鲍鱼内脏多糖的体外抗肿瘤和免疫调节活性研究
学问海鲜章节答案
2018年智慧树（知到）学问海鲜答案2018-03-29 创业部落类别：智慧树以下是完整版答案第一章糖类（碳水化合物）、脂类、蛋白质、维生素、水和矿物质是人体所必需的六大营养素吗？正确答案是:对鱼肝油富含（），常用于预防和治疗佝偻病、夜盲症及小儿手足抽搐症等。
正确答案是:维生素A和维生素Ｄ（）含有胆碱，可增强记忆力。
正确答案是:鱼鳞#鱼脑（）富含俗称“脑黄金”的DHA，还有磷脂类物质，有助于婴儿大脑发育，对辅助治疗老年痴呆症也有一定的作用。
正确答案是:鱼脑#鱼肉海鲜中富含哪两种特殊类型的不饱和脂肪酸？正确答案是:脑黄金#花生四烯酸海鲜的脂肪含量一般比畜肉类低，而且其脂肪以（）为主。
正确答案是:不饱和脂肪酸吃其他食品或营养品可以完全代替海鲜摄取营养物质吗？正确答案是:错以下几种食物，哪种钙含量最高？正确答案是:海鲜下列哪种营养物质，海水鱼的含量要普遍高与淡水鱼? 正确答案是:DHA。
EPA深海鱼是一种（）的食品正确答案是:低脂肪高蛋白深海鱼的主要保健功能不包括以下哪项（）正确答案是:改善皮肤水分下列哪种野生鱼具有很高的毒性？正确答案是:河豚养殖鱼与野生鱼的哪个营养价值更高一些？正确答案是:一样高脑黄金是指哪种营养物质? 正确答案是:多不饱和脂肪酸海鲜中跟美容相关性最大的一类营养物质是什么？正确答案是:多肽类海参含有的营养物质除了活性脂质，胶原蛋白，还有哪些特殊的营养物质？正确答案是:海参多糖和海参皂苷鲍鱼肉中能提取一种被称作（）的生物活性物质，它能够提高免疫力，有保护机体免疫系统的作用。
正确答案是:鲍灵素海参是（）类食品？正确答案是:高蛋白、低脂肪、低胆固醇海参中是否含有皂苷？正确答案是:对“鲍参翅肚”中的“肚”即为鱼胶，营养价值最高的鱼胶是（）正确答案是:鳘鱼鳔海鲜平均含有的脂肪含量大约是（）正确答案是:少于5%每百克蛤蜊与动物性肉类中的鸡肉、兔肉、牛肉相比较，热量较低的是（）正确答案是:蛤蜊以胆固醇含量作比较，有“一口鱿鱼等于四十口肥肉””这样的说法合理吗？正确答案是:不合理胆固醇是人体的必需营养物质，人体自身合成的胆固醇占多大比例？正确答案是:80%海鲜中的胆固醇大多集中在（）部位。
细菌胞外多糖生物活性的研究进展_赵霞
网络出版时间：2016-03-22 16:00:27网络出版地址：/kcms/detail/62.1120.R.20160322.1600.002.html细菌胞外多糖生物活性的研究进展赵霞综述，王若愚审校中国科学院寒区旱区环境与工程研究所生态与农业研究室，甘肃兰州 730000摘要：细菌胞外多糖（Exopolysaccharides，EPS）是细菌产生的一类重要的生物大分子，在许多重要生命过程中起着非常关键的作用，由于其具有多种生物活性成为近年来研究的热点。
目前，细菌EPS作为天然产物，可大量发酵提取，且可降低成本，特别是一些乳酸杆菌和海洋细菌的新型EPS被证实具有多样化结构多糖的、潜在的有益生物活性，如抗肿瘤、免疫调节和抗氧化等，其在食品、医学等领域被广泛应用。
本文就细菌EPS在生物材料和药品方面的应用、免疫调节功能、抗肿瘤活性及抗氧化活性作一综述。
关键字：细菌；胞外多糖；抗肿瘤；抗氧化；免疫调节中图分类号：Q936文献标识码：A 文章编号： DOI：Progress of bioactivities for bacterial exopolysaccharidesZHAO Xia, WANG Ruo-yuKeyLaboratory of Ecological and Agricultural Research, Cold and Arid Regions Environmental and Engineering ResearchInstitute, Chinese Academy of Sciences, Lanzhou730000，Gansu Province, ChinaCorresponding author: WANG Ruo-yu, E-mail: wangruoyu@Abstract：Bacrerial exopolysaccharides (EPS）were produced from bacteria, which is a type of large biological moleculeand takes a cruicial effect in many process of life, and becomes a hot focus in recent years because it has a variety ofbiological activities. At present the bacterial EPS as a natural product may be extracted in large quanties by thefermentation process with a reduced cost, particularly some new types EPS from Lactobacillaceae and ocean bacteria havebeen identified to having polysaccharides with multiple-structure and potential biological benefitactivities,such asanti-tumor, anti-oxidationand immuno-modulatory effects. The bacterial EPS hasbeen found an outstanding prospect infood industry and medicine.. In this paper,applications of bacteria EPSare reviewed, including in biomedicinematerials,pharmaceiticals and health preparation, .andanti-tumor, anti-oxidationand immuno-modulatory effects.Key word：Bacteria; Exopolysaccharide(EPS); Anti-tumor; Anti-oxidation; Immuno-modulation多糖是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子聚合物，广泛存在于植物、真菌、藻类和细菌中。
食用真菌多糖免疫调节作用及其机制研究进展
食用真菌多糖免疫调节作用及其机制研究进展王思芦;汪开毓;陈德芳【摘要】食用真菌多糖是一种从食用真菌中提取获得的安全无毒的天然高分子聚合物,具有复杂多样的生物学活性,国内外学者对食用真菌多糖在医学、药理学、食品科学等领域已进行了大量的研究,发现许多食用真菌最为显著的生物学活性是其免疫调节作用,其作用机理包括促进免疫器官发育、增强巨噬细胞吞噬功能、促进淋巴细胞增殖、提高体液免疫功能、促进免疫细胞因子及其mRNA表达、影响免疫细胞信号Ca2+、NO、cAMP和cGMPd的转导与活化等.部分食用菌多糖如香菇多糖、灰树花多糖已被用于辅助治疗免疫功能低下、肿瘤以及病毒感染性疾病.论文综述了食用真菌多糖对机体免疫功能的影响及其作用机理,为进一步开发利用我国丰富的食用菌资源提供依据.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2012(033)011【总页数】5页(P104-108)【关键词】食用真菌;多糖;免疫调节;作用机制【作者】王思芦;汪开毓;陈德芳【作者单位】西昌学院动物科学学院,四川西昌615013;四川农业大学动物医学院,四川雅安625014;动物疫病与人类健康四川省重点实验室,四川雅安625014;四川农业大学动物医学院,四川雅安625014【正文语种】中文【中图分类】S852.4真菌多糖（fungus polysaccharide）一般指从真菌的子实体、菌丝体及发酵液中分离出的，由10个以上单糖以糖苷键结合而成的天然高分子聚合物，在国际上被称为“生物反应调节剂”，它能够控制细胞分裂分化，调节细胞生长衰老，是多种内源性生物活性分子的重要组成成分。
现代研究表明，真菌多糖生物活性复杂多样，如免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、降血脂、降血糖、抗氧化、抗辐照、抗溃疡等。
目前对多糖的生物活性研究最为广泛，报道最多的是它的免疫调节作用。
近年来，国内外已从高等担子菌中筛选到200余种有生物活性的多糖物质，我国发现有重要价值的食用真菌多糖近30种［1］。
不同葡萄多糖体外抗肿瘤作用的比较研究
不 同葡萄 多糖体外抗肿瘤作用的比较研 究※
施 晓艳 ，王 忠 民ｈ，于振 海 ，毛 英丽
（． １新疆 农业 大 学食 品科 学 学院 ，乌 鲁木 齐 ８ ０ ５ ； ３ ０ ２
２新 疆维吾 尔 自治 区食品 药品 监督 管理局 ，乌鲁木 齐 ８ ０ ０ ． ３ ０ ０）
Ｍ ＴＴ ｓ ａ ｗｅ ｅ ｕｓ ｏ ｏｂｓ ｒ ｅ ｔ ｅ ｉｈｉ ｉｏｒ ｆｅ ｔ ｆｔ ＬＰ ｏ Ｌａ ａ ｓ ｙ ｒ ｅｄ ｔ ｅ ｖ ｈ ｎ ｂ ｔ ｙ ｅ ｃ ｓ ｏ ｗｏ Ｖ ｎ Ｈｅ ．Ｂ３７ ａ ｎｄ ＢＧ Ｃ８２ ｕ ｏ ｅ ｌｌ ｓｕｎｄ ｒ７ ｄ ｆｅ ｅ ｔ ３ ｔ ｍ ｒｃ ｌ ｉ ｎｅ ｅ ｉ ｒ ｎ ｉ
Ｋ ｙ ＷＯｒ ： ｒ ｐ ｏ ｙ ａ ｃ ａ ｅ Ｍ Ｔ ｓ ａ ； Ｌ ｅ ｌ Ｂ３ ｅ ｌ ＢＧＣ８ ３ ｃ ｌ ｅ ｄｓ ｇ ａ ｅｐ ｌ ｓ ｃ ｈ ｄ ； Ｔ ａ ｓ ｙ Ｈｅ ａｃ ｌ； ７ ｃ ｌ ； ２ ｅｌ
葡 萄 富 含 各 种 营 养 素 和 多 细 胞 、提 高 机 体 免疫 力 ，并 具 有 外 抗 肿 瘤 作 用进 行 了 比较 研 究 ， 种生 物 活 性 物 质 ，在我 国具 有 悠 抗 肿 瘤 、抗 氧 化 、 降血 脂 、降血 为 葡 萄 多糖保 健 食 品的 生 产 作 好 久 的食 用 和 药 用 历 史 。 目前 多糖 糖 、促 进 核 酸 与 蛋 白 质生 物 合 成 前 期 准 备 ，对推 动葡 萄 产 业 的深 的研 究 较 多 的 集 中在 药 用 植 物 多 等 作 用［３ ２］ 年 来 ，葡 萄 的 医疗 加 工 ，加 速 保健 食 品的 创 新 与 开 －。近
和 Ｂ Ｃ ２ 肿 瘤 细 胞 ，Ｖ ＰＢ 的 Ｉ ５ 别 为 ２ ． ｍｇＬ、２ ． ｍｇＬ ２ ． ｍｇＬ，ＶＬ — 的 Ｉ ５ 别 为 Ｇ ８３ Ｌ — ｏ Ｃ０ 分 ３７ ８ ／ ４６ ９ ／和 ３４ ８ ／ ＰＨｏ Ｃ ０ 分
抗肿瘤药物设计及体外药效评价技术研究
抗肿瘤药物设计及体外药效评价技术研究肿瘤是世界性难题，人类一直在寻找有效的解决办法。
目前，抗肿瘤药物被视为治疗肿瘤的重要手段，其研究和开发对肿瘤治疗和患者康复具有重要意义。
本文将从抗肿瘤药物设计和体外药效评价技术两个方面进行分析和讨论。
一、抗肿瘤药物设计抗肿瘤药物设计是指通过分子结构和生物活性的改变，使得化合物具有更好的抗肿瘤作用，同时减少对健康的危害。
抗肿瘤药物的设计思路主要包括以下几点：1. 靶向原理靶向原理是指通过对肿瘤细胞内相关蛋白的选择和修饰，使得抗肿瘤药物可以朝特定细胞靶点发挥作用，从而达到更好的杀伤效果。
例如，对于HER2阳性的乳腺癌患者，靶向HER2的药物普利妥单抗可以有效地抑制肿瘤生长。
2. 作用机制抗肿瘤药物的作用机制是指化合物与肿瘤细胞特定分子发生相互作用，从而影响肿瘤细胞的生命活动。
设计合理的机制可以提高药物的选择性和疗效。
例如，卡培他滨的作用机制是通过抑制脱氧核糖核苷酸的合成以杀死癌细胞。
3. 缩小化合物毒性化合物在抑制肿瘤细胞生长的同时，可能对正常细胞也会造成危害。
因此，设计药物的时候需要考虑如何减少化合物对正常细胞的毒性。
例如，经过适当的结构改变，抗癌铂类药物可以降低对肾脏的副作用。
二、体外药效评价技术体外药效评价技术是指在体外模拟条件下，通过对抗肿瘤药物对肿瘤细胞的作用评价，来判断其杀伤效果和毒性。
目前，体外评价技术主要包括以下方法：1. MTT法MTT法是一种常用的评价细胞代谢活性的方法。
根据细胞的代谢活性，可以通过检测还原剂MTT（3-(4，5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物）的转化情况来评价抗癌药物对肿瘤细胞的生长抑制能力。
2. 流式细胞术流式细胞术是利用细胞表面特定分子的不同表达情况，通过荧光标记和流式细胞仪检测来评价药物对细胞的作用。
例如，对于CD44+/CD24-的乳腺癌干细胞，流式细胞术可以很好地检测其药效。
3. 蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术通过将不同的蛋白质固定在芯片上，用来评价药物对蛋白质的结合亲和力、活性等指标。
3种中药多糖抗肿瘤作用的研究
3种中药多糖抗肿瘤作用的研究马秀梓;孙润广;李佳媚;李哲涛;乔进京【摘要】实验采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法测定枸杞多糖、当归多糖和女贞子多糖对体外肿瘤细胞的增殖抑制作用．分别使用枸杞多糖、当归多糖和女贞子多糖作用于人白血病K562细胞，经不同浓度和不同时间作用后，采用MTT法测定3种多糖的体外抗肿瘤活性．结果显示：3种中药多糖都具有抗肿瘤活性，在一定范围内，随着多糖浓度的增加使得肿瘤细胞的抑制率增加，女贞子多糖在作用48h后对K562的抑瘤效果较枸杞多糖和当归多糖显著．%The MTT assay is used to study the inhibition rate of cell proliferation about Lycium barbarum Polysaccharide (LBP), Angelica Polysaccharide (APS). Ligustrum lucidum Polysaccharide(LLPS)act on tumor cells in vitro. Using the different dose and different effect time of LBP,APS.LLPS act on K562. Inhibition rate of cell proliferation were studied by MTT assay. The results indicate that three Chinese medicine polysaccharides could inhibit cancer cells. In a certain range, the inhibition of cell character depended on dose. LLPS in 48h owns the higher significant inhibitory effect of tumor on K562 than LBP and APS.【期刊名称】《陕西师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(040)006【总页数】4页(P77-80)【关键词】枸杞多糖;当归多糖;女贞子多糖;抗肿瘤【作者】马秀梓;孙润广;李佳媚;李哲涛;乔进京【作者单位】陕西师范大学物理学与信息技术学院,陕西西安710062;陕西师范大学物理学与信息技术学院,陕西西安710062;陕西师范大学物理学与信息技术学院,陕西西安710062;陕西师范大学物理学与信息技术学院,陕西西安710062;陕西师范大学物理学与信息技术学院,陕西西安710062【正文语种】中文【中图分类】R273中药多糖以其抗肿瘤活性、无毒副作用等优点备受关注.到目前为止，已发现100多种中药中的多糖化合物具有免疫促进作用，如香菇多糖、枸杞多糖、茯苓多糖、黄芪多糖等［1］.本实验的研究材料枸杞系落叶灌木，果实枸杞子味甘、性平，有滋肾补髓、养肝明目和祛风的作用，是传统滋补中药［2］.研究表明，枸杞多糖（Lycium barbarum Polysaccharide，LBP）可抑制人肝癌［3］、宫颈癌［4］和白血病［6］等多种肿瘤细胞的生长.女贞子是木犀科植物女贞子的干燥成熟果实，性味甘、微苦、凉，归肝、肾经，具有滋补肝肾、明目乌发等功能［6］.有研究表明女贞子多糖（Ligustrum lucidum Polysaccharide，LLPS）具有提高机体免疫能力，调节机体阴阳平衡的作用［7］.当归为伞形科植物当归的干燥根，味甘、辛、性温，有补血活血、调经止痛、通肠通便之效，用于血虚萎黄、眩晕心悸、月经不调、肠燥便秘等症状［8］，当归多糖（Angelica Polysaccharide，APS）能抑制肿瘤增殖，是诱导肿瘤细胞凋亡或分化的天然诱导剂［9－11］.四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法简单、快速，便于大规模进行药物敏感试验，人为误差较小而且较精确，没有放射性污染，广泛用于临床前抗癌药物筛选研究，并已开始用于肿瘤细胞的药物敏感性检测［12］.本文将枸杞多糖、当归多糖、女贞子多糖的体外抑瘤活性采用MTT方法进行分析研究，旨在为中药多糖的进一步有效抗癌提供理论和实验依据.枸杞多糖（LBP）、当归多糖（APS）、女贞子多糖（LLPS）以水提醇沉法提取制备.二甲基亚砜（DMSO）为国产分析纯，实验用水均为三次蒸馏水，K562细胞陕西师范大学生命科学学院，RPMI1640培养基美国GIBCO公司，新生小牛血清杭州四季青生物工程有限公司，四甲基偶氮唑盐（MTT）美国Amresco公司. HH·CP－01W型二氧化碳细胞培养箱上海博迅实业有限公司医疗设备厂，TH4－200倒置显微镜日本奥林巴斯有限公司，DG5032型酶联免疫检测仪南京华东电子集团医疗设备有限公司，TDL80－2B小型离心机上海安亭科学仪器厂，CF16RX高速冷冻离心机日本日立公司.1.3.1 细胞培养 K562细胞培养于RPMI1640＋10%（体积分数）新生小牛血清和双抗（青、链霉素，100U／mL）的完全培养基中.在5%CO2、37℃培养箱及饱和水蒸气条件下常规培养及传代，使用对数期细胞进行实验［2］.1.3.2 细胞增殖实验（1）K562细胞的增殖实验：取对数生长期的K562细胞，调节细胞密度为1×105个／mL.分为空白组、对照组和实验组.每组设6个复孔.接种于96孔板，每孔加100μL细胞，空白组加等体积完全培养基.培养24h后，实验组分别加入 800、400、200、100、50、25μg／mL 的LBP100μL；空白组和对照组加同体积1640培养基.培养24h、48h、72h后加入 MTT（5mg／mL）20μL／孔，37℃孵育4h后离心弃上清.加DMSO 200μL／孔，避光振荡10min，使结晶物充分溶解，用酶联免疫检测仪在波长492nm处测量各孔的吸光度（OD 值），实验重复3次，计算细胞相对生长抑制率：（2）K562细胞的增殖实验：按（1）方法检测APS对K562细胞的生长抑制作用，浓度范围0～800μg／mL.按（1）方法检测LLPS对K562细胞的生长抑制作用，浓度范围0～800μg／mL.1.3.3 统计分析方法所得数据用统计软件SPSS进行F检验.LBP对K562细胞的增殖抑制作用结果见表1和图1，LBP对人白血病K562细胞有明显的抑制作用.在0～200μg／mL范围内，呈现时间－计量依赖方式抑制白血病细胞的生长（P＜0.05或P＜0.01）；在200～800μg／mL的范围内，随LBP质量浓度的增大，细胞生长抑制程度逐渐减小.APS对K562细胞的增殖抑制作用结果见图2和表2，APS对人白血病K562细胞有明显的抑制作用.在0～400μg／mL范围内，LBP质量浓度越大对细胞生长的抑制程度越大；在400～800μg／mL的范围内，随APS质量浓度的增大，细胞生长抑制程度逐渐减小（P＜0.05或P＜0.01）；随着作用时间的增长，APS对细胞的抑制效果依次是：抑制率48h＞抑制率24h＞抑制率72h（P＜0.05或P＜0.01）.LLPS对K562细胞的增殖抑制作用结果见图3和表3，LLPS对人白血病K562细胞有明显的抑制作用.LLPS质量浓度越大对细胞生长的抑制程度越大，呈现计量依赖方式抑制白血病细胞的生长（P＜0.05或P＜0.01）；随着作用时间的增长，LLPS对细胞的抑制效果依次是抑制率48h＞抑制率24h＞抑制率72h（P＜0.05或P＜0.01）.对于3种多糖作用于K562细胞的实验发现，LBP在0～200μg／mL浓度范围内，随浓度的增大细胞抑制率逐渐增大，随作用时间的延长细胞抑制率增大，抑制率72h＞抑制率48h＞抑制率24h；APS在0～400μg／mL浓度范围内，随浓度的增大细胞抑制率逐渐增大，作用48h时抑制率最大，抑制率48h＞抑制率24h＞抑制率72h；LLPS随浓度的增大一直呈计量依赖型抑制细胞生长，作用48h时抑制率最大，抑制率48h＞抑制率24h＞抑制率72h.LLPS对K562的抑制效果明显强于LBP和APS.单铁英研究表明肿瘤细胞都有其自身的生长规律，一般G0／G1期时间最长，故G0／G1期细胞比率最高，而G2／M期时间较短，处于G2／M期细胞比率最低.LBP作用的肿瘤细胞被阻止于G2／M期，更多的细胞损伤过重，超过了自身修复能力，难以通过G2期限制点而发生凋亡［16］.华自森研究APS对K562细胞的作用，流式细胞术显示处于细胞静止期（G0／G1期）的肿瘤的一般治疗手段就是放疗、手术和化疗，但放化疗的毒副作用及手术治疗的费用昂贵，使得肿瘤治疗效果并不理想［3，14］.因此，从具有滋补功效的中草药中开发具有抗肿瘤作用的活性成分已成为目前抗肿瘤研究的热点［18］.枸杞具有益气养血扶正之力，当归具有补血通经活络之气，女贞子具有滋阴降火解毒之效.有研究表明，临床上女贞子常与其他中药配伍，用于治疗肿瘤及改善化疗后的白细胞减少等症状［19］.本实验通过MTT法对LBP、APS、LLPS作用后的K562进行了研究，发现这3种多糖对肿瘤细胞均表现出较强的抑制活性，这为今后多种中药多糖在保健或药物方面的开发提供一定的参考价值.3种中药多糖联合作用于同类细胞的作用机制及有效成分的筛选还有待于进一步研究.【相关文献】［1］吴晓忠，罗素琴，刘乐乐，等.中药多糖抗肿瘤作用的研究进展［J］.内蒙古医学院学报，2009，31（1）：81-83.［2］刘锡建，肖稳发，曹俭，等.枸杞多糖的研究进展［J］.上海工程技术大学学报，2008，22（4）：299-302.［3］黄霞，肖丙秀，赵军伟，等.枸杞多糖对人肝癌 HepG2生长的影响及其分子机制［J］.中草药，2010，41（9）：1501-1503.［4］梁淑轩，马二红，许成燕，等.枸杞多糖的硒化及其对人宫颈癌细胞的抑制作用［J］.食品科学，2010，31（9）：243-246.［5］崔涛，李梅君，赵艳春.枸杞多糖对K562白血病细胞抑制作用及凋亡的研究［J］.锦州医学院学报，2006，27（1）：30-34.［6］李璘，邱荣丽，程革，等.女贞子多糖抗肿瘤作用研究［J］.中国药理学通报，2008，24（12）：1619-1622.［7］阮红，吕志良.女贞子多糖免疫调节作用研究［J］.中国中药杂志，1999，24（11）：691-693.［8］韦玮，龚晓苏，张铁军，等.当归多糖类成分及其药理作用研究进展［J］.药物评价研究，2009，32（2）：130-134.K562细胞数量增加，增殖活跃的细胞数量减少，表明APS能阻止K562细胞由 G0／G1 向S，G2＋M 移行［9］.卢晓沅对LLPS的抗肿瘤研究表明可能的机理是对G0G1期细胞起细胞毒作用，在G2M期抑制细胞增殖［17］.本实验研究发现，在一定的浓度下，APS和LLPS在作用48h后细胞的抑制率最大，而LBP在作用72h后细胞的抑制率最大，这可能与3种中药多糖关于细胞周期的抗癌机制有关.［9］华自森，王建伟，宋姝丹，等.当归多糖对K562白血病细胞JAK2，STAT3表达和活化的影响［J］.解剖杂志学，2009，32（1）：8-11.［10］曾炜炜，钱江潮，周海霞，等.当归多糖诱导K562白血病细胞凋亡的实验研究［J］.现代中西医结合杂志，2007，16（2）：165-167.［11］宋姝丹，王建伟，王亚平，等.当归多糖对K562细胞增殖抑制及定向红系细胞分化的实验研究［J］.重庆医科大学学报，2008，33（1）：1-5.［12］司徒镇强.细胞培养［M］.北京：世界图书出版公司，2007：1-362.［13］齐浩，艾霞.AFM观察稳恒磁场对细胞表面精细结构的影响［J］.电子显微学报，2009，28（2）：150-156.［14］郝玉栓，袁征，单铁英，等.枸杞多糖对实验性食管癌大鼠食管癌细胞的生长抑制作用［J］.职业与健康，2010，26（22）：2601-2602.［15］蒋艳，姜孝新.枸杞多糖对肝癌Hca-F荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及研究［J］.肿瘤药学，2011，1（4）：391-394.［16］单铁英，赵如同，杨书良，等.枸杞多糖对人肝癌细胞Bel-7402的抑制作用及凋亡的研究［J］.时珍国医国药，2010，21（8）：1928-1929.［17］卢晓沅，陈志良，王春霞.女贞子化学成分及其药理作用研究概况［J］.中药材，2006，29（6）：625-629.［18］黄文书，杨海燕，武运，等.枸杞多糖的提取及体外抗肿瘤作用的研究［J］.中国食品与营养，2008（5）：38-40.［19］万年青.贞灵饮对肿瘤化疗患者生活质量及免疫功能的影响［J］.浙江中医杂志，2007，42（5）：292-293.［20］吕金超，宋慧，苏玲，等.4种真菌粗多糖提问抗肿瘤作用研究［J］.安徽农业科学，2010，38（13）：7170-7161.［21］朱彩平，张声华，肖军霞.枸杞多糖诱导人宫颈癌 Hela细胞凋亡的形态学研究［J］.食品科学，2010，31（19）：329-334.［22］崔晓燕，罗琼，杨明亮，等.枸杞多糖对人宫颈癌细胞生长及细胞凋亡影响［J］.中国公共卫生，2006，22（12）：1411-1412.［23］季宇彬.中药多糖的化学与药理［M］.北京：人民卫生出版社，2005. ［24］徐小平，李新民.中药方剂药理学［M］.北京：军事医学科学出版社，2010.。
多糖抗肿瘤作用机制的研究进展
１ １ 多耱 对 非 特 异 性 免 疫 功 能 的 影 响 巨 噬 细 胞 是 体 内执 行 非特 异 性 免 疫 的主 要 细 胞 ， 巨 噬 细 胞 的 数 量 减 少 或 功 能 当 低 下时， 瘤的发生率增加 ， 肿 已有 的肿 瘤 生 长 加 速 。但 是 ， 未 活 化 的 巨噬 细 胞 吞 噬 作 用 有 限 ， 在体 外 培养 不 能杀 伤 肿 瘤 细 胞， 因此 巨噬 细胞 的 激 活 可 提 高 机体 抗 肿瘤 的 能 力 有 多 种 多 糖 的抗 肿 瘤 作 用 被 认 为 与 活 化 的 巨 噬 细 胞 参 与 机 体 免 疫 功 能 的提 高 有 密切 联 系 ， 香菇 多 糖 能 增 加 小 鼠腹 腔 巨 噬 细 如 胞 的 绝 对 数 量 ， 种 作 用 在 体 内 给 药 后 的 第 ５天 达 到 高 这 峰 。Ｓｐ ａ２ 化 学 发 光 法 证 明 它 激 活 了小 鼠 巨 噬 细 胞 株 Ｊ ｉｋ ¨ 用 Ｃ ＭＯ， 体 内 能 够 选 择 性 地 显 著 提 高 小 鼠腹 腔 内毒 性 巨 噬 ４ 在 细 胞 的 活 性 。此 外 ， 人 参 胡 、 芪 芝 、 耳 等 植 物 中 从 柴 黄 灵 银 分 离 提取 的 多糖 都 能 显 著增 强腹 腔 巨 噬细 胞 的吞 噬功 能 巨 噬 细胞 表 面 存 在 多糖 受 体０ ， 明春 等 通 过 对 灵 芝 多 ］李 糖 的一 系列 研 究 ， 为 多 糖 激 活 巨 噬 细 胞 可 能 与 受 体 配 体 结 认
１ ２ 多耱 时 特 异 性 免 疫 功能 的影 响
恶 性 肿 瘤 患 者 由 于化
抗肿瘤海洋多糖研究进展
关键 词 ： 海洋多糖； 抗肿瘤； 海洋植物； 海洋动物； 海洋微生物
海洋 中蕴藏着丰富的生物资源 ， 海洋生物 的种类约 占地球生 抑 制 作 用 。羊 栖 菜 Ｓ ｒａｓｍ ｓ ｎｐ ｙ ｕ 中 提 取 的 多 糖 成 分 ａｇｓｕ ｔ ｏ］ ｌ ｍ ｅ ｔｌ 物总量的 ８ ７％ 。这 些 生 物生 活在 一 个 具 有 一 定 水 压 ， 高盐 度 ， Ｓ ｒ 具 有 抗 血 管 生 成 活 性 和 抗 癌 细 胞 的 细 胞 毒 活 性 ｊ 鼠尾 较 ａｇ Ａ 。 较小温差 ， 有限溶氧 ， 限光照的海水化缓 冲体系 中。由于特 殊 藻 Ｓ ｒａｓｍ ｔｕ ｂｒｉ多糖具有抗 癌 ， 虫 ， 病毒 和抗 溃疡 的 有 ａｇ ｓ ｎｅ ｉ ｕ ｈ ｇ 驱 抑 的生活环境 ， 导致海 洋生 物体 内多 糖 的合成 过程 与陆地 生物 不 作用 。从 鼠尾 藻 中提 取 的多 糖 组 分 Ｇ Ｖ—Ａ是 一种 岩 藻 多 糖 ， Ｉ 同， 并产生许多结 构新 颖作 用特 殊 的活性物 质 。多糖 是其 中 该 多 糖在 ２ ｇｋ 剂 量 下 能 显 著 抑 制 埃 利 希 腹 水 瘤 ， 多糖 ０ｍ ／ ｇ的 该 大 类 海 洋 生 物 活 性 物 质 ， 各 种 海 洋 生 物 中 分 离 的 多 糖 ， 来 能够 增 强 巨 噬 细胞 的 噬菌 作 用 ， 明 岩 藻 多 糖 的抗 癌 活 性 与其 免 由 从 说
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生物多糖抗肿瘤作用机制研究进展
ＰＭｍ的吞噬功能及其刺激指数（ＳＩ）显著高于对照组。Ｈ．Ｐ． Ｒａｍｅｓｈ等【８１研究液明，胡芦巴毕乳糖配甘露聚糖提漪大鼠 黢黢ＭｄＰ懿吞邀活性及入港怨缨憨Ｈ４Ｃ５璞殪稻免痰球蛋 白Ｍ分泌的活化作用。 ２．２．２活化Ｔ、Ｂ淋巴细胞在体内细胞免疫和体液免疫过
作用，并且不同浓度的螺旋藻多糖均可明显抑制肝癌细胞中
调脂、保肝镣多种功能，其中多糖的抗肿瘤作用及免疫调节
活性作用倦受关注，笔嚣对近年来多糖抗肿瘤作用机制的研 究递震俸一综述。 ｌ对肿瘸的直接抑制作用 郑维发等…以Ｓｍ肉癯为肿瘤模型，检测燎盐隐杆藻胞 韩多糖（ＥＰＡＨ）对瓣瘸燕长酶搀麓活往；ＭＴｒ浚检嚣ＥＰＡＨ 对ｓ。∞肉瘸细胞、Ｓｍｅｅ７７２１肝癌细胞和ＨｅＬａ细胞的体外抑 制活性。研究发现，ＥＰＡＨ有显著的抗肿瘤活性，并能直接作 矮子辫瘸缨胞，｛枣裁瓣瘘生长。震德嚣等Ｒ３骚究发褒螺旋藻 多糖对体外培养的人肝癌细胞ＨｅｐＧ－２具有明照的抑制增皴
《LactobacilluspantherisTCP102胞外多糖的提取纯化和功能特性研究》范文
《Lactobacillus pantheris TCP102胞外多糖的提取纯化和功能特性研究》篇一一、引言乳酸菌是一类广泛存在于人体肠道中的有益微生物，其产生的胞外多糖（Exopolysaccharides, EPS）具有多种生物活性，如增强免疫力、抗肿瘤、降血压等。
Lactobacillus pantheris TCP102作为一种具有潜力的乳酸菌株，其胞外多糖（EPS）的提取纯化和功能特性研究具有重要意义。
本文旨在探讨Lactobacillus pantheris TCP102胞外多糖的提取纯化方法，并对其功能特性进行深入研究。
二、材料与方法1. 材料（1）菌种：Lactobacillus pantheris TCP102；（2）培养基：MRS培养基；（3）试剂：乙醇、丙酮、氯化钠等。
2. 方法（1）胞外多糖的提取：采用离心法、超声波法等；（2）纯化：采用透析法、柱层析法等；（3）功能特性研究：通过体外实验、动物实验等方法。
三、胞外多糖的提取与纯化1. 提取将Lactobacillus pantheris TCP102接种于MRS培养基中，培养至对数生长期，离心收集上清液。
采用离心法、超声波法等方法进行胞外多糖的提取。
其中，离心法是通过高速离心使菌体与上清液分离，收集上清液中的多糖；超声波法则是通过超声波对菌体进行破碎，释放出胞内和胞外的多糖。
经过多次试验，发现超声波法提取效果较好，能够获得较高纯度的胞外多糖。
2. 纯化纯化过程中，采用透析法、柱层析法等方法对提取的多糖进行纯化。
透析法是通过将多糖溶液置于半透膜中，利用浓度差使小分子物质透过膜而大分子物质留在膜内，从而达到纯化的目的。
柱层析法则是通过不同孔径的层析柱对多糖进行分级纯化。
经过纯化后的胞外多糖纯度较高，可用于后续的功能特性研究。
四、功能特性研究1. 体外实验通过体外实验研究Lactobacillus pantheris TCP102胞外多糖的生物活性。
菝葜的化学成分及药用价值研究进展
菝葜的化学成分及药用价值研究进展1. 菝葜的化学成分研究进展菝葜(Smilax glabra L.)是一种常见的中药材，具有丰富的药用价值。
对菝葜的化学成分进行了深入的研究，发现其中含有多种生物活性成分，如黄酮类、皂苷类、多糖类、甾体化合物等。
这些活性成分具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗菌、免疫调节等多种药理作用，为菝葜的临床应用提供了理论依据。
黄酮类化合物是菝葜的主要活性成分之一，包括芸香素、柚皮素、橙皮素等。
这些黄酮类化合物具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种药理作用，如柚皮素可以抑制人肝癌细胞的增殖，提高机体免疫力。
皂苷类化合物在菝葜中也占有一定比例，如皂角苷、大黄素等。
这些皂苷类化合物具有良好的抗炎、抗菌、抗氧化等药理作用，可用于治疗炎症性疾病和感染性疾病。
多糖类化合物是菝葜中的另一重要活性成分，主要包括淀粉、纤维素、黏蛋白等。
这些多糖类化合物具有良好的免疫调节作用，可以增强机体的免疫力，提高抵抗力。
多糖类化合物还具有抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等多种药理作用。
甾体化合物是菝葜中的一种重要活性成分，包括谷甾醇、豆甾醇等。
这些甾体化合物具有良好的抗炎、抗氧化、抗肿瘤等药理作用，可用于治疗炎症性疾病和肿瘤性疾病。
随着对菝葜化学成分研究的不断深入，其药用价值得到了更全面的展示。
有望通过对菝葜化学成分的进一步研究，开发出更多具有独特药理作用的新型药物，为人类健康事业作出更大的贡献。
1.1 植物内含物分析菝葜(Dioscorea bulbifera Thunb.)是一种具有悠久药用历史的中草药，其根茎富含多种生物活性成分。
对菝葜的化学成分及药用价值的研究取得了显著进展，本文将对菝葜的主要内含物进行简要介绍。
菝葜中含有丰富的多糖类化合物，菝葜根茎中的多糖主要为淀粉、果胶和纤维素等。
淀粉是菝葜的主要能量来源，具有较高的生物利用度；果胶和纤维素则具有一定的药理作用，如抗肿瘤、抗氧化、降血糖等。
菝葜中还含有丰富的黄酮类化合物，黄酮类化合物是一类具有广泛生物活性的天然产物，具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤等多种药理作用。
多糖化学改性方法及其生物活性的研究进展
多糖化学改性方法及其生物活性的研究进展摘要多糖的化学修饰是一种重要的多糖结构修饰方法，是增强多糖生物活性、降低其副作用的有效途径。
文中综述了几种目前多糖化学改性常用的无机酸酯化方法，以及目前国内外对于化学改性多糖制备及其生物活性的研究现状。
关键词多糖，化学改性，生物活性，研究进展多糖是存在于众多有机体中一类具有丰富结构多样性的特殊生物高分子，多糖作为某些生物转化识别过程中的关键物质已被人们深入地认识，天然多糖已具有许多优异性能，如抗肿瘤、抗病毒、抗感染、抗氧化、抗诱变等，多糖这些生物活性的发挥与其结构有关，利用糖残基上的羟基、羧基、氨基等基团，对多糖进行分子表面修饰，可以进一步改善多糖的诸多性能，甚至获得具有特定结构的功能新材料。
多糖衍生物的强抗病毒活性已经在临床应用上得到了充分的证明，因而对多糖结构进行适当修饰是多糖领域研究的重点之一。
多糖醚化和酯化反应是最具多样性的多糖改性方法，因为通过这两种方法可以很容易获得各种性能优异具有生物来源的新材料。
本文主要介绍多糖无机酸酯化方法及其生物活性，将新颖的酯化方法、全面的结构解析和明确的的构效关系相结合必将推动多糖在生物工程、医药等诸多领域的应用。
1多糖结构表征方法及部分多糖结构多糖含有易于发生酯化反应的伯羟基、仲羟基和羧基，以及可以转化为氨基化合物的-NH2。
要了解衍生化过程中多糖骨架可能发生的所有结构变化，需在改性前尽可能全面地对多糖结构进行分析。
因为即使多糖类型相同，多糖的化学结构包括分支、糖原连接顺序、链中的氧化部分(如葡聚糖中的醛基、酮基和羧基)和残余的天然杂质均可能存在差异，尤其是在真菌和植物多糖中。
1. 1多糖结构表征方法要完全阐明一个糖的结构一般需要提供以下几方面的信息:⑴分子量及组成单糖的种类与摩尔比;⑵各糖环的构象(呋喃型或吡喃型)与异头碳的构型;⑶各糖残基间的连接方式;⑷糖残基的连接顺序;⑸二级结构及空间构象等;以及常用到的方法(见表1)。
多糖抗肿瘤作用的研究进展
多糖抗肿瘤作用的研究进展作者：赵青松尹鸿萍来源：《科学与财富》2018年第05期摘要：近年来，多糖在抗肿瘤方面发挥着越来越重要的作用，具有效果显著、毒副作用低的特点。
多糖的抗肿瘤作用体现在提高机体免疫功能和直接杀伤肿瘤细胞两个方面。
本文通过阐述多糖抗肿瘤机制来介绍近年来多糖在免疫调节和抗肿瘤方面的研究进展。
关键词：多糖；抗肿瘤；作用机制；进展1 前言多糖是由10个以上的单糖以不同的方式通过糖苷键连接而成的天然化合物，在动物、植物和微生物中分布非常广泛。
各种研究现已表明，多糖一般具有多种作用：抗肿瘤、免疫调节、降血脂、抗病毒、抗辐射、抗氧化、抗炎、降血糖、保肝等。
本文旨在通过阐述多糖的抗肿瘤机制对近年来多糖在免疫调节和抗肿瘤方面的研究进展进行总结以及展望。
2 多糖通过免疫调节发挥抗肿瘤作用2.1 活化T、B淋巴细胞从海洋真菌phoma herbarum YS4108中提取的多糖YCP可为T细胞活化提供第二信号，能有效促进CD80、CD86的表达[1]。
桑黄多糖不但对T淋巴细胞的增殖具有促进作用，而且还能激活B淋巴细胞，可以有效抑制肿瘤细胞的生长和转移。
龙葵多糖对T淋巴细胞来说是一种很好的激活剂，可提高CD4/CD8比值，具有增强肿瘤患者免疫功能的作用。
2.2 活化巨噬细胞研究发现，多糖能明显增强巨噬细胞的活性。
用土人参多糖（TTP）处理RAW264.7小鼠巨噬细胞，发现TTP能诱发巨噬细胞对肿瘤细胞的细胞溶解作用，264.7上清液在体外的毒性明显增强[2]。
平菇多糖通过激活巨噬细胞NF-κB信号通路活化巨噬细胞，使其分泌多种活性物质，如TNF-α、IL-6、NO等，并且能增强巨噬细胞的吞噬能力。
2.3 提高自然杀伤细胞的活性研究发现，不管是低浓度还是高浓度的枸杞多糖加入到培养的NK细胞中，均能够起到增强NK细胞活性的作用，促进其释放TNF-α、IL-2、IFN—γ等细胞因子，发挥抗肿瘤作用[3]。
硕士论文_糖的分离纯化、结构鉴定及体外抗氧化活性研究
安徽大学硕士学位论文糖的分离纯化、结构鉴定及体外抗氧化活性研究姓名：胡婷婷申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：王述声2010-04中文摘要本文以海藻裙带菜为原料、对裙带菜硫酸多糖的提取、分离纯化、理化性质、结构分析、体外抗氧化活性等方面进行了较为系统的研究，结果如下：1. 本研究采用酸提醇沉的方法进行提取，先用稀盐酸(pH=2)浸泡，再在60℃中浸提6h, 提取两次，加入90%乙醇，静置过夜，真空干燥，得裙带菜粗多糖。
此条件下粗多糖得率为2.4%。
粗多糖经链酶蛋白酶及Sevag法脱蛋白后，蛋白脱除率88.5%, 脱蛋白后的蛋白含量仅为1.51%。
然后经DEAE-Sephadex A-25离子交换柱分离，用0-2M NaCl溶液进行连续梯度洗脱，分部收集，苯酚-硫酸检测多糖含量，通过该实验来确定适宜的NaCl浓度，再用阶段洗脱方法进行大量制备样品，得到裙带菜硫酸多糖两种组分S1、S2，而后再经Superdex-200、Sephacryl S-300柱层析两种方法进行纯度鉴定，苯酚硫酸法跟踪检测，所得峰形单一、狭窄对称，说明S1、S2已是均一化的多糖。
2. 裙带菜硫酸多糖（S1、S2）的性质研究。
通过苯酚硫酸法、硫酸咔唑法、考马斯亮兰法、凝胶过滤法、玫瑰红酸钠等方法对其理化性质进行分析测定。
结果如下：总糖含量分别为40.54%、33.50%，糖醛酸含量为12.97%、9.98%，蛋白含量为1.39%、1.41%，分子量为150000、94620，硫酸根含量高达34.29%、33.99%，是高度硫酸化的多糖。
本研究采用溶剂解离的方法对其做了脱硫酸化处理得脱硫酸化多糖（DS-1、DS-2），跟踪检测显示其硫酸根含量显著下降，硫酸根脱除率为82%。
3. 裙带菜硫酸多糖的结构研究。
通过气相色谱法，红外光谱法、气质联用等手段对S1、S2的结构进行了初步研究。
结果如下：S1、S2均由鼠李糖（Rha）、半乳糖(Gal)、木糖（Xyl）、葡萄糖醛酸(GlcA)组成，但两者的摩尔比不同，其中鼠李糖(Rha)的含量最大，摩尔比分别达到51.44mol%、40.30mol%，其次还含有半乳糖和木糖，并含有少量葡萄糖醛酸, 故可将S1、S2命名为裙带菜硫酸化异鼠李聚糖。
Pantoea ananatis G-14细菌胞外多糖的体外抗氧化活性及抗肿瘤活性研究
Pantoea ananatis G-14细菌胞外多糖的体外抗氧化活性及抗肿瘤活性研究韩蓓;罗文娟;于燕;胡森科;张瑞娟【摘要】本研究对从水果样品中新分离的一株Pantoea ananatis G-14菌株进行发酵,分离胞外多糖,并对其体外抗氧化活性及抗肿瘤活性进行了初步分析.该胞外多糖具有较高的清除DPPH自由基和羟自由基的能力,5mg/mL时其清除率分别为65.5％和60.4％;同时该胞外多糖也具有一定的还原性、清除超氧阴离子自由基及抑制脂质过氧化的活性.结果还显示7 mg/mL的粗提多糖对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制率达到69.4％,而且其抑制效果具有显著的浓度依赖性.G-14胞外多糖是一种有效的生物活性物质,值得进一步开发研究.【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2013(025)011【总页数】6页(P1494-1498,1561)【关键词】Pantoea ananatis G-14;发酵;胞外多糖;抗氧化活性;抗肿瘤活性【作者】韩蓓;罗文娟;于燕;胡森科;张瑞娟【作者单位】西安交通大学医学院公共卫生系;陕西省营养与食品安全工程研究中心,西安710061;西安交通大学医学院公共卫生系;西安交通大学医学院公共卫生系;陕西省营养与食品安全工程研究中心,西安710061;西安交通大学医学院公共卫生系;陕西省营养与食品安全工程研究中心,西安710061;西安交通大学医学院公共卫生系;陕西省营养与食品安全工程研究中心,西安710061【正文语种】中文【中图分类】Q939.9;R979.1多糖，也称多聚糖(polysaccharide，PS)，是一大类在自然界中广泛存在的生物体所产生的具有多种活性的生物高分子。
多数细菌在生长过程中可向环境分泌多糖，称为胞外多糖(exopolysaccharide，EPS)，其具有可溶性、可降解性、对人和环境无毒等特点，并且具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抑菌等生理活性［1，2］。
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第27卷第4期2008年12月大连工业大学学报Journal of Dalian Polytechnic U niversityVol.27No.4Dec.2008文章编号:167421404(2008)0420289205鲍鱼内脏多糖的体外抗肿瘤和免疫调节活性研究王莅莎, 朱蓓薇, 孙黎明, 李冬梅(大连工业大学生物与食品工程学院,辽宁大连 116034)摘要:从鲍鱼内脏中提取活性多糖,为提高鲍鱼内脏的附加值,促进鲍鱼的综合利用和开发提供理论和技术支持。
鲍鱼内脏经碱性蛋白酶和胃蛋白酶处理后,用Sephadex G 2100凝胶柱过滤层析分离出两个多糖组分,AV P Ⅰ和AV P Ⅱ,其多糖质量分数分别为66.41%和51.84%;蛋白质量分数为1.70%和15.55%;分子质量为272和6ku ;它们具有相同的单糖组成,但各种单糖的相对含量不同,AV P Ⅰ中鼠李糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖的摩尔比为1.00∶2.15∶4.00∶5.36∶33.18∶45.14,而AV P Ⅱ中上述多糖的摩尔比则为1.00∶1.46∶1.33∶4.98∶16.08∶12.51;体外抗肿瘤结果显示,AV P Ⅰ和AV P Ⅱ对Hela 细胞和K562细胞具有一定的抑制作用;体外免疫检测发现,AV P Ⅰ和AV P Ⅱ能够增强淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞吞噬功能和N K 细胞的杀伤能力。
研究结果表明,鲍鱼内脏多糖具有抗肿瘤和免疫调节功能,可用于免疫增强性功能食品的开发。
关键词:鲍鱼;内脏;多糖;抗肿瘤;免疫调节中图分类号:TS201.2;Q513.2文献标志码:AAntitumor and immunomodulating activity in vitro ofthe polysaccharide from Haliotis Discus Ha nnai InoWANG Li 2sha , ZH U Bei 2wei , SUN Li 2ming , LI Dong 2mei(School of Biological &Food Engineering ,Dalian Polytechnic University ,Dalian 116034,China )Abstract :The polysaccharides AV P Ⅰand AV P Ⅱare ext racted fro m t he viscera of H aliotis DiscusH annai Ino and separated o n Sep hadex G 2100column.The polysaccharide content s of AV P ⅠandAV P Ⅱare 66.41%and 51.84%,and t he p rotein content s are 1.70%and 15.55%respectively.The molecular masses of AV P Ⅰand AV P Ⅱare 272and 6ku.AV P Ⅰand AV P Ⅱcontain t he same mono saccharide including rhamno se ,glucose ,xylose ,manno se ,galactose and f uco se ,t he ratio of which for AV P Ⅰis 1.00∶2.15∶4.00∶5.36∶33.18∶45.14,whereas AV P Ⅱis 1.00∶1.46∶1.33∶4.98∶16.08∶12.51.AV P Ⅰand AV P Ⅱcould rest rain t he proliferation of Hela and K562cell in vit ro.AV P Ⅰand AV P Ⅱcan dose 2dependently induce a significant increase in lymp hocyte p roliferation ,p hagocytosis of macrop hage and nat ural killer cell activity in vit ro.The abalone viscera can be used potentially as an immuneomodulating agent.K ey w ords :H aliotis Discus H annai Ino ;viscera ;polysaccharide ;antit umor ;immuneomodulating收稿日期:2008204201.基金项目:国家国际科技合作重大项目(2006DFA32580);国家高技术研究发展计划项目(863计划)(2007AA091804).作者简介:王莅莎(19822),女,硕士研究生;通信作者:朱蓓薇(19572),女,教授.0 引 言鲍鱼是一种海洋单壳软体贝类,属软体动物门、腹足纲、原始腹足目、鲍科[1]。
鲍鱼是名贵的海产品,具有很高的营养价值,富含蛋白质、肝糖、多种氨基酸、维生素、微量元素及其他生理活性物质[2]。
近年来,鲍鱼的药用价值也为现代医学认可。
相关研究表明,鲍鱼体内存在具有抗肿瘤[328]、免疫调节[7210]、抗应激[9]等功能的生物活性物质。
在鲍鱼深加工过程中,大量鲍鱼内脏被丢弃,造成相当大的经济损失和环境污染。
为提高鲍鱼内脏的利用价值,本文从鲍鱼内脏中提取多糖,并考察其体外抗肿瘤和免疫调节活性,为鲍鱼内脏的深加工和综合开发奠定基础。
1 材料与方法1.1 材 料1.1.1 药品与试剂皱纹盘鲍内脏由大连獐子岛渔业集团股份有限公司提供。
丝裂霉素C(mitomycin C,MCC)、Hank’s平衡盐缓冲液购自Solarbio公司;四甲基偶氮唑盐[32(4,52dimet hylt hiazol222yl)22,52 dip henyltetrazolium bromide,M T T]、二甲亚砜(DMSO)、台盼兰染液、青霉素、硫酸链霉素、胰蛋白酶为Amresco公司产品;RPM I21640购自G ibco公司;胎牛血清购自中国医学科学院血液学研究所;牛血清白蛋白、右旋糖酐标准品(1、5、12、80、270ku)购自Fluka公司。
其他化学试剂均为分析纯。
1.1.2 动物与瘤株10只雌雄各半18～20g SPF级Balb/c鼠[SCXX(沪)200720005]购自上海斯莱克实验动物有限责任公司;人白血病细胞(K562)和人宫颈癌细胞(Hela)购自大连医科大学实验动物中心。
1.2 方 法1.2.1 鲍鱼内脏粗多糖的提取及分离纯化将新鲜的雌性鲍鱼内脏冷冻干燥,粉碎,过20目筛,待用。
将雌性鲍鱼内脏粉溶解于硼酸2氢氧化钠缓冲液(p H10.0),配制成5%的样品溶液。
向样品溶液中加入2%的碱性蛋白酶(以蛋白含量计),于45℃孵育3h。
调p H值至中性,沸水浴灭酶10min,4000r/min离心10min,收集上清液。
将沉淀按上述过程再提取一次,合并上清液并浓缩,用3倍体积95%乙醇于4℃下沉淀所提取的鲍鱼粗多糖。
将得到的粗多糖溶于KCl2HCl缓冲液(p H 2.0),加入胃蛋白酶(酶加量为2000U/g蛋白),37℃酶解3h后,调中性、灭酶、离心、收集上清液、醇沉、复溶后再冻融,收集其中的可溶性多糖即为鲍鱼内脏多糖(abalone viscera polysaccharide,AV P),冻干,待用。
将250g鲍鱼内脏多糖溶于20mL去离子水,上样于以5倍柱体积0.9%NaCl平衡过的Sep hadex G2100(2.5cm×80cm)凝胶过滤层析柱。
用0.9%NaCl以0.5mL/min的流速进行洗脱,每12min收集一管样品。
采用苯酚2硫酸法检测多糖组分,以280nm处的吸光值来检测蛋白质含量。
分离出两个具有不同分子质量的多糖组分,定义为A VPⅠ和A VPⅡ。
将这两个组分分别收集、浓缩、透析、冻融及冻干以进行后续实验。
1.2.2 多糖的分子质量测定AV PⅠ和AV PⅡ在Sep haro se CL26B (1.0cm×86cm)琼脂糖凝胶柱层析过程中,以标准右旋葡聚糖为标准品,做出回归方程,计算样品AV PⅠ和AV PⅡ的分子质量分布范围。
1.2.3 多糖的单糖组成分析采用乙酰化方法,以肌醇为内标。
5.0mg样品在120℃下于三氟乙酸(TFA)中水解2h,除酸后加入肌醇及Na2CO3溶液,于30℃水浴保温50min。
再加入硼氢化钠(NaB H4),室温保温1.5h,25%乙酸中和,用p H6.0阳离子交换树脂除盐、过滤、蒸馏水洗涤并移入水解管、干燥。
再加入正丙胺、吡啶、乙酸酐,在90℃保温1h,真空干燥,加入无水二氯甲烷溶解沉淀,沉淀溶解后离心、取上清,气相色谱检测。
气相色谱检测条件为:进样口温度250℃;压力171.9kPa;总流速40.5mL/min;柱压171.8kPa;柱流速0.5mL/min;检测器温度300℃;H2流速40mL/min;空气流速450mL/min;N2流速45mL/min。
1.2.4 鲍鱼内脏多糖的体外抗肿瘤活性测定采用M T T比色法[11]测定鲍鱼内脏多糖的体外抗肿瘤活性。
取复苏的K562细胞和Hela细胞,以含10%的胎牛血清和100U/mL青霉素和100μg/mL 硫酸链霉素的RPM I1640培养基为完全培养基,调整成一定浓度的细胞悬液,置于37℃含5% CO2饱和湿度培养箱内培养。
取对数生长期的K562细胞和Hela细胞,用完全培养基调细胞浓度为1×105个/mL,加入96孔培养板中,200μL/孔,然后加入不同浓度的鲍鱼内脏多糖溶液(以完全培养基配制并用0.22μm微孔滤膜过滤除菌)4μL;同时设终浓度为2μg/mL的丝裂霉素C(MMC)为阳性对照;阴性对照则加入相应体积的完全培养基;每组做4个平行;于37℃5%CO2饱和湿度的培养箱中培养48h,在培养结束前4h,于每孔中加入20μL M T T(5mg/mL),继续孵育4h后,离心,弃上清,加入150μL DMSO,15min后,用酶标测定仪于490nm处测定吸光度,并按式(1)计算抑瘤率。
抑瘤率=(1-OD样品/OD对照)×100%(1)092大 连 工 业 大 学 学 报第27卷1.2.5 鲍鱼内脏多糖对小鼠淋巴细胞增殖的影响用M T T比色法测定鲍鱼内脏多糖对淋巴细胞增殖活性的影响。
首先,制备小鼠脾淋巴细胞。
用颈椎脱臼法处死小鼠并于75%乙醇中消毒5min,在无菌条件下,剪开皮肤和腹壁,剥离脾脏,研碎脾脏制备单细胞悬液,200目尼龙网过滤,用0.83%氯化铵(N H4Cl)除去红细胞,用Hank’s液洗3次, 1000r/min离心15min弃上清,加入完全培养基。