微生物检验操作规程
微生物检验操作规程
微生物检验操作规程1.0目的建立微生物检验标准操作规程，保证检验操作规范化。
2.0适用范围适用于本公司相关的微生物检验活动的全过程。
3.0职责3.1 微生物检验员负责微生物检验的全过程；3.2 QC主管负责监督检查本规程的有效实施。
4.0作业内容4.1无菌操作要求4.1.1 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
4.1.2专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
4.1.3 接种样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。
4.1.4 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
4.1.5 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
4.1.6 接种样品、转种细菌必须在酒精灯旁操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞（即硅氟胶塞）都要通过火焰消毒。
4.1.7 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处。
4.1.8 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
4.2无菌间使用要求4.2.1 无菌间内应保持清洁，工作后用消毒溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。
4.2.2无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。
4.2.3处理和接种样品时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
4.3消毒灭菌要求4.3.1灭菌前准备（1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。
（2）装培养基的三角瓶，内容物不应超过总体积的2/3（例如500mL的三角瓶最好装300～350mL培养基，以防再次加热融化时爆沸）。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查操作规程《微生物限度检查操作规程》一、目的微生物限度检查是用于确认产品是否符合微生物水平要求的一种分析方法。
本操作规程的目的是制定微生物限度检查的操作步骤，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本操作规程适用于所有需要进行微生物限度检查的产品，包括食品、医药和化妆品等。
三、操作步骤1. 准备工作：清洁实验室工作台面和仪器设备，准备所需的培养基和试剂，并确保仪器设备的正常运转。
2. 取样：按照产品的取样标准，从不同批次或不同位置进行取样，并确保取样的代表性。
3. 样品制备：将取样的产品进行样品制备，包括稀释、搅拌和过滤等步骤，以便于后续的微生物检查。
4. 培养：将样品接种在适当的培养基上，根据不同的微生物种类和要求进行培养，并进行恒温培养一定时间。
5. 计数：在培养一定时间后，对培养基上的菌落进行计数，并按照标准方法进行结果的记录和确认。
6. 结果判定：将检查结果与产品的微生物限度标准进行比对，根据结果作出是否合格的判定。
7. 结果记录：将微生物限度检查的结果进行记录，包括样品信息、操作步骤、检查结果和判定等信息，并将结果报告给相关部门或供应商。
四、注意事项1. 操作人员应具备一定的微生物检测知识和操作技能，严格按照操作规程执行。
2. 实验室应保持清洁、卫生，并进行定期消毒和验证。
3. 实验室设备应定期维护和校准，确保设备的准确性和可靠性。
4. 所使用的培养基和试剂应符合相关标准，存放在干燥、阴凉、避光的环境中。
5. 检查结果应及时报告，并根据结果采取相应的控制措施。
以上就是《微生物限度检查操作规程》的主要内容，希望能够帮助大家更好地进行微生物限度检查，确保产品质量和安全。
微生物限度检查法标准操作规程3篇
微生物限度检查法标准操作规程第一篇：微生物限度检查法标准操作规程概述1.引言微生物限度检查法（Microbial Limit Test, MLT）是药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品产品质量控制检验的重要手段之一。
它的意义在于保证制品中微生物污染的可控性，保障产品的安全有效性。
本篇文章将围绕微生物限度检查法的标准操作规程，对其概述进行介绍。
2.主要内容2.1 微生物限度检查法的定义微生物限度检查法（Microbial Limit Test, MLT）是指对药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品产品中细菌和真菌等微生物数量进行检查的方法和标准。
它是评价产品质量与卫生安全性的重要方法。
2.2 微生物限度检查法的目的微生物限度检查法的目的在于评价药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品产品中的微生物数量是否在规定的限度范围内，以保证产品的安全性和有效性。
同时，微生物限度检查法也可为制品的生产、质量控制和质量管理提供有效依据。
2.3 微生物限度检查法的适用范围微生物限度检查法适用于药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品的质量控制检验。
其中，针对药品类，在我国《药典》中有详细规定。
3. 微生物限度检查法的标准操作规程3.1 样品处理样品处理过程应密闭、无菌且保持无菌状态。
洗手、穿戴无菌工作服及手套等工艺应符合规定，以避免二次污染。
3.2 检验方法微生物限度检查法主要分为计数法和筛选法，具体方法可根据制品的特性进行选择使用，并符合规定的国家标准。
对于细菌，常用的检验方法包括菌落计数法、薄膜过滤法等；对于真菌，常用的检验方法包括直接涂片法、薄膜过滤法等。
3.3 限度对于不同的制品，在药品中通常采用菌落计数法，在制品中微生物的限度规定一般标准分别为：细菌总数不超过10^3CFU/g或/mL，霉菌和酵母菌总数不超过10^2CFU/g或/mL。
3.4 结果判定若检测出的微生物数目符合规定限度，则判定结论为合格；若其中一个指标不符合规定，则判定为不合格。
微生物限度检查法标准操作规程完整
3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查 供试品微生物计数中 所使用的培养基应进行适用性检查。供试品的微生物计数方法应进行方法适用性 试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。
4、菌种及菌液的制备
试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0袋），并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。计数培养基适用性检查和计数方法 适用性试验。
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B) 10104]
大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B) 44102])
乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi B)[CMCC(B) 50094]
白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98001]
薄膜过滤法采用的滤膜孔径不大于。滤膜直径一般为50mm。滤器及滤膜使用 前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供 试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。为发挥滤膜的最大过滤效率，应 注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要 用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量不超过100ml，总冲洗量不得超过1000m1；以免滤膜上的微生物受损伤。取照上述“供试液的制备”和“接种和 稀释”制备的供试液适量（一般取相当于1g、1ml、10cm2的供试品，若供试品 中所含菌数校对，供试液可酌情减量），加至适量的稀释液总，混匀，过滤，用 适量的冲洗液冲洗滤膜。测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨 琼脂培养基平板上；测定霉菌和酵母菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于沙氏葡萄糖 琼脂培养基平板上，按规定条件培养、技术。每株试验菌每种培养基至少制备1张滤膜。同法测定供试品对照组和菌液对照组菌数。
微生物限度检查操作规程
更改历史微生物限度检查操作规程1.0 目的建立微生物限度检查标准操作规程，规范检验操作，确保检验结果准确2.0 范围适用于本公司采用微生物限度检查法测定的供试品。
3.0 职责质量部负责按本规程的要求执行微生物限度检查操作。
4.0 工作程序4.1 洁净区间的确认微生物计数检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全部过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品（即待检样品、产品）中微生物的检出。
4.2 培养基4.2.1 应使用按中国药典处方及规定的方法制备的培养基。
4.2.2 所用培养基可按中国药典规定的处方及制备方法自行配制，也可使用按中国药典规定的处方生产的脱水培养基进行配制；或购买商品化的预制培养基。
4.2.3 配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2~25℃、避光的环境下保存。
4.2.4 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。
4.2.5 供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
4.2.6 供试品的微生物计数方法、控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数或控制菌检查。
4.3 菌种及菌液制备检查所用的菌种及菌液制备见附件 1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。
稀释剂、冲洗液及其制备的要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查。
4.4 培养基的适用性检查供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
微生物限度检查所用的培养基每批均应进行适用性检查，检查可在供试品检查前或与供试品检查同时进行。
具体要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。
4.5 方法适用性试验供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。
检验科微生物监测操作规程
1．目的规范检验科的微生物检测。
2．适用范围适用于检验科的微生物空气监测。
3．操作步骤3.1 检验科实验室空气培养监测3.1.1采样及检查原则采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h。
若样品保存0—4℃条件时，送检时间不得超过24h。
3.1.2. 采样时间检验科各室空气培养在每月下旬，选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。
3.1.3 采样高度与地面垂直高度80—150cm。
3.1.4 布点方法室内面积≤30m3，设一条对角线上取3点，既中心一点、两端各距墙1m处各取一点：室内面积＞30m3，设东、西、南、北、中5点，其中东、西、南、北点均距墙1m。
3.1.5 采样方法用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检培养。
盖上盖子，并填写好检验单，送细菌室培养。
3.2 48h后，观察结果。
各个实验室空气培养要求在：≤4CFU／m3。
监测时间:根据不同的特殊重点部门,每1～3个月监测一次.当发生医院感染流行,高度怀疑或确定与空气,物体表面,医务人员手的污染有关时,可随时进行监测.4．处理根据培养结果，对检验科的消毒灭菌效果进行总结，采取积极的应对措施，使检验科的微生物监测符合要求。
1．目的规范检验科的微生物检测。
2．适用范围适用于检验科的微生物物表监测。
3．操作步骤3.1 检验科实验室物表培养监测3.1.1 物体表面采样方法3.1采样时间检验科各室空气培养在每月下旬，选择消毒处理后4h内进行采样。
3.3采样方法①采样面积被采表面＜100cm2，取全部表面：被采表面≥100cm2，取100cm2。
用5×5cm2的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭纸1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭纸，连续采样1—4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭纸放入装10ml采样液的试管中送检。
门把手等小型物体则采用棉拭纸直接涂抹物体的方法采样。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程《微生物限度检查标准操作规程》一、目的微生物限度检查是药品、食品、化妆品等产品质量的重要指标之一，其目的是为了保障产品的安全性和稳定性。
本标准操作规程旨在规范微生物限度检查的操作流程，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、范围本标准操作规程适用于药品、食品、化妆品等产品的微生物限度检查，包括大肠菌群、金黄色葡萄球菌、霉菌和酵母菌等微生物指标的检查。
三、检查设备和试剂1. 培养基：根据不同的微生物指标选择适当的培养基，如大肠培养基、Mannitol盐琼脂、Sabouraud葡萄糖琼脂等。
2. 培养皿：使用符合规定的试验培养皿。
3. 培养箱：保证培养条件的恒温培养箱。
4. 其他常用实验用具：包括无菌采样容器、吸管、移液器、无菌培养皿等。
四、操作流程1. 样品采集：从产品中采集适量样品，保持无菌状态。
2. 制备稀释液：根据样品的特性，选择适当的稀释液将样品进行适当稀释。
3. 接种培养：将稀释后的样品接种在适当的培养基上，并在符合条件的培养箱中进行培养。
4. 观察和统计：观察培养皿中微生物的生长情况，统计出微生物的数量。
5. 结果判定：根据标准规定的微生物限度标准，判断检测结果是否符合规定。
五、质量控制1. 实验员必须进行严格的无菌操作训练，并使用正确的个人防护用具。
2. 培养基的质量必须符合规定，避免培养基带有细菌污染。
3. 检查设备必须经过定期的检查和校准，保持正常的工作状态。
4. 标本的采集、处理、保存和运送必须符合规定，避免外界的污染和干扰。
六、结果报告根据检测结果和规定的限度标准，出具检测报告，标明产品的微生物限度是否符合规定，以及具体的检测结果数据。
七、总结微生物限度检查是产品质量检验的重要环节，严格按照标准操作规程进行操作，可以保证检测结果的准确性和可靠性。
实验员在操作过程中也需严格遵守规程，做好个人防护措施，确保实验室的安全和卫生。
微生物检验操作规程
微生物检验操作规程《微生物检验操作规程》一、检验前准备1. 确保实验室环境清洁整洁，无菌操作台面及仪器设备；2. 熟悉操作规程，准备好所需的培养基、试剂和消毒液；3. 检查培养基和试剂的有效期，确保使用的培养基和试剂符合要求。
二、样本处理1. 将样本送检单与样本一同接收，并核对相关信息；2. 对样本进行消毒处理，避免污染实验室环境；3. 定量取样，确保取样的准确性和可靠性。
三、培养基制备1. 按照培养基说明书的要求，准备培养基，注意培养基的稀释和灭菌；2. 根据需要，将培养基注入培养皿中，准备好后放置在无菌条件下。
四、微生物接种1. 根据样本的来源，选择合适的培养基进行接种；2. 采用无菌技术，进行微生物接种，避免外部污染；3. 对接种的培养皿进行标记，清晰记录接种的菌种和数量。
五、培养条件1. 根据不同微生物的生长要求，设置适当的培养条件，包括温度、湿度、气体组成等；2. 定期观察培养皿的生长情况，记录菌落形态、数量和颜色等信息。
六、鉴定和鉴定1. 根据菌落形态、生理生化特性等进行初步鉴定；2. 利用鉴定试剂或生化指标进行进一步鉴定；3. 如有需要，可进行分子生物学方法进行鉴定。
七、结果记录和报告1. 将鉴定结果详细记录在报告中，包括鉴定的微生物种类、数量、鉴定方法和结果等；2. 及时向送检单位提交检验报告，确保检验结果准确无误。
八、实验后清洁1. 将使用过的培养皿和试剂进行正确的处理和清洁；2. 对实验室操作台面和设备进行消毒，保持实验室环境整洁。
以上是《微生物检验操作规程》的基本操作流程，每一步的操作都应严格遵守操作规范，保证微生物检验结果的准确性和可靠性。
微生物检验标准操作规程
微⽣物检验标准操作规程1 ⽬的建⽴微⽣物限度检查的操作规程，为微⽣物检查⼈员提供正确的标准操作⽅法。
2 范围适⽤于原辅材料、内包装材料、半成品、成品的微⽣物限度检查。
3 责任QA对本规程的有效执⾏承担监督检查责任，QC对本规程的实施负责。
4 程序4.1 简述: 微⽣物限度检查法系指检查⾮规定灭菌制剂及其原、辅料受到微⽣物污染程度的⼀种检查⽅法，包括染菌量及控制菌的检查。
螨，属于节肢动物门，蛛形纲，蜱螨⽬。
种类繁多，分布甚⼴。
其⽣活习性各异，分为⾃由⽣活和寄⽣⽣活两种类型。
在⼟壤、池沼、江河和湖海⾥，动、植物体上，贮藏⾷品和药品中，都可能有它们的存在。
药品可因其原料、⽣产过程或包装、运输、贮存、销售等条件不良，受到螨的污染。
螨可蛀蚀损坏药品，使药品变质失效，并可直接危害⼈体健康或传播疾病。
能引起⽪炎及消化系统、泌尿系统、呼吸系统等的疾病。
因此，药品特别是中成药，必须进⾏活螨检查。
4.2 器⽫、仪器及⽤具。
4.2.1 玻璃器⽫：250ml锥形瓶、250ml具塞三⾓烧瓶、研钵（陶瓷制，直径10-12cm）、培养⽫（90mm）、量筒（100ml）、试管（18×180mm）及塞、吸管（1ml分度0.01,10ml 分度0.1）、注射器(20或30ml)、注射针头、载玻⽚、盖玻⽚、玻璃消毒缸（带盖）。
4.2.2 ⽤具：⼤、⼩橡⽪乳头（放于⼲净带盖的容器中，并应定期⽤70%-75%⼄醇溶液浸泡）,⽆菌⾐、帽、⼝罩、⼿套灭菌，备⽤, 显微镜、放⼤镜（5-10倍）、实体显微镜、解剖针（尖端宜尖细且粗糙，否则不易挑取体表光滑的螨体）、发丝针（由⼀根长约10cm的⼩⾦属棒，将其⼀端磨成细尖，另取长约1.5cm的头发⼀根，以其长度的⼀半紧贴在⾦属棒的尖端上，⽤细线将其缠紧，然后粘上加拿⼤树胶或油漆，即得。
适⽤于挑取⾏⾛缓慢且体表刚⽑较多的螨体）、⼩⽑笔（即绘图⽑笔。
适⽤于挑取活动快的螨类，笔锋宜尖细，以免螨体夹在笔⽑之间）、载玻⽚、盖玻⽚、酒精灯、培养⽫或⼩搪瓷盘（内衬⿊⾊纸⽚）、扁形称量瓶（⾼3cm、宽6cm）。
微生物检验操作规程
微生物检验操作规程微生物检验操作规程一、实验室的准备工作1.确保实验室环境整洁卫生，空气流通。
2.检查实验室设备及试剂的完好性，如有损坏或过期的试剂应予以更换。
3.准备所需的培养基、试剂和培养器具，并确保其质量符合要求。
4.准备好必要的个人防护用品，如实验手套、口罩、护目镜、实验服等。
二、标本采集和处理1.标本的采集应遵循无菌操作的原则，采集器具需经过高温高压消毒处理。
2.将采集的标本迅速送至实验室，避免暴露于空气中。
3.对于液体标本，如尿液、血液等，应进行无菌操作并进行适当的稀释。
4.对于固体标本，如组织、分泌物等，应进行无菌取样，并进行适当的处理。
三、培养基的准备和使用1.根据需要，准备所需的培养基，并按照说明书进行正确的配制。
2.确保培养基的无菌性，防止细菌、真菌等污染。
3.使用培养基前应进行质控试验，确保培养基的质量符合要求。
4.在使用培养基前，要检查培养基是否出现变质、褪色等异常情况，若有发现，应立即更换。
四、微生物的分离和培养1.将标本取适量，在无菌条件下均匀涂抹于培养基表面，避免重叠。
2.将涂抹好的培养基置于细菌培养箱中，设置适当的温度和湿度，促使微生物的生长。
3.培养箱内不宜存放过多的培养基，以免影响空气流通和温度控制。
4.定期观察培养基的生长情况，并进行记录，一般培养时间为24小时至48小时。
五、微生物的鉴定和鉴定1.根据菌落的形态、大小、颜色等特征，初步判断微生物的种类。
2.利用显微镜观察菌液或菌落的形态、数量、运动性等特征，进一步鉴定微生物。
3.对于不易鉴定的微生物，可使用生化试剂或分子生物学方法进行鉴定。
4.鉴定微生物的结果应进行记录，并与对应的标准对照互相核对。
六、微生物的灭活和处理1.工作台和实验器具在使用前后应进行消毒，以防止微生物的传播。
2.将已鉴定的微生物进行灭活处理，可使用高温高压或化学消毒剂。
3.遵循规定将已处理的微生物进行妥善的处置，防止对环境和人员造成污染和危害。
微生物检验操作规程
微生物检验操作规程为规范检验程序，提高检验结果的准确性，要求微生物检验员严格按照本操作规程检验。
样品准备：准确称取10g±1g样品，剪碎后加入到200ml已灭菌的生理盐水中，充分混匀，静置10分钟，待生理盐水样液自然沉降后取上清液作菌落计数，液体样品可用原液直接做样液。
如果被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释量可按每次50ml递增，直至能吸出足够测试用样液。
在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时相应调整稀释度。
1.细菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱35℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。
2）试液：0.9%生理盐水、营养琼脂。
3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。
然后用冷却至45℃左右熔化的营养琼脂培养基15～20ml倒入每个平皿内混合均匀。
待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置35℃±2℃培养48h后，计算平板上的菌落数。
结果计算：X1=A*K/5式中：X1→细菌菌落总数，cfu/g或cfu/mlA→5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数K→稀释度4）如果样品菌落总数超过标准的规定，应进行复检。
将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到标准规定，则判定被检样品合格，其中有任何1次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。
2.真菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱25℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。
2）试液：0.9%生理盐水、玫瑰红钠琼脂。
3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。
然后用冷却至45℃左右熔化的玫瑰红钠琼脂培养基15～20ml 倒入每个平皿内混合均匀。
待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置25℃±2℃培养7天，分别于3、5、7天观察,计算平板上的菌落数，如果发现菌落蔓延，以前一次的菌落计数为准。
微生物限度检验操作规程
1目的规范微生物限度检验操作，确保检验结果准确、可靠。
2依据《中国药典》2015版。
3范围本标准适用于微生物限度检验。
4责任中心化验室负责人：对本规程的实施负责。
中心化验室检验人员：严格按照本规程执行检验操作。
5程序5.1执行标准：《中国药典》2015版。
5.2抽样：照《取样标准操作规程》进行。
6内容6.1需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（MPN法）。
检查时，按已验证的计数方法进行供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。
6.1.1设备、仪器及用具6.1.1.1设备微生物限度检测室、净化工作台、生化培养箱（30〜35£）、生化培养箱（20〜25£）、电热恒温水浴锅、烘箱、脉动真空灭菌柜、紫外灯等。
6.1.1.2仪器及器皿显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、移液枪及吸头、薄膜过滤器等。
6.1.1.3用具大、小橡皮乳头，洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等。
6.1.2试液6.1.2.1消毒液A.0.1%新洁尔灭溶液B.75%乙醇溶液6.1.2.2稀释液、试剂及配制A. pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g、无水磷酸氢二钠5.77g、氯化钠4.3g、蛋白胨1.0g,加纯化水1000ml，微温溶解，滤清，分装，1210C灭菌15分钟。
B.聚山梨酯80C.无菌十四烷酸异丙酯D. pH6.8无菌磷酸盐缓冲液6.1.3培养基胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基6.1.4操作方法6.1.4.1试验前准备6.1.4.1.1将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、试管、移液枪吸头（1ml、10ml）、量筒、稀释液、培养基等移至传递窗内。
每次试验所用物品必须事先计划，准备足够用量，避免操作中出入操作间。
6.1.4.1.2开启微生物检测室紫外灯和空调净化系统，并使其工作不低于30min。
微生物检验操作规程
QW-8.2.3-04
微生物检验操作规程
1、实验前用0.2%过氧乙酸擦净台面及四周，放好需用的实验器材
及各种溶液，开紫外灯消毒40-60分钟。
2、进入无菌室前应用肥皂洗手，然后用75%酒精球棉将手擦干净。
3、进入无菌间必须穿的专用工作服、帽及拖鞋、口罩，应放在无
菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
4、使用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使
用的器皿，不能放置再用，消毒用器皿放置不得超过一周。
5、从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位及试管或平
皿边。
6、接种样品必须在酒精灯前操作，接种样品时，吸管从包装中取
出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7、实验完毕，清洁瓷砖台面。
8、用过的器材进行整理，污染细菌的器材需经高压灭菌或煮沸消
毒。
9、实验者在实验后用肥皂清洗双手或将双手浸泡于0.2%过氧乙
酸溶液中3分钟，用清水冲洗，再用肥皂清洗双手。
10、换下的隔离衣、帽等进行高压消毒，拖鞋放回原处。
11、用毕，再开紫外灯消毒40—60分钟。
12、无菌室和缓冲间每周大扫除一次，保持整洁。
13、每月进行一次紫外线对空气消毒效果测定，如灯管发黑，超过
使用期限，及时更换紫外灯管。
微生物实验操作规程
微生物实验操作规程
1. 实验目的
本操作规程旨在确保微生物实验的安全进行，并保证实验结果的准确性和可靠性。
2. 实验器材准备
- 高温灭菌器
- 密封培养皿
- 不锈钢接种环
- 培养基
- 显微镜
- 实验台
3. 实验步骤
3.1. 准备工作
1. 确保实验台面干净整洁，并消毒实验器材。
2. 检查培养基是否符合要求，如有需要，根据实验要求进行调配。
3.2. 培养菌种
1. 使用无菌的不锈钢接种环在培养基表面划线，接种菌种。
避
免污染其他区域。
2. 密封培养皿，标记上菌种信息和日期，放入高温灭菌器中进
行培养。
3.3. 现场观察
1. 从高温灭菌器取出培养皿，置于实验台上。
2. 使用显微镜观察菌落的形态和生长情况。
记录实验结果。
3.4. 数据处理
1. 将观察到的数据整理成表格或图表。
2. 分析数据并得出结论。
4. 实验注意事项
- 操作过程中要佩戴实验手套，避免污染。
- 实验器材要经过高温灭菌处理，确保无菌状态。
- 实验完毕后及时清理实验台面和器材，保持实验环境的卫生。
- 严格遵守实验操作规程，避免操作失误和意外发生。
5. 实验结果分析
根据实验结果分析，我们可以得出结论并进一步探索微生物的特性和应用领域。
以上为微生物实验操作规程，详细描述了实验的步骤和注意事项，希望能对实验操作提供指导和帮助。
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> 注：以上内容仅供参考，实际操作请根据实验要求和实验室安全规定进行。
微生物检验操作规程
将产气的发酵管分别转种在伊美蓝琼脂平板上,置36±1℃恒温箱内培养18～24h,然后取出观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实实验。
4.8.2.2.4 证实实验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群1-2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃恒温箱培养24±2h，观察产气情况，凡乳糖管产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告为菌群阳性。
4.5.1无菌室应经常打扫、拖地板，用0.25%新洁尔灭，擦洗桌面及墙壁，用甲醛熏蒸无菌室。
4.5.2无菌室使用前，应先打开紫外灯灭菌20-30min。
4.5.3无菌室应备有专用开瓶器、镊子、接种针，每次使用前后应在酒精灯火焰上消毒。
4.5.4无菌室应备有75%酒精棉球；新洁尔灭消毒液和来苏消毒液（甲酚皂溶液与水1︰50混匀），内浸纱布数块，备用。
4.6.1配制方法参见《过程、最终检验操作规程》药品配制。
4.6.2所配制的培养基三角瓶上应注明配制日期、配制人等内容。
4.7取样方法
4.7.1大罐、清酒罐取样阀取样方法
（1）先从取样口放掉一些液体，关掉取样阀，然后于阀口内外用酒精（75%）擦/冲洗，然后关掉取样口。
（2）重新放一些液体，关掉取样阀后，点燃酒精灯，将取样口内外烧30秒左右，开启取样瓶盖在火焰下从取样口取样。
（3）取样瓶在瓶口和瓶盖经火焰灭菌后上盖封紧，关闭取样阀
4.7.2大罐、清酒罐、过滤机、灌装机残水、自来水取样阀取样方法
（1）先从取样阀处放掉一点液体，阀内外用酒精棉球擦净。
（2）用火焰对取样阀进行灭菌。
（3）重新放掉一点液体冷却取样阀，启开取样瓶盖在火焰下取样。
（4）取样瓶在瓶口和瓶盖经火焰灭菌后上盖封紧，关闭取样阀。
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微生物检验操作规程
1.目的
为规范微生物检验员的工作流程及检验方法，确保检测数据的准确性及生产环境的卫生条件符和前提方案的要求，特制订本规程。
2.职责
微生物检验员负责按本规程进行微生物检验及记录的填写整理。
3.商业无菌检测
3.1抽样方法
以《成品留样管理规定》商业无菌检测留样。
3.2检测范围
公司生产各品类产品(发酵核桃乳除外)。
3.3检测方法
GB4789.26-2013 《食品微生物学检验商业无菌检验》。
3.3.1操作
样品准备：每个批次取3听样品，在包装容器表面用防水油性记号笔标注样品编号，观察并记录时否有泄露、包装是否有小孔，锈蚀，压痕、膨胀及其它异常情况。
称重：准备好的样品每个批次取2听称重，精确到1g，并记录。
保温：准备好的样品每个批次取剩下的1听置于2℃~5℃冰箱保存作为对照，称重后样品于36±1℃的恒温箱中保温10天，每日观察，保温期间如有胖听、泄漏及时剔除并开罐检查。
保温结束后，再次称重并记录，比较保温前后有无变化。
如变轻，表明样品发生泄漏，并记录。
将所有包装物置于室温直至开启检查。
开启：如有膨胀的样品，将样品先置于2℃~5℃冰箱冷藏数小时后开启。
如有膨胀样品用冷水和洗涤剂清洗待检样品光滑面，水冲洗后用无菌纱布擦干。
以含4%碘的乙醇溶液浸泡消毒光滑面15min后用无菌纱布擦干，用酒精灯将表面残余的碘乙醇溶液全部燃烧完。
在百级洁净实验室内将保温后样品摇匀，用无菌镊子开启，开罐时不得伤及卷边结构，在开启下一个样品前应将镊子在火焰下灼烧灭菌。
留样：开启后用灭菌移液器无菌取出至少30ml至灭菌容器中，做好标记了，保存2-5℃冰箱中，有需要可用于进一步实验，待该批样品得出检验结论后可弃去。
感官检查：开启后，将样品内容物倒入透明玻璃瓶中，观察其组织形态，色泽和气味有无腐败变质迹象并记录。
pH测定：被测液温度应调到20±2℃，与对照样品比较是否有显著差异，pH 相差0.5及以上为显著差异。
涂片：用无菌接种环挑取样液涂于载玻片上，待干后用酒精灯火焰固定，然后向载玻片上滴一滴结晶紫，覆盖固定的料液1min，用蒸馏水小流沿载玻片一端冲洗，待冲洗后水不为紫色为止，自然干燥。
镜检：至少观察5个视野，记录菌体形态特征及每个视野的菌数，与同批冷藏对照样比较，判断是否有明显微生物增殖现象，菌数有百倍或百倍以上增长判为明显增殖。
3.3.2判定
商业无菌：样品经保温试验未出现泄漏；保温后开启，经感官检验、pH 测定、涂片镜检，确证无微生物增殖现象，则可报告该样品为商业无菌。
非商业无菌：样品经保温试验出现泄漏；保温后开启，经感官检验、pH 测定、涂片镜检，确证有微生物增殖现象，则可报告该样品为非商业无菌。
若需核查样品出现膨胀、pH 或感官异常、微生物增殖等原因，可取异常样品的留样按照GB4789.26-2013《食品微生物学检验商业无菌检验》中附录B中低酸性罐藏食品接种培养进行接种培养和分析并报告。
若需判定样品包装容器是否出现泄漏，可取开启后的样品按照GB4789.26-2013《食品微生物学检验商业无菌检验》中附录B中镀锡薄钢板食品空罐密封性检验方法进行密封性检验并报告。
4.非需商业无菌检测
4.1抽样方法：每批取5听。
4.2 检测范围：公司生产发酵核桃乳。
4.3检测内容及指标
表1微生物指标
4.4操作
4.4.1菌落总数
样品稀释：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225m L生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠) 中，充分混匀，制成 1∶10的样品匀液。
用1mL微量移液器吸取1∶10 样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中( 注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，在旋涡振荡器上振摇试管混合均匀，制成 1：100的样品匀液。
按照同样的方法制备10倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次, 换用1次1mL吸头。
倾注平板：根据对样品污染状况的估计, 选择2 -3个适宜稀释度的样品匀液( 液体样品可包括原液)，在进行10倍递增稀释时, 吸取1mL样品匀液于无菌平皿内, 每个稀释度做两个平皿。
同时, 分别吸取1mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
及时将1 5mL-20m L 冷却至46℃的平板计数琼脂培养基( 可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
培养计数：待琼脂凝固后，将平板翻转, 36℃±1℃培养48h±2h，选取
30-300CFU之间的平板计数。
4.4.2大肠菌群
样品稀释同4.4.1
平板计数：选取2 -3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个无菌平皿, 每皿1mL。
同时取1mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。
及时将15-20mL融化并恒温至4 6℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)约倾注于每个平皿中。
小心旋转平皿, 将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3-4mL VRBA覆盖平板表层。
翻转平板，置于36℃±1℃培养18h~24h 。
平板菌落数的选择：选取菌落数在15-150CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落(如菌落直径较典型菌落小)。
典型菌落为紫红色, 菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大，最低稀释度平板低于15CFU的记录具体菌落数。
证实试验：从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10
个菌落的挑取全部典型和可疑菌落。
分别移种于BGLB肉汤管内，3 6℃±1℃培
养24h~48h，观察产气情况。
凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
大肠菌群平板计数的报告：经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以
1.3.
2.3 中计数的平板菌落数, 再乘以稀释倍数, 即为每mL样品中大肠菌群数。
若所有稀释度( 包括液体样品原液)平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀
释倍数计算。
4.4.3 霉菌和酵母
样品稀释同4.4.1
倾注平板：选取2 -3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个无菌平皿, 每皿1mL。
同时取1mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。
及时将15-20mL融化并恒温至4 6℃的孟加拉红培养基约20-25mL倾注于每个平皿中。
小心旋转平皿, 将培养基与样液充分混匀，置于平台使其凝固。
培养计数：平板凝固后，正置平板，28℃±1℃培养5d，选取10-150CFU之间的平板进行计数。
5.用水、生产环境及其他项目检测
5.1自来水，原水、RO水（反渗透水）
5.1.1方法参考标准：GB/T5750.2-2006，GB/T 5750.12-2006。