式细胞术主要通过将单个细胞悬浮液通过激光进行检测，可以同时检测多种细胞因子，并分析不同细胞亚群之间的作用关系。
蛋白质芯片技术是一种高通量的检测方法，可同时检测多种细胞因子及其相互作用。
细胞因子检测在临床应用中有着广泛的价值。
例如，在肿瘤治疗中，细胞因子
检测可以评估肿瘤微环境中细胞因子的分泌水平，及时调整治疗方案。
在自身免疫性疾病中，细胞因子检测可以帮助医生了解患者免疫炎症状态，指导用药选择。
在感染性疾病中，细胞因子检测可以帮助快速诊断病原体感染，加快治疗进程。
总的来说，细胞因子检测作为一种重要的生物医学检测方法，为疾病的诊断、
治疗和监测提供了重要的信息。
随着技术的不断进步，相信细胞因子检测将在未来发挥更为重要的作用，为个体化医疗和疾病预防提供更多可能性。
细胞因子检测方法-
细胞因子检测方法-细胞因子是一种广泛存在于植物和动物中的蛋白质，它们可以促进或抑制细胞的生长、分化和凋亡。
在免疫系统中，细胞因子是一种重要的信号分子，它们可以调节免疫反应的激活、增强或抑制。
细胞因子检测是一种关键的实验技术，它可以用于研究细胞因子的分泌和功能，以及诊断和治疗许多疾病。
在本文中，我们将介绍几种常见的细胞因子检测方法，并探讨它们的优缺点和适用范围。
1. ELISA（酶联免疫吸附）检测酶联免疫吸附检测是一种常用的细胞因子检测方法。
它基于酶标记技术和特异性抗原-抗体反应原理，可以高灵敏度地测定细胞因子在样品中的浓度。
ELISA检测需要使用特定的抗体对细胞因子进行捕捉，再用另一种标记有酶或荧光素的抗体进行检测。
样品经过处理后，酶或荧光素会与抗体结合，从而检测出样品中的细胞因子浓度。
ELISA检测具有高灵敏度、高特异性和易于操作等优点，适用于大多数细胞因子的检测。
但是，它需要一定的实验器材和条件，并且不能同时检测多种细胞因子。
2. Luminex检测Luminex检测是一种多重细胞因子检测技术，它基于微球上的特异性抗体和荧光标记的技术，在同一试管内同时检测多种细胞因子。
Luminex技术可以同时检测多达50种不同的细胞因子，而且对于具有低浓度的细胞因子也能进行灵敏的检测。
Luminex检测具有高通量、高灵敏度和多功能性等优点，但是它需要较高的技术水平和专业的仪器，而且需要更多的样品和试剂。
3. Western blot（蛋白质印迹）检测Western blot是一种常见的蛋白质检测方法，它可以用于测定细胞因子和其相关蛋白的表达和定量。
Western blot需要将样品中的蛋白质进行SDS-PAGE胶电泳分离，并通过转移和检测的方式来定性或定量样品中的蛋白质。
Western blot检测适用于分子量较大的细胞因子，比如IL-6、TNF-α等。
它具有高特异性和较高的灵敏度，但是需要多道操作，需要一定的技术水平。
细胞因子的测定方法
细胞因子的测定方法
细胞因子是由免疫细胞或其他细胞产生的一类具有生物活性的物质，它们在免疫反应、炎症过程、组织修复等生理过程中发挥重要作用。
细胞因子的测定对于了解细胞的功能、疾病诊断和治疗等方面具有重要意义。
本文主要介绍生物学方法、免疫学方法和基因表达分析三种测定细胞因子的方法。
一、生物学方法
生物学方法是利用细胞因子与靶细胞之间的相互作用来测定细胞因子。
细胞因子与靶细胞上的受体结合后，可诱导靶细胞产生特定的生物学效应，如增殖、分化、凋亡等。
通过观察这些效应的发生程度，可以评估细胞因子的活性。
二、免疫学方法
免疫学方法是利用特异性抗体来检测细胞因子。
这种方法通常采用酶联免疫吸附试验（ELISA）或流式细胞术等方法。
ELISA可以检测细胞培养液或血清中的细胞因子，而流式细胞术可以用于检测细胞因子在单个细胞中的表达水平。
三、基因表达分析
基因表达分析是通过检测特定基因的表达水平来评估细胞因子的产生情况。
这种方法通常采用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）或微阵列等技术。
RT-PCR可以检测特定细胞中细胞因子的mRNA水平，而微阵列可以同时检测多个基因的表达水平。
以上是细胞因子测定的三种主要方法，它们各有优缺点。
生物学
方法可以直观地反映细胞因子与靶细胞之间的相互作用，但操作繁琐且不易定量；免疫学方法具有较高的灵敏度和特异性，但可能受到交叉反应的干扰；基因表达分析可以反映细胞因子的产生情况，但无法直接确定其生物活性。
因此，在实际应用中需要根据具体情况选择合适的方法。
细胞因子的检测和应用课件
o
OH
5’端标记报告荧光 没有杂 交，距 离近而 发生荧 光能量 转移 3’端标记淬灭荧光
TaqMan 聚合酶
样本中原始模板的数量与荧光强度超出 选定阈值时的扩增循环数（Ct)成反比
“分子信标”技术
5’ 3’
分子生物学检测法(mRNA )
• Northern印迹杂交 本方法有一定 的限制性，因为mRNA的稳定性及其 降解速率直接影响细胞内mRNA的积 累量，因此用细胞总RNA作Northern 印迹杂交，其结果不能完全反映 mRNA的转录活性。 反转录PCR（RT-PCR） 细胞因子的 mRNA寿命短、拷贝数低，难以在小 量样本中进行检测。RT-PCR能检测 细胞内低丰度特异mRNA的方法。
免疫学检测法
细胞因子均为蛋白或多肽，具有较强的抗原 性。随着重组细胞因子的出现，可较方便 制得细胞因子的特异性抗血清或单克隆抗 体，因此尽管细胞因子的种类繁多，只要 获得了针对某一因子的特异性抗体（包括 多克隆抗体或单克隆抗体）均可采用相似 的技术开展工作。常用的方法有ELISA、RIA 及免疫印迹法等。目前，几乎所有常见细 胞因子的检测试剂盒均有商品供应。
步骤：1．依赖细胞株的培养。用血细胞计数仪测定细胞密 度，取适当体积的细胞用于测定。用基础培养液洗细胞两 次后，测定细胞活力（应>80%），并以测定培养液重悬细 胞至合适终浓度用以测定。表１５－１提供了参考。 ２．用细胞因子标准品建立一个标准曲线，并设置已知含 测定培养液的质控孔。 ３．适当稀释待测标本，加入微孔板中双份重复测定。 ４．每孔中加入细胞悬液，置于湿润的CO2培养箱中３７℃ 培养。（培养时间按所用细胞株而定） ５．加入3H标记的胸腺嘧啶，在置于CO2培养箱中３７℃培 养约4h。 ６．收集细胞于玻璃纤维滤纸上，是用液体闪烁仪测定放 射活性。 此方法优点是易于自动化，测定的信噪比最好，可常规用 于大标本量的测定。缺点是使用放射性核素，试验废物处 理麻烦。
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临床免疫学检验教研室 温州医学院附属二院 陶 洪 群
学习要点： 学习要点：
生物学检测方法的种类、 生物学检测方法的种类、原理和技术要点 免疫学检测方法的种类 分子生物学检测方法的种类 比较三种细胞因子检测方法的优缺点 检测细胞因子受体的常用方法
细胞因子: 细胞因子 是由活化的免疫细胞及某些基质细胞表达并
常用于攻击细胞的病毒
VSV、EMCV等 、 等
最常用的检测系统： 细胞-VSV 最常用的检测系统： Wish细胞 细胞
IFN的生物学活性测定 IFN的生物学活性测定
96孔培养板中加入不同稀释度的 孔培养板中加入不同稀释度的IFN和标准 和标准IFN， ， 孔培养板中加入不同稀释度的 和标准 每孔50l，病毒对照不加IFN 每孔 ，病毒对照不加 ↓ 每孔加入100l 1.5～2×10５／ ml Wish 或Hep-2细胞悬液， 每孔加入 ～ × ５ 细胞悬液， 细胞悬液 孵箱培养6～ 孵箱培养 ～12h， ， ↓ 每孔加入VSV, 细胞对照不加病毒液 每孔加入 ↓ 终止培养前3～ 加入 加入5mg／ml MTT, 15L／孔 终止培养前 ～4h加入 ／ ／ ↓ 加入适量生理盐水， 加入适量生理盐水，用滴管轻轻吹吸弃去悬浮病变细胞和死细胞 ↓ 200l／孔 二甲亚砜，作用 ／ 二甲亚砜，作用10min ↓ 表示活细胞中含甲臜的量， 测OD(570nm),表示活细胞中含甲臜的量， 表示活细胞中含甲臜的量 测定IFN对活细胞的保护水平 对活细胞的保护水平 测定
四、趋化活性测定法
IL-8、IL-16、MCP（单核细胞趋 、 、 （ 化蛋白） 化蛋白）的生物活性测定 Boyden 小室法
五、生物学检测法的评价
优点 生物学活性的测定 灵敏度高 不需商品化试剂盒， 不需商品化试剂盒，成本低 缺点 特异性差 操作繁琐 易受干扰
第二节 免疫学检测法
ELISA 首选方法
第三节 分子生物学检测
细胞因子的DNA检测 细胞因子的DNA检测 DNA
Southern印迹杂交 Southern印迹杂交 斑点印迹杂交 聚合酶链反应（PCR） 聚合酶链反应（PCR） 原位杂交和原位PCR 原位杂交和原位PCR
细胞因子mRNA表达的测定 细胞因子mRNA表达的测定 mRNA
原位杂交 RT-PCR RT原位RT原位RT-PCR RT
分泌的活性物质， 分泌的活性物质，其主要生物学功能是介导和调节免疫 应答及炎症反应，其化学本质是蛋白质或多肽。 应答及炎症反应，其化学本质是蛋白质或多肽。 生物学作用:抗感染和抗肿瘤 生物学作用 抗感染和抗肿瘤; 抗感染和抗肿瘤 免疫调节作用; 免疫调节作用 刺激造血细胞增殖分化; 刺激造血细胞增殖分化 参与和调节炎症反应 发挥效应的特点:非特异性 多效性;重叠性 拮抗性; 发挥效应的特点 非特异性;多效性 重叠性;拮抗性 非特异性 多效性 重叠性 拮抗性 协同性;增强性 网络性 协同性 增强性;网络性 增强性
技术要点
依赖细胞株的准备 细胞因子作用于依赖细胞株 测定细胞增殖程度 测定细胞增殖程度 细胞因子活性单位的计算 细胞因子的生物活性单位是指使相应细胞达到最大程 细胞因子的生物活性单位是指使相应细胞达到最大程 度增殖的50％ 度增殖的 ％时所需细胞因子的含量为一个活性单位 。
待测样品50％ 待测样品 ％最大程度增殖的稀释度 细胞因子活性（ 细胞因子活性（U/ml）＝ ）＝ 标准品50％ 标准品 ％最大程度增殖的稀释度 ×标准品的细胞因子活性单位
主要用于肿瘤坏死因子（TNF） 主要用于肿瘤坏死因子（TNF）的生物活性测定 肿瘤坏死因子 TNF敏感株：小鼠成纤维细胞株L929和 TNF敏感株：小鼠成纤维细胞株L929和WEHI 164.13 敏感株 L929
技术要点
靶细胞的准备 TNF作用于靶细胞 作用于靶细胞 细胞毒性反应程度测定 细胞毒性反应程度测定 TNF活性计算 活性计算
ILIL-2生物活性的测定
IL-2依赖的 依赖的CTLL用10％FCS-RPMI1640洗涤 次， 洗涤2次 依赖的 用 ％ 洗涤 每次1000rpm, 5min, 除去原培养液中的 除去原培养液中的IL-2 每次 ↓ 调整活细胞数1× 调整活细胞数 ×10５／ml ↓ 96孔平底培养板中每孔加入 孔平底培养板中每孔加入100l不同稀释度标准 不同稀释度标准IL-2和待测样品 孔平底培养板中每孔加入 不同稀释度标准 和待测样品 ↓ 每孔加100l CTLL悬液 每孔加 悬液 ↓ 37℃CO2孵箱，培养 ～24h 孵箱， ℃ 孵箱 培养18～ ↓ 每孔加３H-TdR ↓ 4-6h 用细胞收集仪收获于玻璃纤维纸上 ↓ 于液闪仪中测β射线的 射线的cpm值 于液闪仪中测 射线的 值
第四节 细胞因子受体检测技术
膜结合受体的测定 可溶性受体的测定
细胞因子测定的临床应用原则
多种方法测定 测定标本的选择适当 同时测定多种细胞因子
细胞因子测定的临床应用
疾病诊断的辅助指标 评估机体的免疫状态， 评估机体的免疫状态，判断疗效及预后 监测治疗
思考题
名词解释： 名词解释：依赖细胞株 生物学测定法测定细胞因子原理及其优缺点。 生物学测定法测定细胞因子原理及其优缺点。 生物学测定法测定细胞因子的技术类型及其应用。 生物学测定法测定细胞因子的技术类型及其应用。 免疫化学法测定细胞因子原理及其优缺点。 免疫化学法测定细胞因子原理及其优缺点。
指示细胞
指示细胞：短期培养细胞；依细胞株是指人们为检测某一种细胞因子而筛选的， 依赖细胞株是指人们为检测某一种细胞因子而筛选的， 是指人们为检测某一种细胞因子而筛选的 该细胞株的分裂增殖只依赖于某一种细胞因子的存在， 该细胞株的分裂增殖只依赖于某一种细胞因子的存在， 并在一定浓度范围内与细胞增殖程度呈正相关。 并在一定浓度范围内与细胞增殖程度呈正相关。若培养 基中缺乏这种细胞因子，依赖株则不能存活。 基中缺乏这种细胞因子，依赖株则不能存活。 IL-2指示细胞：CTLL（小鼠杀伤性 细胞系） 指示细胞： 细胞系） 指示细胞 （小鼠杀伤性T细胞系
分子生物学检测方法的评价
可对细胞因子的基因突变、缺失、重排及染色体易位等进 可对细胞因子的基因突变、缺失、 行检测。 行检测。 原位杂交和原位PCR，可分析病理情况下何种细胞中细胞 ， 原位杂交和原位 因子的基因发生异常， 因子的基因发生异常，揭示细胞中细胞因子基因特定改变 及其表达，究竟发生在细胞增殖的哪个阶段。 及其表达，究竟发生在细胞增殖的哪个阶段。 技术复杂 ,实验室条件要求严格
细胞增殖检测方法
直接计数法 简便、直观,但费时、主观因素影响大、 简便、直观,但费时、主观因素影响大、难以标准 化和自动化
3H-TdR掺入法 TdR掺入法
通过细胞DNA合成的增加间接判断 通过细胞DNA合成的增加间接判断 DNA MTT比色法 MTT比色法 以细胞的代谢物作为细胞增殖指示物间接判断 代谢产物可被二甲基亚砜或酸化的异丙醇所溶解而 代谢产物可被二甲基亚砜或酸化的异丙醇所溶解而 二甲基亚砜或酸化的异丙醇 显色，测定波长为570nm，参考波长为630nm。 显色，测定波长为570nm，参考波长为630nm。 570nm 630nm
3H-TdR掺入法、MTT比色法、 掺入法、 比色法、 掺入法 比色法
结晶紫染色法:活细胞染色而死细胞不着色 活细胞染色而死细胞不着色， 结晶紫染色法 活细胞染色而死细胞不着色， 柠檬酸钠缓冲液脱色， 柠檬酸钠缓冲液脱色，测A570nm
TNF生物学活性测定 TNF生物学活性测定
取对数生长期的L929细胞，以0．01％胰蛋白酶消化用培养液调整细 细胞， 取对数生长期的 细胞 ． ％ 5／mL。 胞浓度至2× 胞浓度至 ×10 。 ↓ 培养板中每孔加入100L细胞悬液，置37℃，5％C02温箱孵育 培养板中每孔加入 细胞悬液， ℃ ％ 温箱孵育24h。 。 细胞悬液 温箱孵育 ↓ 每孔分别加入100L稀释样品或标准品 每孔分别加入 稀释样品或标准品 ↓ 各孔加入10L放线菌素 ，37℃12—14h。 各孔加入 放线菌素D， ℃ 。 放线菌素 ↓ 离心弃上清，并用PBS洗细胞一次。 洗细胞一次。 离心弃上清，并用 洗细胞一次 ↓ 每孔加入0． ％ 每孔加入 ．25％结晶紫 100／uL，室温下染色 ／ ，室温下染色10min。 。 ↓ 离心弃上清，用PBS洗一次。 离心弃上清， 洗一次。 洗一次 ↓ 室温下晾干，每孔加入100uL柠檬酸钠缓冲液 室温下晾干，每孔加入 柠檬酸钠缓冲液 ↓ 570nm波长下测 波长下测OD值。 波长下测 值
三、细胞病变抑制法
常用于IFN等的测定，IFN可诱导细胞产生抑制病毒 等的测定， 常用于 等的测定 可诱导细胞产生抑制病毒 RNA和DNA合成的酶，保护细胞不受病毒感染从而抑 合成的酶， 和 合成的酶 制细胞病变。 制细胞病变。
常用于检测抗病毒活性的细胞株
Wish、Hep2 、 人干扰素 L929 小鼠干扰素 A549 大鼠干扰素 MDBK 多种属的IFN-α和IFN-γ 多种属的 和
细胞因子检测方法
生物学检测法 免疫学检测法 分子生物学检测法 临床上最常用
第一节
基本原理: 基本原理:
生物学检测法
结果以活性单位(U/ml) 结果以活性单位(U/ml) 表示 活性单位
一、细胞增殖法
原理: 原理:利用某一细胞因子可促进相应指示细 胞分裂、增殖,将不同浓度的细胞因子（ 胞分裂、增殖,将不同浓度的细胞因子（标准 品或待测样品） 品或待测样品）与指示细胞共同孵育一定的时 间，检测细胞的增殖情况，从而估计细胞因子 检测细胞的增殖情况， 的活性水平。 的活性水平。 白细胞介素的测定
二、靶细胞杀伤或抑制法
基本原理：对指示细胞具有破坏作用的细胞因子， 基本原理：对指示细胞具有破坏作用的细胞因子， 若与细胞共育将会导致细胞死亡(细胞毒性反应) 因此， 若与细胞共育将会导致细胞死亡(细胞毒性反应)。因此， 待测细胞因子作一系列稀释后加至指示细胞培养体系， 待测细胞因子作一系列稀释后加至指示细胞培养体系， 以检测培养细胞的死细胞数作为判断指标， 以检测培养细胞的死细胞数作为判断指标，死细胞数量 与细胞因子的活性呈正比。 与细胞因子的活性呈正比。