FVIII抑制物检测SOP
HIV初筛检测实验标准操作程序(SOP文件)
艾滋病初筛检测实验标准操作程序〔SOP文件〕一、目的保证艾滋病病毒抗体ELISA实验的准确性。
二、适用范围艾滋病病毒抗体ELISA实验。
三、具体要求3.1样品采集样品采集安试剂盒要求采集。
采血时注意平安，用一次性注射器谨慎操作，防止发生刺伤和造成外界污染。
血样如即时用可存于普通冰箱，如要长期保存，别离血清置于-20 及以下。
同时做好记录。
3.2样品运送样品转送，除特殊需要外，必须是血清或血浆，置于带有盖帽的试管内，或将塑料试管用酒精灯封死，防止样品流出。
试管上标明姓名、时间、编号，将试管放入专门带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理，在所放试管周围||上下垫有软性物质，以免碰碎，容器外标有HIV检测专用字样和生物危害标志。
路途较远或气候炎热时，容器应置于4 以下运送。
这样同时附送检单。
3.3样品登记和处理收到样品后，及时填写标本登记记录表，送样人、收样人签字，如已进行过初检，登记初检结果和实验方法及所用试剂情况。
对从其他实验室送来的样品，检查并注明送检单与标本记录的符合、样品管破损、溢漏等情况。
如有溢漏应立即将尚存的血样移出，并对管壁和盛器消毒。
检查并记录样品的质量有无严重溶血、细菌污染、血脂过多以及黄疸等情况。
对实验室自采的样品，最好将血液先放置1-2个小时，再用3000 离心15分钟，吸出上清液备用，如在几天内检测可放在2-8 冰箱中，如要贮存，置于-20冰箱。
3.4实验准备将试剂从冰箱中取出，按试剂盒要求时间恢复室温。
检查并记录冰箱、温箱温度。
按照试剂盒要求准备实验原始记录表，标明空白、阴性对照、阳性对照、外部质控血清以及检测样本的位置：登记日期和实验起止时间，记录环境条件及试剂盒厂家、批号、效期：整个实验过程中每一步操作都要在原始记录表上详细登记。
按照试剂盒的要求配置洗液及其他所需要的试剂。
3.5加样和稀释根据样品数量将适宜数量的酶标板条固定在板架上，为了不损坏洗扳机，每道上的酶标板条必须保持完整{缺乏局部可用废弃的微孔添充}，检查加样器加样刻度是否与||试剂盒要求的加样量相符，按照原始记录表说明的位置参加各种质控品和检测样品，注意：空白只加标本稀释液。
HIV抗体快速检测SOP文件
HIV抗体初筛实验室管理规章制度为营造整洁的工作环境，建立良好的工作秩序，保障实验室工作的正常运行和检测过程中人身安全，特制定本制度。
1、非本实验室工作人员未经许可不得随意出入本初筛实验室2、工作人员从事本实验室工作前必须经过严格培训，熟悉本实验室规章制度，获得上岗证后才能正式工作。
3、进入实验室操作时，应穿工作服、带手套、做好隔离、安全防护措施，出实验室前要脱掉手套、洗手，及时把工作服脱下，放入实验室。
4、实验室工作人员必须认真负责，严格遵守操作规程，做好试验的各项原始记录，务必准确按时地发出阴性报告。
遇筛查阳性时应送市CDC进行确认实验。
5、保持实验室清洁，严禁带手套触摸门把手。
6、实验完毕后必须对实验区域进行必要的清洁处理。
废弃物处理应严格按照实验室废弃物处理制度的规定执行。
7、实验结束离开实验室时应检查水、电等设施，严格执行安全措施，确保实验室安全。
8、要严肃、认真、负责的态度，对某些检验对象和阳性结果应采取必要的保密措施以免对本人及家属产生不利影响。
9、实验室内严禁吸烟或饮食，以免影响检测结果和自身健康；应注意保持实验室的整洁卫生，定期做好清洁、消毒工作。
实验室安全防护制度1、检测人员上岗前应接受相关的生物安全与个人防护培训。
2、为检测人员提供一次性乳胶手套、口罩、帽子。
3、检测人员工作前应修剪长的带刺的指甲，以免刺破手套。
4、避免在检测样本时进食、饮水、吸烟、和化妆。
5、出现手部皮肤有开放性伤口及其他不适于检测工作的情况，应暂停工作。
6、操作过程中，如发现工作服被污染，应立即更换；如手套破损，应立即丢弃、洗手并换上新手套。
7、避免用戴手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵、头发和清洁工作区域。
8、禁止手套清洗或消毒后再次使用，因为使用表面活性剂清洗可使手套对水的通透性增加，消毒剂可以引起手套的破损。
职业暴露处理方案HIV检测实验室职业暴露是指检验工作人员在从事检测工作过程中意外被艾滋病毒感染者或艾滋病病人的血液、体液污染了皮肤或粘膜，或被含有艾滋病病毒的血液、体液污染了的针头及其它利器刺破皮肤，有可能被艾滋病病毒感染的情况。
FVIII抗体检测
FVIII抗体检测二、实验室诊断（一）初筛试验凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）正常，活化部分凝血活酶时间（APTT）延长。
（二）纠正试验（证实有时间依赖性的抑制物存在）延长的APTT不能被正常混合血浆纠正。
多数血友病患者替代治疗后产生抑制物显示特征性模式，即患者血浆与正常混合血浆按1:1比例混合后的即刻APTT 结果介于两种分别检测的APTT结果之间，但当37℃混合温育1-2小时后检测APTT，其APTT结果进一步延长。
（三）确诊试验FⅧ:C减少，且随孵育时间呈进行性下降。
（四）抑制物定量测定（Bethesda方法；Nijmegen改良法）1. Bethesda法（1975年，Kasper）（1）试验原理：血友病A患者产生的FⅧ抑制物呈时间依赖性。
在含抑制物的血浆中加入人源或猪源FⅧ，37℃混合温育，随孵育时间延长，FⅧ被抑制物逐渐中和。
如加入FⅧ的量和孵育时间标准化，则可根据FⅧ被中和的量，以Bethesda 单位的方式确定抑制物滴度。
（2）检测方法：将患者血浆与正常混合血浆按一定比例混合，37℃温育2小时后，测定该混合物中剩余的FⅧ :C水平。
1BU的定义：能使血浆中FⅧ:C 降低50%的抑制物活性为1个Bethesda单位（BU）。
患者血浆稀释倍数的倒数为患者血浆抗体滴度的BU值。
（图1）图1. 抑制物检测（Bethesda法）（3）操作步骤1）将患者血浆用OVB缓冲液按一定比例倍比稀释，一般做多个稀释倍数，样本一直置于冰上保存。
如果之前有关于抑制物检测的相关资料，则可作为参照对样本进行适当的稀释。
2）将正常混合血浆（FⅧ浓度已经过标准化检测）等量加入每份待测的稀释血浆样本中，FⅧ浓度通常为100 IU/dl。
因此，每份混合物的FⅧ起始浓度大约为50 IU/dl。
3）37℃孵育2小时后进行FⅧ:C检测，采用正常混合血浆和乏FⅧ血浆的混合物作为标准品进行定标，并以该标准曲线来计算其它混合物的FⅧ活性。
HIV病毒检测标准操作规程sop
淋巴细胞增殖抑制检测标准操作规程
签名/日期
1 目的
建立淋巴细胞增殖抑制检测标准操作规程，确保检验操作标准化、规范化。
2 适用范围
适用于淋巴细胞的检查
3 术语或定义
3.1 淋巴细胞（lymphocyte）：是白细胞的一种，是体积最小的白细胞。
其由淋巴器官产生，主要存在于
淋巴管中循环的淋巴液中，是机体免疫应答功能的重要细胞成分。
3.2 CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）：是一种基于WST-8而广泛应用于细胞活性和细胞毒性检测的
快速、高灵敏度试剂盒。
3.3 酶标仪：即酶联免疫检测仪。
是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。
可简单地分为半自
动和全自动两大类，其核心是一个比色计,即用比色法来进行分析。
4 责任
4.1 负责淋巴细胞的检验、结果的复核、记录的填写。
4.2 合性和记录的审核。
5 环境健康安全
N/A
6 程序
7 附件
《淋巴细胞增殖抑制检测记录》
8 参考或引用文件
《酶联免疫检测仪实验室进出记录》
《温湿度观察记录》
《设备、仪器运行使用记录》
《试剂使用记录》
《酶联免疫检测仪实验室清洁、消毒记录》
9 文件版本修改历史。
不规则抗体检测标准操作流程
不规则抗体检测标准操作流程
不规则抗体检测标准操作流程(SOP)
目的:输血前进行检验查,可对有妊娠史,多次输血史,大量输血的病人进行不完全抗体的初选.
操作:
1、取3—5名“O”型正常人抗凝血(新鲜血常规抗凝血)进行等量混合。
2、用无菌生理盐水洗涤3—5次。
3、配制成2%红细胞悬液(上述离心沉淀红细胞1ml加生理盐水49mL混匀)待用。
4、取病人(受血者)血清或血浆100mL和2%红细胞悬液100mL等到量混合，然后离心，侄去上清液，混匀，倒在玻片上，显微镜观察是否凝集。
5、如有凝集，说明该受血者体内存在不规则抗体，毅然交叉配血不能进行。
6、如无凝集才能配血。
HIV 抗体检测金标发SOP复习过程
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精品资料
HIV 抗体检测胶体金法SOP 编写日期：编写人：
审核人：
1试剂厂家：SD。
2方法：胶体金法。
3应用范围：人体外血清、血浆标本。
4目的：人血清或血浆中HIV抗体检测。
5检测设备：离心机、恒温水箱、移液器、生物安全柜。
6操作步骤：操作前请仔细阅读试剂说明书
6.1 从包装袋中取出测试条，放于水平、干燥的平面上。
缓慢滴加10UL待检血清/血浆或20UL全血标本于样品孔中，然后滴加3滴样品稀释液。
5-20分钟内判断结果，超过20分钟观察无效。
注：上述结果是指室温在15-30℃的条件下，如果室温低于15℃，则要适当延长判断时间。
6.2 在结果窗口的C处，将出现一条紫色的条带，称质控带。
6.3结果判断在结果窗口中只出现一个质控带，而测试带1、2未出现时，判定为阴性结果。
当窗口中同时出现1或2 或1、2都出现时判定为阳性。
当窗口中没任何色带时，则判断为无效结果。
7注意事项：
7.1全部检测工作必须符合实验室管理规范和生物安全守则规定，要严格防止交叉感染，操作时必须戴手套及隔离衣，严格健全和执行消毒隔离制度。
7.2样品和稀释液均应用移液器加注。
9编制依据：SD试剂盒说明书。
HIV抗体快速检测SOP
.........................HIV抗体快速检测SOP文件科室：检验科目录第一部分工作制度 (2)实验室工作制度 (2)HIV标本采集与接收登记制度 (3)艾滋病实验室保密制度 (3)艾滋病筛查实验室常规消毒清理工作制度 (4)差错事故处理制度 (5)报告单签发审核制度 (6)设备管理制度 (7)试剂管理制度 (8)艾滋病筛查实验室安全防护制度 (9)艾滋病病毒职业暴露预防处理方案 (10)第二部分标准操作规程 (13)第一章样品采集与处理 (13)第二章标准操作程序 (15)第三章结果报告与注意事项 (16)第三部分流程图 (18)一、HIV抗体快速检测流程图 (18)二、暴露级别的评估 (21)第一部分工作制度实验室工作制度1.室内应经常保持整洁，各种仪器设备要安装适当，器皿试剂摆放整齐，标志清晰，有良好的通风设备。
2.实验室工作人员工作时一律穿制服，保持衣帽整洁，试验过程中应专心致志、认真负责，坚守工作岗位，不得随意串岗、闲谈，保持实验室安静，下班离开实验室前要检查并关好水、电、门、窗等，注意实验室安全。
3.认真开展实验室质量控制工作，仪器设备应定期保养，有温度记录，检测标本的保存要求符合规范要求。
4.实验室不得放置与测试无关的物品，水、温、湿度、光照、防震、防尘、防噪声等，环境必须符合实验室的工作要求。
5.实验和楼道内必须配置足够的安全防火措施，并定期检查保养。
6.对不同属性、品种和含量水平的试样，应有足够的试验区域，予以分离检验，尤其是已知具有生物危害的试样必须分离检验。
防止损害工作人员健康和污染环境。
7.与检验无关人员不得进入实验室，外单位人员联系工作，一律在办公室接待。
8.实验结束后，应及时清理实验现场和用品，对染菌带毒的器具废弃物应严格进行消毒无菌处理。
9.实验室内禁止吸烟、用餐和进食。
HIV标本采集与接收登记制度1、采样前和接收标本时应核对病人身份，严格执行查对制度。
中检院送检细胞制剂检定项目SOP
中检院送检细胞制剂检定项目SOP目录1.人脐带间充质干细胞P4代成品细胞质量标准 (2)2.细胞流式检测标准操作程序 (4)3.逆转录病毒PERT法检测标准操作程序 (8)4.细胞基因组DNA提取操作标准流程 (10)5.细胞基因组RNA提取操作标准流程 (12)6.病毒PCR法检测标准操作程序Ⅰ (14)7.病毒PCR法检测标准操作程序Ⅱ (16)8.hUC-MSCs免疫学反应检测标准操作程序 (19)9.hUC-MSCs成骨诱导分化标准操作程序 (21)10.hUC-MSCs成脂诱导分化标准操作程序 (22)11.细胞计数台盼蓝染色法标准操作程序 (25)12.细胞周期检测标准操作程序 (26)13.hUC-MSCs端粒酶检测标准操作程序 (28)14.hUC-MSCs软琼脂克隆形成实验标准操作程序 (31)人脐带间充质干细胞P4代成品细胞质量标准细胞流式检测标准操作程序1 目的：对细胞表面抗原进行流式鉴定，保证检测的准确性。
2 范围：细胞流式检测的全过程3 责任人：技术部4 内容4.1 仪器和试剂4.1.1 仪器设备：流式细胞仪（FACS Calibur TM）、台式离心机、1000µL微量移液枪、100µL微量移液枪、10µL微量移液枪。
4.1.2 试剂以及耗材：FITC单克隆抗体、APC 单克隆抗体、PE单克隆抗体、PerCP 单克隆抗体、相应的同型对照；1XPBS；鞘液专用流式管、枪头。
4.1.3 样本准备4.1.3.1 将样本按条码号顺序排列好，每份样本按照检测抗体种类的需要取流式专用管若干支，分别标记好单阳管、阴性管、同型对照管和样本检测管。
4.1.3.2 各取100µL样本加入标记好的流式管中，然后根据流式管标记的信息分别添加对应的抗体。
充分混匀，置4℃冰箱避光孵育30分钟。
4.1.3.5 孵育结束以后加入1ml PBS，充分混匀，1200rpm离心5分钟。
HIV抗体检测标准操作程序(SOP)
HIV抗体检测标准操作程序（SOP）——微生物科一、样本的采集和处理二、检测方法和步骤三、质控品的应用方法四、仪器的使用和维护五、结果的记录、解释与报告六、保密程序七、实验室的清理、消毒八、艾滋病检测实验室安全防护九、附表样品的采集和处理1.1血清样品采集：用注射器抽出一定量静脉血，室温下自然放置1-2小时，待血清凝固和血块收缩后在用3000rmp离心15min，吸出血清备用。
1.2抗凝血样品采集：用加有抗凝剂的真空管或用消毒注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管，反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。
1.3采样注意事项：1.3.1采集样品应按临床采血技术规范及试剂盒说明书要求进行。
1.3.2采集标本时应注意安全，直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液的操作应戴双层手套。
2、样品的保存：2.1用于抗体检测的血清或血浆样品应存放与-20摄食度以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8摄食度。
3.样品的运送：3.1实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。
样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类、、采样时间。
3.2将试管放入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒。
在试管的周围垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。
3.3特殊情况下如需对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄，但必须将盛有样品的试管包扎好，保证不会破碎和遗漏。
4.1含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。
4.2核对标本与送检单，检查样品管有无破损及遗漏。
如发现遗漏应立即将尚存留的样品移出、对样品管和盛器消毒，同时还要报告有关领导和专家。
检验方法和步骤1.检验方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）2.检验步骤：严格按照试剂说明书操作。
3.注意事项：3.1禁止肉眼判读！3.2保证酶标仪，洗板机正常运转，保证加样器准确，选择高质量的与加样器配套的TIP头3.3使用有效期内的试剂3.4保证样品质量质控品的应用方法1.质控品按临床样本对待，操作应依照实验室安全管理条例执行。
血凝仪SOP文件资料希森美康CA500、510
全自动血凝分析系统标准操作规程SOP编码：页数：页制定人签名：日期：审核人签名：日期：批准人签名：日期：生效日期：颁发日期：周期性审查：年一次修订登记：审查登记：1.原理CA500中具有具有2种检测原理方法的型号称C A530，同时具有：凝固法、发色底物法1.1.1 凝固法：基本测试原理是光学法的散射光检测（用660nm光电二极管检测散射光强度的变化），还并用了百分比方式的测定原理：当试剂加入标本后，凝血开始启动，随之光学出现变化，仪器把这种光学的变化描绘成凝固曲线：把开始出现凝集的起始点作为0%、把完全凝固的终点作为100%、把50%变化点处作为凝固时间（报告点），当测定含有干扰物（黄疸、溶血、高脂血症等）或低纤维蛋白原血症的特殊标本时，其作为起始点的0%的基线会随之上移或下移,相当于扣除本底干扰.以上凝固法检测原理所测定的项目包括了最常用的如PT、APTT、FIB、TT、内源凝血因子（F VIII、XI、XI、XII），外源凝血因子（F II、V、VII、X）等1.1.2. 发色底物法的检测原理：是通过测定产色物质的吸光度变化，以推算待测物的含量，这种方法属生物化学法，其基本原理是：试剂中为人工合成的含某种酶裂解位点的短肽，与产色物质如对硝基苯胺(pNA)连接，待检物品中含有活性酶或无活性的酶原被加入的激活剂活化，在检测过程中产色物质被解离下来，使被检物品出现颜色变化，其与被检物含量呈一定的数量关系。
此方法以酶学方法为基础，可检测项目包括如：AT-III、Plg、PC、PS、FM、PAI，Tpa，α2-AP等。
2.标本●使用3.8%或3.2%(W/V)拘橼酸钠溶液作为抗凝剂；●血样与抗凝剂的比例为9:1，如果血球压积<20%或>55%，则需调整这个比例，方法是：0.00185×血液毫升数×(100-压积)=抗凝剂毫升数；或不同比积血样可参考下表使用不同浓度的抗凝剂（仍按9：1比例抽血）〈血栓止●一采样后60分钟内进行；一分离血浆应在3000r/min 离心10分钟，务使血小板去除；●盛血浆容器应加塞，防止PH改变；●血浆应保存在2—8℃●3试剂及配套消耗品3.1试剂3.1.1反应试剂: 采用CA500血凝仪配套Dade Behring试剂，具体见相应项目要求3.1.2 系统清洁液:厂家配套Sysmex Clean I清洁液,用于检测过程中样品针、试剂针的冲洗；3.1.3 系统冲洗液：蒸馏水，实验室自制，用于检测过程中系统管路的冲洗3.1.4 :稀释液：配套Dade Behring的Owern’s Veronal Buffer 和CA System Buffer，用于检测过程中样本的稀释或定标曲线制定中标准血浆的稀释；3.2 其它消耗品3.2.1 反应杯：厂家配套Sysmx Reaction Tube反应杯 ,货号：SU-4003.3. 检测环境要求:3.3.1 温度: 10° - 30° C；湿度: 20 - 80% (无冷凝)3.3.2 电源: 交流电100-240V，50/60Hz；最大输入电量: 最大250伏安，功率：720VA3.3.3 请勿将仪器直接置于水、直射阳光、冷凝或大风的环境中,这样会导致不正确的检测结果并导致仪器工作不正常而损坏3.3.4 仪器的背面和墙之间要始终保持20厘米以上的距离。
标准操作规程(SOP)——流感病毒神经氨酸酶活性试验及其活性抑制试验
病毒神经氨酸酶（E.C.3.2.1.18酰基神经氨酸水解酶）催化裂解末端唾液酸和邻近D －半乳糖或－半乳糖胺间α－酮苷连接。
世界卫生组织国际流感参照和协作中心，于1973年公布了国际上统一的流感病毒神经氨酸酶活性（NA ，Neuraminidase ）及其活性抑制（NI ，neuraminidase inhibition ）测定方法。
二、简介反应原理自由的N －乙酰神经氨（N-acetylneuraminic ）神经氨酸酶的作用，自胎蛋白底物中释放。
经过碘酸盐的氧化作用，将N －乙酰神经氨酸神经氨酸转化为β-甲醛丙酮酸(β-formyl pyrruvic acid)。
β-甲醛丙酮酸经硫代巴比妥酸的作用形成生色团。
用有机溶剂提取生色团。
用分光光度计测定吸光值。
这样可以测定标本神经氨酸酶的活性，并且可确定用于神经氨酸酶抑制试验的标准剂量。
神经氨酸酶活性抑制试验是测定血清抑制标准量酶活性的效价。
NI 测定已经成为流感病毒鉴定不可缺少的手段之一。
因NI 活性测定结果是流感病毒神经氨酸亚型划分的主要依据之一。
有时该方法也用于了解流感病毒NA 抗原性变异和血清学诊断等方面。
NI 测定不受血清中非特异性抑制素的影响，但易受病毒颗粒红细胞凝集素抗体的影响，即空间干扰。
为解决这一弊端，在流感病毒鉴定中，常使用单价血清（只针对NA 的）或基因重配毒株所制备的免疫血清（如使基因重配株NA 抗原为N2或N1，其HA 抗原为马1（H7）亚型的）。
三、范围适用于中国流感监测网络参与流感监测的所有技术人员进行流感病毒神经氨酸酶活性试验及其活性抑制试验。
一、目的标准操作规程（SOP ）——四、程序（一）生物安全等级和要求操作时在BSL-1级实验室即可，除了一般的防护外，在称量化学试剂时需戴护目镜和口罩。
（二）材料1．磷酸缓冲液(PBS,pH 5.9)甲液：4mmol/L 磷酸氢二钠乙液：4mmol/L 磷酸二氢钠甲液19mL加乙液81mL混匀，将pH值调至5.9±0.5，pH值偏高用乙液调整，偏低用甲液调整。
fviii指导原则
fviii指导原则FVIII指导原则FVIII指导原则是指在血友病A治疗中，根据患者的FVIII水平和个体化的治疗需求，制定合理的药物剂量和治疗方案。
本文将介绍FVIII指导原则的背景、重要性以及具体的实施方法。
背景血友病A是一种由于凝血因子VIII（FVIII）功能缺陷引起的遗传性出血性疾病。
FVIII是血液凝血过程中必需的凝血因子之一，其缺乏或异常会导致患者易于出血。
因此，FVIII的补充治疗成为血友病A 患者的主要治疗方法。
重要性FVIII的补充治疗对于血友病A患者的生活质量和生存率至关重要。
合理的FVIII剂量和治疗方案可以有效控制患者的出血症状，预防或减少关节和软组织的出血，提高患者的生活质量。
实施方法1. 确定FVIII水平：在制定治疗方案前，需要通过血液检测确定患者的FVIII水平。
根据FVIII水平的高低，可以判断患者的治疗需求和剂量调整的频率。
2. 制定个体化的治疗方案：根据患者的FVIII水平和出血症状的严重程度，制定个体化的治疗方案。
对于FVIII水平低的患者，需要更频繁地补充FVIII；对于FVIII水平较高的患者，可以适量减少FVIII 的剂量。
3. 考虑出血风险因素：除了FVIII水平，还需要考虑患者的出血风险因素。
例如，关节或软组织的既往出血史、手术或创伤等都会增加患者的出血风险。
在这些情况下，需要增加FVIII的剂量或调整治疗方案。
4. 定期复查FVIII水平：治疗期间需要定期复查患者的FVIII水平，以评估治疗效果并调整剂量。
根据患者的具体情况，可以选择每周、每月或每季度进行复查。
5. 注意副作用和并发症：在使用FVIII治疗时，需要注意副作用和并发症的发生。
常见的副作用包括过敏反应、抗体产生等。
在发生副作用时，需要及时调整治疗方案或采取其他措施。
6. 与患者建立良好的沟通：在制定和实施FVIII治疗方案时，与患者建立良好的沟通非常重要。
了解患者的需求和意愿，共同制定治疗目标，并及时解答患者的疑问和顾虑。
医院检验中心纤溶酶原激活剂抑制物活性测定发色底物法操作规程
医院检验中心纤溶酶原激活剂抑制物（PAI）活性测定(发色底物法)操作规程
（1）原理：
定量t-PA加到待测血浆中，与血浆中的PAI作用，形成无活性的复合物，剩余的t-PA 作用于纤溶酶
原（Plg）,激活为纤溶酶（Plm），后者水解发色底物
S2251，释放出对硝基苯胺（PNA），它在405nm有强吸收
峰。
由测出剩余t-PA量，间接测出PAI活性。
PAI活性单位定义为：在25℃、20分钟内抑制1.0国际单位t-PA的PAI酶量为1.0 AU。
（2）标本处理：
静脉采血2ml置于含200ul抗凝剂（0.109mol/L枸橼酸钠）的塑料管或硅化管中,3000 rpm离心10分
钟,收集上清液置于2～8℃,可保存12小时,-20℃可保
存一个月。
（3）方法：
1）准：第一步，用1.1ml稀缓冲液溶解标准品；
第二步，再稀释100倍（取50ul，加稀缓冲液4950ul）；
第三步，用稀缓冲液等量稀释第二步。
2）释血浆制备：待测血浆50ul+稀缓冲液950ul( 稀20倍)—取200ul+等量第二步稀释标准液——混匀(又稀2倍)，25℃放置20分钟。
3）测定：
以1号孔调零点，在酶标仪上测定各孔A405值（4）数据处理：
A405
PAI相对活性
从标准曲线上查出PAI相对活性×40×1.1 [正常值] 0.35～0.8AU/ml。
标准操作规程(SOP)——神经氨酸酶活性 ELISA检测方法
一、目的本实验是利用ABI 公司的NA-star 试剂盒，检测流感病毒的神经氨酸酶活性的方法。
二、范围适用于中国国家流感中心所有技术人员进行神经氨酸酶活性ELISA 检测。
三、程序（一）生物安全要求季节性流感病毒及经完全灭活的高致病禽流感病毒和H2N2流感病毒操 作可以在BSL-2实验室里进行，操作人员采取BSL-2级防护。
禽流感H5、H7亚型高致病性禽流感病毒及H2N2亚型流感病毒的操作需要在BSL-3级实验室中进行，操作人员采取BSL-3级防护。
（二）材料1．ABI 公司NA-star 试剂盒 （Cat NO.4374422或4374348或4374349）2．检测毒株3．移液器单通道可调 20μL ～200μL4．PE 公司2103 Multilablel Reader（三）实验步骤本试验擦作步骤序依据ABI 公司NA-star 试剂盒诊断试剂盒说明书制定。
1．取96孔板，1~10列每孔加入25μL NA-star 缓冲液，用于稀释神经氨酸酶，11、12列加入NA-star 缓冲液。
2．1~11孔加入25μL 的待检测病毒液，12孔加入25μL NA-star 缓冲液作为标准操作规程（SOP ）——性ELISA空白对照。
3．摇动96孔板，使其完全混匀，放置37℃孵育20min。
4．将试剂盒内的神经氨酸酶底物用缓冲液稀释1:1000稀释备用。
5．每孔加入NA－star中的神经氨酸酶底物10μL，充分混匀，放置37℃孵育10min。
6．每孔加入神经氨酸酶促进剂60μL，立即用PE 公司2103 Multilabel Reader 检测化学发光信号。
由于化学发光信号在5min内将减弱，读取数据时每孔不要超过1s。
7．每个数据减去空白对照，绘制标准曲线。
或者利用GrapHPad软件分析数据。
标准操作规程(SOP)——流感禽流感微量中和抗体检测
标准操作规程（SOP）——一、目的微量中和试验是一种敏感性高、特异性强的血清学方法，用于测定血清中的病毒特异性中和抗体水平。
中国国家流感中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程，进行流感/禽流感微量中和抗体检测实验，以确保实验的准确性。
二、范围适用于中国国家流感中心的所有技术人员进行流感/禽流感微量中和抗体检测。
三、责任进行流感/禽流感微量中和抗体检测的技术人员需严格按照规定进行操作。
四、程序（一）生物安全要求H5，H7亚型高致病性禽流感病毒，H2N2亚型流感病毒的操作需要在生物安全3级（BSL-3）实验室中进行。
其余流感病毒的操作需要在生物安全2级（BSL-2级）实验室中进行。
操作人员必须严格按照相应实验室的要求做好个人防护。
（二）材料1．中和反应实验材料（1）病毒：一般采用接种鸡胚尿囊腔后收获的流感/禽流感病毒液，在-70℃中保存，并且注意避免反复冻融。
进行中和试验之前，需先进行病毒滴度（TCID50）的滴定。
具体步骤如下，1）病毒的稀释：可采取对数或者半对数稀释的方法。
以下介绍半对数稀释法。
取1管冻存病毒尿囊液，用病毒培养液进行1:100稀释。
第一列4个孔每孔加入146μL 1:100稀释过的病毒液，其它各列每孔加入100 μL 病毒培养液。
然后用多道加样器从第一孔吸46μL 至第二孔，做系列半对数稀释，使之成为10－2、10－2.5、10－3、10－3.5……10－7。
每孔含有100μL 病毒液。
2）每孔加入100μL MDCK 细胞悬液（1.5×104细胞/孔），37℃，5%CO 2培养箱孵育18～22h 。
每一滴度作平行4孔。
3）细胞固定、ELISA 操作如下述。
4）OD 值 〉2倍MDCK 细胞对照OD 值判定为阳性5）病毒滴度计算见组织细胞半数感染量滴定SOP 。
（2）血清样品：包括待检血清、阳性及阴性血清对照。
如果待检血清有可能需要多次检测，则需将待检血清进行小量分装，-20℃至-70℃保存均可，避免多次反复冻融。
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Betheda法
一、原理 Bethesda单位的定义为，在37℃中孵育2小时后，抑制物中和加入因子VIII量的50%为一
个单位。 未肯定存在抑制物的患者：
1.患者血浆(0.2ml)和正常人血浆(0.2ml)等比混合 2.对照为正常人混合血浆0.2ml加缓冲液0.2ml 3.37℃孵育2h，用测VIII:C的方法，检测各管VIII:C水平 体内存在抑制物的患者 1. 首先用FVIII分析缓冲液稀释患者血浆，在实验中设置多个稀释度更可取。孵育2h
Verbruggen B, Novakova I, Wessels H, Boezeman J, van den Berg M,MauserBunschoten E.The Nijmegan modification of the Bethesda Assay for factor VIII:C Inhibitors: improved specificity and reliability. Thrombosis & Haemostasis 1995 73: 247-251. (For the Nijmegenmodification.)
以 APTT 测定为基础的凝血因子抑制物的筛查
一、原理 凝血因子抑制物对APTT可能产生即刻或时间依赖性的影响。待测血浆中含有即刻反应抑
制物时，加入正常血浆，只能很小程度上纠正凝血时间或不能纠正。当待测血浆中含有时间 依赖性抑制物时，则需要与正常血浆孵育一段时间后才能检测到抑制物。
正常血浆、待测血浆和二者作1：1的混合血浆分别置37oC孵育60分钟，然后检测正常血 浆、待测血浆、已孵育的混合血浆及分别孵育后的正常血浆和待测血浆等体积混合后的APTT， 最后比较两种混合血浆的APTT被纠正程度。
后，则将稀释血浆置冰浴中。如已知患者前次的测定结果，试验中稀释度应依据结 果调整。 2. 每个稀释度的受检血浆中加入正常混合血浆－FVIII浓度接近100u/dl。因此，每个 孵育混合物FVIII起始浓度约为50u/dl。 3. 孵育2h后，正常对照FVIII:C作为标准，计算受检血浆FVIII:C。结果分析时，正常 对照FVIII:C为100%。 4. 实验中，调整正常血浆的缓冲能力是非常重要的。在正常血浆中加入0.1M，PH7.4 咪唑缓冲液，即Nijmegen改良测定法,能增加实验的敏感性和特异性。 5. 孵育后检测剩余FVIII水平。根据剩余FVIII/抑制物单位图，计算抑制物的量(见下 图)。
例子 2： 患者 FVIII 浓度为 20u/dl（存在抑制物）
受检血浆未稀释
正常人混合血浆＋未稀释受检血浆－FVIII＝120％对照 孵育 2h 后进行 FVIII 检测 正常人混合血浆＋未稀释受检血浆－FVIII＝90％对照 剩余 FVIII＝90/120＝75％
参考文献 Kasper C, Aledort L, Counts R, Edron J, Fratantoni J, Green D, Hampton J, Hilgartner M,Laserson J, Levine P, MacMillan C, Pool J, Shapiro S, Shulman N, Eys J. A more uniform measurement of factor VIII inhibitors. Thrombosis at Diathesis Haemorrhagica 1975 34: 869-872.
纠正程度差见于： 分别孵育后制备的混合血浆中含有即刻作用抑制物 孵育后的混合血浆中含有时间依赖的抑制物
二、器材 移液器 测定管 冰盒 水浴箱
三、试剂 正常血浆（20人份的混合血浆） 待测血浆 APTT试剂
四、方法 准备3个塑料管—A，B和C。在A管内加入0.5ml正常血浆，B管内加入0.5ml待测血浆， C管内加入正常和待测血浆各0.2ml 37℃孵育60分钟 将上述试管置冰盒中 检测前将A管和B管血浆按1：1即刻混合 A，C，D和B管依次进行复管APTT检测。
粗略估计，同时病人最近是否接受因子VIII制剂治疗，也可预估抑制物的高低。 2.吸取0.2ml乏FVIII血浆至另一塑料试管中，制作标准曲线－标准管。
3.分别在标准管和受检管中加入0.2ml正常人混合血浆，各管中FVIII水平接近50u/ml。 孵育后进行FVIII检测，标准管FVIII水平被定为100%。
二、仪器 塑料试管(75*12mm) 吸头 冰浴盒
三、试剂 咪唑缓冲液 OBS缓冲液 正常人混合血浆 乏FVIII血浆 APTT试剂
四、方法 人因子VIII浓缩物 1.用咪唑缓冲液在塑料试管中倍比稀释受检血浆(1/2，1/4，1/8，1/16，等)，终体积
为0.2ml－受检管。 稀释倍数因人而异，建议起始点不作稀释，接下来倍比稀释，1/2，1/4，等。 注意：如病人先前做过抑制物检测，其抑制物水平能帮助我们对本次检测的稀释倍数做
4.加盖，颠倒混匀，37℃孵育2h。 5.若FVIII检测不能马上进行，孵育2h后,需将所有管子放置冰浴中。 6.按常规VIII:C检测的最适稀释度为1/5,1/10,1/20。
五、结果/解释 制图，对照作为100%，读出各受检管剩余因子VIII水平。
六、计算抑制物浓度 稀释的受检血浆剩余FVIII水平接近50%，介于30-60%，这正是计算抑制物含量的范围。
计算各个稀释度的结果求平均值。任何剩余FVIII:C<25%或>75%将不能计算抑制物浓度。 在双对数纸上画出%剩余FVIII:C与抑制物单位图，从而确定抑制物浓度(见图)。 依据剩余FVIII:C，读出各管抑制物水平，最后乘上稀释度。 例如：1/4稀释血浆+正常血浆 剩余FVIII:C=50% 抑制物单位=1BU 乘以稀释倍数(1/4)=4BU
五、结果解释
示例：
样本
1
2
3
A：正常血浆
40
40 40
B：待测血浆
90
90 90
C：待测+正常血浆（孵育后）
45
70 70
D：待测+正常血浆（未孵育）
45
48 70
例如：1=血浆中有内源性凝血因子缺陷，但不含有抑制物
2=血浆中含有时间依赖性凝血因子抑制物
3=血浆中含有即时作用抑制物
FVIII抑制物检测
七、注意 重型血友病患者常需要进行抑制物检测，这些患者血浆仅含有少量或测不出FVIII:C。
如受检血浆FVIII浓度大于5u/dl，则在计算抑制物浓度中要注意。
这个问题可采用以下两种方法解决： 对照混合物比受检混合物加入更多的因子以补偿 FVIII 的浓度。例如，受检血浆 FVIII 为 20u/dl，则对照混合物中则是 120µl 正常人混合血浆和 80µl 缓冲液。（在孵育开始时， 受检混合物和对照混合物都含有 60 u/dl FVIII）。这个方法仅仅能用于不稀释的患者血浆； 稀释的标本采用此方法会改变起始的 FVIII 浓度。 计算时要考虑受检血浆中起始因子 VIII 浓度。这样就能正常分析复合物的组成。
例子 1： 患者 FVIII 浓度为 20u/dl 对照正常人血浆+缓冲液 a．正常人混合血浆＋未稀释受检血浆－起始 FVIII＝120％ b．正常人混合血浆＋1：2 稀释的受检血浆－起始 FVIII＝110％ 孵育 2h 后进行因子检测。 a．正常人混合血浆＋未稀释受检血浆－FVIII＝120％对照 剩余 FVIII＝120/120＝100％，抑制物结果－阴性 b．正常人混合血浆＋1：2 稀释的受检血浆－FVIII＝110％对照 剩余 FVIII＝110/110＝100％，抑制物结果－阴性