PCR实验室常用设备、试剂和耗材使用管理

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应立即停止使用。 使用的玻璃或塑料离心管应能承受相应的离心力
并大小合适。非金属转头不可用紫外照射。 如果被离心的物品密度大于说明书的规定范围,
应计算相对离心力。
•对于高致病性病原微生物,必须要高度警惕离心过程中 产生的气溶胶风险。
-大型离心机上应加装负压罩,以及时吸出离心机排出 的气体,并排至实验室的过滤通风系统,在BSL-3及以 上级别实验室尤其要注意。
GILSON eppendorf
0.5 -10
0.5 -10
2 -20
2 -20
20 -100 10 -100
20 -200 20 -200
200 -1000 100 -1000
加样器-技术指标
型号 P2
容量
(μL) 最小 0.2
0.5 最大 2
P10 最小 1
5 最大 10
P20 最小 2 5
10 最大 20
天平
天平
精密电子分析天平
天平
二、影响重现性的因素 1、潮湿 2、静电:最好用100%的玻璃容器。 3、空气浮力 4、温度 5、气流和通风 6、磁场和磁性样品 7、天平放置状态
天平
三、维护 1、避免振动。 2、在密闭容器内称量挥发性和腐蚀性
物品。 3、定时清洁。 4、避免移动仪器。 5、及时检修,不可带“病”工作。 6、不可过载,损坏天平。
破损。必须在安全柜内打开盖子。
4. 使用转头时应注意转头盖与转头型号是否匹配。离心桶的装载、平衡、密封和
打开必须在生物安全柜内进行。空离心桶配平时应该用蒸馏水或70% 乙醇、异丙醇,不应使用盐水和次氯酸盐溶液。离心管内液面水平距 管口应留出一定空隙,以确保离心过程中液体不会溢出,尤其是 使用角转头时更要注意。(密封的离心桶/安全杯)
连续可调式移液器在使用完毕后应置于以液器架上 ,远离潮湿及腐蚀性物质。
在取液之前,所取液体应在室温(15-25C)平衡 ;液体温度与室温有异时,将吸嘴预洗多次再用; 移液温度不得超过70℃。
不可把容量计数调超其适用范围。
加样不准确的原因
用大量程的移液器移取小体积的液体 装配吸头时气密性不好,吸头不匹配 吸取的液体具有强挥发性 液体的密度与水有明显差异 吸液速度和放液速度太快
加样器-使用注意事项
根据所需取液量选择 相应的移液器及吸头, 基因扩增实验要求使 用带滤芯的吸头,防 止交叉污染。
吸取液体时应缓慢匀速吸取,避免液体溅到移液器 头上;打出液体后拇指应缓慢松开按钮,避免液体 回吸。
在调整取液量的旋钮时,不要用力过猛,并应注意 计数器显示的数值不要超过其可调范围。
连续可调式移液器不可在无吸头时使用,吸头有液 体时不可平放或倒置。
加样器-使用注意事项
操作时要慢和稳,吸嘴浸入液体 深度要合适,吸液过程深度尽量保持不变
改吸不同液体、样品或试剂前更换新吸嘴 发现吸嘴内有残液时必须更换;新吸嘴使
用前应先质检。 为防止液体进入移液器套筒内,注意以下
P100 最小 20
50 最大 100
准确度(标准误差)
绝对误差(μL) 相对误差(%)
±0.024
±12
±0.025
±5
±0.030
±1.5
±0.025 ±0.075 ±0.10
±2.5 ±1.5 ±1
±0.1 ±0.1 ±0.1 ±0.2
± 5.0 ±2.0 ±1.0 ±1.0
±0.35 ±0.4 ±0.8
±1.8 ±0.8 ±0.8
精度(重复性)2
标准误差(μL) 相对离差(%)
≤ 0.012
≤6
≤ 0.012
≤ 2.50
≤ 0.014
≤ 0.70
≤ 0.012 ≤ 0.030
≤ 0.040
≤ 1.25 ≤ 0.60 ≤ 0.40
≤ 0.03 ≤0.04 ≤0.05 ≤0.06
≤ 1.50 ≤ 0.80 ≤ 0.50 ≤ 0.30
0 7 5 7.5μ l
P20
1 2 5 12.5μ l
P100
0 7 5 75μ l
P200
1 2 5 125μ l
加样器-使用
加样器-使用
吸液 前进式
倒退式
加样器-使用
把按钮压至第一停点垂直握持
加样器,使吸嘴浸入液样中,
浸入液体深度视型号而定:
P2和P10
≤1mm
P20和P100
转头转速(rpm ) ~15 ,00 0
2,000 ~20,000 ~120 ,000
离心机-注意事项
外接电源系统的电压要匹配,并要求有良好的接地线 开机前应检查转头安装是否牢固,机腔有无异物掉入 更换转头或清洁转头时,应注意安装牢固。
样品应预先平衡。 离心机运行时,离心机周围30cm范围内不能有人和危
≤0.10 ≤0.12 ≤0.15
≤0.5 ≤0.24 ≤0.15
加样器-使用
设定容量
容量计读数由三位拨号数字组成(显示所转移液体容量),从上(最 大有效数字)到下(最小有效数字)读取。利用底部刻度可将容量调节 到更精确的分度。根据型号不同,数字可能是黑色或红色的。
P2
1 2 5 1.25μ l
P10
校准方式 计量局 厂家 自校
时间 视使用频率定(6个月-1年)
加样器-校准
型号 P1000 出厂编号 L26069L 发证日期 2002-7-4
本移液器已按照国际ISO标准,以吉尔森原厂零配件进行维修及校准, 达到吉尔森产品说明书规定的性能指标,并自发证日起免费担保六个月 (易损零配件不包括在内)。
几点:压放按钮时保持平稳;移液器不得 倒转; 使用了酸或有腐蚀蒸气的溶液后,最好拆 下套筒,用蒸馏水清洗活塞及密封圈。
加样器-使用注意事项
连续可调式移液器在取样加样过 程中应注意移液嘴不能触及其他 物品,以免被污染;
移液嘴盒(架子)、废液瓶、所取试剂及加样的样 品管应摆放合理,以方便操作过程、避免污染为原 则。
保护人、环境、样本
不同型号生物安全柜(BSC)特征比较
柜子 类型
Ⅰ级
面速度 (英尺 /分)
75
气流方式
前面进,上面出,顶部通过HEPA 过滤器

非挥发性化学毒 物/放射性物质


挥发性化学毒物 /放射性物质
能1
A1型
75
70%通过HEPA在工作区内循环,30 %通过HEPA排出到实验室内
能(微量)
-所有的离心管必须带盖密封,其开启应在安全柜内进 行。
-微型离心机则可放在安全柜内离心,但要注意其对安 全柜气流的影响。
-如果不能在安全柜内离心也无负压罩,则必须将密封 的转头在安全柜内打开。
1. 所有离心机应处于正常工作状态/合格机械性能,根据厂家说明书进行操作。 2. 离心机位于适宜位置和高度,工作人员能看见离心桶,便于进行各项操作。 3. 离心管和标本容器根据厂家要求选用,最好使用塑料制品,使用前应检查有无
PCR热循环仪(DNA扩增仪)
冰箱
1、现在使用的冰箱的温度是否标示范 围内?
2、需要每天都记录温度吗?
冰箱
冰箱
温度计
1、新购买的温度计准确吗? 2、需要做质检吗? 3、如何做质检?
温度计
温度计
天平
一、分类 1、超微量电子分析天平 2-5g 2、微量电子分析天平 20-50g 3、准微量电子分析天平 20-100g 4、常量电子分析天平 100-200g 5、精密电子分析天平
2. 化学浓度不能超过最低爆炸浓度。
生物安全柜
II级生物安全柜是目前应用最 为广泛的柜型,是有前窗操作 口的安全柜,操作都可以通过 前窗口在安全柜内进行操作, 对操作过程中的人员、产品及 环境进行保护。
二级A1型生物安全柜气流模式
不能
A2型 100 同ⅡA, 箱体呈负压和可管道排气


级 B1型
100
30%通过HEPA在工作区内循环,70 %通过HEPA和严格的管道排出

能(微量)2 能(微量)2
B2型
100
无循环,全部通过HEPA和严格的 管道排出

能(少量)
Ⅲ级
无 排气口处经两个HEPA处理

能(少量)
1.安装上要求有一特殊管道通到室外、有一道活性炭过滤器、防爆的发动机及其它电路 组成。Ⅰ级柜如果操作挥发性化学物,则不能将废气排到室内。
PCR实验室常用设备、试剂和耗材 使用管理
广西临床检验中心 周微雅2012 Nhomakorabea05.15
常用仪器设备
试剂准备区
加样器 洁净工作台 低温冰箱
标本制备区
生物安全柜 高速( 冷冻)离心机 漩涡振荡混旋器 恒温水浴箱(金属浴) 加样器 冰箱
扩增区(产物扩增及分析区)
加样器
放置地点:
试剂准备区 标本制备区
标识:
所在区域 校准状态
加样器-类型
单道连续可调式移液器 多通道连续可调式移液器 单道连续移液器 单道移液管配合使用的移液器
加样器-使用
加样器-型号和取液范围
型号

P10 P20 P100 P200 P1000
所用量程范围(μ L)
更换部件
O型密封圈
测试环境: 温度 25 C 湿度 38 % 测试液体: 蒸馏水 测试用吸嘴:吉尔森Diamond标准盒装吸嘴
离心机
离心机放置: 水平坚固的地板或平台上,以免离心时造成机器震动
打开电源开关,按要求装上所需的转头,将预先平衡 好的样品放置于转头样品架上(离心筒须与样品同时 平衡),关闭机盖。
险物品。 挥发性或腐蚀性液体离心时,应使用带盖的离心管,
并确保液体不外漏以免腐蚀机腔或造成事故。
离心机-注意事项
易燃易爆以及易与其他物质发生反应的物质不能 离心。
在没有相应的防护措施时,不能离心有毒的、放 射性的物质或病原微生物。
离心机运行时不可人为地打开盖子。 如果转头和盖子有可见的腐蚀或磨损的痕迹,则
,然后用清水擦洗。 3. 擦拭离心机腔时动作要轻,以免损坏机腔内温度
感应器。 4. 使用消毒液处理时,温度不可超过25℃,时间不
可超过规定范围。 5. 可以用高压消毒的转头,应在清洗后,121 ℃消
毒20分钟,转头务必平放,并不受挤压,以免变 形。
生物安全柜
防止操作过程中含有危害性或 未知性生物气溶胶散逸的空气 净化安全装置。
测定次数 4 次
低点校准
设定值 绝对误差 标准离差
200 ul - 1.4 Ul 0.101 ul
平均容积 相对误差 相对离差
198.6 ul -0.7 % 0.202 %
高点校准
设定值 绝对误差 标准离差
1000 ul - 0.63 Ul 0.783 ul
平均容积 相对误差 相对离差
999.37 ul -0.063 % 0.078 %
2-3mm
P200和P1000 2-4mm
P5000
3-6mm
P10ML
5-7mm
加样器-使用
放液 将吸头口贴到容器内壁并保持10- 40℃倾斜,缓慢平稳地把按钮压到第1 停点,等1s后将吸头压至第二点排出 剩余液体,压住按钮,同时提起加样 器,使吸头贴管壁擦过,松开按钮, 按吸头弹射器去除吸头。
3.高压消毒,有的加样器的吸管部分可高压消毒(121℃及1巴 压力下消毒20分钟),(如Eppendor的Research单道可调加 样器)。但消毒时不可超温超时,也不能挤压放置,以免造 成变型。
4.各区(试剂准备、样本提取、扩增和产物检测)的加样器应
有各自的标识,清洁和消毒 时,应分别处理。
加样器-校准
加样器-维护及校准
维护
1.一般维护可用中性洗涤剂(如洗餐具用的洗涤灵),或者用 异丙醇清洁。然后用蒸馏水反复洗涤,去除洗涤剂或异丙醇 ,晾干。清洁后活塞处可使用一定量的润滑剂。
2.如果有液体进入加样器内的严重污染,可以将加样器拆开后 进行清洁,具体拆开步骤参照加样器说明书(不同的加样器 的拆开方式有所不同)。
比安全柜顶部至少高出100mm生物安全柜的使用规范每次使用前检查不打开观察窗列出工作所需物品的清单以减少双臂进入破坏气流打开风机510min窗式报警器气流报警器任何造成安全柜内气流紊乱的不良操作都会危及操作者的安全操作准备物品摆放与防污染措施尽量少放仪器和物品不要阻塞气口的空气流通废物容器袋置安全柜内密封消毒安全柜内洁净物品污染物品分开放置消毒巾的垫置操作尽量工作台中央注意动作对定向气流的影响工作用纸不允许放在生物安全柜内尽量减少操作者背后人员的走动快速开关实验室的门进入时敲门提醒正在操作的人员生物安全柜内感染性材料溢洒的处理当发生少量溢洒时应用吸收纸巾立即处理并立即用浸满消毒液的毛巾或纱布对生物安全柜及其内部的所以物品进行擦洗
按功能选择键,设置各项要求:温度、速度、时间、 加速度及减速度,带电脑控制的机器还需按储存键, 以便记忆输入的各项信息。
待离心机完全停止转动时打开机盖,取出离心样品, 用柔软干净的布擦净转头和机腔内壁,待离心机腔内 温度与室温平衡后方可盖上机盖。
高速(冷冻)离心机
离心分类 微速离心 低/ 高速离心 超速离心
5. 应该每天检查在特定的转速下,离心杯的内表面有无污物。离心转头和离心桶 应每天检查有无腐蚀点以及极细的裂缝,以确保安全。离心桶、转头和离心 机腔每次用后都应该消毒。每次用后,应该把离心桶倒放,以排净离心配平 的液体。
离心机-维护和清洁
清洁方法:
1. 中性洗涤液清洁,然后用清水清洁。 2. 必要时使用含0.5%有效氯的消毒液擦拭污染部位
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