建立体外诱导和检测中性粒细胞胞外诱捕网的方法
211105470_中性粒细胞胞外诱捕网通过诱导巨噬细胞M2型极化促进非小细胞肺癌增殖和侵袭
中性粒细胞胞外诱捕网通过诱导巨噬细胞M2型极化促进非小细胞肺癌增殖和侵袭①苏莹 马丽丽 柳江 韩忠诚 （新疆维吾尔自治区人民医院肿瘤科，乌鲁木齐830000）中图分类号 R734.2 文献标志码 A 文章编号 1000-484X （2023）03-0472-06［摘要］ 目的：探究中性粒细胞胞外诱捕网（NETs ）诱导巨噬细胞极化在非小细胞肺癌（NSCLC ）增殖和侵袭中的作用及其相关机制。
方法：采集28例NSCLC 患者肿瘤组织及其癌旁组织，通过免疫组化检测PAD4和Arg -1表达水平。
采用PMA/LPS 和PMA/IL -4极化THP -1细胞为M1和M2型巨噬细胞的过程中加入NETs 共孵育，qRT -PCR 检测巨噬细胞iNOS 、IL -6、TNF -α、Arg -1、IL -10和TGF -β表达水平。
将各组M2型巨噬细胞与A549细胞共孵育，CCK8检测A549细胞增殖变化，Transwell 检测细胞侵袭能力变化，qRT -PCR 和Western blot 检测细胞VEGF 表达水平变化。
结果：与癌旁组织比较，NSCLC 患者肿瘤组织PAD4和Arg -1表达水平升高。
在向M1型巨噬细胞极化过程中，加入NETs 后巨噬细胞iNOS 、IL -6、TNF -α表达水平降低，Arg -1、 IL -10、TGF -β表达水平升高。
在向M2型巨噬细胞极化过程中，加入NETs 后巨噬细胞Arg -1、IL -10、TGF -β表达水平升高。
与Control 组比较，M2组A549细胞增殖、侵袭能力和VEGF 表达水平升高。
与M2组比较，M2+NETs 组A549细胞增殖、侵袭能力和VEGF 表达水平升高。
结论：NETs 通过诱导巨噬细胞向M2型极化，促进NSCLC 增殖和侵袭。
［关键词］ 非小细胞肺癌；中性粒细胞胞外诱捕网；巨噬细胞；M2型极化Neutrophil extracellular traps promote proliferation and invasion of NSCLC byinducing M2-type polarization of macrophagesSU Ying ， MA Lili ， LIU Jiang ， HAN Zhongcheng. Department of Oncology ， People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region ， Urumqi 830000， China［Abstract ］ Objective ：To investigate the role of neutrophil extracellular trap （NETs ） induced macrophage polarization in pro⁃liferation and invasion of non -small cell lung cancer （NSCLC ） and its related mechanisms. Methods ：Tumor tissues and adjacent tis⁃sues of 28 NSCLC patients were collected and the expression levels of PAD4 and ARG -1 were detected by immunohistochemistry. The expression levels of iNOS ， IL -6， TNF -α， ARG -1， IL -10 and TGF -β in macrophages were detected by qRT -PCR when PMA/LPS and PMA/IL -4-polarized THP -1 cells were incubated with NETs. M2 macrophages in each group were co -incubated with A549 cells. Prolife -ration of A549 cells were detected by CCK8， invasion ability of A549 cells were detected by Transwell ， and expression level of VEGFwas detected by qRT -PCR and Western blot. Results ：Compared with adjacent tissues ， the expression levels of PAD4 and ARG -1 intumor tissues of NSCLC patients were increased. During the polarization to M1-type macrophages ， the expression levels of iNOS ， IL -6 and TNF -α in macrophages were decreased after co -incubation with NETs ， while the expression levels of ARG -1， IL -10 and TGF -β were increased. During the polarization of M2-type macrophages ， the expression levels of ARG -1， IL -10 and TGF -β in macrophages increased after co -incubation with NETs. Compared with Control group ， the proliferation ， invasion and VEGF expression levels of A549 cells in M2 group were increased. Compared with M2 group ， proliferation ， invasion and VEGF expression levels of A549 cells inM2+NETs group were increased. Conclusion ：NETs promote proliferation and invasion of NSCLC by inducing macrophage polarization to M2 type.［Key words ］ Non -small cell lung cancer ；Neutrophil extracellular trap ；Macrophage ；M2 type polarization世界卫生组织国际癌症研究机构（International Agency for Research on Cancer ，IARC ）发布的2020年全球癌症数据显示，肺癌是目前威胁全球人类生命健康的第二大癌症［1］。
中性粒细胞胞外诱捕网研究最新进展
Ｃｈｉｎ Ｊ Ｌａｂ Ｄｉａｇｎ，Ｊａｎｕａｒｙ，２０１８，Ｖｏｌ ２２，Ｎｏ．１
中性 粒 细胞 胞 外 诱 捕 网研 究 最 新 进 展
崔 蕊 ，方 玲 ，谢 风 （吉 林 大 学 中 日联 谊 医 院 检 验科 ，吉 林 长 春 １３００３３）
当机 体受 到 病 原微 生 物 侵 害时 ，因为 巨噬细 胞 等 分泌 的炎性 因子 ，导 致 中性 粒 细 胞 大 量 聚集 在 感 染 部位 ，分 泌 形 成 ＮＥＴｓ结 构 中 富 含 的组 蛋 白、蛋 白肽 和抗菌 肽等 ，其 杀 伤 力强 于 中性 粒 细胞 吞 噬 引 起 的 杀 菌效 率 ，ＮＥＴｓ可 以对 多 种 病 原 微 生物 都 有 杀 灭 和清除 的作 用 ，但 是 人体 血 液 中存 在 可 以降 解 ＮＥＴｓ的脱 氧 核 糖 核 酸 酶 １（Ｄｎａｓｅ１），当 此 酶 缺 乏 时 ，大量 ＮＥＴ ｓ 会 聚集 ，ＮＥＴｓ中 的 多种 蛋 白酶 和抗 菌肽 可以导致 内皮 及上皮细胞 的损伤 ，而组蛋 白是造
＊通 讯 作 者
究证 明ｌ１ ］，巨噬细胞 、肥大 细胞 、嗜酸 性粒 细胞也可 产生 网状结构 ，在体 内发挥一定 的免疫作用 。 ２ ＮＥＴｓ的 免 疫 原 性
宿主 来源 或 者 某些 外 源 的 物质 如 细 菌 、真菌 等 均 可 以刺 激 中性 粒 细胞 产 生 ＮＥＴｓｌ】 ，比如 ：１２一豆 蔻 酸 一ｌ３一乙 酸 佛 波 醇 可 以 在 短 时 间 内 诱 导 产 生 ＮＥＴｓ，因此 ，它是体 外 实 验 常用 到 的 ＮＥＴｓ体 外 引 物 。血 清淀粉 样 蛋 白 Ａ 也 可 以诱 导 ＮＥＴｓ形 成［１ ， 一 些 炎 性介 质 也 可 以诱 导 ＮＥＴｓ的生 成 ［１ 。在 引 物诱 导 下 ，蛋 白激 酶 Ｃ在 活 化 后 可 以通 过 丝 氨 酸 ／ 苏 氨酸 蛋 白激 酶 ／丝 裂 素 活化 蛋 白激酶 激 酶 ／细胞 外 的信 号调节 激 酶信号 通路 磷酸 化烟 酰胺 腺 嘌呤二 核苷 酸磷 酸 氧化 酶 ，生 成 ＮＥＴｓ形成 所需 ＲＯＳ。烟 酰胺 腺 嘌呤二 核 苷酸磷 酸 氧化酶 等经 一 系列酶 促反 应 生 成 超 氧 化 氧 离 子 、过 氧 化 氢 （Ｈ２０２）、次 氯 酸 （ ＨＯＣ１）等 。ＨｏＣｌ是 刺 激 ＮＥＴｓ释 放 的关 键 ＲＯＳ 成 分口 。ＲＯＳ 和 自 噬 影 响 下 的 染 色 体 解 聚 是 ＮＥＴｓ形成 的 特 征 之 一 。ＮＥ、精 氨 酸 脱 亚 胺 酶 ４（ ｐｅｐｔ试ｙｌａｒｇｉｎｉｎｅ ｄｅｉｍｉｎａｓｅ ｔｙｐｅ ４ ＰＡＤ４）和髓 过氧 化物 酶 （ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＭＰＯ ）共 同参 与 这一 过 程 ，尤其 ＰＡＩＮ 可催化 ３／４的精 氨酸残 基瓜 氨酸化 ， 从而 减弱静 电吸引 ，造 成组 蛋 白结合 ＤＮＡ 的能 力下 降＿】 。而 ＮＥＴ的抗菌 策 略 主要 可 以分 为 ①将 表 面 带有 正 电荷 的病 原体 捕 获 ，限制其 扩散 ［１引。②ＮＥＴｓ 内含 有抗 菌 酶 及 组 蛋 白可 以杀 伤 病原 体 。③ＮＥＴｓ 内部 含有的 ＮＥ可分 解沙 门菌等 细菌的毒力 因子 。 ３ ＮＥＴｓ与临床 疾病 ３．１ ＮＥＴｓ与 感 染
中性粒细胞胞外诱捕网在痛风性关节炎中的作用一枚硬币的两面
135痛风性关节炎(gouty arthritis, GA)是由单钠尿酸盐(monosodium urate, MSU)晶体沉积引发的炎症性疾病[1]。
当痛风性关节炎患者的尿酸浓度超过尿酸的溶解度达到过饱和状态时，MSU 晶体会在软骨、滑膜及周围组织沉积并刺激关节滑膜，发生一系列病理反应，从而引发关节处出现急性炎症[2]。
此时，血管内皮表面的黏附分子会捕获循环血中的中性粒细胞，渗出血管，定向迁移至关节腔的炎症部位，识别并对抗入侵宿主体内的病原体，发挥保护作用[3]。
近年研究发现，除了吞噬及脱颗粒作用外，中性粒细胞也可以通过形成中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps, NETs)的方式消灭入侵的病原微生物[4]。
NETs 由于吞噬刺激从中性粒细胞释放的胞外DNA 纤维，帮助嗜中性粒细胞固定并诱捕细菌、真菌或病毒，从而更有效地消除这些病原体[5]。
Brinkmann 等人[6]率先发现NETs ，他们通过免疫荧光及DNA 染料染色的方法对NETs 的组成进行分析后得出，该结构是由染色质和蛋白颗粒组成的、能捕获并杀死微生物的胞外网状结构。
MSU 晶体诱发中性粒细胞NETs 产生，后者反过来吞噬捕获MSU 晶体，并通过镶嵌在NETs 上的弹性蛋白酶、髓过氧化物酶、组织蛋白酶G 等酶类的杀菌作用，发挥其抗菌作用，防止炎症扩散[7]。
鉴于中性粒细胞NETs 在GA 中发挥的重要作用，本文将对GA 的发生、发展及炎症消散过程进行概述，重点讨论中性粒细胞NETs 在GA 中所起到的双重作用，并对GA 中参与中性粒细胞NETs 形成的相关信号通路进行简述。
*国家自然科学基金项目(31972901、31671234、31571430)†通信作者，研究方向：免疫学与骨代谢调控。
E-mail:******************.cndoi:10.3969/j.issn.0253-9608.2021.02.008中性粒细胞胞外诱捕网在痛风性关节炎中的作用：一枚硬币的两面*王雪霖①，曹秀梅②，闫建设①†①上海大学 生命科学学院，上海 200444；②上海交通大学 医学院，上海市免疫学研究所，上海 200025摘要 痛风性关节炎(gouty arthritis, GA)是一种由大量单钠尿酸盐(monosodium urate, MSU)沉积所导致的急性炎症。
中性粒细胞胞外诱捕网的形成及其在生殖相关疾病中的作用
DOI:10.12280/gjszjk.20200457乔国栋，王永红△【摘要】中性粒细胞活化后可形成中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps，NETs），参与人体内诸多疾病的病理生理过程，但其具体的发病机制尚未阐明。
目前研究表明，NADPH氧化酶等细胞因子在其形成过程中发挥重要作用，并通过蛋白酪氨酸激酶（protein tyrosine kinase，PTK）和磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol3-kinase，PI3K）等细胞信号通路对NETs的形成过程进行调节，有助于探讨NETs在子痫前期等生殖相关疾病中的作用。
综述NETs的形成及其相关作用机制的研究进展。
【关键词】胞外诱捕网；NADP；蛋白酪氨酸激酶类；p38丝裂原活化蛋白激酶类；丝裂原活化蛋白激酶1；先兆子痫；中性粒细胞胞外诱捕网Neutrophil Extracellular Traps and Related Reproductive Diseases QIAO Guo-dong,WANG Yong-hong.Department of Obstetrics and Gynecology,The Second Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan030001,ChinaCorresponding author:WANG Yong-hong,E-mail:**********************【Abstract】Neutrophil extracellular traps(NETs)can be formed after the activation of neutrophils,whichparticipate in the pathophysiological process of many diseases including related reproductive diseases.However,the specific pathogenesis has not been clarified.At present,studies have shown that the nicotinamide adeninedinucleotide phosphate(NADPH)oxidase and other cytokines play an important role in the formation process ofNETs,and that many signaling pathways,such as protein tyrosine kinase(PTK)and phosphatidylinositol3-kinase(PI3K),regulate the formation of NETs.Many reproductive diseases such as preeclampsia could be furtherexplained by NETs.In this paper,we will review the formation of NETs and the related mechanisms.【Keywords】Extracellular traps；NADP；Protein-tyrosine kinases；p38mitogen-activated protein kinases；Mitogen-activated protein kinase1；Pre-eclampsia；Neutrophil extracellular traps（ＪＩｎｔＲｅｐｒｏｄＨｅａｌｔｈ蛐ＦａｍＰｌａｎ，2021，40：260-264）·综述·基金项目：山西省面上自然基金项目（201901D111367）；山西省卫健委科研计划课题（2019050）；山西医科大学校级博士启动基金项目（BS201713）作者单位：030001太原，山西医科大学第二医院妇产科通信作者：王永红，E-mail：**********************△审校者中性粒细胞一旦发现异物或内源性威胁，就会采取一系列措施，包括吞噬和产生活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）等，确保消除危害。
中性粒细胞外诱捕网检测方法的研究进展
中性粒细胞外诱捕网检测方法的研究进展①马雪妮程龙许慧梅杨一蕃张德奎（兰州大学第二医院消化内科，兰州730030）中图分类号R392-3文献标志码A文章编号1000-484X（2021）24-3056-06［摘要］中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）是中性粒细胞受到刺激后产生的以DNA为骨架，其间镶嵌多种颗粒蛋白、蛋白水解酶、抗菌肽、组蛋白等的网状结构。
研究表明，NETs在宿主稳态中发挥双重作用，既能保护宿主免受病原体的侵袭，也参与多种自身免疫/炎症性疾病、代谢性疾病、血栓、肿瘤等的病理生理过程。
因其组成部分的复杂性、释放类型的差异性及释放过程中的易降解性，准确检测NETs存在一定的困难。
本文就目前NETs在体内、体外及原位检测方法的研究进展进行综述。
［关键词］中性粒细胞外诱捕网；检测方法；进展Advances in detection of neutrophil extracellular trapsMA Xue-Ni，CHENG Long，XU Hui-Mei，YANG Yi-Fan，ZHANG De-Kui.Department of Gastroenterology，the Second Hospital of Lanzhou University，Lanzhou730030，China［Abstract］Neutrophil extracellular traps（NETs）is a kind of DNA-based skeleton released by neutrophils to the outside of cell，in which a variety of granular proteins，proteolytic enzymes，antibacterial peptides，histones and other network structures are em⁃bedded.Studies have shown that NETs play a dual role in host homeostasis，not only protecting the host from pathogens，but also par⁃ticipating in various autoimmune/inflammatory diseases，metabolic diseases，thrombosis，tumors and other pathophysiological pro⁃cesses.Due to the complexity of its composition，the difference of the types，and the uncertainty of the release process，there are cer⁃tain difficulties to detect NETs accurately.This article focuses on the current methods to detect NETs in vivo，in vitro，and in situ.［Key words］Neutrophil extracellular traps；Detection；Progress中性粒细胞是人外周血中最丰富的白细胞，约占白细胞总数的50%~70%，在先天免疫系统中扮演重要角色，是机体应对病原体入侵时的第一道防线，可通过吞噬作用、脱颗粒、产生活性氧等多种途径抵御外界病原体的入侵［1］。
中性粒细胞胞外诱捕网捕杀病原体的作用
中性粒细胞胞外诱捕网捕杀病原体的作用摘要】中性粒细胞是人体先天免疫系统的重要效应细胞，具有细胞内与细胞外杀灭病原体的途径。
活化中性粒细胞能形成胞外诱捕网(NETs)构成细胞外杀灭途径。
NETs由染色质与颗粒（源性）蛋白质构成。
NETs对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌，以及真菌有捕获与杀灭作用，对利什曼原虫、牛艾美耳球虫等寄生虫也有捕获与杀灭作用。
【关键词】中性粒细胞中性粒细胞胞外诱捕网病原体中性粒细胞是人体先天免疫系统的重要效应细胞，具有捕杀微生物的关键作用。
Brinkmann等[1]研究指出，中性粒细胞能通过形成胞外诱捕网(NETs)，构成NET介导的杀灭途径，参与微生物病原体感染的先天免疫应答反应。
1 NETs的结构与组成成分在感染或炎症应答期，活化的中性粒细胞形成一种细胞外纤维结构，即中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)。
NETs由染色质与颗粒（源性）蛋白质构成。
NETs结构中染色质与细胞核内染色质不同，细胞外染色质呈松弛的去致密状态[2]。
在形成NET时期，活化的中性粒细胞高表达肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)，PAD4催化组蛋白精氨酸残基瓜氨酸化，电中性瓜氨酸残基替代正电性精氨酸残基促进中性粒细胞松弛染色质结构。
Brinkmann等研究报道，DNA是NETs的主要结构成分。
用组蛋白抗体证明NETs含有组蛋白H1、H2A、H2B、H3和H4。
用免疫荧光技术分析，NETs含有嗜苯胺蓝颗粒中蛋白质，以及含有其他特异性颗粒蛋白质。
2 ETosis:一种新的细胞死亡途径研究者证实，中性粒细胞死亡时释放NETs。
中性粒细胞这种细胞死亡程序，既不同于细胞凋亡，又不同于细胞坏死，是一种新的细胞死亡途径（ETosis）。
细胞凋亡是由基因控制、细胞自主的有序死亡，其显著特点是细胞染色体的DNA降解，在琼脂糖凝胶电泳中呈现特异的梯状图谱。
坏死是由强烈理化或生物因素引起的细胞无序变化的死亡过程。
细胞经ETosis死亡，则表现为细胞核膜崩溃，细胞核和细胞质的基质混合，以及细胞器消失，在胞外形成纤维样捕获网结构，捕获网中DNA未断裂。
中性粒细胞胞外诱捕网形成的分子机制研究进展
中性粒细胞胞外诱捕网形成的分子机制研究进展①蒋瑶邢艳（川北医学院附属医院检验科，南充637000）中图分类号R392.6文献标志码A文章编号1000-484X（2022）10-1272-06［摘要］中性粒细胞作为固有免疫的一线细胞，其死亡形式-中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）过度形成过程中因释放大量胞内成分而参与包括自身免疫性疾病在内的多种疾病发生。
自身免疫性疾病以自身抗原暴露、免疫耐受缺失为特征，且目前治疗仍以改善症状为主，如能抑制自身抗原产生将为其根治提供新的可能。
本文主要对参与NETs形成的分子进行综述，包括ROS、PAD-4、自噬以及相关信号通路，以期促进NETs相关疾病治疗策略的开发。
［关键词］中性粒细胞胞外诱捕网；分子机制；研究进展Progress on molecular mechanism of neutrophil extracellular traps formationJIANG Yao，XING Yan.Department of Clinical Laboratory，Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College，Nanchong637000，China［Abstract］As first-line cells of innate immunity，neutrophils release a large number of intracellular components in process of over-formation of neutrophil extracellular traps（NETs），which participates in occurrence of multiple diseases including autoimmune diseases.Autoimmune diseases are characterized by autoantigen exposure and loss of immune tolerance，whose treatment is still mainly to improve symptoms at present.If production of autoantigens can be inhibited，it will provide a new possibility for cure.This article will review molecules involved in formation of NETs，including ROS，PAD-4，autophagy and its related signal pathways，and aim to promote development of treatment strategies for NETs-related diseases.［Key words］Neutrophil extracellular traps；Molecular mechanism；Progress中性粒细胞是人体内含量最多的固有免疫细胞，通过抵御病原体入侵而在固有免疫中起重要作用，经典杀菌方式包括吞噬和脱颗粒。
中性粒细胞细胞外诱捕网的研究进展
细 胞细 胞外 诱 捕 网 （ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｔｒａｐｓ，ＮＥＴｓ）。该 机 制 主 要 通 过 活 性 氧 和 肽 酰 基 精 氨 酸 脱 亚 氨 酶 ４等
影 响 因 子刺 激 中 性 粒 细 胞 形 成 以 ＤＮＡ 为 骨 架 的 网状 结 构 ，内含 有 多 种 蛋 白 酶 ，能 非 特 异 性 捕 获 杀 伤 病 原 体 ，还 能
中 图 分 类 号 ：Ｒ３９２．１
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１６７１—７２３６（２０１８）０１ ０２０６ ０６
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｎ Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｒａｐｓ
ＺＨＡＮＧ Ｋａｉ ，ＣＨＥＮ Ｈｏｎｇｙｕ ，ＬＩ Ｊｉａｏ。，ＢＡＯ Ｌｉ。，ＤＵＡＮ Ｐｉｎｇ ，ＪＩＡＮＧ Ｎｉｎｇ （１．Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｚｏｏｎｏｓｉｓ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ
Ｚｏｏｎｏｓｉｓ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍ ｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １０８６６，Ｃｈｉｎａ；２．Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １００４４，Ｃｈｉｎａ）
中至 关 重 要 ，是 构 成 机 体 内抵 御 微 生 物 入 侵 的第 一 道 防 线 。 近 年 来 ，人 们 发 现 中 性 粒 细 胞 除 了经 典 的通 过 胞 吞 作
用 吞 噬病 原 微 生 物 、释 放 嗜天 青 颗 粒 及 产 生 并 分 泌 抑 菌 杀 菌 物 质 外 ，还 具 有 抵 抗 微 生 物 入 侵 的新 机 制 — — 中性 粒
中性粒细胞胞外诱捕网研究进展和启示
·83·中性粒细胞胞外诱捕网研究进展和启示夏 杰，占 玲，张 丹，雷 琴，王 蓉（黄冈职业技术学院 医药学院，湖北 黄冈 438002）摘 要：中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的释放是中性粒细胞杀灭病原体的一种新的机制。
NETs 的释放常伴随中性粒细胞死亡，这一过程称之为NETosis。
组蛋白、NADPH 氧化酶、活性氧等在NETs 形成过程中发挥关键作用。
病原体对NETs 有一定的逃逸能力，NETs 对人体本身也是一把双刃剑。
关键词：中性粒细胞胞外诱捕网；组蛋白；活性氧；免疫逃逸中图分类号：R446.63 文献标识码：A 文章编号：1672-1047（2018）02-0083-03 DOI:10.3969/j.issn.1672-1047.2018.02.22收稿日期：2018-03-06作者简介：夏 杰，男，湖北麻城人，主治医师，讲师。
研究方向：生物化学。
中性粒细胞是人体内数量最多的免疫细胞，并且是第一线的防御细胞。
中性粒细胞可通过吞噬作用、脱颗粒作用杀灭病原微生物[1]。
2004年，Brinkmann V 等[2]首次发现中性粒细胞还可以通过一种全新的行为杀灭病原体：当中性粒细胞与病原体相遇时，中性粒细胞释放出网状结构的物质，将病原体捕获并杀灭。
这种网状结构主要骨架是构成染色质的DNA 和组蛋白以及从嗜中性颗粒释放出来的抗菌肽。
这种网状结构称为中性粒细胞胞外诱捕网（Neutrophil extracellular traps ，NETs）， NETs 形成常伴中性粒细胞的死亡，这种形成且伴随中性粒细胞死亡的过程称之为NETosis。
中性粒细胞在免疫病原体的终末阶段，以一种及其悲壮的方式自毁并释放其细胞核中的染色质、组蛋白等物质作为最后的武器杀灭敌人。
虽然NETs 对人体抵抗病原体入侵发挥着积极作用，但病原体也通过各种途径逃逸NETs 的捕杀，NETs 本身对机体也是一把双刃剑。
中性粒细胞胞外诱捕网在糖尿病肾病肾小球内皮细胞损伤中的作用和机制研究演示课件
在糖尿病肾病肾小球内
皮细胞损伤中的作用和
机制研究
汇报人：XXX
2024-01-09
目录
Contents
• 引言 • 中性粒细胞胞外诱捕网概述 • 糖尿病肾病肾小球内皮细胞损伤机
制 • 实验研究 • 中性粒细胞胞外诱捕网在糖尿病肾
病治疗中的应用前景 • 结论
01 引言
研究背景和意义
实验结论和讨论
中性粒细胞胞外诱捕网对糖尿病肾病肾小球内皮细胞 具有保护作用，能够减轻细胞损伤程度，降低炎症因
子表达水平，改善氧化应激状态。
中性粒细胞胞外诱捕网的作用机制可能与抑制炎症反 应、减轻氧化应激损伤等有关，为糖尿病肾病的治疗
提供了新的思路和方法。
进一步研究中性粒细胞胞外诱捕网在糖尿病肾病中的 具体作用机制和临床应用价值具有重要意义。
NETs通过激活GEnC表面的TLR4受体，触发NF-κB信号通路，导致炎症 因子（如TNF-α、IL-1β）和趋化因子（如MCP-1）的表达增加，进一步
招募和激活炎症细胞，形成正反馈循环，加重GEnC损伤。
此外，NETs还能够诱导GEnC发生氧化应激反应，导致细胞内ROS水平 升高，抗氧化酶（如SOD、CAT）活性降低，从而造成GEnC的氧化损伤 。
01
糖尿病肾病
糖尿病肾病（DN）是糖尿病（DM）的一种严重并发症，以肾小球内
皮细胞（GEC）损伤为主要特征，导致肾功能逐渐丧失。
02
中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）
NETs是中性粒细胞在活化或凋亡时释放的一种网状结构，具有捕获和
杀死微生物的功能，同时也参与无菌性炎症的调节。
03
NETs与糖尿病肾病
近年来研究发现，NETs在DN的发生和发展中起重要作用，通过影响
脓毒症时中性粒细胞胞外诱捕网的研究进展完整版
脓毒症时中性粒细胞胞外诱捕网的研究进展完整版脓毒症（sepsis）是由感染引起的全身炎症反应，严重时可导致多器官功能衰竭、脓毒性休克，甚至死亡。
当前，脓毒症的发病率和病死率仍然居高不下，在美国，脓毒症在危重患者致死因素中居首位，每年有75 万新增脓毒症患者，而其中又有21 万患者因脓毒症而死亡。
脓毒症的发病机制十分复杂，至今仍未完全阐明，脓毒症早期，感染部位招募大量中性粒细胞，通过吞噬病原菌、脱颗粒释放蛋白酶等物质来达到杀菌的作用。
此外，中性粒细胞还具有另外一个特殊的效应机制，即“中性粒细胞胞外诱捕网”（NETs），使得中性粒细胞在胞外仍然具有有效的捕获及杀伤病原菌的能力，从而对机体产生重要的保护作用。
但是近年来的研究表明，脓毒症时NETs 的产生也可以导致病情加重。
现对NETs 的形成、结构、杀菌机制及其对脓毒症的作用进行系统阐述，以进一步探讨脓毒症的发病机制，为脓毒症的治疗提供新的思路和方向。
1 NETs 的形成2004 年，Brinkmann 等首次报道了中性粒细胞特有的杀菌机制——NETs。
NETs 的产生是中性粒细胞特殊的细胞死亡过程，这种过程称作NETosis ［9］。
NETs 主要由成熟的中性粒细胞产生，未成熟的中性粒细胞因为缺少了对刺激信号的反应能力而不能形成NETs ［10］。
研究表明，革兰阴性菌、革兰阳性菌以及真菌等均可以引发中性粒细胞产生NETs。
脓毒症时，在多种刺激物的作用下中性粒细胞活化，通过还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶途径产生大量活性氧簇（ROS），进而启动NETosis ［11］。
中性粒细胞内嗜天青颗粒中储存的中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）、髓过氧化物酶（MPO）转位至细胞核内，NE 降解接头蛋白H1 及核心组蛋白（histone），MPO 则对此过程具有促进作用。
此外，在精氨酸脱亚氨酶4（PAD4）的作用下，组蛋白H3 精氨酸残基瓜氨酸化，组蛋白H3 构象改变。
15898474_中性粒细胞细胞外诱捕网的研究进展
(FH/8形 成 的 影 响 因 子
(.* 活 性 氧 X@BI形成的经典途径依赖于 磷酸 酰胺 腺 嘌 呤
二核苷酸氧化酶)XA\&8*和 活 性 氧)03/G1JO37NP* W3KIL3GJ3I"'D;*调 节 颗 粒 酶 髓 过 氧 化 物 酶 )E&D* 生成的 活 性 氧 诱 导%.^d0KIZ711J0/ 等 研 #,$ 究 发 现" 完全阻断细胞外的活性氧不足以阻断中性粒细胞产
J>8<@6;<!X3H107L2JMI"V2JG22/O3[3G7>3123M/0W3I1KH>[307FJ>>HK3G3MMIJK123L30JL230/M [M77Z"/03123J>L701/K1G7>L7K3K1I7F123JKK/13J>>HK3IPI13>JK123[7ZP/KZ V2JG2G7KI1J* 1H13123FJ0I1MJK37FZ3F3KIJKW/W/JKI1>JG07[J/MJKO/IJ7K"LM/PJKW/KJ>L701/K107M3JKK7KIL3GJFJG J>>HKJ1P=.3IJZ3I7F123GM/IIJGL2/W7GP17IJI7FL/127W3KI"Z3W0/KHM/1J7K/KZ12303M3/I37F[/G* 130JGJZ/MIH[I1/KG3I"J1JIF7HKZ12/1K3H107L2JMI2/O3/K3V >3G2/KJI>,,,X3H107L2JM3N10/G3MMH* M/010/LI )X@BI*"V2JG2G7HMZ03IJI1123>JG07[J/MJKO/IJ7KJK03G3K1P3/0I=.3G/HI37F12303/G* 1JO37NPW3K"L3L1JZPM/13Z/0WJKJK3Z3/>JK/I3$/KZ71230F/G170I"K3H107L2JMIJIF70>3Z7F10/LI VJ12\XA/I123Ib3M317K7F123K31V70bI10HG1H03/KZG7K1/JKJKW/O/0J31P7FL0713/I3I=X@BI G/KG/L1H03/KZbJMML/127W3KIK7KIL3GJFJG/MMP/KZ/MI7LM/P/IPK30WJI1JG07M3JK123L07ZHG1J7K /KZZ3130J70/1J7K7FG301/JKZJI3/I3I=B2JI/01JGM3JI/K7O30OJ3V7K123F70>/1J7K7FX@BI"JKFMH*
中性粒细胞胞外诱捕网在肝移植术后并发症诊疗中的作用
· 综述·中性粒细胞胞外诱捕网在肝移植术后并发症诊疗中的作用刘彦尧 秦小琰 吴忠均【摘要】 肝移植术后并发症的防治对于维护移植肝功能，改善移植受者预后至关重要。
中性粒细胞胞外诱捕网（NET ）是由中性粒细胞激活后释放到胞外的一种以DNA 为骨架，多种组蛋白和颗粒蛋白构成的纤维网状结构，研究表明肝移植术后供肝内中性粒细胞激活和NET 的释放参与了包括缺血-再灌注损伤、急性排斥反应、急性肝衰竭和肝细胞癌复发在内的多种肝移植相关并发症的发生。
本文将重点探讨NET 对肝移植术后并发症的影响，详述NET 作为肝移植术后并发症防治潜在靶点的研究进展，以期为肝移植受者术后并发症的防治提供参考，提高临床肝移植疗效，改善肝移植受者预后。
【关键词】 肝移植；中性粒细胞胞外诱捕网；缺血-再灌注损伤；急性排斥反应；急性肝衰竭；肝细胞癌；肽基精氨酸脱亚胺酶4（PAD4）；髓过氧化物酶（MPO ）【中图分类号】 R617, R392.12 【文献标志码】 A 【文章编号】 1674-7445（2023）05-0015-09The role of neutrophil extracellular trap in the diagnosis and treatment of complications after liver transplantation Liu Yanyao *, Qin Xiaoyan, Wu Zhongjun. *Department of Hepatobiliary Surgery , the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University , Chongqing 400016, ChinaCorresponding author: Wu Zhongjun, Email: **************【Abstract 】 Prevention and treatment of complications after liver transplantation play a significant role in maintaining liver graft function and improving clinical prognosis of the recipients. Neutrophil extracellular trap (NET) are fibrous net-like structures composed of DNA as the skeleton and histones and granular proteins released by activated neutrophils. Studies have shown that the activation of neutrophils and the release of NET in donor liver after liver transplantation are involved in the incidence of multiple liver transplantation-related complications including ischemia-reperfusion injury, acute rejection, acute liver failure and recurrence of hepatocellular carcinoma, etc . In this article, the effect of NET on the complications after liver transplantation was mainly assessed, and research progress on NET as a potential target for the prevention and treatment of complications after liver transplantation was reviewed, aiming to provide reference for the prevention and treatment of complications after liver transplantation, enhance clinical efficacy of liver transplantation and improve clinical prognosis of the recipients.【Key words 】 Liver transplantation; Neutrophil extracellular trap; Ischemia-reperfusion injury; Acute rejection;Acute liver failure; Hepatocellular carcinoma; Peptide arginine deiminase 4 (PAD 4); Myeloperoxidase (MPO)DOI: 10.3969/j.issn.1674-7445.2023093基金项目：国家自然科学基金（82170666）；重庆医科大学附属第一医院博士后培育项目（CYYY-BSHPYXM-202303）作者单位： 400016 重庆，重庆医科大学附属第一医院肝胆外科（刘彦尧、吴忠均）；重庆医科大学附属儿童医院渝中院区普通创伤外科（秦小琰）作者简介：刘彦尧（ORCID ：0000-0002-2130-2716），博士研究生，住院医师，研究方向为肝移植、肝移植术后免疫损伤，Email ：*********************通信作者：吴忠均（ORCID ：0000-0002-1627-0633），博士研究生导师，主任医师，研究方向为肝移植、肝移植术后免疫损伤，Email: **************第 14 卷 第 5 期器官移植Vol. 14 No.5 2023 年 9 月Organ Transplantation Sep. 2023 肝移植是各种终末期肝病的唯一有效治疗手段[1]。
中性粒细胞胞外诱捕网及其在肺部炎症性疾病中的作用研究进展
种杀菌方式，即中性粒细胞胞外诱捕网（ＮＥＴｓ）。ＮＥＴｓ 主要由组蛋白、ＤＮＡ 和弹性蛋白酶以及髓过氧化物酶
（ＭＰＯ）等酶类构成，其形成和降解受多种因素的影响，形成过程受多种信号通路的调控。ＮＥＴｓ 是把“双刃剑”，其
形成和降解失衡可影响疾病的最终转归。异常形成的ＮＥＴｓ 参与急性肺损伤／ 急性呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺
及髓过氧化物酶（ＭＰＯ）等酶类构成，在机体抗感染 １ ＮＥＴｓ 的形成、降解与信号通路
防御过程中发挥至关重要的作用［１］。当机体受到 １． １ ＮＥＴｓ 的形成与降解 ＮＥＴｓ 的形成与降解过
病原微生物入侵时，ＮＥＴｓ 可以借助于其特殊的以 程复杂，目前仍未完全阐明。研究发现，诸多因素可
ＤＮＡ 为主体的纤维丝网状结构来快速、有效的捕获 以诱导中性粒细胞形成ＮＥＴｓ，如病原微生物（细菌、
病原体，限制炎症扩散，发挥强大的免疫防御等功 病毒等）、１２十四酸佛波酯１３乙酸盐（ＰＭＡ）、脂多
能［２］。最新研究发现，ＮＥＴｓ 与炎症相关性疾病、自 糖（ＬＰＳ）、白细胞介素８（ＩＬ８）、高迁移率族蛋白Ｂ１
身免疫性疾病、肿瘤等的发生发展过程密切相关，已 （ＨＭＧＢ１）等［６～８］。最新研究发现，血清淀粉样蛋白
ｕｌｉｎ ｉｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ｃｏｒｎｅａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｗｏｕｎｄ
［］ ， ， （）： ｈｅａｌｉｎｇ Ｊ ． Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ２０１２ ５３ ４ ２４１４． ［ ］ ， ， ， ２５ Ｖａｌｌｉèｒｅｓ Ｎ Ｂａｒｒｅｔｔｅ Ｂ Ｗａｎｇ ＬＸ ｅｔ ａｌ． Ｂｅｔａｃｅｌｌｕｌｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ
［］ ， ， （ ）： ＴＧＦα Ｊ ． Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１１ ４１２ １ １０９
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基础 论 著 ・
建立体外诱 导和检测 中性粒 细胞 胞外诱捕 网的方法
朱缪娈 张珥 李 国力 梁顺涛 郝禹 李蕊 曾辉 【 摘要 】 目的 建立体外诱 导和 检测 中性粒细胞 胞外诱捕 网的方法 ，旨在研 究中性粒细胞胞外
诱捕 网 （ ＮＥ Ｔ）产生和调节 的机 制 。 方法 分 离正常人外周血 中性 粒细胞 ，通过 内毒 素 （ Ｌ Ｐ Ｓ ）和 白
Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｄｉ ｔ ａ ｎ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｃ ａ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ ０ １ ５ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ， Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｋｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｆ ｏ
【 Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ 】 Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｔ ｈ ｅ ｍｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｉ ｓ ｍｓ ｏ ｆ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｇ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｎ ｅ ｕ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｉ ｌ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｕ ｌ ａ ｒ ｔ ｒ ａ ｐ（ ＮＥ Ｔ ） ｂ ｙ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｉ ｎ ｇ ａ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｔ ｏ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｅ Ｎ Ｅ Ｔ ．Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ Ｎｅ ｕ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｉ ｌ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｈ ｅ ａ ｌ ｔ ｈ ｙ ｈ ｕ ｍａ ｎ ｐ ｅ ｒ ｉ ｐ ｈ ｅ ｒ ａ ｌ ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ ， ａ ｎ ｄ ｓ ｔ ｉ ｍｕ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ ｌ ｉ ｐ ｏ ｐ ｏ ｌ ｙ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ （ Ｌ Ｐ Ｓ ） ｏ ｒ ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｌ ｅ ｕ ｋ ｉ ｎ 一 ８
细胞 介素一 ８（ Ｉ Ｌ ． ８ ）体 外诱导ＮＥ Ｔ 产生 。采用 免疫 荧光染色 和激 光共聚焦 显微成 像定 性评价ＮＥ Ｔ 生
成 ；采 用 Ｐ ｉ ｃ ｏ Ｇ ｒ ｅ ｅ ｎ 染 料定量检测细胞上清游 离Ｄ ＮＡ，反 映 Ｎ Ｅ Ｔ 生成量 。 结果 Ｌ Ｐ Ｓ 体 ｌ ｕ ａ ｎ ． Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｙ ｕ ｅ ． Ｌ ｉ Ｇ ｕ ｏ ｌ ｉ ， Ｌ ｉ ａ ｎ ｇ Ｓ ｈ ｕ ｎ ｔ ａ ｏ Ｈａ ｏ Ｙ ｕ ． Ｌ ｉ Ｒ ｕ ｉ ， ｚ ｅ ｎ ｇ Ｈｕ ｉ ． Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆＩ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｕ ｓ Ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ
Ｅ ｍ ｅ ｒ ｇ ｉ ｎ ｇ Ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｕ ｓ Ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ ， Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ ０ １ ５ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ
Ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ａ ｕ ｔ ｈ ｏ ｒ ． ＂ Ｚ ｅ ｎ ｇ Ｈｕ Ｌ Ｅ ｍａ ｉ ｌ ： ｚ ｅ ｎ ｇ ｈ ｕ ｉ ＠ｃ ｃ ｍｕ ． ｅ ｄ ｕ ． ｃ ｎ
细胞３ ｈ 后，与对照组相 比，产生大量 胞外 网状结构 （ ＮＥ Ｔ），该结构包含ＤＮＡ、组蛋 白和髓 过氧 化 物酶 （ ＭＰ Ｏ）成 分；同时细胞上清中游离Ｄ ＮＡ （ ＮＥ Ｔ）含量显著升 高 （ 尸＜ ０ ． ０ １ ）。采用Ｉ Ｌ ８ 体外刺 激 中性粒细胞３ ｈ ，与上述 结果相似 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ）。 结论 建立 了体外诱导和 定性 、定 量检测ＮＥ Ｔ的方 法 ，二者 结合 能更 好地 评价ＮＥ Ｔ 的产 生。
（ Ｉ Ｌ 一 ８ 、ｔ ｏ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ＮＥ Ｔ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ． Ｉ ｍｍｕ ｎ ｏ ｌ ｆ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｔ ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ ｌ ａ ｓ ｅ ｒ ｃ ｏ ｎ ｆ ｏ ｃ ａ ｌ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｓ ｃ ｏ ｐ ｙ ｉ ｍａ ｇ ｉ ｎ ｇ
１ ０ ４・
中 华 实 验 和 临床 感 染 病 杂 志 ｒ 申 子 版、 ２ ０ １ ５ ￣６ 月 第９ 卷 第３ 期Ｃ ｈ ｉ ｎＪ Ｅ Ｃｌ ｉ ｎ Ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ Ｄｉ ｓ （ Ｅ ｌ ｅ ｃ ￣ｎ ｉ ｃ Ｅ ｄ ｉ ｉ ｔ ｏ ｎ ） ． Ｊ ｕ ｎ ｅ ２ ０ １ ５ ． Ｖ ｏ １ ． ９ ． Ｎｏ ． ３
【 关 键 词 】 中性 粒 细 胞胞 外诱 捕 网 ； 免 疫 荧 光 染 色 ；游 离 Ｄ ＮＡ
Ｅｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｏ ｆ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｉ ｎ ｇ ａ ｎｄ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎｇ ｎｅ ｕ ｔ ｒ ｏ ｐｈ ｉ ｌ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｕ ｌ ａ ｒ ｔ ｒ ａ ｐ ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ Ｚ ｈ ｕ