抗菌药物敏感性试验
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实验四 抗菌药物敏感性试验
临床微生物学及检验
医学检验学院 病原生物学教研室
抗菌药物敏感性试验 （antimicrobial susceptibility test，AST）
1.概念：
简称药敏试验，是在体外测定抗菌药物抑 制或杀灭细菌的能力，是测定细菌对抗菌 药物敏感性的试验。
2
一 纸片琼脂扩散法 二 稀释法
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常量肉汤稀释法
实验材料：试管、MH肉汤培养基 抗菌药物溶液：储存液浓度5120mg/L，或为最高测试浓度的10倍。 分装密封低温储存。测试时做系列倍比稀释。 接种物：菌液终浓度为5×105CFU/ml：0.5McFarland标准菌液， 1:100稀释，与等量抗菌药物混合；稀释菌液划线接种检测纯度。
0.5麦氏比浊管、镊子、天平、无菌试管、无菌吸头等。
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（一）纸片琼脂扩散法（disk diffusion method）
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平 板上，药敏纸片中的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片 周围扩散形成递减的梯度浓度，药物形成类似于同心圆的等浓 度圈，当某一圈的药物浓度恰好刚刚能抑制细菌生长时，细菌 仅能在此圈外面生长而形成药敏纸片的抑菌圈。抑菌圈的大小 反应细菌对药物的敏感度，抑菌圈越大越敏感。
3
一、实验目的：
1.掌握纸片扩散法药物敏感试验（K-B法）的原理、方法、结果判读。 2.了解K-B法的质量控制。 3.熟悉肉汤稀释法药物敏感性试验的原理、操作方法、结果判读和临
床意义。
4
二、试验器材：
1.菌种：大肠埃希菌18-24h培养物。 2.MH平板、 MH肉汤。 3.药敏纸片、环丙沙星、无菌生理盐水、无菌棉签、刻度尺、
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抗菌药物对倍稀释
1
移液素
抗 生
管
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另设测试菌生长对照管一支不含药物。将已调节好的待测菌悬液 1mL加入各含药管内，使每mL含细菌约5×105CFU/mL。各试管置 35℃孵育16～24h后观察结果。质控菌对照按上述操作平行进行。
结果报告：MIC的测定（mg/L） ➢ MIC小于或等于敏感解释标准：敏感S ➢ MIC大于或等于敏感解释标准：耐药R ➢ MIC在敏感和耐药解释标准之间：中介I
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实验方法：
1.准备菌悬液：分别挑取临床菌株和标准菌株，用生长肉汤或生理 盐水调整至0.5麦氏浊度标准。
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2.涂布平板：无菌棉签在三个方向均匀抹琼脂表面（每次转60℃） 使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。
8Leabharlann Baidu
3.贴含药纸片：一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中心距离 应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。
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杆菌肽耐药
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实验结果：
左起第四管为药物最低浓度而无细菌生长，即待检菌的MIC
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临床微生物学及检验
医学检验学院 病原生物学教研室
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4. 孵育：放于35℃孵箱中，通常于16-18h后，测量抑菌环直径。
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5. 与解释标准核对得出结论 耐药 (resistant, R)：所分离菌株能被测试药物使用推荐剂量时在感 染部位可达到的药物浓度所抑制。 敏感(susceptible, S)：所分离菌株不被测试药物常规剂量可达到的药 物浓度所抑制。
中介(intermediate, I)：抗菌药物在生理浓集的部位具有临床效果。
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（二）稀释法药敏试验
稀释法（dilution method）药敏试验指在体外定量检测抗菌 药物对细菌抗菌活性的方法，是测定抗菌药物的最低抑菌浓 度MIC。 最低（小）抑菌浓度（minimal inhibitory concentration， MIC)：所测得的某抗微生物药能抑制检测菌肉眼未见生长的 最低浓度。 常量肉汤稀释法、微量肉汤稀释法、琼脂稀释法
临床微生物学及检验
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抗菌药物敏感性试验 （antimicrobial susceptibility test，AST）
1.概念：
简称药敏试验，是在体外测定抗菌药物抑 制或杀灭细菌的能力，是测定细菌对抗菌 药物敏感性的试验。
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一 纸片琼脂扩散法 二 稀释法
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常量肉汤稀释法
实验材料：试管、MH肉汤培养基 抗菌药物溶液：储存液浓度5120mg/L，或为最高测试浓度的10倍。 分装密封低温储存。测试时做系列倍比稀释。 接种物：菌液终浓度为5×105CFU/ml：0.5McFarland标准菌液， 1:100稀释，与等量抗菌药物混合；稀释菌液划线接种检测纯度。
0.5麦氏比浊管、镊子、天平、无菌试管、无菌吸头等。
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（一）纸片琼脂扩散法（disk diffusion method）
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平 板上，药敏纸片中的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片 周围扩散形成递减的梯度浓度，药物形成类似于同心圆的等浓 度圈，当某一圈的药物浓度恰好刚刚能抑制细菌生长时，细菌 仅能在此圈外面生长而形成药敏纸片的抑菌圈。抑菌圈的大小 反应细菌对药物的敏感度，抑菌圈越大越敏感。
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一、实验目的：
1.掌握纸片扩散法药物敏感试验（K-B法）的原理、方法、结果判读。 2.了解K-B法的质量控制。 3.熟悉肉汤稀释法药物敏感性试验的原理、操作方法、结果判读和临
床意义。
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二、试验器材：
1.菌种：大肠埃希菌18-24h培养物。 2.MH平板、 MH肉汤。 3.药敏纸片、环丙沙星、无菌生理盐水、无菌棉签、刻度尺、
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抗菌药物对倍稀释
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移液素
抗 生
管
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另设测试菌生长对照管一支不含药物。将已调节好的待测菌悬液 1mL加入各含药管内，使每mL含细菌约5×105CFU/mL。各试管置 35℃孵育16～24h后观察结果。质控菌对照按上述操作平行进行。
结果报告：MIC的测定（mg/L） ➢ MIC小于或等于敏感解释标准：敏感S ➢ MIC大于或等于敏感解释标准：耐药R ➢ MIC在敏感和耐药解释标准之间：中介I
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实验方法：
1.准备菌悬液：分别挑取临床菌株和标准菌株，用生长肉汤或生理 盐水调整至0.5麦氏浊度标准。
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2.涂布平板：无菌棉签在三个方向均匀抹琼脂表面（每次转60℃） 使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。
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3.贴含药纸片：一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中心距离 应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。
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杆菌肽耐药
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实验结果：
左起第四管为药物最低浓度而无细菌生长，即待检菌的MIC
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临床微生物学及检验
医学检验学院 病原生物学教研室
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4. 孵育：放于35℃孵箱中，通常于16-18h后，测量抑菌环直径。
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5. 与解释标准核对得出结论 耐药 (resistant, R)：所分离菌株能被测试药物使用推荐剂量时在感 染部位可达到的药物浓度所抑制。 敏感(susceptible, S)：所分离菌株不被测试药物常规剂量可达到的药 物浓度所抑制。
中介(intermediate, I)：抗菌药物在生理浓集的部位具有临床效果。
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（二）稀释法药敏试验
稀释法（dilution method）药敏试验指在体外定量检测抗菌 药物对细菌抗菌活性的方法，是测定抗菌药物的最低抑菌浓 度MIC。 最低（小）抑菌浓度（minimal inhibitory concentration， MIC)：所测得的某抗微生物药能抑制检测菌肉眼未见生长的 最低浓度。 常量肉汤稀释法、微量肉汤稀释法、琼脂稀释法