抗菌药物敏感试验(实验)
抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt生物技术实验教学中心课件
8.联合药物敏感试验
1）方法很多，其中纸片法最为常用。先将试验菌均 匀涂布于培养基表面，盖好平皿，放置5分钟，待 平板表面水分吸收后，将两种含药纸片贴于平板 上，两纸片中心距离2--4mm左右。然后35℃ 孵育 过夜，取出观察结果。
2）结果判断 联合药物敏感试验可出现四种结果： A.无关作用： 甲+乙=甲单或乙单 B.拮抗作用： 甲+乙＜甲单或乙单 C.相加作用： 甲+乙=甲单+乙单 D.协同作用： 甲+乙＞甲单+乙单
三、实验操作步骤
（一）纸片扩散法：
1. M-H平板：直径为90mm，厚度 4mm。 2. 菌悬液制备：无菌挑取菌落于无菌生理盐水中，校
正浊度至0.5 麦氏。 3. 用无菌棉签浸入细菌悬液中，将棉签在试管壁上轻
轻挤压以挤去过多的菌液，用棉签以连续划线的方 式均匀涂抹琼脂平板表面三次（每次转60℃）使 菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。盖上 平板的盖子，放置3~10min。
一、实验目的：
1. 掌握纸片扩散法（K-B法）的原理、操作方法、结 果的判读及临床意义。
2. 了解各种稀释法抗生素敏感性试验的原理、操作 方法、结果判读和临床意义。
3. 掌握纸片扩散法的质量控制，了解稀释法的质量 控制。
二、实验原理
1. 抗菌药物敏感性试验是测定抗生素或其他抗 微生物制剂在体外抑制细菌生长的能力。这 种能力可以通过稀释或扩散方法来测定。
六、影响因素：
1. 培养基：厚度，PH，离子浓度，成份，添加剂； 2. 抗菌药物的配制方法，纸片的含量，大小，
渗透性，保存方式等； 3. 细菌的接种量； 4. 培养的环境，温度与时间； 5. 结果的判断及解释标准等。
4.每个孔加入100ul浓度为105菌悬液（大肠或金 葡），混匀，胶布封口，37°C培养。
4.抗菌药物的敏感性试验
肠球菌属：青霉素 、万古霉素 、甲氧苄啶/磺胺异
噁唑 、庆大霉素、环丙沙星、红霉素、氨苄西林
不动杆菌属：头孢他啶 、亚胺培南、阿米卡星、哌拉 西林/他唑巴坦、头孢吡肟 、头孢曲松 、环丙沙 星、米诺环素； 洋葱伯克霍德菌：头孢他啶 、米诺环素、甲氧苄啶/磺 胺异噁唑 、美罗培南 ；
嗜麦芽窄食单胞菌：甲氧苄啶/磺胺异噁唑、左氧氟沙 星、米诺环素 ；
嗜血杆菌属：氨苄西林、甲氧苄啶/磺胺异噁唑、头孢
他啶、美罗培南、阿奇霉素、环丙沙星、头孢克洛；
淋病奈瑟菌：头孢曲松、环丙沙星、青霉素、大观霉素、
四环素 ；
肺炎链球菌：红霉素 、苯唑西林 、甲氧苄啶/磺胺异噁唑、 克林霉素、左氧氟沙星、四环素、万古霉素 ； 除肺炎链球菌外的其他链球菌：红霉素、青霉素、克 林霉素、万古霉素、头孢曲松、左氧氟沙星。
5.盖上平板的盖子，放置培养箱内孵育，放置3~10分钟 后贴上标准抗生素纸片。
6.根据选择的菌株挑选相应的抗菌纸片。
肠杆菌科：氨苄西林、阿米卡星、哌拉西林/ 他唑巴坦、头孢噻肟、环丙沙星、亚胺培 南、氨曲南、庆大霉素； 铜绿假单胞菌：头孢他啶、庆大霉素、哌拉西林、 阿米卡星、环丙沙星、头孢吡肟、亚胺培南； 葡萄球菌属：头孢西丁、青霉素、红霉素、万古霉 素、环丙沙星、庆大霉素、利福平 ；
操作方法：1.抗菌药物的稀释和融解
2.抗菌药物母液的稀释
3.在微量聚乙烯微板孔中加入各种不同浓度的抗生素
100μ l，从低浓度往高浓度加样，不需要更换吸管。
4.挑选18~24小时的菌落置M-H肉汤增菌4~6小时。
5.制备0.5麦氏比浊管，然后1:200稀释，使之最终 浓度105 CFU/ml。
6.孵育后形成一椭圆形抑菌圈，抑菌圈和试条的相交
四抗菌药物敏感性试验
四、抗菌药物敏感性试验（一）药敏试验的目的测定病原微生物对化学治疗药物敏感性的试验称为化疗药物敏感性试验（Drug sensitivity test），简称药敏试验。
药敏试验的主要目的是：①用于测定新的抗菌药物或制剂的抗菌谱；②对病灶分离菌进行流行病学调查，主要应用于测定细菌经过多年后敏感性的变化情况和地区特异性；③在临床治疗感染性疾病时，针对病原菌选择合适的首选药物品种。
（二）药敏试验的原理及种类药敏试验是通过培养基培养的细菌确定细菌对药物的敏感性方法。
将被检菌接种在适当的培养基上，然后加上不同种类或不同浓度的抗菌药物（或制剂），观察细菌生长发育的速度和程度。
用药后，细菌在培养基上停止生长并且死亡，抑菌圈清晰，说明细菌对药物敏感，药物表现有较强的杀菌作用；用药后，细菌停止生长，但液体培养基经过一定时间后还可能出现浑浊或固体培养基上的抑菌圈不清晰，说明细菌对药物比较敏感，预示药物对被检细菌只是起抑菌作用。
通常判定一种药物对细菌的杀菌或抑菌作用的强度指标是固体培养基中抑菌圈的大小，但这也不是绝对的，因为抑菌圈的大小与药物对培养基的渗透性是密切相关的。
药敏试验方法较多，但在原理上不外乎是稀释法和扩散法两大类。
而扩散法（包括纸片法、管碟法）通常适用于临床治疗选择药物。
（三）常用培养基制作法1．普通肉汤培养基牛肉浸膏 3.0克蛋白胨 10.0克氯化钠 5.0克蒸馏水 1000毫升放在三角烧瓶中，微温溶解后，调节pH值至7.4~7.6，煮沸10分钟，冷却后的pH值为7.2±0.2。
15磅压力下灭菌15分钟（115℃灭菌30分钟）即得。
本培养基可用作为固体、鉴别、选择等培养基制造的基础原料，大部分细菌都能在其中生长。
1．普通肉汤琼脂培养基照上述普通肉汤培养基的配方及制法，加入15~20克琼脂，加热溶解后，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟，即得。
3．0.5%葡萄糖肉汤培养基蛋白胨 10克氯化钠 5克葡萄糖 5克牛肉浸膏 3克蒸馏水 1000毫升微温溶解后，调节pH值至弱碱性，煮沸后，加葡萄糖溶解，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟，即得。
第4章抗菌药物敏感试验
第4章抗菌药物敏感试验一、需氧菌和兼性厌氧菌的体外抗菌药物敏感试验1.扩散法（K-B法）（1）原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在接种有待检菌的琼脂平板上，该点称为抗菌药源。
药物向周围扩散，形成了随着药源距离增加，琼脂中药物浓度递减的浓度梯度。
在药源周围可抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，形成无菌生长的透明圈即抑菌圈，其大小可以反映待检菌对测定药物的敏感性，并与该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
（2）实验材料①培养基：采用水解酪蛋白（M-H）琼脂，pH为7.2，琼脂厚度4mm。
对生长条件要求高的细菌，如链球菌属细菌需加入5%脱纤维羊血，嗜血杆菌属细菌需加入1%血红蛋白（含Ⅴ因子）和1%Ⅹ因子复合物。
②抗菌药物纸片：选用直径为6.35mm，吸水量20μl的专用药敏纸片。
制备时取灭菌药敏纸片，经加样或浸泡药物溶液后冷冻干燥，置4℃保存备用，在有效期内使用。
③接种菌液挑取平板上形态相同的菌落4～5个，接种于3～5ml M-H肉汤中，于35℃中培养2～8h。
嗜血杆菌属和链球菌属细菌需用加血肉汤培养过夜。
用生理盐水或肉汤校正菌液至0.5麦氏比浊标准（相当于1.5×109/ml的含菌量）后在15min内接种。
（3）试验方法以无菌棉拭蘸取已制备好的菌液（其浊度为0.5麦氏比浊标准），在M-H琼脂表面均匀涂布接种3次，每次平板旋转60°，最后沿平板内缘涂抹１周。
平板置室温干燥3～5min，后用无菌镊子或专用纸片分配器将含药纸片贴于琼脂表面。
纸片应贴得均匀，各纸片中心相距＞24mm，纸片距平板内缘＞15mm。
直径为90mm的平板可贴6张纸片。
纸片贴牢后应避免再移动。
平板室温放置15min后倒置于35℃培养箱中培养16～18h后读取结果。
（4）结果解释平板置黑色背景上，从背面量取包括纸片直径在内的抑菌圈直径，单位为mm。
培养基中如果加有血液须打开皿盖从正面测量抑圈菌。
药敏反应实验报告
一、实验目的1. 了解药敏试验的基本原理和操作流程。
2. 掌握最小抑菌浓度（MIC）的测定方法。
3. 分析细菌对不同抗菌药物的敏感性，为临床合理用药提供依据。
二、实验原理药敏试验是一种体外试验方法，用于检测细菌对特定抗菌药物的敏感性。
通过观察细菌在含有不同浓度抗菌药物的培养基中的生长情况，可以确定最小抑菌浓度（MIC），即抑制细菌生长的最低药物浓度。
根据CLSI标准，将细菌对药物的敏感性分为敏感、中介和耐药三种。
三、实验材料1. 菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等。
2. 抗菌药物：青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星等。
3. 培养基：MH肉汤、MH琼脂、MH培养基。
4. 仪器：恒温培养箱、微量移液器、无菌操作台、显微镜等。
四、实验方法1. 菌株培养：将待测菌株接种于MH肉汤培养基中，37℃培养24小时，备用。
2. 制备药敏纸片：将不同浓度的抗菌药物溶解于无菌生理盐水中，制成药敏纸片。
3. 点种细菌：将培养好的菌株用无菌棉签涂布于MH琼脂平板上，待菌落生长后，用无菌镊子将药敏纸片贴于平板表面。
4. 观察结果：将平板置于37℃恒温培养箱中培养24小时，观察细菌生长情况，记录抑菌圈直径。
5. MIC测定：将培养好的菌株用无菌生理盐水稀释至一定浓度，分别加入不同浓度的抗菌药物，观察细菌生长情况，记录抑制细菌生长的最低药物浓度。
五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均敏感。
2. 大肠杆菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均耐药。
3. 肺炎克雷伯菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均中介。
六、讨论1. 药敏试验是临床合理用药的重要依据，通过测定细菌对药物的敏感性，可以指导临床医生选择合适的抗菌药物，避免滥用和误用。
2. 本实验结果显示，金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均敏感，提示临床治疗金黄色葡萄球菌感染时，可以选择这些药物进行治疗。
抗菌药物敏感性试验执行标准
抗菌药物敏感性试验执行标准抗菌药物敏感性试验是临床微生物学中非常重要的一项实验，它可以帮助医生选择最有效的抗菌药物来治疗感染性疾病。
执行标准的严格性和准确性对于试验结果的可靠性至关重要。
下面将介绍抗菌药物敏感性试验执行标准的相关内容。
首先，进行抗菌药物敏感性试验前，需要准备好所需的培养基、试验材料和各种试剂。
同时，要做好实验室的消毒和无菌操作，以确保试验的准确性和可靠性。
在进行试验时，需要按照严格的操作规程进行。
首先，要准备好待测菌株的悬浮液，然后按照一定比例将其接种到含有不同浓度抗菌药物的琼脂平板上。
接种后，要在恒温培养箱中进行培养，培养时间一般为16-18小时。
培养结束后，需要观察菌落的生长情况，并进行相关的数据记录和分析。
根据菌落的生长情况和抗菌药物的浓度，可以判断出菌株对抗菌药物的敏感性。
在记录和分析数据时，要注意细致入微，确保数据的准确性和可靠性。
在执行标准中，对试验结果的解释和判定也非常重要。
根据试验结果，可以判断出菌株对抗菌药物的敏感性、耐药性或者中间敏感性。
这些判定对于临床治疗具有指导意义，可以帮助医生选择最合适的抗菌药物来治疗感染性疾病。
此外，在执行标准中，还需要对试验过程中可能出现的干扰因素进行控制和排除。
比如，培养条件、试剂质量、操作技术等都可能对试验结果产生影响，需要在试验过程中进行严格的控制和调节。
总的来说，抗菌药物敏感性试验执行标准的严格性和准确性对于试验结果的可靠性至关重要。
在实验过程中，需要严格按照操作规程进行，确保试验过程的准确性和可靠性。
同时，对试验结果的解释和判定也非常重要，可以帮助医生选择最合适的抗菌药物来治疗感染性疾病。
在执行标准中，还需要对试验过程中可能出现的干扰因素进行控制和排除，以确保试验结果的准确性和可靠性。
抗菌药物敏感试验实验
无菌试管、刻稀释法
K-B法操作方法
操作注意事项：
菌液应在15分钟内接种完毕 接种后，平板放置时间不要超过5min 注意纸片距离
肉汤稀释法操作方法
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
M-H肉汤(ml)
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
抗生素(ml) 菌液(ml)
2
2
2
2
2
2
2
2
2弃 －
去
0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
35℃孵育16~18h，观察结果
实验内容
第二次 1.观察K-B法的结果 2.观察肉汤稀释法的结果
K-B法结果解释
测量抑菌圈直径，参照CLSI的标准解释结果。
20mm
金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验结果判断
大肠埃希菌抗菌药物敏感性试验结果判断
实验目的 1.掌握纸片扩散法（K-B法）和肉汤稀释法
的原理、操作方法、结果的判读及其临床 意义。 2.掌握纸片扩散法和肉汤稀释法的质量控制。
实验内容 纸片琼脂扩散法（K-B法） 肉汤稀释法
实验器材
1. 菌种： 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌 2. 培养基：水解酪蛋白琼脂（MH琼脂）、MH肉汤 3. 抗菌纸片：青霉素（PEN）、庆大霉素（GEN）、
抗菌药物的敏感性试验
15
第四节 抗菌药物敏感性 试验的方法
16
纸片扩散法
► 原理 ► 材料
：培养基 、药敏纸片 ► 试验菌液的制备 ⑴ 直接菌落悬液法（direct colony suspension method） ⑵ 生长法（growth method）
17
Hale Waihona Puke 纸片扩散法► 接种 ► 贴药敏纸片 ► 孵育
► 结果判读
14
中介
►
一些抗菌药物敏感试验结果的表示方法还包括“中介” （intermesiate，I），它包含几层不同的意思： (1)抗菌药对感染菌的MIC接近该药在血液和组织中 的浓度，感染菌的临床应答率可能低于敏感菌； (2)结合药代动力学资料分析； (3)若某药在高剂量使用时是安全的（如β -内酰胺类 药物），则中介意味着高剂量给药可能奏效； (4) 中介的数据位置处于敏感与耐药之间，它可作为 一个缓冲带
► 其它抗菌药物：①抑制蛋白质合成的抗
菌药，如氯霉素；②作用于细胞膜的脂 肽类抗生素，如多粘菌素B；③抑制RNA 合成的药物，如利福平；④抑制细胞壁 合成的药物，如磷霉素。
9
药敏试验用药的选择依据和方法
► 致病菌的固有耐药特点 ► 本地流行株的耐药谱和耐药趋势 ► 药物的活性和毒性
► 药物的价格及其供应情况
3
抗菌药物敏感性试验的目的
► 测定细菌对抗菌药物的敏感性 ► 地区性耐药监测 ► 评价新药的抗菌药效
► 分析医院感染流行株的药敏谱
4
抗菌药物敏感性试验的指征
当某些致病菌或条件致病菌的药敏特点不能 从其种属特征上了解时，或其药敏结果易变时，这 些菌的临床分离株必须进行药敏试验。如：肠杆菌 科的细菌、革兰阴性葡萄糖非发酵菌、葡萄球菌属 和肠球菌属的细菌等.
细菌药敏试验概述
3
药物分组
判断折点
标准菌株质控范围
特殊的耐药监测
敏感性分类(CLSI的定义)
敏感（Susceptible）
用常规用量治疗有效 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的
MIC 5倍以上。
耐药（Resistance）
用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度
5.平板置室温干燥3~5分钟，用无菌镊子或纸片分配器 将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面，一旦纸片贴上，不 能移动；各抗菌纸片中距离应大于24mm，纸片距平板 内缘应大于15mm。
6.盖上平板的盖子，置35℃培养箱内孵育16~18小时后 阅读结果，对苯唑西林和万古霉素敏感等应孵育24小 时。
7.用游标卡尺或直尺量取 抑菌环直径，根据CLSI标 准，报告细菌对该抗生素
敏感性分类（2）
中介 (Intermediate)
MIC接近血、体液中药物的浓度，治
疗反应率低于敏感株
药物生理浓集部位有效 (尿-FQ) 加大用药剂量可能有效
缓冲区：防止操作的系统误差造成重
大结果的判定错误
药敏试验的方法学
半定量…纸片扩散法 (抑菌圈直径)
MIC法：
稀释法(肉汤、琼脂) 自动化仪法 抗生素连续梯度法 (Etest ) 流式细胞仪
第四章
抗菌药物敏感试验
黄露萍
抗菌药物敏感试验
测定抗菌药物在体外对病原微生物有无
抑菌或杀菌作用的方法称为抗菌药物敏
感性试验（Antimicrobial Susceptibility
Test），简称药敏试验（AST）。
药敏试验的意义
预测抗菌治疗的效果；
抗菌药物敏感性试验(药敏试验)
平板孵育规定时间（一般为18-24h）后读 取结果，葡萄球菌和肠球菌必须孵育24h以 检测苯唑西林和万古霉素的耐药性。
孵育16-18h 后检查每一块平板
如果划线满意，接种物准确无误，抑菌圈应 为正圆形，菌落应融合生长
磺胺异恶唑
所有菌属
所有磺胺类
萘啶酸（敏感） 肠杆菌科
头孢噻吩/头孢 肠杆菌科 唑啉（敏感）
所有喹诺酮类敏感 所有头孢菌素敏感
万古霉素 氨苄西林
革兰阳性杆菌 肠球菌属
替考拉宁 青霉素
B组药物
细菌对A组同类药物耐药，可选择性报告 报告指征
特定的标本来源 多种细菌感染 多部位感染 对A组药过敏、耐受或无效 以流行病学调查为目的向感染控制部门报告
用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻 压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距 ≥24mm,纸片中心距平皿边缘≥15mm。 直径90mm的平板最好贴6张。
15min内将平板倒置放温箱孵育。
注意
纸片一旦贴下就不可再挪动位置，因纸 片中的药物已扩散到琼脂中。 需要时应在适当的地方贴新纸片
孵育
必须用35℃孵箱（苛氧菌药敏平板应置 于5% CO2 环境）
菌液浓度为1.5×108/ml 质控菌株
金黄色葡萄球菌 ATCC 25923 大肠埃希菌 ATCC 25922 铜绿假单胞菌 ATCC 27853
操作方法
菌液制备
挑取已纯化的4~5个菌落制备菌悬液
生长法
挑选琼脂平板上3~5个形态特征一致的菌 落，用接种环接触每个菌落顶部
转移至4~5mL 适宜的液体培养基中（如 胰酶消化大豆胨肉汤）
置35℃孵育2-6 h 用无菌生理盐水或肉汤校正，使其浊度至
抗菌药物敏感性试验
方法：
菌液制备：生理盐水校正测试菌和质控菌至 0.5麦氏比浊标准，再用MH肉汤稀释到 107CFU/ml；
加菌液：用微量加样器取0.1ml稀释菌液由低 到高加于各排试管中，其最终的接种量为 5×105 CFU/ml。测试菌排、测试菌生长对照 管加测试菌液；质控菌排、质控菌生长对照 管加质控菌液。
实验内容
常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测 方法介绍。
纸片扩散法。 肉汤稀释法。
一、常用抗菌药物敏感性试验与耐药 检测方法介绍
纸片扩散法（Kirby-Bauer test） 稀释法（dilution test） E试验法（E test） 联合药物敏感试验 特殊耐药菌及耐药酶的表型检测
耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的检测 β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测等
二、纸片扩散法（K-B法）
原理：
含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上， 纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断向纸片周 围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度 范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
抗菌药物
青霉素 苯唑西林 万古霉素 庆大霉素 红霉素 克林霉素 磺胺药
纸片含药量
10U 1μg 30μg 10μg 15μg 2μg 1.25/23.75μg
耐药 ≤28 ≤10 — ≤12 ≤13 ≤14 ≤10
抑菌圈直径(mm)
中介
敏感
—
≥29
11～12
≥13
—
≥15
13～14
≥15
14～22
≥23
涂布接种：无菌棉拭蘸取菌液，在试管壁旋转挤去多 余菌液后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转 平板60º，最后沿平板内缘涂抹1周；
细菌药敏试验.
并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。
操作方法 ：
1.将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm的平板，其 厚度4mm。 2.无菌挑取孵育16～24h的血平板上4~5个菌落。
3.置于无菌生理盐水中，校正其浊度于McFarland No 0.5管。
4.用无菌棉签浸入细 菌悬液中，将拭子在 试管上壁轻轻挤压以 挤去过多的菌液。棉 签在三个方向均匀抹 琼脂表面（每次转 60℃）使菌液均匀分 布，最后沿平板内缘 涂抹一周。
M100-S20Tables：抗菌药物敏感性试验的实施标准 M2-A10：纸片扩散法敏感性试验的实施标准 M07-A8：需氧菌稀释法敏感性试验方法 M11-A7: 厌氧菌敏感性试验方法 M47-A8: 血培养的原则和步骤
M35-A2: 细菌及酵母样真菌的鉴定方法简本
* M100 每年更新一次 **M2, M7 每三年更新一次
纸片扩散法（Kirby-Bauer法）
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼
脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后 不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周 围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无 菌生长的透明圈即为抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，
0. 0.
MIC的分布
药代动力学和药效学
药代动力学：药物吸收，分布，代谢，排泄 药效学：药物对机体的作用
时间依赖型（％T>MIC〕：β-内酰胺类，大环内酯类
浓度依赖型（AUC/MIC比率〕：AGS, FQ
这些参数可用于计算具有最佳药效的给药方案
MIC与抑菌圈直径的线性关系
Log2. MIC
药敏试验折点的建立
1. MIC的分布 2. 药代动力学和药效学 定 MIC的折点 3. 临床疗效和细菌清除率 4. 抑菌圈直径的分布 ………定抑菌圈折点
抗菌药物敏感性试验
面向外。 5)孵育，置平板于35℃孵育16-24h。
20
6.孵育后形成一椭圆形抑菌圈，抑菌圈和试条的相交处的刻度即 为抗菌药物对该菌的最低抑菌浓度(MIC) 。
椭圆形细菌生 长抑制区
24
抑菌浓度指数（FICI）
FICI ＝
A药联合时的MIC A药单测的MIC
＋
B药联合时的MIC B药单测的Hale Waihona Puke ICFICI ﹤1为协同作用；
FICI =1为累加作用；
FICI﹥1 为拮抗或无关作用，无关时药物组合的MIC 等于浓度高的药物的MIC。
25
2、抗菌药物的杀菌活性 （1）最低杀菌浓度（MBC）
11
（5）孵育：放于35℃孵箱中，通常于16-18h后，测量抑菌环直径。
12
（6）测量抑菌环直径
13
（7）与解释标准核对得出结论 敏感(susceptible, S)：所分离菌株能被测试药物使用推荐剂量时在感 染部位可达到的药物浓度所抑制。 耐药 (resistant, R)：所分离菌株不被测试药物常规剂量可达到的药 物浓度所抑制。
时的抗菌效果，其结果可以表现为协同、拮抗、累加和无关。
23
2）部分抑菌浓度指数（FICI）测定： 测定A、B两种药的MIC值，根据MIC值将两药配成不同浓度的
含药肉汤，将各浓度的A药和B药肉汤两两等量混合，组成棋盘模式 不同药物组合的含药肉汤。观察孵育后各行列中不长菌的最低药物 浓度管，即为药物组合的MIC值。
26
（2）时间杀菌试验（time-kill assay）
1）概念：是指能够使试验菌减少99.9%以上的最低药物浓度。 2）操作方法：分别取高于MIC值的各管中的菌药混合肉汤划线接种于
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35℃孵育16~18h，观察结果
实验内容
第二次
1.观察K-B法的结果 2.观察肉汤稀释法的结果
K-B法结果解释
测量抑菌圈直径，参照CLSI的标准解释结果。
20mm
金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验结果判断
大肠埃希菌抗菌药物敏感性试验结果判断
抗菌药物敏感性试验
王频佳 检验医学院
实验目的 1.掌握纸片扩散法（K-B法）和肉汤稀释法 的原理、操作方法、结果的判读及其临床 意义。 2.掌握纸片扩散法和肉汤稀释法的质量控制。
实验内容
纸片琼脂扩散法（K-B法） 肉汤稀释法
实验器材
1. 菌种： 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌 2. 培养基：水解酪蛋白琼脂（MH琼脂）、MH肉汤 3. 抗菌纸片：青霉素（PEN）、庆大霉素（GEN）、 阿米卡星（AMK）、环丙沙星（CIP） 4.庆大霉素稀释液：1支/桌（256U/ml） 5. 其它：MH肉汤、无菌刻度管、无菌棉签、镊子、 无菌试管、刻度尺（自带）
实验内容
第一次
1.K-B法 2.试管稀释法
K-B法操作方法
操作注意事项：
菌液应在15分钟内接种完毕
接种后，平板放置时间不要超过5min
注意纸片距离
肉汤稀释法操作方法
1 M-H肉汤(ml) 2
2 2
3 2
4 2
5 2
6 2
7 2
8 2
9 2
10 2
抗生素(ml)
菌液(ml)
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