洁净室(区)表面微生物的检验操作规程

环境微生物监测标准操作规程

环境微生物监测标准操作规程一、监测指征1．感染暴发或感染流行时，环境因素在感染传播中有流行病学意义。

2．监测潜在的危险环境状况，证明有危险的病原体存在或证明危险的病原体已被成功清除。

3．当某项感染控制措施改变时，评估其效果；或者根据规范要求，仪器设备或系统启用时监测。

4．目标性监测的需要。

5．循证医学证据支持。

二、空气监测(沉降法)(一)采样时间：消毒处理后与进行医疗活动之前。

(二)采样高度：距地面垂直高度80～150 cm。

(三)采样点设置1．非洁净房间：室内面积≤30 ㎡，在对角线上设里、中、外3点。

里、外两点位置各距墙1 m；室内面积>30 ㎡，设东、西、南、北、中5点。

其中东、西、南、北4点均距墙1 m。

9 cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5 min后送检培养。

2．洁净房间：清洁房间在空态或静态条件下，根据房间的不同清洁级别进行布点，操作按照GB 50333—2002。

9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露30 min后送检培养。

(四)采样注意事项1．采样人员做好手部卫生，佩戴口罩、帽子等个人防护装备。

进入清洁房间采样须穿洁服。

2．皿盖打开顺序应先内后外；手臂及头不可越过培养皿上方；行走及放置动作要轻，尽量减少对空气流动状态的影响；皿盖应扣放，以防污染。

3．采样结束后，由外向内合上皿盖。

4．采样完毕的培养皿应在6 h内培养。

(五)实验室检验1．培养皿在37℃培养48 h后，进行菌落计数和致病菌检验。

普通营养琼脂培养基的配制按照GB／T 4789．28—2003；菌落计数方法按照GB\T 7918．2—1987；致病菌检验：溶血性链球菌检验按照GB／T 4789．11—2003，沙门菌检验按照CB\T 4789．4—2003，铜绿假单胞菌检验按照GB／T7918．4—1987，金黄色葡萄球菌检验按照CB\T 7918．5—1987,，2．计算结果：非洁净房间以100 c㎡的平皿在空气中暴露5 min即相当于10 L 空气中的细菌数，计算公式为：细菌数(cfu／m3)=1 000÷(A／100×t×10／5)×N=50 000N／At式中：t——平皿暴露于空气中的时间(min)；N—一培养后平皿上的菌落数(cfu／平皿)；A——所用平皿的面积(c㎡)。

2015版药典表面微生物检测操作规程

题目：洁净区（室）表面微生物监测标准操作规程编码：颁发部门：质量部起草：日期：2015年月日修订日期：年月日审核：日期：2015年月日生效日期：2016年月日批准：日期：2015年月日发放份数：版次：第1版分发部门：质量部、中心化验室1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。

2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。

3.责任：表面微生物检测员。

4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。

4.1.3表面微生物菌落数:规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。

4.2测试原理:本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。

4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。

恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。

培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。

使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。

接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。

培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。

将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。

待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。

洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。

版药典表面微生物检测操作规程

1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。

2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。

3.责任：表面微生物检测员。

4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。

4.1.2表面微生物：4.1.3表面微生物菌落数:规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。

4.2测试原理:本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。

4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。

恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。

培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。

使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。

接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。

培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。

将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。

待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。

4.3.2采样点选择：洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。

如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。

注：表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定：1.洁净区（室）的大小；2.设备、管路等的复杂程度；3.生产活动的重要性；4.易受污染的部位等。

微生物限度检查操作规程

更改历史微生物限度检查操作规程1.0 目的建立微生物限度检查标准操作规程，规范检验操作，确保检验结果准确2.0 范围适用于本公司采用微生物限度检查法测定的供试品。

3.0 职责质量部负责按本规程的要求执行微生物限度检查操作。

4.0 工作程序4.1 洁净区间的确认微生物计数检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全部过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品（即待检样品、产品）中微生物的检出。

4.2 培养基4.2.1 应使用按中国药典处方及规定的方法制备的培养基。

4.2.2 所用培养基可按中国药典规定的处方及制备方法自行配制，也可使用按中国药典规定的处方生产的脱水培养基进行配制；或购买商品化的预制培养基。

4.2.3 配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2~25℃、避光的环境下保存。

4.2.4 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。

4.2.5 供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。

4.2.6 供试品的微生物计数方法、控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数或控制菌检查。

4.3 菌种及菌液制备检查所用的菌种及菌液制备见附件 1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。

稀释剂、冲洗液及其制备的要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查。

4.4 培养基的适用性检查供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。

微生物限度检查所用的培养基每批均应进行适用性检查，检查可在供试品检查前或与供试品检查同时进行。

具体要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。

4.5 方法适用性试验供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。

表面微生物测定操作规程

文件制修订记录一、目的：建立表面微生物测定操作规程，使操作标准化，规范化。

二、范围：各生产车间、化验室。

三、责任人：质控部检验员。

四、管理内容：1 洁净区微生物监测的动态标准如下：2 检测方法2.1 培养皿接触法培养皿接触法(Rodac Plate法)最为简单，但仅适用于平的表面。

在层流下开启表面接触碟，碟内无菌琼脂培养基 (通常直径为50mm)直接与设备表面接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀接触10秒钟左右，再盖上碟盖；用蘸有75%酒精的棉球擦拭被取样表面，除去残留琼脂。

将取样后的接触碟置于预定时间内和规定温度下(例如30～35℃或20～25℃)进行培养，用肉眼对微生物计数并识别，有疑似控制菌应鉴别菌种。

此方法要求将培养基倒人培养皿中并使之隆起，应防止培养基溢出。

2.2 棉球擦抹法对洁净区消毒结束后，可对洁净室内的机械表面＼内部及缝隙间、墙壁、窗台、试验台等量取25cm2的面积，用事先经过灭菌的生理盐水、精制水或缓冲液(例如磷酸缓冲生理盐水)润湿的适当大小的灭菌纱布或灭菌脱脂棉充分擦拭，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内振摇(或作超声波洗涤)，再对浸出液进行增菌培养。

棉签取样能用于 Rodac 盘无法进行取样的场合，例如角落、缝隙等处。

棉签可以由棉花和涤纶制成。

如果棉签是由海藻酸钙做成的那就最好不过，因为这种材料可溶于稀释液，这样便于将微生物释放在溶液中。

擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。

对每个擦拭点应详细记录所在房间的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间。

2.3 浸渍法棉签先用灭菌稀释液(如注射用水)湿润，然后擦拭取样区域，最后放入一个装有灭菌稀释液的试管中。

样品应在2小时内进行测试，以免在稀释液中增加微生物数量。

试管经搅动从棉签上释放出微生物，稀释液则注入培养基盘内，经培养，然后计数并鉴别。

根据USP中表面微生物的检测，面积为25～30平方厘米，一个点使用一根棉签，擦拭完毕后将棉签剪断到5ml生理盐水中，分注到5个平皿中。

洁净室（区）的操作服、手套微生物检验操作规程

洁净室（区）的操作服、手套微生物检验操作规程1.目的：建立一个测定洁净室（区）的操作服、手套微生物数的检查方法。

2.范围：适用于所有全厂洁净室（区）、超净台等区域使用的操作服、手套的监测。

3.责任：质检科检验员、车间全体洁净室（区）人员对实施本规程负责。

4.程序4.1取样部位及范围4.1.1手套和操作服表面的微生物监测是人员卫生监测的关键。

手套取样时应包括双手的手指和手掌，操作服表面取样主要是前臂的袖管部位、肩前下部等，鞋套的取样部位宜在套筒的上侧面（此部位在穿戴时易被污染）。

4.1.2人员卫生监测时每点取样面积宜控制在24～30cm2之间。

4.1.3为避免干扰，宜在生产活动结束时取样（生产人员离开无菌生产区时取样）。

4.2监测方法（接触蝶法）接触蝶内的培养基为固化后呈凸面状的营养琼脂，适用于对平整的规则性表面进行取样监测。

取样时，打开蝶盖，使无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触蝶底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀接触10秒钟左右，再盖上蝶盖。

取样后，需用蘸有70%酒精的湿纱布擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。

将取样后并做好标记的接触蝶置于30～35℃培养4天，读数，记录。

4.3洁净室（区）操作服、手套活微生物数等级4.4菌落计数4.4.1用肉眼直接计数。

4.4.2若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

4.5附注4.5.1每批培养基应有空白对照试验，检验培养基本身是否污染。

4.5.2所用的玻璃器皿，先用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗三次。

于250℃干烤至少1小时，一周内备用。

4.5.3为保证实验的准确性，应在干燥无尘埃流通的环境里操作。

4.5.4测试过程中应严格防止人为对样本的污染。

表面微生物检测标准操作规程

目的：建立洁净室（区）中表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。

范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。

职责：质量管理部、QA检测员内容：1、测试方法:擦拭法2、仪器、设备、培养基2.1培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿2.2培养基：营养琼脂培养基2.3生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。

2.4自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。

3、采样位置和采样点数3.1根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板。

3.2表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定：3.2.1洁净区（室）的大小；3.2.2设备、管路等的复杂程度；3.2.3生产活动的重要性；3.2.4易受污染的部位。

如关键功能间的门、地面、墙面、生产设备的关键部位等。

3.3不宜每次固定在同一点取样，应在取样点附近的不同位置取样，使测试结果更具代表性。

4、采样量：表面微生物取样面积宜控制在25cm2左右。

5、测试状态及时间：动态测试。

6、测试6.1依据测试区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。

6.2将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分。

6.3将棉签按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2，擦拭过程应覆盖整个表面。

6.4翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。

但与前次擦拭移动方向垂直。

6.5擦拭方法如图：6.6擦拭完成后，将棉签放入无菌试管中并密封，检测时，加入15ml灭菌生理盐水，充分振荡混匀，取1ml样液注入到培养平皿中，加入约15ml配置好的营养琼脂培养基充分混匀，待培养基凝固。

表面微生物测试标准操作程序

1目的建立表面微生物监测标准操作程序，便于更准确的掌握洁净室微生物的负荷情况。

2范围适用于生产区域表面以及设备和与产品接触表面的微生物量的测试，包括人员表面微生物的监测。

3职责QA、QC及生产人员遵照执行。

4内容4.1测试仪器包括培养皿、培养基、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器，φ55mm培养皿。

4.2测试方法包括接触碟法、擦拭法以及表面冲洗法，每种提供的数据都可以用于产品质量的评价。

4.2.1接触碟法：适用于平整的规则性表面取样。

培养基充满碟子，取样面积一般约为25cm2。

取样时打开碟盖，使无菌培养基表面与取样面直接接触，确保琼脂表面与取样点表面均匀接触10秒钟左右，再盖上碟盖。

取样后需用75%酒精擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。

4.2.2擦拭法：用于不规则表面（尤其是设备表面）取样。

将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分，按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2。

在向前移动的同时将其从一边移到另一边。

擦拭过程应覆盖整个表面。

翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。

但与前次擦拭移动方向垂直。

擦拭完后，将棉签在平皿上以取样相同的方式轻轻划过并放入平皿，进行培养。

擦拭方法如图：4.2.3表面冲洗法：适用于监测大面积区域内表面的微生物含菌量，包括设备轨道、储水罐等。

用定量的无菌水冲洗表面，收集淋洗水，用膜过滤法来计算微生物数量。

4.3表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定：4.3.1洁净区（室）的大小；4.3.2设备、管路等的复杂程度；4.3.3生产活动的重要性；4.3.4易受污染的部位等。

应至少包含以下部位：每扇门、每个门把手、地板（至少两点）、墙壁（不易被清洁/消毒的部位，至少两点）、公用介质的管路（不易被清洁/消毒的部位）、生产设备的关键性部位（如灌装针、易与人员接触的塑料帘膜、胶塞桶、传输带）等。

药典表面微生物检测操作规程

题目：洁净区（室）表面微生物监测标准操作规程编码：颁发部门：质量部起草：日期：2015年月日修订日期：年月日审核：日期：2015年月日生效日期：2016年月日批准：日期：2015年月日发放份数：版次：第1版分发部门：质量部、中心化验室1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。

2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。

3.责任：表面微生物检测员。

4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。

4.1.3表面微生物菌落数:规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。

4.2测试原理:本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。

4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。

恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。

培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。

使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。

接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。

培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。

将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。

待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。

洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。

微生物检验无菌室洁净标准及其操作规程

微生物检验无菌室洁净标准及其操作规程无菌室(洁净室)是微生物检验室的核心。

无菌室普通是在微生物试验室内开拓的一个自立小房间。

无菌室的规划设计、建设要符合《洁净室施工及验收规范》(GB50591-2010)的要求。

(一)无菌室洁净标准无菌操作间洁净度应达到10000级，超净工作负清净度应达到100级，室内温度维持在18～27℃，湿度保持在30%～70%。

详细要求见表4-3。

表4-3 无菌室(洁净室)空气洁净度级别注：1.浮游菌m3和沉降菌/皿可任测一种。

2.100级洁净室(区)0.8m高工作区的截面最低风速：垂直单向流0.25m/s，水平单向流0.35m/s。

(二)无菌室操作规程 (1)无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。

(2)无菌室应定期用相宜的消毒液灭菌清洁，以保证洁净度符合要求。

按照无菌室的净化状况和空气中含有的杂菌种类，可采纳不同的消毒剂，如、、、3%气溶胶喷雾(20mL/m3)、(配成1%浓度喷洒)、5%气溶胶喷雾(2.5mL/m2)等。

(3)工作人员进入无菌室前，必需用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服、鞋、帽子、口罩和手套。

(4)无菌室用法前，应将全部物品置于操作部位(待检物除外)，然后打开紫外灯杀菌30min以上，并同时打开超净工作台举行吹风。

操作完毕，应准时清理无菌室，再打开紫外灯灭菌20min。

(5)凡带有活菌的物品，必需经高压灭菌后才干清洗或丢弃。

(6)每2～3周用3%石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌椅及地面。

(7)无菌室应每月检查菌落数。

在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的养分琼脂平板3～5个，分离放置在工作位置的左、中、右等处，开盖裸露30min后，倒置于30～35℃培养箱内培养48h，取出检查。

100级洁净室平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平板杂菌数平均不得超过3个菌落。

如超过限度，应对无菌室举行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。

表面微生物检测标准操作规程

目的：建立洁净室（区）中表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。

范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。

职责：质量管理部、QA检测员内容：1、测试方法:擦拭法2、仪器、设备、培养基培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿培养基：营养琼脂培养基生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。

自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。

3、采样位置和采样点数根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板。

表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定：3.2.1洁净区（室）的大小；3.2.2设备、管路等的复杂程度；3.2.3生产活动的重要性；3.2.4易受污染的部位。

如关键功能间的门、地面、墙面、生产设备的关键部位等。

不宜每次固定在同一点取样，应在取样点附近的不同位置取样，使测试结果更具代表性。

4、采样量：表面微生物取样面积宜控制在25cm2左右。

5、测试状态及时间：动态测试。

6、测试依据测试区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。

将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分。

将棉签按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2，擦拭过程应覆盖整个表面。

翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。

但与前次擦拭移动方向垂直。

擦拭方法如图：擦拭完成后，将棉签放入无菌试管中并密封，检测时，加入15ml灭菌生理盐水，充分振荡混匀，取1ml样液注入到培养平皿中，加入约15ml配置好的营养琼脂培养基充分混匀，待培养基凝固。

7、培养：取样结束后将平皿复倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。

物体表面微生物污染检测标准操作规程

物体表面微生物污染检测标准操作规程一、采样方法
二、检测方法
充分震荡采样管后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0 ml接种平皿，将冷却至40~45 ℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15~20 ml，36±1 ℃恒温箱培养48小时，计数菌落数。

三、结果计算
物体表面菌落总数计算方法：
1、规则物体表面：
细菌菌落总数（CFU/ cm²）：平均每皿菌落数×稀释倍数/
采样面积（cm²）；
2、不规则物体表面的结果计算，用CFU/件表示。

四、判定标准
1、Ⅰ、Ⅱ类环境：洁净手术部、其他洁净场所、非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器
官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区等，物体表
面细菌菌落总数≤5 CFU/cm²。

2、Ⅲ、Ⅳ类环境：儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人工流产室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心检
查包装灭菌区和无菌物品存放区、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室等，物体表面细菌菌落总数≤10 CFU/cm²。

五、采样中的注意事项
1、采样时机：日常常规检测时可在消毒后采样，怀疑医院感
染暴发、进行医院感染暴发调查或工作中怀疑物体表面被污染时，应随机采样。

2、常规对环境物体表面消毒效果检测时可不进行致病性微生物检测，疑似医院感染暴发、进行医院感染暴发调查或工作中怀疑物体表面被微生物污染时，应进行目标微生物的检测。

3、采样、接种中严格遵守无菌技术操作规程。

洁净室(区)表面微生物检测操作规程

标准操作规程（STANDARD OPERATING PROCEDURE ）题目洁净室（区）表面微生物检测规程编码SOP-QC-011-00 文件属性■新订；□确认；□修订，第次，替代起草人审核人批准人起草日期审核日期批准日期颁发部门品质管理部颁发日期2018.07.23 生效日期2018.08.01 分发部门品质管理部1份，检验检测部2份，行政人事部1份，共印4份1. 目的：规范洁净室（区）表面微生物检测程序，以确切反映生产活动对环境的影响程度。

2. 适用范围：适用于洁净室（区）内包括设施、墙面、地面、设备表面和洁净服、操作手套等表面的微生物监测。

3. 责任人：QC：负责培养基的准备及取样后培养观察记录结果。

负责培养皿（液）的中间转运、记录填写及报告发放。

各车间工序指定人员：负责正常生产时对无菌注射剂车间动态洁净区的表面微生物检测。

4. 正文：4.1 测试条件：4.1.1 被测洁净室（区）温、湿度、静压差、换气次数和空气的流速必须控制在规定范围内；4.1.2 测试前，被测试洁净室（区）已经消毒；4.1.3 被测净化空调系统正常运行不少于30min后开始测定。

4.2 测试人员：测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服；4.3 测试前准备：4.3.1 定量法培养皿的准备：为购买的预灌装表面接触碟平皿，成分为大豆酪蛋白琼脂营养基（TSA），具有三层包装且经钴60辐照的预灌装表面接触碟平皿，可供采样用。

4.3.2 定性法培养基的准备：4.3.2.1 取250ml锥形瓶加入200ml营养肉汤培养基后，置121℃湿热灭菌20min后备用；4.3.2.2 取500ml锥形瓶加入400ml营养肉汤培养基后，置121℃湿热灭菌20min后备用；4.3.2.3 取20ml试管注入10ml营养肉汤培养基后加塞，置121℃湿热灭菌20min后备用。

4.3.3 擦拭工具准备：4.3.3.1 擦拭用洁净棉签放在烧杯里包裹后，经过121℃湿热灭菌20min后备用。

洁净区(室)表面微生物监测操作规程

建立一个洁净室(区）表面微生物的检验操作规程。

二、范围：适用于本公司的洁净室（区）表面微生物的测定。

三、职责：洁净室（区）表面微生物的检测人员、化验室主任及质量部部长对实施本规程负责。

四、内容：1.标准依据《药品生产质量管理规范》（2010版）2.洁净区测试点选择表面微生物监测的采样点数目及布局根据以下几个方面设置:2.1 空调系统验证的结果2.2 房间的大小和布局2.3房间的用途2.4与产品的距离2.5 人流物流方向对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。

如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。

3.洁净区微生物测试频率和限度3.1 A级每月测定一次，C级、D级每季度测定一次。

3.2接触碟（φ55mm）50cfu/25cm2,警戒40cfu/25cm2纠偏45 cfu/25cm2。

4.洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法）4.1洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。

4.2 取样：取样时打开碟盖，无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，接触约5秒钟，再盖上碟盖。

4.3 取样后，应立即用75%酒精喷洒被取样表面，以除去残留琼脂。

4.4 培养：收好的胰酪大豆胨琼脂接触碟在30-35℃培养不少于2天，以所有采样点的平均值加和报告最终结果。

5.偏差纠正一旦发现表面微生物检测结果超标，可以采用以下行动进行调查和评估：5.1 检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员的资质是否确认；5.2 回顾最近一次的悬浮粒子数的检测结果；5.3 回顾最近一次的沉降菌的检测结果；5.4 检查人员的更衣程序是否正确；5.5 检查清洁设备和消毒剂的质量；5.6 查看操作员工的培训记录。

6.洁净区表面微生物的趋势分析每年应对洁净区表面微生物进行趋势分析。

如果发现表面微生物有增加的趋势，应立即通知质量部，展开调查。

根据调查结果采取相应的行动对系统进行纠正。

洁净室(区)表面微生物的检验操作规程

洁净室(区)表面微生物的检验操作规程.doc洁净室（区）表面微生物检验操作规程1. 目的确保洁净室（区）表面微生物的检验操作标准化，以评估和控制洁净环境的微生物污染。

2. 适用范围适用于所有需要进行微生物污染控制的洁净室（区）。

3. 责任质量管理部门：负责制定和更新检验操作规程。

检验人员：负责执行检验操作，并记录检验结果。

4. 术语和定义洁净室（区）：指按照特定要求控制空气、表面等微生物污染的封闭空间。

表面微生物检验：指对洁净室（区）内表面进行取样和分析，以评估微生物污染程度的过程。

5. 检验准备5.1 检验人员：检验人员应经过专业培训，熟悉检验操作规程。

5.2 检验工具和材料：准备必要的检验工具和材料，如无菌棉签、无菌生理盐水、培养基、手套、口罩、工作服等。

5.3 检验环境：确保检验环境符合洁净室（区）的要求，如温度、湿度、空气洁净度等。

6. 检验操作步骤6.1 表面取样6.1.1 取样点选择：根据洁净室（区）的布局和使用情况，合理选择取样点。

6.1.2 表面消毒：对取样点进行消毒，以减少非目标微生物的干扰。

6.1.3 取样：使用无菌棉签蘸取无菌生理盐水，轻轻擦拭取样点表面，收集样本。

6.2 样本接种6.2.1 培养基准备：根据需要选择合适的培养基，如琼脂平板。

6.2.2 接种：将取样棉签在培养基上轻轻涂抹，确保样本均匀分布。

6.3 培养6.3.1 培养条件：将接种后的培养基放入恒温培养箱中，设定适宜的温度和时间进行培养。

6.3.2 观察记录：定期观察培养基上微生物的生长情况，并记录数据。

6.4 结果分析6.4.1 计数：根据培养基上的菌落数，计算每平方厘米的微生物数量。

6.4.2 鉴定：对菌落进行形态学观察和必要的生化试验，以鉴定微生物种类。

6.4.3 数据分析：分析检验结果，评估洁净室（区）的微生物污染状况。

7. 检验结果的评估7.1 标准对比：将检验结果与洁净室（区）的微生物污染标准进行对比。

洁净区表面微生物检测方法标准操作规程

目的：建立检测洁净区的表面微生物污染的检测方法，保证洁净区达到要求。

应用范围：适用于洁净室的质量控制责任人：化验室微生物检验员。

内容：1 仪器与材料灭菌的培养皿及营养琼脂培养基，每个培养皿中倒入20ml培养基、121℃灭菌30分钟，然后30～35℃培养24小时，如无菌生长，则可用于试验。

2 取样检测方法包括：接触平皿法、棉签擦拭法及表面冲洗法。

取样人员于取样前检查琼脂平皿。

不得使用被污染、水汽过多、过于干燥或分装不均的平皿。

同一物体应在其不同的地方采2个样。

2.1 接触平皿法2.1.1 适用于对平整的有规则性表面进行取样。

碟子为直径50～55mm，培养基充满碟子并形成圆顶，取样面积一般约为25cm2。

2.1.2 取样时，打开碟盖，无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，再盖上碟盖。

2.2.3 取样后，需要立即用适当的消毒剂擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。

2.2 棉签擦拭法2.2.1 适用于平皿接解法不适用的设备和不规则表面取样。

2.2.2 棉签的种类可选棉质、涤纶等。

将100个棉签用无菌生理盐水或0.1%的蛋白胨溶液约50ml浸湿，包上铝箔放入不锈钢饭盒中，121℃灭菌30分钟。

2.2.3 取样时，握住棉签柄，以30角与取样表面接触，缓慢并充分擦拭，取样面积24～30 cm2，然后将取样头折断放入浸湿溶液中，充分振荡，再用平皿涂布法或铺平板法计数。

2.3 表面冲洗法2.3.1需要确定设备内表面的生物载荷或面积较大时采用此法。

2.3.2用经121℃灭菌30分钟无菌水冲洗内表面，刻度吸管吸取淋洗液1ml，膜过滤后，检测。

3 培养 30～35℃培养48小时。

4 采样量每个采样点分别用棉签法取样或使用接触平皿法充分接触。

5 采样结果每个培养皿中的菌落数与限度比较得出最后的评判。

6 偏差纠正发现表现检测结果超标，可以采取以下行动进行调查和评估6.1 检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员的资质等。