三叶青的化学成分及其体外抗肿瘤活性研究_林婧

三叶青干燥全草 （ 2 kg ） ， 用 10 倍量体积分数 80% 甲醇回流提取 3 次， 每次 1 h， 回收甲醇得流浸 用热水超声混悬， 用石油醚萃取后余下的 膏 146 g， 水溶液过 D101 大孔吸附树脂柱 （ 5. 5 cm × 60 cm ） 30% ， 70% ， 粗分， 用 不 同 体 积 分 数 的 乙 醇 （ 10% ， 95% ） 梯度洗脱， 各 5 000 mL， 收集体积分数 70% 乙 醇洗脱部分（ 48. 5 g ） 经硅胶柱 （ 100 ～ 200 目 ） 色谱 分离， 以二氯甲烷甲醇（ 250∶ 1 →10∶ 1 ） 梯度洗脱， 每 200 mL 收集 1 份， 2， 3， 4 …。 第 9 ～ 15 号 编号为 1 ， 合并得到化合物 1 （ 88 mg） ， 第 22 ～ 32 号合并， 采用 硅胶 200 ～ 300 目石油醚乙酸乙酯（ 50∶ 1 →20∶ 1 ） 梯 3 （ 18 mg ） ， 度洗脱得到化合物 2 （ 8 mg ） ， 第 46 ～ 52 号合并采用 Sephadex LH － 20 凝胶色谱 （ 三氯甲烷甲醇 1∶ 1 ） 得到化合物 4 （ 12 mg） 、 第 64 ～ 78 号合并， Sephadex LH － 20 凝胶色谱 （ 三氯甲烷甲醇 = 1∶ 1 ） 结合 Waters 质谱引导自动纯化系统分离制备得化合 6 （ 8 mg ） 和 7 （ 8 mg ） ， 第 87 ～ 102 号合 物 5（ 12 mg ） ， ODS 柱色谱分离结合自动纯化系统分离制备得化 并， 9（ 32 mg） ， 10（ 22 mg） 和 11（ 7 mg） ， 合物 8（ 15 mg） ， 第 79 ～ 85 号合并采用 ODS 柱色谱分离结合自动纯化系 13（ 18 mg） 。 统分离制备得化合物 12（ 25 mg） ， 3 结构鉴定 mp 137 ～ 138 ℃ ， 化合物 1 ： 无色针状结晶， 与 βChin Pharm J， 2015 April， Vol. 50 No. 8 · 659·
·论
著·
三叶青的化学成分及其体外抗肿瘤活性研究
1 2 2 2 1， 2， 3* 2* ， 林婧 ， 纪明妹 ， 黄泽豪 ， 于虹敏 ， 许文 范世明
（ 1． 福建中医药大学中西医结合研究院， 福州 350122 ； 2． 福建中医药
大学药学院， 福州 350122 ； 3． 福建中医药大学生物医药研发中心， 福州 350122 ）
Chemical Constituents of Whole Plants of Tetrastigma hemsleyanum and Their Antitumor Activities
2， 3* LIN Jing1 ，JI Mingmei2 ，HUANG Zehao2 ，YU Hongmin2 ，XU Wen1， ，FAN Shiming2* （ 1 ． Academy of Integra-
The compounds were isolated by various column chromatography. Their structures were identified by spectroscopic meth-
ods including 1 HNMＲ，13 CNMＲ，MS，HＲMS，etc. The antiproliferative activity of the purified flavonoids compounds were evaluated by MTT assay against HepG2 ，HCT8 ，and A549 tumor cells. ＲESULTS Thirteen compounds were isolated and identified as βsitosterol （ 1 ） ，palmitic acid （ 2 ） ， heptadecanoic acid （ 3 ） ， apigenin （ 4 ） ， quercitrin （ 5 ） ， kaempferitrin （ 6 ） ， kaempferol3Oneohesperidoside （ 7 ） ，apigenin6CDglucopyranoside （ 8 ） ，apigenin8CLrhamnopyranosyl（ 12） Dglucopyranoside （ 9 ） ，apigeβαβnin8CDglucopyranoside （ 10 ） ，apigenin8CDglucopyranoside（ 14） Dglucopyranoside （ 11 ） ，orientin （ 12 ） ，and isooriβββentin （ 13 ） . CONCLUSION Compounds 4 － 6 and 8 － 13 were isolated from T. hemsleyanum for the first time. The flavonoids of T. hemsleyanum showed inhibitory activity on HepG2 ，HCT8 ，and A549 tumor cells. KEY WOＲDS： Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg； chemical constituent； antitumor activity
tive Medicine，Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122 ，China； 2 ． School of Pharmacy，Fujian University of Traditional Chinese Medicine， Fuzhou 350122 ， China； 3 ． Centre of Biomedical Ｒesearch ＆ Development， Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122 ，China） ABSTＲACT： OBJECTIVE METHODS To study the chemical constituents and antitumor activity of Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg.
分离鉴定 13 个化合物， 分别为 β谷甾醇 （ 1 ） 、 十六烷酸 （ 2 ） 、 十七烷酸 （ 3 ） 、 芹菜素 （ 4 ） 、 槲皮苷
（ 5） 、 3， 7OL3O6CD8CL山柰酚二鼠李糖苷 （ 6 ） 、 山柰酚新橙皮糖苷 （ 7 ） 、 芹菜素β吡喃葡萄糖苷 （ 8 ） 、 芹菜素α吡喃 （ 12） D8CD8CD（ 14） D鼠李糖β吡喃葡萄糖苷 （ 9 ） 、 芹菜素β吡喃葡萄糖苷 （ 10 ） 、 芹菜素β吡喃葡萄糖β吡喃葡萄 糖苷（ 11 ） 、 荭草素（ 12 ） 、 异荭草素（ 13 ） 。结论 关键词： 三叶青； 化学成分； 抗肿瘤活性 doi： 10. 11669 / cpj. 2015. 08. 002 中图分类号： Ｒ284 文献标志码： A 文章编号： 1001 － 2494 （ 2015 ） 08 － 0658 － 06 8 ～ 13 系首次从该植物中分离得到 ， 化合物 4 ～ 6 ， 体外噻唑蓝活性筛选表明三 叶青黄酮类化合物具有一定的抗肿瘤细胞增殖作用 。
摘要： 目的
研究三叶青全草的化学成分及其体外抗肿瘤活性 。 方法
1 运用多种色谱技术分离三叶青中化学成分 ， 采用 H-
13 NMＲ、 CNMＲ、 MS、 HＲMS 等波谱技术确定化合物结构 。以噻唑蓝法， HCT8， A549 3 种肿瘤细 测试各黄酮化合物对 HepG2 ，
胞的体外抑制作用。结果
三叶青是葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤 （ Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg ） ， 别名蛇附 石猴子、 石老鼠、 拦山虎、 雷胆子、 破石珠、 阴灵 子、 子、 三叶扁藤、 金丝吊葫芦， 主要分布在我国福建、 浙 江、 江苏、 江 西 等 地， 有 活 血 散 瘀、 解 毒、 化痰的作 ［1 ］ 用 。现代药理研究表明， 三叶青具有抗炎、 抗肿
［1 ］ 瘤、 抗病毒、 调节免疫 等活性， 并广泛用于多种中 成药或保健品， 如华佗风痛宝、 结石康胶囊、 金丝地
金芪片等。 目前对三叶青化学成分的研究 甲胶囊、 还较少， 至今为止从该植物中分离得到化合物主要 有黄酮类、 三萜甾醇类、 有机酸类等成分， 黄酮类化 ［2 ］ 合物有 9 个： 李瑛琦等 从三叶崖爬藤中分离并鉴
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通讯作者： 许文， 男， 研究实习员
研究方向： 中药药效
Tel： （ 0591 ） 22861217
Email： yaoxuexuwen@ qq. com； 范世明， 男， 高级实验师
研究方向： 中药鉴定与资源评价研究
Email： r3570379@ 163. com 中国药学杂志 2015 年 4 月第 50 卷第 8 期
Chin Pharm J， 2015 April， Vol. 50 No. 8
3O定了 3 个黄酮： 山柰酚， 槲皮素， 山柰酚新橙皮 ［34 ］ 糖苷； 刘东等 从三叶崖爬藤中分离并鉴定了 4 个 7OL3OD黄酮苷： 山柰酚β吡喃鼠李糖β吡喃 6CL（ 14） L葡萄糖苷， 芹菜素α吡喃鼠李糖α8CL（ 1吡喃阿拉伯糖苷， 芹菜素α吡喃鼠李糖L6， 8CD4） α吡喃阿拉伯糖苷； 芹菜素二β吡喃
三叶青中分离得到的三萜类和甾醇类化合物有 7 ［6 ］ ［2 ］ 个： 刘东等 和李瑛琦等 从三叶青中分离到 β谷 甾醇， 蒲公英萜酮， 蒲公英萜醇， 麦角甾醇， α香树脂 ， ， 6'O 。 醇 胡萝卜苷 苯甲酰基胡萝卜苷 三叶青中 从 分离得到的有机酸类化合物有 13 个： 刘东等 没食子酸， 没食子酸乙 三叶青中分离得到水杨酸， 酯， 丁二酸， 三十二酸； 霍昕等 MS 从三叶 采用 GC青块根乙醚提取物中分析得到了 8 个脂肪酸： 豆蔻 酸， 十五烷酸， 棕榈酸， 十七烷酸， 硬脂酸， 油酸， 亚油 亚麻酸甲酯。 此外， 从三叶青中还分得白藜芦 酸， 3， 3'醇， 二十五烷， 甘露醇， 环四谷氨肽， 二甲氧基 ［3 ， 5 ］ 4O葡萄糖苷 及其他类挥发性化合 鞣 花 酸物