水生产水质微生物检验操作规程

水生产水质微生物检验操作规程
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水生产水质微生物检验操作规程
1目的
1.1为验证杀菌设施的杀菌效果
1.2保证生产水未污染
1.3适用于本公司水产品生产过程的质量管理
2职责
质检中心负责生产过程的微生物检验工作；
3 操作过程
3.1取样点：
灭菌后,正常生产用的储水罐
3.2无菌取样：
用已高温灭菌的取样瓶，在储水罐的取样口进行无菌取样，以确保水质未受取样过程污染。

3.3检测频次：
水生产时为持续过滤过程，水体循环快，规定做定期的取样检测，成品每批次做微生物检测。

正常生产时，微生物检测频次为1次/周。

3.4检验方法
3.4.1.菌落总数：
以无菌操作方法，用灭菌吸管吸取1ml（水样分为1:10与1:100两种稀释度）充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15ml已融化冰冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀，每次试验时应做一平行试验，同时做空白对照。

待冷却凝固后，翻转平皿，使底面朝上，置于36℃±1℃的培养箱内培养48h，进行菌落计数，计算1ml水样中的菌落总数CFU/ml。

3.4.2.大肠菌群：
液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品。

置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品均液。

样品均液PH应在6.5-7.5之间，必要时分别用1mol/l氢氧化钠或1mol/l 盐酸调节。

用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品均液1ml，沿管壁缓慢注入9ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1ml无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100的样品均液。

根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列样品均液。

每递增稀释1次，换用1支1ml无菌吸管或吸头。

从制备样品均液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。

初发酵实验：每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品均液（液体样品可以选择原液），每个稀释接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1ml（如接种量超过1ml，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，
观察倒管内是否有气泡产生，如未产生则继续培养至48h±2h。

记录24h和48h 内产气的LST肉汤管数。

未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵实验。

复发酵实验：用接种环从48h±2h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于黄绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36℃±1℃培养48±2h，观察产气情况。

产气者，记为大肠菌群阳性管。

根据大肠菌群阳性管数，检索MPN表，报告每毫升样品中大肠菌群的MPN值。

记录大肠菌群的MPN值、
4.参数标准（按本企业标准Q/SYJ0002S执行）
菌落总数（CFU∕mL）≤50
大肠菌群（ MPN/100mL）≤3。