Tris-Tricine-SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒
SDS-PAGE电泳试剂配制
SDS-PAGE电泳试剂配制SDSPAGE 电泳试剂配制在生物化学和分子生物学的研究领域中，SDSPAGE 电泳是一种常用的技术手段，用于分离和分析蛋白质。
而要成功进行 SDSPAGE 电泳实验，准确配制各种试剂是至关重要的一步。
接下来，让我们详细了解一下 SDSPAGE 电泳试剂的配制方法。
首先，我们来谈谈分离胶缓冲液的配制。
分离胶缓冲液通常使用TrisHCl 缓冲液，其 pH 值一般在 88 左右。
配制时，我们需要称取一定量的 Tris 碱，然后加入适量的浓盐酸进行调节 pH 值。
这个过程需要用到 pH 计来精确测量，以确保 pH 值的准确性。
一般来说，每升分离胶缓冲液中，Tris 的用量约为 1815g，而浓盐酸的用量则需要根据实际测量的 pH 值进行调整。
接下来是浓缩胶缓冲液的配制。
浓缩胶缓冲液的 pH 值通常为 68，同样使用 TrisHCl 缓冲液。
配制方法与分离胶缓冲液类似，但 Tris 的用量和浓盐酸的用量有所不同。
每升浓缩胶缓冲液中，Tris 的用量约为 606g，浓盐酸的用量也需要根据实际 pH 值测量结果进行微调。
然后是 30%丙烯酰胺溶液的配制。
这是 SDSPAGE 电泳中的关键试剂之一。
丙烯酰胺是一种有毒物质，在配制过程中需要特别小心。
我们将丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺按照 29:1 的比例混合。
称取 29g 丙烯酰胺和 1g 甲叉双丙烯酰胺，加入适量的去离子水，搅拌溶解后，定容至 100ml。
需要注意的是，丙烯酰胺具有神经毒性，操作时应戴手套在通风橱中进行。
SDS 溶液的配制也不能马虎。
SDS 即十二烷基硫酸钠，是一种阴离子去污剂。
称取 10g SDS，加入适量的去离子水，加热搅拌溶解后，定容至 100ml。
10%过硫酸铵溶液是引发丙烯酰胺聚合的重要试剂。
称取 1g 过硫酸铵，加入 10ml 去离子水，现配现用。
因为过硫酸铵溶液不稳定，容易分解，所以不宜长时间保存。
电泳缓冲液也是必不可少的。
SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒-
SDS-PAGE 凝胶快速制备试剂盒
背景介绍：
在 westernblot 实验中，总是少不了蛋白电泳这一环节。最早的蛋白胶需要自己先配制 各种组分的 stock solutions，然后再根据分离胶浓度吸取不同体积的多达 6 个组分配制。 不仅耗费时间和精力，而且组分中 TEMED 有强烈的神经毒性且易挥发。后来很多供应商把这 些传统的组分罗列在一起组成试剂盒，但却没有实质性的改进。
产品简介
本产品现已配套提供改良型过硫酸铵催化剂溶液，提高了过硫酸铵溶液的稳定性和催 化效能。请将此过硫酸铵溶液保存于-20℃。为方便吸取使用，已开盖使用中的过硫酸铵溶 液可置于 4℃保存。
使用本产品凝胶制备试剂无需加入有极臭异味且有毒的 TEMED 试剂，只需加入过硫酸 铵即可凝胶，使研究人员可避免因操作 TEMED 而带来的不快和对健康的影响。配制一块或多 块凝胶最少只需 2 分钟的动手操作时间。特有颜色配方的浓缩胶预混液，使点样孔清晰易 辨，方便点样。多种颜色设计，更能轻易区分含不同样品的凝胶。所含颜色配方不影响电泳。
为了解决上述问题，北京博泰斯生物技术有限公司研制出 SDS-PAGE 凝胶快速制备试剂 盒，该试剂盒具有组分简单，不含 TEMED，浓缩胶带颜色等优点（详见下面产品特点一栏）， 而且具有很高的性价比，价格是传统自行配胶的 1.5 倍左右。但却可以节省很多时间，不受 TEMED 困扰。
货号规格
WB1100: 可制备 125 个 6%的 mini 胶（0.75 mm） WB1101: 可制备 125 个 7.5%的 mini 胶（0.75 mm）； WB1102: 可制备 125 个 10%的 mini 胶（0.75 mm）； WB1103: 可制备 125 个 12.5%的 mini 胶（0.75 mm）； WB1104: 可制备 125 个 15%的 mini 胶（0.75 mm）；
一步法SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒
本产品现已配套提供改良型过硫酸铵催化剂溶液，提高了过硫酸铵溶液的稳定性和催 化效能。请将此过硫酸铵溶液保存于-20℃。为方便吸取使用，已开盖使用中的过硫酸铵溶 液可置于 4℃保存。
使用本产品凝胶制备试剂无需加入有极臭异味且有毒的 TEMED 试剂，只需加入过硫酸 铵即可凝胶，使研究人员可避免因操作 TEMED 而带来的不快和对健康的影响。配制一块或多 块凝胶最少只需 2 分钟的动手操作时间。特有颜色配方的浓缩胶预混液，使点样孔清晰易 辨，方便点样。多种颜色设计，更能轻易区分含不同样品的凝胶。所含颜色配方不影响电 泳，染色及转膜等后续应用。本试剂盒灌制的凝胶也可用于非变性 PAGE 凝胶电泳。
产品内容：
分离胶缓冲液（2×）250ml 分离胶溶液（2×）25）80ml 改良型过硫酸铵溶液 8 ml
产品特点：
◎一步法制胶—上下层胶可同时配制，下层胶配完可及时配制上层胶，无需用水或醇封胶 ◎快速制备凝胶—最少只需 2 分钟的动手操作时间即可灌制多块凝胶，无需计算所需溶液 量，无需稀释 ◎彩色上层胶—可制备红颜色的上层胶，为点样和区分不同凝胶提供最大便利 ◎避免有异味的试剂—无需使用 TEMED，避免恶臭气味
北京博泰斯生物技术有限公司
一步法 SDS-PAGE 凝胶快速制备试剂盒
背景介绍：
一步法 SDS-PAGE 凝胶快速制备试剂盒是在 SDS-PAGE 凝胶快速制备试剂盒的基础上优 化而成。
该试剂盒除了具有组分简单，不含 TEMED，浓缩胶带颜色等优点以外，灌制完下层胶 后不需要水或者醇封胶和等待凝固即可直接灌制上层胶。
大大减少了操作和等待的时间。
货号规格：
WB2101: 可制备 125 个 7.5%的 mini 胶（0.75mm） WB2102: 可制备 125 个 10%的 mini 胶（0.75mm） WB2103: 可制备 125 个 12.5%的 mini 胶（0.75mm） WB2104: 可制备 125 个 15%的 mini 胶（0.75mm）
SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明书
SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明书产品货号：SK6010储存条件：Acr-Bis溶液2-8℃储存，其它常温储存。
有效期2年。
产品组成：Components SK6010-50SK6010-250保存条件30%Acr-Bis(29:1)100ml500ml2-8℃分离胶缓冲液100ml500ml RT浓缩胶缓冲液50ml250ml RTAPS（过硫酸铵）5×0.1g5×0.5g RT TEMED1ml5ml RT/避光说明书1份注意：过硫酸铵（APS）为固体粉末，使用前配制成10%APS溶液（0.1g APS加1ml双蒸水；0.5g APS 加5ml双蒸水）。
APS溶液最好现配现用，通常4℃可保存两周，-20℃能保存半年。
产品简介：本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需全部试剂，只需自备蒸馏水，即可制备各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶，方便、快捷、安全、实惠。
本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中已加入10%SDS，使用时无需另外加入，分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液放置2-8℃可能出现絮状，为SDS析出，常温下放置一会溶液恢复澄清，可继续使用。
因为制备凝胶浓度不同，本品只给出大概制胶数量。
操作步骤：根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。
一、灌制分离胶（各试剂使用量请参考附表3）1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合。
3．加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5cm的水层，使凝胶表面保持平整。
凝胶配制试剂盒介绍
SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 (SDS-PAGE Gel kit) B1027描述：本产品提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制高质量的各种浓度的变性PAGE胶，方便，快捷。
本试剂盒至少可以配制30块常规大小的PAGE 胶，并且其中的分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中已加入10%SDS，使用时无需另外加入。
产品名称包装保存条件30%Acr-Bis（29:1）100 ml 2-8℃避光分离胶缓冲液80 ml 室温浓缩胶缓冲液25 ml 室温APS（过硫酸铵）0.5 g 室温TEMED1 ml 室温、避光*试剂盒中提供的APS（过硫酸铵）为固体粉末，使用前加入双蒸水溶解即配制成10%APS（0.5 g APS加入5 ml双蒸水），将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。
操作步骤：根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围参考附表1。
1．灌制分离胶（试剂使用量参考附表2）（1）参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
（2）将不同体积的30%Acr-Bis（29:1）、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯中混合。
（3）加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌混匀，避免产生气泡。
（4）将分离胶溶液灌入凝胶玻璃槽中，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层，用于压平液面。
（5）静置30-60min，至分离胶凝固。
2．灌制浓缩胶（试剂使用量参考附表3）（1）去除覆盖在分离胶上的水层，并用滤纸吸干，水份吸不干，可能会导致浓缩胶和分离胶分开。
（2）将不同体积的30%Acr-Bis（29:1）、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯中混合。
（3）加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌混匀，避免产生气泡。
（4）将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，插入样品梳，避免产生气泡，静置20-30min，直至浓缩胶聚合。
（5）待凝胶聚合后，小心拔下梳子，以免破坏加样孔。
凝胶配制
使用说明：
1. 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)：
不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：
SDS-PAGE分离胶浓度
最佳分离范围
6%胶
50-150kD
8%胶
30-90kD
10%胶
20-80kD
12%胶
12-60kD
15%胶
10-40kD
0.15
0.2
0.05
0.1
0.15
0.2
0.3
0.5
0.3
0.5
TEMED 成分
12%胶 蒸馏水
0.002
0.004
0.006
0.008
0.012
0.02
配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)
5
10
15
20
30
50
1.0
2.0
3.0
4.0
6.0
10.0
30%Acr-Bis(29:1)
配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)
5
10
15
20
30
50
0.5
1.0
1.5
2.0
SDS-PAGE原理、试剂配制和注意事项
SDS是阴离子去污剂，能断裂分子内和分子间的氢键，破坏蛋白分子的二、三级结构。
作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。
而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使绊胱氨酸残基间的二硫键断裂。
在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS 胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。
分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。
电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。
2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。
当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。
电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。
蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。
电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。
过硫酸铵（AP）为催化剂，四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。
在聚合过程中，TEMED 催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
蛋白sds-page凝胶配方及制胶
蛋白sds-page凝胶配方及制胶
SDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis）是一种常用的蛋白质电泳技术，用于分离和定量蛋白质。
以下是制作SDS-PAGE凝胶的基本配方和制胶步骤：
配方：
1. 1%丙烯酰胺（Acrylamide）溶液：将3.7g丙烯酰胺和60μl N,N'-亚甲基双丙烯酰胺溶解在0.5ml双蒸水中，搅拌均匀。
2. 2.5%BT(Bis-Tris）溶液：将0.1g BT和0.25ml TBE(三酸乙酸盐电泳缓冲液)混合均匀。
3. 10%过硫酸铵（AMS）溶液：将10μl AMS溶解在1ml双蒸水中。
4. 5xTBE电泳缓冲液。
制胶步骤：
1. 将电冰板预热至30℃。
2. 将1%丙烯酰胺溶液和2.5%BT溶液混合，100V恒压电泳10-15分钟，直至胶液凝固。
3. 将胶板取出，放入考马士亮蓝R-250中染色约2小时，然后用自来水冲洗至背景无色。
4. 将胶板再次放入考马士亮蓝R-250中染色约2小时，然后用自来水冲洗至背景无色。
5. 将胶板放入考马士固蓝R-250中染色约2小时，然后用自来水冲洗至背景无色。
6. 将胶板干燥后，即可用于蛋白质电泳。
SDSPAGE所有详细试剂配方
SDSPAGE所有详细试剂配方SDS-（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用于蛋白质分析的实验技术。
该技术通常涉及到几种试剂，如胶溶液、缓冲液、电泳缓冲液、染色溶液等。
下面是SDS-常见的试剂配方及其详细说明。
一、胶溶液配方：1. 30%（w/v）丙烯酰胺（acrylamide）溶液- 在称量瓶中称取30g丙烯酰胺，并用蒸馏水调至100ml。
搅拌溶解直至均匀。
-这是制备聚丙烯酰胺凝胶的基础溶液。
2. 响应稀释液（Response diluent）-用于稀释聚丙烯酰胺溶液以获得不同浓度的凝胶。
-可通过将聚丙烯酰胺溶液与水按1:3体积比混合来制备响应稀释液。
二、缓冲液配方：1. 离子化追踪剂（Tris-Glycine running buffer）-用于凝胶电泳盒中电解质的运行。
-配方为：3g Tris base （pH 8.8）14.4g glycine将固体溶解于1L蒸馏水中，并调整pH至8.8三、电泳缓冲液配方：1. 离子化追踪剂（Tris-Glycine SDS running buffer）-用于在电泳过程中提供离子追踪剂。
-配方为：30g Tris base144g glycine10gSDS将固体溶解于1L蒸馏水中。
2. 加速剂（stacking gel buffer）- 用于形成凝胶中的聚集堆积层（stacking layer）。
-配方为：30g Tris base （pH 6.8）144g glycine1gSDS将固体溶解于1L蒸馏水中，并调整pH至6.8四、样品处理缓冲液配方：1. 样品加载缓冲液（sample loading buffer）-用于处理蛋白样品，以便在凝胶上获得良好的分离效果。
-配方为：0.5M Tris-HCl（pH 6.8）20%（v/v）甘油10%（w/v）SDS0.05%（w/v）溴酚蓝（bromophenol blue）旋转混合并加入蛋白样品。
五、凝胶染色溶液配方：1. 吸附性染色剂（Coomassie blue staining solution）-用于染色聚丙烯酰胺凝胶上分离的蛋白质。
SDS-PAGE电泳试剂配制
SDS-PAGE电泳试剂配制SDSPAGE 电泳试剂配制SDSPAGE 电泳（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离和分析技术。
在进行 SDSPAGE 电泳实验时，准确配制各种试剂是获得可靠实验结果的关键。
下面，让我们详细了解一下SDSPAGE 电泳试剂的配制方法。
首先，我们来看看分离胶缓冲液的配制。
分离胶缓冲液一般是 15M TrisHCl（pH 88）。
要配制 100ml 的这种缓冲液，我们需要称取 1817g Tris 碱，加入约 80ml 去离子水，用浓盐酸调节 pH 值至 88。
这一步需要耐心和细心，因为 pH 值的准确性对电泳结果影响很大。
调节好 pH 后，将溶液定容至 100ml。
接下来是浓缩胶缓冲液，通常是 10M TrisHCl（pH 68）。
同样配制100ml，称取 1211g Tris 碱，加入约 80ml 去离子水，用浓盐酸调 pH 至68，最后定容至 100ml。
然后是 30%丙烯酰胺溶液。
这是 SDSPAGE 电泳中非常重要的试剂。
配制 100ml 该溶液，需要称取 29g 丙烯酰胺和1g N,N’亚甲双丙烯酰胺，用去离子水溶解后定容至 100ml。
丙烯酰胺是有毒物质，在配制和使用过程中要特别小心，避免接触皮肤和吸入粉末。
SDS 溶液的配制也不容忽视。
一般是 10%（w/v）的 SDS 溶液。
称取 10g SDS，加入适量去离子水搅拌溶解，然后定容至 100ml。
还有 10%过硫酸铵溶液。
称取 1g 过硫酸铵，加入 10ml 去离子水，现配现用。
过硫酸铵溶液容易失效，所以每次使用前都要新鲜配制。
TEMED（四甲基乙二胺）在凝胶聚合过程中起到催化作用。
由于它挥发性强，使用时要注意迅速加入。
电泳缓冲液也是必不可少的。
一般使用的是 Tris甘氨酸缓冲液。
配制 1L 缓冲液，需要称取 303g Tris 碱、1877g 甘氨酸和 1g SDS，用去离子水溶解后定容至 1L。
Tricine-SDS-PAGE具体步骤
有篇Nature的protocal，我们试验室的Tricine-SDS-PAGE就是参照其做的。
Tricine sds page.pdf (209.29k)Tricine-sds-page一.试剂及缓冲液AB-3 浓缩胶: 9.6g丙烯酰胺0.3g甲叉双丙烯酰胺溶于20ml水.(49.5%T,3%Cmixture)AB-6 分离胶: 9.3g丙烯酰胺0.6g甲叉双丙烯酰胺溶于20ml水. (49.5%T,6%Cmixture)凝胶缓冲液: 1X 2.422gTris 0.02gSDS溶于20ml水,HCL调节pH=8.45.样品缓冲液:1X 12%SDS,6%mercaptoethanol,30%glycerol,0.05%coomassie blue G-250,150mMTris\HCL(pH=7.0)阴极缓冲液: 1X 1.0MTris 1.0MTricine 1%SDS pH约8.25,基本不用调.阳极缓冲液: 1X 1.0MTris 0.225MHCL pH=8.9, HCL调节.固定液: 250ml甲醇,50ml冰醋酸, 0.05mol醋酸铵加水定容500ml.( 0.7mm,30min)染色液: 0.025%考马斯亮蓝G-250 10%冰醋酸. ( 0.7mm,60min)脱色液: 10%冰醋酸. ( 0.7mm,2h或者过夜)二.配胶: 0.07×14×14cm 两块胶的用量.(一) Separating gel 16%gel1. AB-6: 5ml2.凝胶缓冲液: 5ml3.Glycerol: 1.5g4.上述加水至15ml5.10%APS 50ul6.TEMED 5ul(二)Spacer gel 10%gel1. AB-3: 600ul2.凝胶缓冲液:1ml3.Glycerol: 0.3g4.上述加水至3ml5.10%APS 15ul6.TEMED 1.5ul(三)Stacking gel 4%gel1. AB-3: 500 ul2.凝胶缓冲液: 1.5ml3.上述加水至6ml4.10%APS 45ul5.TEMED 4.5ul三.注意:1.电压:进入分离胶之前30V,之后100 V,在跑至分离胶底部之前可以调至200V.注意温度不能超过35~40℃.2.本实验适合小蛋白、多肽的分离.1~100kD.3. Spacer gel 10%gel的用途是为了使1~5 kD的小分子得到更好的分离.是否配制,按照自己需要.4. 这是我做了半年摸索出的条件.效果非常好.用它已经很好地分离出我的目标宝贝.和大家一起分享.以下是详细说明书：Tricine/Polyacrylamide Gel ElectrophoresisUsed for pilin processing analysis but generally useful for resolution of small (15-35 Kdal) proteins of similar size.SeeStrom, M. S., D. N. Nunn, and S. Lory. 1993. A single bifunctional enzyme, PilD, catalyzes cleavage and N-methylation of proteins belonging to the type IV pilin family. Proc. Natl. Acad. Sci., 90:2404-2408.orStrom, M. S., and S. Lory. 1992. Kinetics and sequence specificity of processing of prepilin by PilD, the Type IV leader peptidase of Pseudomonas aeruginosa. J. Bacteriol. 174:7345-7351.Original citation: Schagger, H. and G. von Jagow. 1987. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal. Biochem. 166: 368-379.Reagents:Anode Buffer ( ): 200 mM Tris pH 8.9 (can dilute from 10X stock)Cathode Buffer (-): 100 mM Tris/100 mM Tricine/0.1% SDS (no need to pH, but will be ~8.25) these can be made as 10X stocks and diluted before useGel Buffer: 3.0 M Tris, pH 8.45/0.3% SDSNote: the pH's given for the anode and gel buffers are essentialStacking acrylamide: 48% acrylamide/1.5% bis-acrylamideSeparating acrylamide: 46.5% acrylamide/1.5% bis-acrylamideSample buffer: (add equal volume to sample), for 20 ml:5 ml 0.5 M Tris, pH 6.84 ml 20% SDS1 ml 2-mercaptoethanol4 ml 50% glycerol0.004 g bromophenol blue6 ml waterPouring GelsFor each minigel (Hoeffer "Mighty Small" or BioRad "Mini Protean-II"--scale up as required):1. Separating gel:15% gel2 ml separating acrylamide2 ml gel buffer2 ml 50% glycerol10% gel1.22 ml separating acrylamide2 ml gel buffer2 ml 50% glycerol0.78 ml waterpolymerize with 75 ul 10% APS and 7.5 ul TEMED2. Stacking gel:0.25 ml stacking acrylamide0.75 ml gel buffer2.0 ml water20 ul 10% APS2 ul TEMEDPolymerize both the stacking and separating gels at the same time (I used small disposable tubes), and pour stacking gel directly onto the separating gel (pour carefully but quickly--they won't mix but the separating gel polymerizes within 2-3 minutes). Make each separating gel mixture separately and add TEMED and APS right before pouring. Multiple stacking gel mixtures can be made in the same tube, but you have around 10 minutes before these start to polymerize too.Sample loading and electrophoresis:For the minigels, 5-10 ul per well gives best results. Layer the samples in the well very carefully, and be sure to flush out any unpolymerized acrylamide before loading.Electrophorese at 25-35 mA (constant current) per gel in minigel setup. Foam will appear on the top (cathode), and additional cathode buffer may have to be added during the run.好东西我的Tricine-SDS-PAGE电泳图，在大分子处有条带，在小分子处无条带，是什么原因1、可能分离胶浓度太小，把胶的浓度加大，跑的时候电压小点2、小分子蛋白含量少，可以加大蛋白上样量谢谢luhao82 ，我再按你的建议试试，但是我都是按你的步骤做的啊。
UElandy SDS-PAGE 胶凝固剂试剂盒说明书
产品说明书凝胶配制试剂盒SDS-PAGE（任意浓度）产品货号：P80111-KIT产品规格：50块胶（0.75mm）产品组分：组分编号试剂A试剂B试剂C试剂D试剂E试剂F试剂G名称上层胶缓冲液下层胶缓冲液30%Acr-Bis(29:1)10%SDSPAGE胶凝固剂PAGE胶促凝剂储存缓冲液（5×）含量50mL100mL100mL5mL0.5g0.6mL100mL储存条件4℃避光保存，有效期见外包装。
PAGE胶凝固剂（粉剂）：4℃保存时需拧紧瓶盖注意防潮，受潮后会很快失效。
PAGE胶凝固剂（粉剂）用水配制成10%溶液后，分装成小管-20℃保存，半年内有效；配制好的凝胶请浸没在1×储存缓冲液（凝胶保存液）中，室温保存，6个月保质期。
产品介绍本产品采用Tris-甘氨酸凝胶体系，按照使用说明书操作，只需自备制胶器具和蒸馏水，加入促凝剂即可配成任意浓度的SDS PAGE凝胶。
操作简单，成本低。
本试剂盒约可配制50块常规大小的（0.75mm）SDS-PAGE凝胶。
具体可以配制的凝胶数量与凝胶厚薄、大小有关。
产品特点保质期长：改良配方，制备的SDS PAGE凝胶可在室温下保存半年以上；上样方便：可制备有颜色的上层胶，点样孔清晰易辨，方便点样；效果优秀：跑胶条带清晰，敏锐，蛋白分辨率高。
高效兼容传统的电泳/转膜液。
使用方法1.准备工作PAGE胶凝固剂（粉剂）溶于5mL蒸馏水中，将溶液分装为10管，0.5mL/管，于-20℃长期保存。
10%PAGE胶凝固剂（粉剂）溶液可在4℃保存一周。
2.分离胶的配制（1）根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶（即下层胶）：不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范SDS-PAGE分离胶浓度6%胶8%胶10%胶12%胶15%胶最佳分离范围50-150kD30-90kD20-80kD12-60kD10-40kD 如果样品蛋白分子量范围较广，建议使用梯度预制胶。
Tricine SDS-PAGE实用方案
Tricine SDS-PAGE实用方案Tricine-SDS-PAGE是用于分离分子量在1-10kD的肽类用的。
一、试剂配制：1． Low Bis acrylamide（49.5% T, 3% C）Acylamide 48.0gBis 1.5gWater make up to 100ml2. High Bis acrylamide (49.5% T, 6% C)Acrylamide 46.5gBis 3.0gWater make up to100ml3. Gel Buffer (3M Tris/cl, PH8.45, 0.3% SDS)SDS 0.3gTris 36.4gWater make up to 100mlPH to 8.45 with HCL注: 3M Tris 配制时不容易溶解,因此配制时我配制了2M Tris,配方如下:Tris 36.4gSDS 0.3gWater make up to 150ml4. Anode (Lower) buffer 阳极缓冲液 (0.2M Tris/cl, PH8.9)Tris 12.11gWater make up to 500mlPH to 8.9 with HCL5. Cathode (Upper) buffer 阴极缓冲液 (0.1M Tris/cl, 0.1M Tricine, 0.1% S DS, PH 8.25)Tris 6.06gTricine 8.96gSDS 0.5gWater make up to 500ml注:不用调PH值6. 4×Tricine SDS Sample buffer 4×上样缓冲液(Final concentration: 0.05M Tris/cl, 4% SDS, 12% glycerol, 200mM DTT, 0. 01% Commasie G 250)8×Tris.cl/SDS PH 6.8 2mlGlycerol 4.8mlSDS 1.6gCommasie Blue G 250 4mgWater make up to 10ml注:8×Tris.cl/SDS PH 6.8配方Tris 6.05gSDS 0.4gWater make up to 100mlPH to 6.8 with HCL二、胶的配制1. 16.5% T 6% C separating gel 30ml49.5% T 6% C 10mlGel buffer 15mlGlycerol 3.2mlWater 1.8ml2. 10% T 3% C spacer gel 30ml49.5% T 3% C 6.1mlGel buffer 15mlWater 8.9ml3. 4% T 3% C stacking gel 12.5ml49.5% T 3% C 1mlGel buffer 4.65mlWater 6.85ml注: 用Bio-Rad系统, 0.75mm的胶,separating gel 配3ml, 加2.5ml; Spacer gel 配1ml,加0.7ml; Stacking gel 配1.25ml. 灌胶前临时加10%AP（过硫酸铵）和TEM ED.胶配制的通用配方:三、电泳参数及染色脱色1. 用Bio-Rad mini 电泳装置进行电泳. 30V 电泳1hr, 100V至电泳结束2. 固定, 染色及脱色: 小分子量肽类在SDS-PAGE胶中容易扩散,因此电泳结束后, 有时需要固定20min (固定液: 0.5% 戊二醛, 30% 乙醇), 再进行染色20-30min (染色液: 50% 甲醇, 10% 乙醇, 0.2% G-250), 在脱色液 (45% 甲醇, 10% 冰醋酸)脱色20-30min; 脱色完毕,把胶放在水中或10%甘油中.。
sds-page凝胶配方及制胶[最新]
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sds-page凝胶配方及制胶[最新] SDS-PAGE凝胶配方及制胶12%分离胶体积试剂 5ml 8ml 10ml 15ml 25ml 30ml 60ml 90ml 120ml30%Acr-Bis(ml) 2 3.2 4 6 10 12 24 36 481.5M Tris-HCl 1.25 22.53.75 6.25 7.5 15 22.5 30 PH8.8(ml)ddH2O(ml) 1.65 2.64 3.3 4.95 8.25 9.9 19.8 29.7 39.610%SDS(ul) 50 80 100 150 250 300 600 900 120010%APS(ul) 50 80 100 150 250 300 600 900 1200TEMED(ul) 3 4.8 6 9 15 18 36 54 725%浓缩胶体积试剂 4ml 6ml 8ml 12ml 16ml 20ml 24ml 36ml 48ml30%Acr-Bis(ml) 0.66 0.99 1.32 1.98 2.64 3.3 3.96 5.94 7.921M Tris-HCl 0.5 0.75 1 1.5 2 2.5 3 4.5 6 PH6.8(ml)ddH2O(ml) 2.74 4.14 5.48 8.28 11.02 13.7 16.56 24.84 33.1210%SDS(ul) 40 60 80 120 160 200 240 360 48010%APS(ul) 40 60 80 120 160 200 240 360 480TEMED(ul) 4 6 8 12 16 20 24 36 481、按顺序加溶液，每加完一个溶液摇匀一下。
2、TEMED要在通风橱中加，加入后混匀30秒左右后再注胶;吸打时枪头不出液面，以减少气泡3、分离胶配好后要用水封顶，聚合至少40min(也可聚合一夜)4、加入浓缩胶后插梳子(要洗干净)，梳子倾斜插入，避免产生气泡。
Tris-Tricine-SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒使用说明
Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明货号：P1320规格：25块/50块/100块PAGE凝胶产品内容：25T50T100T保存条件49.5%T3%C15ml30ml60ml2-8℃，避光49.5%T6%C50ml100ml2×100ml2-8℃，避光凝胶缓冲液70ml2×70ml4×70ml2-8℃50%甘油30ml60ml120ml室温PAGE胶凝固剂0.25g0.5g 1.0g室温PAGE胶促凝剂400ul750ul 1.5ml室温，避光Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒所提供的PAGE胶凝固剂为固体粉末，使用前加入双蒸水溶解即配制成10%PAGE胶凝固剂溶液（0.5g PAGE胶凝固剂加5ml双蒸水），将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。
溶液在使用中可放置4℃保存两周。
产品简介：常规的Tris-SDS-PAGE电泳的只能分辨大分子蛋白，对于相对分子量小的，尤其是10kD以下的蛋白分辨率极低。
而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分离分子量在1-10kD的蛋白及多肽，成为目前电泳法变性分离多肽的主要方法。
本产品包括Tricine-SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量各种浓度的凝胶，方便、快捷，电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
注意事项：1、10%PAGE 胶凝固剂配制后分装-20度保存。
该溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换，使用-20度保存的10%PAGE 胶凝固剂。
2、在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
3、在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。
4、Acr/Bis 具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
5、Tris-Tricine-SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。
SDS-PAGE凝胶制备试剂盒说明书
货号：P1200-1/P1200-2规格：25块/50块SDS-PAGE凝胶产品内容：P1200-1P1200-2保存条件30%Acr/Bis(29:1)100mL100mL×24℃，避光1.5mol/LTris(pH8.8)100mL100mL×2常温1.0mol/LTris(pH6.8)30mL60mL常温PAGE胶凝固剂1g2g干粉4℃；溶液-20℃10%SDS5mL10mL常温PAGE胶促凝剂0.8mL 1.5mL4℃，避光产品简介：本公司生产的SDS-PAGE凝胶制备试剂盒是按照经典方法配制而成。
本试剂盒提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制PAGE胶。
本试剂盒可配制不同规格、不同聚合度的PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶)约25/50块。
注意事项：1.PAGE胶促凝剂和10%PAGE胶凝固剂最后加，在加入前需混匀前面所加试剂。
10%PAGE胶凝固剂溶液在4℃有效期为一周；PAGE胶促凝剂易挥发，使用后请盖紧瓶盖。
在常温下胶30分钟内可以凝固，如温度过低，可放37℃温箱凝固。
灌完分离胶后，轻轻的加1mL ddH2O封上层，胶凝固后可见到分界线。
灌浓缩胶前，先倾去水层，再用吸水纸吸干。
浓缩胶灌好后立刻插入梳子。
浓缩胶凝固后，放入电泳液中(让电泳液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，可防加样孔变形。
2.配制量可按上表等比加减。
如果所用胶浓度与上面不同，可自行调整，主要是调整30%Acr/Bis的量（需要浓度×总体积/30%），最后用水补足总体积。
配胶说明（仅供参考）：1.先在PAGE胶凝固剂干粉中加入蒸馏水或去离子水(每克PAGE胶凝固剂需加水10mL)配置成10%溶液，将溶液分装成小体积后冻存于-20℃，制备凝胶时融化后使用。
4℃保存有效期7-30天。
2.检测SDS溶液是否澄清，若出现絮状物或沉淀可放37℃片刻至溶解，不影响效果。
SDS-PAGE配胶试剂盒使用说明书
SDS-PAGE配胶试剂盒使用说明书Cat.No：Lot No：原理：本技术中，待分离的样品在有SDS-PAGE和还原剂的存在下通过加热而变性并被去污剂所包被。
SDS可使蛋白质带上大量的负电荷，其带电荷的多少正好与多肽的长度成正比。
聚丙烯酰胺凝胶上样后，在高电压的作用下，蛋白组分向正极（阳极）迁移。
由于所有的蛋白所带的负电荷与其分子大小成正比，因而蛋白就仅仅根据其分子量的大小不同而被分离—凝胶的分子筛效应。
蛋白质的分子量就可以通过与标准蛋白的凝胶迁移率进行比对而得到。
凝胶电泳后，特定的凝胶条带可以通过染色而观察到，并且可通过被动扩散或电洗脱从凝胶上进行回收。
两种最常用的染色方法是考马斯亮蓝法和银染法，这两种方法的蛋白条带检测灵敏度可分别达到50ng和5ng。
由于考马斯亮蓝法使用简便，并可以对收集的蛋白带作进一步分析，因而较为常用。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳应用范围：1）蛋白质纯度的分析；2）蛋白质分子量的测定；3）蛋白质浓度的测定；4）蛋白质水解的分析；5）免疫沉淀蛋白的鉴定；6）免疫印迹的第一步；7）蛋白质修饰的鉴定；8）分离和浓缩用于产生抗体的抗体的抗原；9）分离放射性标记的蛋白质。
试剂盒组成：1．30%预制聚丙烯酰胺胶（4℃保存）200ml2．1.5M TrisCl（PH=8.8）200ml3．1.0M TrisCl（PH=6.8）50ml4．10%SDS 30ml5．10%过硫酸铵（4℃保存）30ml6．去离子水250ml7．TEMED（4℃闭光保存！）1ml8．5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液250 ml9．考马斯亮蓝染色剂50ml10. 考马斯亮蓝脱色剂250ml5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液用时以去离子水1：4稀释，配成1×-甘氨酸电泳缓冲液工作液。
凝胶的配制：（1）将玻璃板安装固定好切误把玻璃弄坏（2）进行分离胶的配制（3）加入TEMED后立即混匀内容物倒入到固定好的玻璃板中，同时留出灌注浓缩胶所需空间（梳子的齿长再加0.5cm）再在胶液面上小心注入一层水（约2—3mm高）以排除气泡和阻止氧气进入凝胶溶液。
重组多肽表达SDS-PAGE电泳鉴定(Tris-Tricine系统)
重组多肽表达SDS-PAGE鉴定（Tris-Tricine系统）一、溶液配制：1. 40% T，3% C Acr+Bis储备液38.8g Acr + 1.2 Bis，溶于100mL。
2. 3×凝胶缓冲液（3×Gel Buffer）：3M Tris，0.3% SDS，pH8.4536.33g Tris，0.3g SDS溶于40mL水中，以4M HCl调pH至8.45（加入量约26mL），定容至100mL，即得。
3. 50%（W/V）甘油（50% Glycerol）4. 10% AP （临用前配制）5. 2×样品缓冲液（2×Loading Buffer，pH6.8）甘油：24%（V/V）巯基乙醇4%（V/V）SDS 8%（W/V）Tris 100mMCoomassie Blue G250 0.02%（W/V）配制50mL 2×样品缓冲液：H2O 20 mLSDS 4 g甘油12 mL巯基乙醇 2 mL2M Tris 2.5 mLCoomassie Blue G250 10 mg以4M HCl调pH至6.8（加入量约0.6mL），定容至50mL，即得。
6. 阴极缓冲液：0.1M Tris，0.1M Tricine，0.1% SDS，pH8.25 （不调pH）7. 阳极缓冲液：0.2M Tris，pH8.9（配600mL溶液约加3mL浓盐酸）8. 2M Tris9. 20mM PBS，pH7.0二、重组多肽表达1. 接种重组菌落于LB培养基，37℃培养过夜。
2. 1%转种菌液于TB培养基，37℃培养至OD600为0.6~1.0。
3. 加入100mM IPTG，使终浓度为1mM。
4. 诱导培养3~5小时。
5. 离心得菌体，以20mM PBS，pH7.0缓冲液洗涤菌体一次。
于－20℃冻存。
6. 以100μl无菌水悬浮，再加入100μl 2×Loading Buffer，沸水浴10分钟。
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Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
货号：P1320
规格：25块/50块/100块PAGE凝胶
产品内容：
25T50T100T保存条件
49.5%T3%C15ml30ml60ml2-8℃，避光
49.5%T6%C50ml100ml2×100ml2-8℃，避光
凝胶缓冲液70ml2×70ml4×70ml2-8℃
50%甘油30ml60ml120ml室温
PAGE胶凝固剂0.25g0.5g 1.0g室温
PAGE胶促凝剂400ul750ul 1.5ml室温，避光本产品所提供的PAGE胶凝固剂为固体粉末，使用前加入双蒸水溶解即配制成10%PAGE胶凝固剂溶液（0.5g PAGE胶凝固剂加5ml双蒸水），将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。
溶液在使用中可放置4℃保存两周。
产品简介：
常规的Tris-SDS-PAGE电泳的只能分辨大分子蛋白，对于相对分子量小的，尤其是10kD以下的蛋白分辨率极低。
而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分离分子量在1-10kD的蛋白及多肽，成为目前电泳法变性分离多肽的主要方法。
本产品包括Tricine-SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量各种浓度的凝胶，方便、快捷，电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
注意事项：
1、10%PAGE胶凝固剂配制后分装-20度保存。
该溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换，使用-20度保存的10%PAGE胶凝固剂。
2、在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
3、在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。
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4、Acr/Bis 具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
5、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。
配胶说明：
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE 分离胶配制浓度，凝胶浓度配方参考附表。
I 配制分离胶
1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 6%C 、凝胶缓冲液和甘油加入到离心管中混合。
2、加入10%PAGE 胶凝固剂和PAGE 胶促凝剂，立即涡旋混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液（1mm mini-gel，分离胶溶液加约4ml ），然后在分离胶溶液
上轻轻覆盖一层1-3cm 的水层，使凝胶表面保持平整。
4、静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
II 配制夹层胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。
1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。
2、加入10%PAGE 胶凝固剂和PAGE 胶促凝剂，立即涡旋混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3、将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面（对于1mm 的mini-gel，夹层胶溶液加约1ml ），然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层水层，使凝胶表面保持平整。
分离胶
夹层胶浓缩胶20%/4.5ml
16.5%/4.5ml 15.5%/4.5ml 10%/2ml 4%/2ml 49.5%T 3%C ///0.407ml 0.160ml 49.5%T 6%C 1.82ml 1.50ml 1.395ml //凝胶缓冲液 1.50ml 1.50ml 1.50ml 0.667ml 0.496ml 50%甘油0.96ml 0.96ml 0.96ml //ddH 2O
0.22ml 0.54ml 0.645ml 0.926ml 1.344ml 10%PAGE胶凝固剂40µl 40µl 40µl 20μ|20μ|PAGE胶促凝剂
5µl
5µl
5µl
3µl
3µl
4、静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
III配制浓缩胶
去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1、将不同体积的双蒸水、49.5%T3%C和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。
2、加入10%PAGE胶凝固剂和PAGE胶促凝剂，立即涡旋混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
4、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
5、进行电泳操作。
IV电泳
将电泳槽放入4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液（T1225），内槽加入阴极缓冲液（T1215），30V预电泳10min，将样品（已经过Tricine专用上样缓冲液P1325处理）加入点样孔后30V电泳1小时，100V电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。
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