成纤维细胞生长因子21对二乙基亚硝胺诱导L02肝细胞癌变的抑制作用 李舒欢

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： 收 稿 日 期 ： ； 修 回 日 期 ： 。 作 者 简 介 ： 李 舒 欢 （ ）， 女 ， 主 要 从 事 肝 脏 疾 病 临 床 与 基 础 研 究 。 通 信 作 者 ： 韩 继 武 ， 电 子 信 箱 ： 。
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３４ 卷 ２期 ２０１８ 年 ２月 ㊀ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｈｅｐａｔｏｌ， Ｖｏｌ． ３４ Ｎｏ． ２， Ｆｅｂ． ２０１８ 临 床 肝 胆 病 杂 志 第 第
． 成 ２１ 对 Ｌ０２ 肝 李 舒 欢 ， 等 纤 维 细 胞 生 长 因 子 二 乙 基 亚 硝 胺 诱 导 的 细 胞 癌 变 的 抑 制 作 用
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qtlÀÁÉâã ２１ ½ksäåæçèé8 Ｌ０２ %ÀÁÄê8ßë;<
１５０００１ ） （哈 尔 滨 医 科 大 学 附 属 第 四 医 院 消 化 内 科 ，哈 尔 滨
㊀ 探讨成纤维细胞生长因子（ ＦＧＦ） ２１ 对二乙基亚硝胺（ ＤＥＮ） 诱导的 Ｌ０２ 肝细胞癌变的抑制作用。 方 ㊀ 培养 Ｌ０２ 摘 要 ： 目 的 法 肝细胞，分别用不同浓度的 ＤＥＮ（ １ 、１０ 、２０ 、５０ 、１００ 和 １５０ μｍｏｌ ／ Ｌ ） 作用， ＭＴＴ 法测定 ＤＥＮ 对 Ｌ０２ 肝细胞活力的影响，选择适当的 ＤＥＮ 刺激浓度（ ２０ μｍｏｌ ／ Ｌ） 进行后续实 验。 同 时，分别 采用 丙二 醛 （ ＭＤＡ ） 及超 氧 化物 歧化 酶 （ ＳＯＤ ） 检 测试剂 盒检 测 ＤＥＮ （ ２０ μｍｏｌ ／ Ｌ） 作用细胞和正常 Ｌ０２ 细胞内的 ＭＤＡ 及 ＳＯＤ 水平。 将 Ｌ０２ 肝细胞分为模型对照组（ ２０ μｍｏｌ ／ Ｌ ＤＥＮ ＋ ＰＢＳ 处理） 、ＦＧＦ２１ 低 剂量组（ ２０ μｍｏｌ ／ Ｌ ＤＥＮ ＋ １ μｍｏｌ ／ Ｌ ＦＧＦ２１ 蛋白） 和 ＦＧＦ２１ 高剂量组（ ２０ μｍｏｌ ／ Ｌ ＤＥＮ ＋ ２ μｍｏｌ ／ Ｌ ＦＧＦ２１ 蛋白） 。 细胞培养 １２ ｈ 后， 检测细胞内的 ＭＤＡ 及 ＳＯＤ 水平。 同时采用 Ｒｅａｌ － ｔｉｍｅ ＰＣＲ 和 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 检测 β － Ｋｌｏｔｈｏ（ ＫＬＢ） 的表达水平，并用 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 检 测蛋白激酶 Ｂ（ ＰＫＢ， 又称 ＡＫＴ） 磷酸化水平。 计量资料 ２ 组间比较采用 ｔ 检验，多组间比较采用方差分析，进一步两两比较采用 ＬＳＤ － ｔ 检验。
ｄｏｉ １０． ３９６９ ／ ｊ． ｉｓｓｎ． １００１ － ５２５６． ２０１８． ０２． ０２０ ２０１７ － ０８ － ０８ ２０１７ － ０８ － ２９ １９９０ － ｈａｎｊｉｗｕ０１０５＠ １２６． ｃｏｍ
Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ － ２１ ｏｎ ｔｈｅ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ｌ０２ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｄｉｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ
李 舒 欢 ，韩 继 武
结 果 ㊀ ＤＥＮ 作用于 Ｌ０２ 后细胞内 ＭＤＡ 水平明显升高，ＳＯＤ 水平显著下降，差异均有统计学意义（ ｔ 值分别为 ９． ３３６ 和
１６ ２８１ ，Ｐ 值分别为 ０． ０１１ 和 ０． ００４ ） 。 与模型对照组相比， ＦＧＦ － ２１ 低剂量组和 ＦＧＦ － ２１ 高剂量组细胞内 ＭＤＡ 水平下降、 ＳＯＤ 水 平升高（ Ｐ 值均 ＜ ０． ０５ ） ，且 ＦＧＦ２１ 高剂量组细胞内 ＭＤＡ 水平显著低于 ＦＧＦ２１ 低剂量组，差异有统计学意义（ Ｐ ＝ ０． ０３０ ） ，ＳＯＤ 水平 则高于 ＦＧＦ２１ 低剂量组，差异有统计学意义（ Ｐ ＝ ０． ０４２ ） 。 ＦＧＦ２１ 高剂量组与 ＦＧＦ２１ 低剂量组细胞内 ＫＬＢ ｍＲＮＡ 水平明显高于模 型对照组（ Ｐ 值均 ＜ ０． ００１ ） ，而 ＦＧＦ２１ 高剂量组 ＫＬＢ ｍＲＮＡ 水平高于低剂量组，差异有统计学意义（ Ｐ ＜ ０． ００１ ） ，ＫＬＢ 蛋白表达趋势 与 ＫＬＢ ｍＲＮＡ 相同。 模型对照组中磷酸化 ＡＫＴ（ ｐ － ＡＫＴ） 水平高于另外 ２ 组，同时 ＦＧＦ２１ 高剂量组 ｐ － ＡＫＴ 水平低于 ＦＧＦ２１ 低剂 量组，差异均有统计学意义（ Ｐ 值均 ＜ ０． ０５ ） 。
０． ０５
（ ） ，ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｌｏｗ － ｄｏｓｅ ＦＧＦ － ２１ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｈｉｇｈ － ｄｏｓｅ ＦＧＦ － ２１ ｇｒｏｕｐ ｈａｄ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＭＤＡ ａｎｄ ａ ｓｉｇ ，ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ． Ｔｈｅ ｈｉｇｈ － ａｎｄ ｌｏｗ － Ｐ ＝ ０． ０３０ ａｎｄ ０． ０４２ ） ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＳＯＤ （ ，ａｎｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈ － ｄｏｓｅ ｄｏｓｅ ＦＧＦ － ２１ ｇｒｏｕｐｓ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＫＬＢ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ （ Ｐ ＜ ０． ００１ ） ，ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａ ｓｉｇｎｉｆｉ Ｐ ＜ ０． ００１ ） ＦＧＦ － ２１ ｇｒｏｕｐ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＫＬＢ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｌｏｗ － ｄｏｓｅ ＦＧＦ － ２１ ｇｒｏｕｐ （ ｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ； ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＫＬＢ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｒｅｎｄ． Ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｈａｄ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ，ａｎｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈ － ｄｏｓｅ ＦＧＦ － ２１ ｇｒｏｕｐ ｈａｄ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｐ － ＡＫＴ ｔｈａｎ Ｐ ＜ ０． ０５ ） ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｐ － ＡＫＴ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ （ ｔｈｅ ｌｏｗ － ｄｏｓｅ ＦＧＦ － ２１ ｇｒｏｕｐ （ Ｐ ＜ ０． ０５ ） ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ ＤＥＮ ｃａｎ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎ Ｌ０２ ｃｅｌｌｓ． Ｂｙ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎ Ｌ０２ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＤＥＮ， ａｎｄ ｔｈｕｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＫＬＢ，ＦＧＦ － ２１ ｃａｎ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｐ － ＡＫＴ，
ＬＩ Ｓｈｕｈｕａｎ ＨＡＮ Ｊｉｗｕ． ｔｈｅｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＭＤＡ ａｎｄ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＳＯＤ ａｆｔｅｒ Ｌ０２ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＤＥＮ ｔ ＝ ９． ３３６ ａｎｄ １６． ２８１ Ｐ ＝ ０． ０１１ ａｎｄ ０． ００４ ． Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｔｈｅ
ｌｏｗ － ａｎｄ ｈｉｇｈ － ｄｏｓｅ ＦＧＦ － ２１ ｇｒｏｕｐｓ ｈａｄ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＭＤＡ ａｎｄ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＳＯＤ Ｐ ＜ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．
结 论 ㊀ ＤＥＮ 可增强 Ｌ０２ 细胞内氧化应激， ＦＧＦ２１ 通过上调 ＫＬＢ 表达，降低 ＡＫＴ 磷酸
化。
关 键 词 ： 肝细胞； 成纤维细胞生长因子； 二乙基亚硝胺； 氧化性应激 Ｒ７３５． ７㊀ ㊀ ㊀ 文 Ａ㊀ ㊀ ㊀ 文 １００１ － ５２５６ （ ２０１８ ） ０２ － ０３２１ － ０６ 中 图 分 类 号 ： 献 标 志 码 ： 章 编 号 ：
（ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ， Ｔｈｅ Ｆｏｕｒｔｈ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｈａｒｂｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｈａｒｂｉｎ １５０００１， Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ － ２１ （ ＦＧＦ － ２１ ）ｏｎ ｔｈｅ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ｌ０２ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｄｕｃｅｄ ｂｙ ｄｉｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ （ ＤＥＮ） ． Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ Ｌ０２ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ａｎｄ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＤＥＮ （ １， １０ ， ２０ ， ５０ ， １００ ，ａｎｄ １５０ μｍｏｌ ／ Ｌ） ． ＭＴＴ ａｓｓａｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ＤＥＮ ｏｎ ｔｈｅ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｌ０２ ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ａｎ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＥＮ （ ２０ μｍｏｌ ／ Ｌ）ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｙ． Ｔｈｅ ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ （ ＭＤＡ）ａｎｄ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ （ ＳＯＤ）ｄｅｔｅｃ ｔｉｏｎ ｋｉｔｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＭＤＡ ａｎｄ ＳＯＤ ｉｎ Ｌ０２ ｃｅｌｌｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ＤＥＮ （ ２０ μｍｏｌ ／ Ｌ）ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ Ｌ０２ ｃｅｌｌｓ． Ｔｈｅｎ Ｌ０２ ｃｅｌｌｓ ，ｌｏｗ － ｄｏｓｅ ＦＧＦ － ２１ ｇｒｏｕｐ （ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ （ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ２０ μｍｏｌ ／ Ｌ ＤＥＮ ａｎｄ ＰＢＳ） ２０ μｍｏｌ ／ Ｌ ＤＥＮ ＋ １ μｍｏｌ ／ Ｌ ，ａｎｄ ｈｉｇｈ － ｄｏｓｅ ＦＧＦ － ２１ ｇｒｏｕｐ （ ＦＧＦ － ２１ ） ２０ μｍｏｌ ／ Ｌ ＤＥＮ ＋ ２ μｍｏｌ ／ Ｌ ＦＧＦ － ２１ ） ． Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＭＤＡ ａｎｄ ＳＯＤ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ａｆｔｅｒ １２ ，ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ＫＬＢ） ｈｏｕｒｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ． Ｒｅａｌ － ｔｉｍｅ ＰＣＲ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ βＫｌｏｔｈｏ （ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｂ （ ｐ － ＡＫＴ ） ． Ｔｈｅ ｔ － ｔｅｓｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｄａｔａ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ；ａｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｇｒｏｕｐｓ， ａｎｄ ｔｈｅ ｌｅａｓｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｔ － ｔｅｓｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｆｕｒ