微生物检验操作规程样本
微生物实验室实验样本安全操作规程
微生物实验室实验样本安全操作规程
为确保微生物实验室实验样本的安全，防止实验中可能出现的
偶然事故和人为疏忽，制定以下操作规程:
1. 实验室入口严格管控，必须佩戴实验室工作服和手套进入。
2. 实验室内应保持整洁，禁止存放过多杂物，确保通道畅通，
防止燃气泄漏等事故。
3. 实验室内温度、湿度、压力等应定期检查，确保仪器设备正
常工作。
同时，对于实验室内存在的生化、放射、毒性等危险性物质，应定期进行检测、调整，确保符合安全标准。
4. 实验过程中，应佩戴防护眼镜、口罩等装备，严禁在实验室
内吃饭、喝水。
5. 实验前要仔细阅读实验手册，对于操作规程不熟悉的，应向
其他工作人员请教；实验当天要对所需化学品和试剂品质进行检查。
6. 实验完成后，试剂品应专门分类保存，避免交叉污染。
对于
有毒物品，要求采用专用存放，并标明危险性质。
7. 实验室存放的微生物菌种应进行分门别类、专人管理，并定
期消毒，杜绝交叉污染。
8. 实验完成后应及时清理化学药品、毒性物品等残留物，消毒杀菌，保持清洁卫生。
注意：禁止将实验室的化学试剂及细菌菌株带离实验室。
如有违反，严肃追究责任。
（以上规程为基础框架，实验室也应按照自身特点进行针对性的补充和完善。
）。
微生物实验的操作规程
微生物实验的操作规程微生物实验的操作规程：一、实验前准备1. 确定实验目的、方法和所需试剂和设备。
2. 检查试剂和设备的完好性和有效期，确保实验所需的试剂和设备都齐全，并进行必要的消毒。
3. 穿戴实验室规定的实验服装和个人防护用品，如实验手套、护目镜和口罩等。
4. 确保工作台面和实验器具的清洁度，并做好实验台面的消毒。
5. 准备好所需的培养基及其他辅助试剂，并按照实验要求进行必要的消毒和灭菌。
二、实验操作1. 在无菌条件下，将所需试剂和设备放入实验台面上，并进行必要的消毒处理。
2. 操作前需洗手，并在工作台上喷洒70%乙醇或其他消毒剂，然后用纸巾擦拭干净。
3. 遵守无菌操作原则，使用无菌技术进行培养基的制备和菌落的分离。
4. 操作时注意防止细菌的污染，尽量避免开启试管、培养皿等时将手放入危险区域。
5. 操作过程中不得随意触摸自己的面部，以免将细菌带入自己的身体。
6. 注意实验室中的气流，尽量避免在通风不良的地方进行操作。
7. 实验操作结束后，将使用过的器材进行清洗和消毒处理，并保持实验室台面的清洁。
三、实验后处理1. 实验完成后关闭实验台面上的灯和电源，将所有试剂、实验器具和废液放置在指定的位置，并进行必要的消毒处理。
2. 将使用过的培养基和细菌培养物放入指定的消毒容器中，并进行高温高压灭菌处理。
3. 清洁和消毒实验室的工作台面和地面，保持实验室的整洁。
4. 将实验室废液倒掉并进行必要的处理，注意不要将废液倒入下水道或环境中。
5. 清洗和消毒使用过的实验服装和个人防护用品，如实验手套、护目镜和口罩等。
6. 定期对实验室进行全面清洁和消毒，并确保消毒剂的有效时间。
四、安全注意事项1. 不得进行未经指导的实验操作，以免发生意外或造成伤害。
2. 遵守实验室的安全规定，不得从事与自己能力和资质不相符合的实验操作。
3. 严格遵守实验室的消防和紧急救援措施，了解实验过程中的风险并采取相应的措施。
4. 遵守个人防护措施，使用必要的个人防护用品，如实验手套、护目镜和口罩等。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查操作规程《微生物限度检查操作规程》一、目的微生物限度检查是用于确认产品是否符合微生物水平要求的一种分析方法。
本操作规程的目的是制定微生物限度检查的操作步骤，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本操作规程适用于所有需要进行微生物限度检查的产品，包括食品、医药和化妆品等。
三、操作步骤1. 准备工作：清洁实验室工作台面和仪器设备，准备所需的培养基和试剂，并确保仪器设备的正常运转。
2. 取样：按照产品的取样标准，从不同批次或不同位置进行取样，并确保取样的代表性。
3. 样品制备：将取样的产品进行样品制备，包括稀释、搅拌和过滤等步骤，以便于后续的微生物检查。
4. 培养：将样品接种在适当的培养基上，根据不同的微生物种类和要求进行培养，并进行恒温培养一定时间。
5. 计数：在培养一定时间后，对培养基上的菌落进行计数，并按照标准方法进行结果的记录和确认。
6. 结果判定：将检查结果与产品的微生物限度标准进行比对，根据结果作出是否合格的判定。
7. 结果记录：将微生物限度检查的结果进行记录，包括样品信息、操作步骤、检查结果和判定等信息，并将结果报告给相关部门或供应商。
四、注意事项1. 操作人员应具备一定的微生物检测知识和操作技能，严格按照操作规程执行。
2. 实验室应保持清洁、卫生，并进行定期消毒和验证。
3. 实验室设备应定期维护和校准，确保设备的准确性和可靠性。
4. 所使用的培养基和试剂应符合相关标准，存放在干燥、阴凉、避光的环境中。
5. 检查结果应及时报告，并根据结果采取相应的控制措施。
以上就是《微生物限度检查操作规程》的主要内容，希望能够帮助大家更好地进行微生物限度检查，确保产品质量和安全。
微生物限度检查法标准操作规程3篇
微生物限度检查法标准操作规程第一篇：微生物限度检查法标准操作规程概述1.引言微生物限度检查法（Microbial Limit Test, MLT）是药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品产品质量控制检验的重要手段之一。
它的意义在于保证制品中微生物污染的可控性，保障产品的安全有效性。
本篇文章将围绕微生物限度检查法的标准操作规程，对其概述进行介绍。
2.主要内容2.1 微生物限度检查法的定义微生物限度检查法（Microbial Limit Test, MLT）是指对药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品产品中细菌和真菌等微生物数量进行检查的方法和标准。
它是评价产品质量与卫生安全性的重要方法。
2.2 微生物限度检查法的目的微生物限度检查法的目的在于评价药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品产品中的微生物数量是否在规定的限度范围内，以保证产品的安全性和有效性。
同时，微生物限度检查法也可为制品的生产、质量控制和质量管理提供有效依据。
2.3 微生物限度检查法的适用范围微生物限度检查法适用于药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品的质量控制检验。
其中，针对药品类，在我国《药典》中有详细规定。
3. 微生物限度检查法的标准操作规程3.1 样品处理样品处理过程应密闭、无菌且保持无菌状态。
洗手、穿戴无菌工作服及手套等工艺应符合规定，以避免二次污染。
3.2 检验方法微生物限度检查法主要分为计数法和筛选法，具体方法可根据制品的特性进行选择使用，并符合规定的国家标准。
对于细菌，常用的检验方法包括菌落计数法、薄膜过滤法等；对于真菌，常用的检验方法包括直接涂片法、薄膜过滤法等。
3.3 限度对于不同的制品，在药品中通常采用菌落计数法，在制品中微生物的限度规定一般标准分别为：细菌总数不超过10^3CFU/g或/mL，霉菌和酵母菌总数不超过10^2CFU/g或/mL。
3.4 结果判定若检测出的微生物数目符合规定限度，则判定结论为合格；若其中一个指标不符合规定，则判定为不合格。
微生物限度检查法标准操作规程完整
3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查 供试品微生物计数中 所使用的培养基应进行适用性检查。供试品的微生物计数方法应进行方法适用性 试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。
4、菌种及菌液的制备
试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0袋），并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。计数培养基适用性检查和计数方法 适用性试验。
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B) 10104]
大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B) 44102])
乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi B)[CMCC(B) 50094]
白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98001]
薄膜过滤法采用的滤膜孔径不大于。滤膜直径一般为50mm。滤器及滤膜使用 前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供 试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。为发挥滤膜的最大过滤效率，应 注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要 用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量不超过100ml，总冲洗量不得超过1000m1；以免滤膜上的微生物受损伤。取照上述“供试液的制备”和“接种和 稀释”制备的供试液适量（一般取相当于1g、1ml、10cm2的供试品，若供试品 中所含菌数校对，供试液可酌情减量），加至适量的稀释液总，混匀，过滤，用 适量的冲洗液冲洗滤膜。测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨 琼脂培养基平板上；测定霉菌和酵母菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于沙氏葡萄糖 琼脂培养基平板上，按规定条件培养、技术。每株试验菌每种培养基至少制备1张滤膜。同法测定供试品对照组和菌液对照组菌数。
微生物限度检查操作规程
更改历史微生物限度检查操作规程1.0 目的建立微生物限度检查标准操作规程，规范检验操作，确保检验结果准确2.0 范围适用于本公司采用微生物限度检查法测定的供试品。
3.0 职责质量部负责按本规程的要求执行微生物限度检查操作。
4.0 工作程序4.1 洁净区间的确认微生物计数检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全部过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品（即待检样品、产品）中微生物的检出。
4.2 培养基4.2.1 应使用按中国药典处方及规定的方法制备的培养基。
4.2.2 所用培养基可按中国药典规定的处方及制备方法自行配制，也可使用按中国药典规定的处方生产的脱水培养基进行配制；或购买商品化的预制培养基。
4.2.3 配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2~25℃、避光的环境下保存。
4.2.4 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。
4.2.5 供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
4.2.6 供试品的微生物计数方法、控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数或控制菌检查。
4.3 菌种及菌液制备检查所用的菌种及菌液制备见附件 1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。
稀释剂、冲洗液及其制备的要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查。
4.4 培养基的适用性检查供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
微生物限度检查所用的培养基每批均应进行适用性检查，检查可在供试品检查前或与供试品检查同时进行。
具体要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。
4.5 方法适用性试验供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。
检验科微生物监测操作规程
1．目的规范检验科的微生物检测。
2．适用范围适用于检验科的微生物空气监测。
3．操作步骤3.1 检验科实验室空气培养监测3.1.1采样及检查原则采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h。
若样品保存0—4℃条件时，送检时间不得超过24h。
3.1.2. 采样时间检验科各室空气培养在每月下旬，选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。
3.1.3 采样高度与地面垂直高度80—150cm。
3.1.4 布点方法室内面积≤30m3，设一条对角线上取3点，既中心一点、两端各距墙1m处各取一点：室内面积＞30m3，设东、西、南、北、中5点，其中东、西、南、北点均距墙1m。
3.1.5 采样方法用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检培养。
盖上盖子，并填写好检验单，送细菌室培养。
3.2 48h后，观察结果。
各个实验室空气培养要求在：≤4CFU／m3。
监测时间:根据不同的特殊重点部门,每1～3个月监测一次.当发生医院感染流行,高度怀疑或确定与空气,物体表面,医务人员手的污染有关时,可随时进行监测.4．处理根据培养结果，对检验科的消毒灭菌效果进行总结，采取积极的应对措施，使检验科的微生物监测符合要求。
1．目的规范检验科的微生物检测。
2．适用范围适用于检验科的微生物物表监测。
3．操作步骤3.1 检验科实验室物表培养监测3.1.1 物体表面采样方法3.1采样时间检验科各室空气培养在每月下旬，选择消毒处理后4h内进行采样。
3.3采样方法①采样面积被采表面＜100cm2，取全部表面：被采表面≥100cm2，取100cm2。
用5×5cm2的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭纸1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭纸，连续采样1—4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭纸放入装10ml采样液的试管中送检。
门把手等小型物体则采用棉拭纸直接涂抹物体的方法采样。
微生物限度检查操作规程(含表格)
微生物限度检查操作规程（ISO13485-2016/YYT0287-2017）1.0目的规范微生物限度检查方法及操作，使纯化水、内包材、环境监测、清洁验证及其他要素的微限检查符合ChP2015规定。
2.0适用范围适用于纯化水、内包材、环境监测及其他要素的微限检查。
3.0引用/参考文件ChP2015实用药品微生物检验检测技术指南《取样及留样管理规程》4.0职责质量控制实验室负责执行对相关要素的微限检查，QA负责执行监督并参与OOS 调查。
5.0程序5.1仪器用具高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、生化培养箱、霉菌培养箱、三角瓶、培养皿、胶塞、移液枪、微型台秤或电子天平、微限检查虑架、酒精灯、镊子、0.22μm 滤膜等。
5.2培养基、稀释液及试剂（均已经121℃，15min灭菌处理）胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）、pH7.0NaCl-蛋白胨缓冲液、无菌生理盐水、R2A琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基（TSB）、麦康凯琼脂培养基、麦康凯液体培养基等。
5.3检查5.3.1纯化水微生物限度检查5.3.1.1样品准备微生物QC手用75%酒精消毒后，将采样口周围进行消毒，打开采样口阀门使水自流至少5秒后用灭菌三角瓶或者无菌取样袋快速取样至少10ml。
打开阀门后在需要时仍可以使用消毒剂进行再次消毒后取样。
取样结束后，迅速用胶塞将三角瓶封口，装于取样箱内转移至微生物实验室进行检验，样品转移过程中特别注意污染防护。
样品如不能立即检测，可以在2-8℃条件下最长保存8h。
5.3.1.2实验室准备实验前将相关试剂、仪器、设备、耗材等转移进超净工作台或者传递窗内，开启实验室与超净台送风，调节超净台风速达到0.36-0.54m/s后开启超净台、微限室、更衣间、缓冲间、传递窗紫外灯，保持30min。
5.3.1.3微限检查操作微生物QC按照《人员进出洁净区管理规程》进行更衣、消毒后进入实验室关闭紫外灯后准备开始试验。
微生物限度检品送检标准操作规程
微生物限度检品送检标准操作规程
一、目的：为使需要进行微生物检查的样品免受污染，保证检查结果的准确性，特制定本操作规程。
二、适用范围：适用于需要进行微生物检查的样品。
三、责任者：品质管理部微生物检验人员。
四、正文：
1、进行微生物检查的样品是指产品成品、生产用水、净化区沉降菌检查
后的平皿，
生产工人手检查后的试管等。
2、取样方法：
2.1 产品成品：直接取样，包装在进行菌检时方可打开；
2.2 生产用水：用灭菌后的三角瓶装取适量；
2.3 平皿及试管：密封后用牛皮纸包好；
3、送检：用车送至菌检室，时间不得超过取样后的 4 小时。
4、检验人员尽快进行菌检，并出具检验报告。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程《微生物限度检查标准操作规程》一、目的微生物限度检查是药品、食品、化妆品等产品质量的重要指标之一，其目的是为了保障产品的安全性和稳定性。
本标准操作规程旨在规范微生物限度检查的操作流程，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、范围本标准操作规程适用于药品、食品、化妆品等产品的微生物限度检查，包括大肠菌群、金黄色葡萄球菌、霉菌和酵母菌等微生物指标的检查。
三、检查设备和试剂1. 培养基：根据不同的微生物指标选择适当的培养基，如大肠培养基、Mannitol盐琼脂、Sabouraud葡萄糖琼脂等。
2. 培养皿：使用符合规定的试验培养皿。
3. 培养箱：保证培养条件的恒温培养箱。
4. 其他常用实验用具：包括无菌采样容器、吸管、移液器、无菌培养皿等。
四、操作流程1. 样品采集：从产品中采集适量样品，保持无菌状态。
2. 制备稀释液：根据样品的特性，选择适当的稀释液将样品进行适当稀释。
3. 接种培养：将稀释后的样品接种在适当的培养基上，并在符合条件的培养箱中进行培养。
4. 观察和统计：观察培养皿中微生物的生长情况，统计出微生物的数量。
5. 结果判定：根据标准规定的微生物限度标准，判断检测结果是否符合规定。
五、质量控制1. 实验员必须进行严格的无菌操作训练，并使用正确的个人防护用具。
2. 培养基的质量必须符合规定，避免培养基带有细菌污染。
3. 检查设备必须经过定期的检查和校准，保持正常的工作状态。
4. 标本的采集、处理、保存和运送必须符合规定，避免外界的污染和干扰。
六、结果报告根据检测结果和规定的限度标准，出具检测报告，标明产品的微生物限度是否符合规定，以及具体的检测结果数据。
七、总结微生物限度检查是产品质量检验的重要环节，严格按照标准操作规程进行操作，可以保证检测结果的准确性和可靠性。
实验员在操作过程中也需严格遵守规程，做好个人防护措施，确保实验室的安全和卫生。
微生物检验实验室细菌鉴定操作规程
微生物检验实验室细菌鉴定操作规程
1．目的
规范细菌鉴定标准操作规程。
2．适用范围
革兰阴性菌、革兰阳性菌等。
3．职责
检验人员严格执行本程序。
4．程序
4.1 观察菌落大小、颜色、气味、溶血、形态特征等，观
察内容应记录在《细菌鉴定流程表》。
4.2 涂片，革兰染色，观察染色性及细菌形态、大小和排列，球菌、杆菌或螺形菌等，观察内容记录在《细菌鉴定流程表》。
4.3 初步生化反应根据菌落特征和涂片结果选择初步生化反应，如氧化酶、触酶、凝固酶（玻片法）等。
4.4 制定细菌鉴定方案
4.4.1 仪器鉴定方案（以VITEK2为例）
革兰阴性杆菌：选择GN卡（阴性菌鉴定卡）。
革兰阳性球菌：选择GP卡（阳性菌鉴定卡）。
酵母菌：选择YST卡（酵母菌鉴定卡）。
需氧芽孢杆菌：选择BBL卡（需氧芽孢杆菌卡）。
4.4.2 手工细菌鉴定法
氧化酶阳性革兰阴性杆菌，选择非发酵鉴定生化反应组合：葡萄糖O/F、木糖、麦芽糖、硝酸盐、动力、七叶苷等生化反应。
氧化酶阴性革兰阴性杆菌，选择肠杆菌科细菌鉴定生化反应组合：触酶、硝酸盐、葡萄糖O/F、动力、乳糖、VP、吲哚、甲基红、枸橼酸盐、精氨酸、鸟氨酸、赖氨酸等生化反应。
疑不动杆菌氧化酶阴性革兰阴性杆菌，选择非发酵鉴定生化反应组合。
革兰阳性球菌，选择革兰阳性球菌鉴定生化反应组合：触酶、葡萄糖O/F、胆汁七叶苷、蔗糖、木糖、甘露醇、硝酸盐、脲酶等。
微生物检验操作规程
微生物检验操作规程《微生物检验操作规程》一、检验前准备1. 确保实验室环境清洁整洁，无菌操作台面及仪器设备；2. 熟悉操作规程，准备好所需的培养基、试剂和消毒液；3. 检查培养基和试剂的有效期，确保使用的培养基和试剂符合要求。
二、样本处理1. 将样本送检单与样本一同接收，并核对相关信息；2. 对样本进行消毒处理，避免污染实验室环境；3. 定量取样，确保取样的准确性和可靠性。
三、培养基制备1. 按照培养基说明书的要求，准备培养基，注意培养基的稀释和灭菌；2. 根据需要，将培养基注入培养皿中，准备好后放置在无菌条件下。
四、微生物接种1. 根据样本的来源，选择合适的培养基进行接种；2. 采用无菌技术，进行微生物接种，避免外部污染；3. 对接种的培养皿进行标记，清晰记录接种的菌种和数量。
五、培养条件1. 根据不同微生物的生长要求，设置适当的培养条件，包括温度、湿度、气体组成等；2. 定期观察培养皿的生长情况，记录菌落形态、数量和颜色等信息。
六、鉴定和鉴定1. 根据菌落形态、生理生化特性等进行初步鉴定；2. 利用鉴定试剂或生化指标进行进一步鉴定；3. 如有需要，可进行分子生物学方法进行鉴定。
七、结果记录和报告1. 将鉴定结果详细记录在报告中，包括鉴定的微生物种类、数量、鉴定方法和结果等；2. 及时向送检单位提交检验报告，确保检验结果准确无误。
八、实验后清洁1. 将使用过的培养皿和试剂进行正确的处理和清洁；2. 对实验室操作台面和设备进行消毒，保持实验室环境整洁。
以上是《微生物检验操作规程》的基本操作流程，每一步的操作都应严格遵守操作规范，保证微生物检验结果的准确性和可靠性。
微生物检验操作规程
微生物检验操作规程微生物检验操作规程一、实验室的准备工作1.确保实验室环境整洁卫生，空气流通。
2.检查实验室设备及试剂的完好性，如有损坏或过期的试剂应予以更换。
3.准备所需的培养基、试剂和培养器具，并确保其质量符合要求。
4.准备好必要的个人防护用品，如实验手套、口罩、护目镜、实验服等。
二、标本采集和处理1.标本的采集应遵循无菌操作的原则，采集器具需经过高温高压消毒处理。
2.将采集的标本迅速送至实验室，避免暴露于空气中。
3.对于液体标本，如尿液、血液等，应进行无菌操作并进行适当的稀释。
4.对于固体标本，如组织、分泌物等，应进行无菌取样，并进行适当的处理。
三、培养基的准备和使用1.根据需要，准备所需的培养基，并按照说明书进行正确的配制。
2.确保培养基的无菌性，防止细菌、真菌等污染。
3.使用培养基前应进行质控试验，确保培养基的质量符合要求。
4.在使用培养基前，要检查培养基是否出现变质、褪色等异常情况，若有发现，应立即更换。
四、微生物的分离和培养1.将标本取适量，在无菌条件下均匀涂抹于培养基表面，避免重叠。
2.将涂抹好的培养基置于细菌培养箱中，设置适当的温度和湿度，促使微生物的生长。
3.培养箱内不宜存放过多的培养基，以免影响空气流通和温度控制。
4.定期观察培养基的生长情况，并进行记录，一般培养时间为24小时至48小时。
五、微生物的鉴定和鉴定1.根据菌落的形态、大小、颜色等特征，初步判断微生物的种类。
2.利用显微镜观察菌液或菌落的形态、数量、运动性等特征，进一步鉴定微生物。
3.对于不易鉴定的微生物，可使用生化试剂或分子生物学方法进行鉴定。
4.鉴定微生物的结果应进行记录，并与对应的标准对照互相核对。
六、微生物的灭活和处理1.工作台和实验器具在使用前后应进行消毒，以防止微生物的传播。
2.将已鉴定的微生物进行灭活处理，可使用高温高压或化学消毒剂。
3.遵循规定将已处理的微生物进行妥善的处置，防止对环境和人员造成污染和危害。
微生物检验操作规程
微生物检验操作规程为规范检验程序，提高检验结果的准确性，要求微生物检验员严格按照本操作规程检验。
样品准备：准确称取10g±1g样品，剪碎后加入到200ml已灭菌的生理盐水中，充分混匀，静置10分钟，待生理盐水样液自然沉降后取上清液作菌落计数，液体样品可用原液直接做样液。
如果被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释量可按每次50ml递增，直至能吸出足够测试用样液。
在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时相应调整稀释度。
1.细菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱35℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。
2）试液：0.9%生理盐水、营养琼脂。
3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。
然后用冷却至45℃左右熔化的营养琼脂培养基15～20ml倒入每个平皿内混合均匀。
待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置35℃±2℃培养48h后，计算平板上的菌落数。
结果计算：X1=A*K/5式中：X1→细菌菌落总数，cfu/g或cfu/mlA→5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数K→稀释度4）如果样品菌落总数超过标准的规定，应进行复检。
将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到标准规定，则判定被检样品合格，其中有任何1次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。
2.真菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱25℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。
2）试液：0.9%生理盐水、玫瑰红钠琼脂。
3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。
然后用冷却至45℃左右熔化的玫瑰红钠琼脂培养基15～20ml 倒入每个平皿内混合均匀。
待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置25℃±2℃培养7天，分别于3、5、7天观察,计算平板上的菌落数，如果发现菌落蔓延，以前一次的菌落计数为准。
微生物检验操作规程
微生物检验操作规程
1、实验前用75%酒精擦净台面及四周，放好需用的实验器材及各种溶液，开紫外灯消毒30分钟。
2、进入无菌室前应用肥皂洗手，然后用75%酒精球棉将手擦干净。
3、进入无菌间必须穿的专用工作服、帽及拖鞋、口罩，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
4、使用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用的器皿，不能放置再用，消毒用器皿放置不得超过一周。
5、从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位及试管或平皿边。
6、接种样品必须在酒精灯前操作，接种样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7、实验完毕，清洁瓷砖台面。
8、用过的器材进行整理，污染细菌的器材需经高压灭菌或煮沸消毒。
9、实验者在实验后用肥皂清洗双手或将双手浸泡于0.2%过氧乙酸溶液中3分钟，用清水冲洗，再用肥皂清洗双手。
10、换下的隔离衣、帽等进行紫外线消毒，拖鞋放回原
处。
11、用毕，再开紫外灯消毒30分钟。
12、无菌室和缓冲间每周大扫除一次，保持整洁。
13、每月进行一次紫外线对空气消毒效果测定，如灯管发黑，超过使用期限，及时更换紫外灯管。
微生物检验操作规程
微生物检验操作规程1. 目的建立微生物检验标准操作规程，保证检验操作规范化。
2. 范围适用于本公司相关的微生物检验活动的全过程。
3. 职责3.1 微生物检验员负责微生物检验的全过程；3.2 QC主管负责监督检查本规程的有效实施。
4. 操作规程4.1 微生物检验玻璃器皿吸管的洗涤4.1.1 一般的玻璃器皿（例如培养皿、试管、三角瓶等），可用毛刷及洗涤剂洗去灰尘、油垢，然后用自来水、蒸馏水充分冲洗，直至玻璃器皿内壁均匀分布一层薄的水膜，即器壁既不挂水珠也无条纹，即洗涤达到标准。
4.1.2 玻璃器皿内有污迹不能洗净时，可浸泡于洗液中，待器皿中有机物氧化分解后，取出用自来水、蒸馏水冲洗干净，备用。
4.1.3 新购的玻璃器皿先用2％盐酸浸泡，再用用自来水、蒸馏水充分冲洗。
4.2 器皿的包扎4.2.1 试管：塞上胶塞，然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起来。
做发酵试验时，将试管头塞上专用的耐高温PVC试管帽。
4.2.2 三角瓶、抽滤瓶：将三角瓶（抽滤瓶）口塞上胶塞，然后用牛皮纸把塞头部包起来。
4.2.3 吸管：将耐高温的移液枪头装盒，用用牛皮纸或报纸包裹。
4.2.4 平皿：10个为一组，用牛皮纸包裹。
4.3消毒和灭菌：4.3.1 化学灭菌：此法适用于微生物操作过程中不能加热、紫外线的地方。
如人手等。
（1）用75%的乙醇溶液或0.1%新洁尔灭擦拭或浸泡。
（2）一般用1～2%的甲醛液浸泡软管和用具。
（3）一般成品漂白粉的有效成分是25～32% 。
使用时配成有效成份的2%溶液洒在地面或容器内，（对金属有腐蚀作用）放置10～15min后冲洗即可。
（4）氯灭菌剂的能力以有效氯表示，将氯水配制成50～100PPm 的有效氯溶液，可用于浸泡，冲洗和表面杀菌。
但氯对金属有腐蚀作用。
4.3.2 物理灭菌：4.3.2.1 干热灭菌：适用于干燥的玻璃器皿（吸管、平皿等）、金属器具（镊子等）、固体试液、液状石蜡等。
灭菌条件一般选用在160℃干热空气灭菌2h。
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微生物检验操作规程
1. 目的
建立微生物检验标准操作规程, 保证检验操作规范化。
2. 范围
适用于本公司相关的微生物检验活动的全过程。
3. 职责
3.1 微生物检验员负责微生物检验的全过程;
3.2 QC主管负责监督检查本规程的有效实施。
4. 操作规程
4.1 微生物检验玻璃器皿吸管的洗涤
4.1.1 一般的玻璃器皿( 例如培养皿、试管、三角瓶等) , 可用毛刷及洗涤剂洗去灰尘、油垢, 然后用自来水、蒸馏水充分冲洗, 直至玻璃器皿内壁均匀分布一层薄的水膜, 即器壁既不挂水珠也无条纹, 即洗涤达到标准。
4.1.2 玻璃器皿内有污迹不能洗净时, 可浸泡于洗液中, 待器皿中有机物氧化分解后, 取出用自来水、蒸馏水冲洗干净, 备用。
4.1.3 新购的玻璃器皿先用2％盐酸浸泡, 再用用自来水、蒸馏水充分冲洗。
4.2 器皿的包扎
4.2.1 试管: 塞上胶塞, 然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起来。
做发酵试验时, 将试管头塞上专用的耐高温PVC试管帽。
4.2.2 三角瓶、抽滤瓶: 将三角瓶( 抽滤瓶) 口塞上胶塞, 然后用牛皮纸把塞头部包起来。
4.2.3 吸管: 将耐高温的移液枪头装盒, 用用牛皮纸或报纸包裹。
4.2.4 平皿: 10个为一组, 用牛皮纸包裹。
4.3消毒和灭菌:
4.3.1 化学灭菌: 此法适用于微生物操作过程中不能加热、紫外线的地方。
如人手等。
( 1) 用75%的乙醇溶液或0.1%新洁尔灭擦拭或浸泡。
( 2) 一般用1～2%的甲醛液浸泡软管和用具。
( 3) 一般成品漂白粉的有效成分是25～32% 。
使用时配成有效成份的2%溶液洒在地面或容器内, ( 对金属有腐蚀作用) 放置10～15min后冲洗即可。
( 4) 氯灭菌剂的能力以有效氯表示, 将氯水配制成50～100PPm 的有效氯溶液, 可用于浸泡, 冲洗和表面杀菌。
但氯对金属有腐蚀作用。
4.3.2 物理灭菌:
4.3.2.1 干热灭菌: 适用于干燥的玻璃器皿( 吸管、平皿等) 、金属器具( 镊子等) 、固体试液、液状石蜡等。
灭菌条件一般选用在160℃干热空气灭菌2h。
( 1) 器具用牛皮纸或灭菌袋包( 装) 扎, 放入金属容器内。
( 2) 器具在干燥箱加热前放入, 每个器具之间留有足够的空隙, 使热
空气能畅通。
( 3) 关闭箱门接通电源, 打开通气孔, 使箱内湿空气能逸出, 至箱内温度达到100℃时关闭。
( 4) 加热至160℃, 保持2小时。
( 5) 切断电源, 冷却至60℃时, 打开箱门, 取出灭菌器具, 并打开箱顶通气口。
注: 灭菌时必须注意温度不能超过180℃, 以免使棉花、报纸烘焦; 灭菌时不得打开箱门; 干燥箱未冷却时, 不要取出里面器具, 防止内外温差过大造成玻璃器具爆炸
璃器具爆炸。
4.3.2.2 湿热灭菌: 适用于容器、培养基、无菌衣、胶塞以及其它遇高温和潮湿不发生变化或损伤的物品。
详见《压力蒸汽灭菌器操作规程》。
( 1) 装入培养基的瓶用胶塞盖上, 再用牛皮纸包扎。
( 2) 瓶中的培养液不要超过1L, 否则灭菌不彻底。
( 3) 容器的上部应留有足够的空间( 一般不超过装量的2/3) , 以便产生气泡。
( 4) 器具用牛皮纸包裹。
( 5) 器具的组合和包裹应允许灭菌蒸汽接触所用物品。
( 6) 各类器具装入灭菌器时, 相互间要留有空隙以使蒸汽自由流动。
4.4 无菌操作的准备工作及注意事项
4.4.1 微生物室应定期按《微生物实验室管理规程》清洁。
4.4.2 微生物室使用前, 应先打开紫外灯灭菌20～30min。
4.4.3 微生物室应备有专用剪刀、镊子、接种针, 每次使用前后应灭菌消毒。
4.4.4 微生物室应备有75%酒精棉球; 新洁尔灭消毒液内浸纱布数块, 备用。
4.4.5 进入微生物, 换专用鞋, 穿好洁净服, 离室时脱去洁净服和专用鞋, 洁净服和专用鞋只准在微生物室内使用, 不准穿到其它地方去, 并定期洗换和消毒灭菌。
4.4.6 样品检验前应在原始记录本上记录名称、批号等内容, 并在所用平皿或试管上详细记录样品序号、检验日期等内容。
4.4.7 无菌操作前, 用75%的酒精棉球擦手。
4.4.8 操作要正确迅速, 所用的器皿均应是经过严格灭菌的器皿。
4.4.9 检验完毕, 立即清理工作台, 弃去不需要物品, 打开紫外灯灭菌20～30min。
4.5 微生物检验用培养基、溶液的配制、使用与储存
配制方法参见培养基说明书或检验标准项下规定配制。
4.5.1 水: 电导率在25℃时不超过25μs/cm, 除非另有规定要求。
4.5.2 称重和溶解:
保存培养基的时间需视培养基中水份蒸发的程度及有无污染而定, 已制备好的培养基要保存于冰箱中。
在冰箱中存放的培养基在使用前要先置于室温30min, 使其与室温一致再使用, 因为气体的溶解度可因温度上升而降低, 特别是乳糖胆盐发酵管内的倒管会因温度上升而出现气泡, 这一点必须注意。
4.5.3 pH 的测定和调整:
用pH计测pH, 必要时在灭菌前进行调整, 除特殊说明外, 培养基灭菌后冷却至25℃时, pH应在标准pH±0.2范围内。
一般使用浓度约为40g/L( 约1mol/L) 的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5 g/L( 约1mol/L) 的
盐酸溶液调整培养基的pH。
4.5.4 分装: 将配好的培养基分装到适当的容器中, 容器的体积应比培养基体积最少大20%。
4.5.6 培养基的使用:
经过高压的培养基应尽量减少重新加热时间, 融化后避免过度加热。
融化后应短暂置于室温中( 如2 min) 以避免玻璃瓶破碎。
融化后的培养基放入47℃～50℃的恒温水浴锅中冷却保温, 且应尽快使用, 放置时间一般不应超过4 h。
未用完的培养基不能重新凝固留待下次使用。
敏感的培养基尤应注意, 融化后保温时间应尽量缩短, 如有特定要求可参考指定的标准。
4.5.7平板的制备和储存
倾注融化的培养基到平皿中, 使之在平皿中形成厚度至少为 3 mm( 直径90 mm的平皿, 一般要加入18 mL～20 mL琼脂培养基) 。
将平皿盖好皿盖后放到水平平面使琼脂冷却凝固。
如果平板需储存, 或者培养时间超过48h或培养温度高于40℃, 则需要倾注更多的培养基。
凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和( 或) 5℃±3℃冰箱的密封袋中, 以防止培养基成分的改变。
在平板底部或侧边做好标记, 标记的内容包括名称、制备日期和( 或) 有效期。
也可使用适宜的培养基编码系统进行标记。
将倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延长储存期限。
为了避免冷凝水的产生, 平板应冷却后再装入袋中。
储存前不要对培养基表面进行干燥处理。
对于采用表面接种形式培养的固体培养基, 应先对琼脂表面进行干燥: 揭开平皿盖, 将平板倒扣于烘箱或培养箱中( 温度设为25℃～50℃) ; 或放在有对流的无菌净化台中, 直到培养基表面的水滴消失为止。
注意不要过度干燥。
商品化的平板琼脂培养基应按照厂商提供的说明使用。
4.6 检验方法
做样前, 将灭菌好的吸管、培养皿等放入操作台上, 操作台、微生物室紫外线灭菌30min, 然后关紫外线灭菌灯, 开启净风循环30min后开始做样。
详见附录各检测方法
附录1 菌落总数测定
附录2 霉菌和酵母计数
附录3 大肠菌群计数
附录4 大肠埃希氏菌计数
附录5 沙门氏菌检验
附录6 金黄色葡萄球菌检验
附录1
菌落总数的测定方法
1. 样品的稀释
1.1 固体和半固体样品: 称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水中均质1 min～2 min制成1:10 的样品匀液。