Illumina 测序的原理和应用
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1. Single DNA libraries are hybridized to primer lawn and extended by polymerase
6
精品文档
2. Double-stranded molecule is denatured and original template is
3‘端
Index primer
17
5‘精端品文档
wenku.baidu.com
14. Repeat bridge amplification to form reverse strand after index sequencing 15. Sequencing the reverse strands
18
精品文档
高通量测序的应用
Index 用来区分不同样本
3
精品文档
Illumina测序流程
Library Preparation 文库制备
测
Cluster Generation 簇生成
序
流
程
Sequencing
测序
Data Analysis 数据分析
4
精品文档
什么是 flow cell？
Flow cell 即流动槽，如载玻片大小，有8个通道 即8条lane。
washed away
7
精品文档
3. New synthesized strand is covalently attached to flow cell surface to form a bridge and extended by polymerase
4. Double-strand bridge is formed
单端测序：高碘酸希夫反应 。
双端测序： Illumina巧妙地利用了“ 甲酰胺基嘧啶糖苷酶（Fpg）”对 “8-氧鸟嘌吟糖苷（8-oxo-G）”的 选择性切断作用。
11
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Illumina测序流程
Library Preparation 文库制备
测
Cluster Generation 簇生成
序
流
Illumina 测序的原理和 应用
1
精品文档
Illumina测序流程
Library Preparation 文库制备
测
Cluster Generation 簇生成
序
流
程
Sequencing
测序
Data Analysis 数据分析
2
精品文档
Adapter and Library 接头和 文库
接头：与flow cell结合区 Read1和Read2测序引物结合区
20
Long ncRNA
转录组
精品文档
DGE
sRNA
Thank you!
21
精品文档
15
精品文档
12. Cleave the fluor and free the 3’ end then repeat above steps for next cycle
16
精品文档
13. Sequenced strand is stripped off and the index primer is added for to seq index
10
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9. Cleaved reverse strands are washed away and leaving a cluster with forward strands only
在Illumina的测序过程中，无论是单 端测序还是双端测序，都会用到特异 选择性链切断的过程。其中单端测序 的要切断1次，双端测序中的两条链 要先后各切断1次（共2次）。
程
Sequencing
测序
Data Analysis 数据分析
12
精品文档
Two flow cell
Hiseq2500
13
精品文档
10. Sequencing primer is hybridized to adapter sequ
3‘端 测 序 引 物
14
5‘端
精品文档
11. Only one nucleotide is added every cycle as the 3’ end is blocked
DNA水平 RNA水平
19
基因组denovo、重测序 外显子捕获测序 DNA甲基化测序 Chip-Seq 16s、宏基因组
转录组测序 数字表达谱DGE Small RNA lncRNA
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高通量测序的应用
DNA
Chip-seq
甲基化
RNA
真核 原核
无参 有参
BSA-seq 比较转录组
Protei n
8
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two copies of covalently bound single-stranded templates 6. Bridge amplification cycle repeat
9
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8. dsDNA bridges are denatured and reverse strands are cleaved
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6
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高通量测序的应用
Index 用来区分不同样本
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Illumina测序流程
Library Preparation 文库制备
测
Cluster Generation 簇生成
序
流
程
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Data Analysis 数据分析
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什么是 flow cell？
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4. Double-strand bridge is formed
单端测序：高碘酸希夫反应 。
双端测序： Illumina巧妙地利用了“ 甲酰胺基嘧啶糖苷酶（Fpg）”对 “8-氧鸟嘌吟糖苷（8-oxo-G）”的 选择性切断作用。
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Cluster Generation 簇生成
序
流
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序
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Data Analysis 数据分析
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Data Analysis 数据分析
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14
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基因组denovo、重测序 外显子捕获测序 DNA甲基化测序 Chip-Seq 16s、宏基因组
转录组测序 数字表达谱DGE Small RNA lncRNA
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甲基化
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真核 原核
无参 有参
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8
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8. dsDNA bridges are denatured and reverse strands are cleaved