中性体系中鲁米诺电化学发光行为

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鲁米诺与化学发光
陕西师范大学化学化工学1院
实验目的
➢ 掌握鲁米诺制备所涉及的酰胺化、硝基还原基本实验操作。 ➢ 了解鲁米诺发光的原理。
2
实验原理
➢鲁米诺制备 ➢鲁米诺化学发光
3
鲁米诺的制备
1.3 g 3-硝基邻苯二甲酸和2 mL 10% 水合肼加入装有温度计和回流冷
凝管的100 mL三口烧瓶中，三口烧瓶的另一支口通过安全瓶与水泵相连。
电热帽加热至固体溶解后，加入4 mL二缩三乙二醇。开启循环水泵并快
速加热三口瓶，使反应体系温度维持在210-220oC约2 min，打开安全瓶旋
塞使体系与大气相通，停止加热并关闭水泵。反应液冷却至100oC，加入
约20 mL热水，进一步冷却至室温，过滤，收基-邻苯二甲酰肼中间体转移至100 mL烧杯，加入6.5 mL10%
将不同荧光染色剂（1-5 mg）分别溶于2-3 mL水中，并加入到鲁米诺的二甲亚砜溶液就可观察到不同颜色的荧光。
无染料：蓝白色；曙红：橙红色；罗丹明B：绿色；荧光素：黄绿色。
5
NaOH溶液，搅拌使固体溶解，加入4 g 水合连二硫酸钠，加热至沸腾并
不断搅拌，5 min后，稍微冷并加入2.6 mL冰醋酸，冰水浴冷却至室温，
析出黄色晶体，过滤、洗涤后收集产品。
4
鲁米诺的化学发光
在100 mL磨口锥形瓶中依次加入4 g KOH、20 mL DMSO和0.2 g未干燥的鲁米诺，塞上瓶塞。剧烈摇荡使溶液与瓶内空气充分接触，此时，在暗处就能观察到锥形瓶中发出微弱的蓝色荧光；继续摇振并不时打开塞子让新鲜空气进入，瓶中荧光会越来越亮。

鲁米诺化学发光分析研究综述

鲁米诺化学发光分析研究综述化学发光是化学反应体系中的某些分子，如反应物、中间体或反应产物吸收了化学反应释放出的化学能，由基态跃迁至激发态，当其从激发态返回基态时所产生的光辐射[1]。

化学发光法则是根据化学反应的发光强度或发光总量确定相应组分含量的一种分析方法。

同荧光法相比，化学发光法不需要外来的光源，减少了拉曼散射和瑞利散射，降低了噪音信号的干扰，提高了检测的灵敏度[4]，扩大了线性范围。

鲁米诺（5-氨基-2，3-二氢-1，4-二杂氮萘二酮，也称3-氨基邻苯二甲酰肼）因其结构简单、易合成、水溶性好，以及发光量子效率高等特点，鲁米诺是最常用的液相化学发光试剂之一。

自从1928年albrecht首次报道了鲁米诺与氧化剂在碱性溶液中的化学发光反应以来，人们对该化学发光体系的研究就一直十分活跃，使得该化学发光体系被应用于许多领域之中。

white等通过比较鲁米诺体系的化学发光光谱和3-氨基邻苯二甲酸根离子的荧光光谱，提出鲁米诺化学发光反应的发光体。

在碱性条件下，鲁米诺首先被氧化为叠氮酮，然后形成桥式六元环过氧化物中间体，分解后以光子的形式释放出能量产生化学发光。

下面笔者简要介绍鲁米诺化学发光反应的机理，详细地总结近五年来鲁米诺化学发光体系的应用进展。

鲁米诺化学发光体系的分析应用主要基于以下几个方面。

鲁米诺-过氧化氢化学发光体系应用最为广泛。

许多过渡金属离子对鲁米诺-过氧化氢化学发光反应具有很好的催化作用。

李正平等发现铁蛋白催化，产生很强的化学发光信号，建立简便灵敏的检测铁蛋白的化学发光方法。

方法的线性范围为0.5～10μg/l，检出限为0.36μg/l，为铁蛋白作为纳米粒子标记物及直接检测提供一种新的途径。

戴路等报道了一种新的测定雌性激素的流动注射化学发光方法。

在碱性条件下，金银复合纳米粒子能显著地增强鲁米诺-过氧化氢化学发光，而雌性激素能明显地抑制该体系的化学发光强度，建立了测定天然雌激素（雌酮、雌二醇和雌三醇）的化学发光方法。

鲁米诺_过氧化氢_纳米银化学发光体系测定药物中的对乙酰氨基酚

2 结果与讨论
2． 1 流路参数的选择和化学发光动力学曲线
分别考察了泵速对化学发光强度的影响。发现当泵 P1 的泵速增大时，ΔI 亦增大，当泵速为 3. 6 mL / min时，ΔI 最大，为了节省试剂，实验选择 P1 的泵速为 3. 6 mL / min。当泵 P2 的泵速增大时，ΔI 亦增大，当泵速大于 2. 3 mL / min 时，ΔI 基本不发生变化，本实验选择 P2 的泵速为 2. 3 mL / min。
应用化学 CHINESE JOUＲNAL OF APPLIED CHEMISTＲY
Vol． 31 Iss． 1 Jan． 2014
鲁米诺-过氧化氢-纳米银化学发光体系测定药物中的对乙酰氨基酚
樊雪梅a，b* 王书民a 崔效伟a
（ a 商洛学院化学与化学工程系商洛 726000； b 商洛市材料科学工程研究院商洛 726000）
图 4 luminol 浓度对发光强度的影响 Fig． 4 Effect of luminol concentration on the CL intensity
NaOH： 0． 05 mol / L； H2 O2 ： 2. 5 × 10 － 3 mol / L； Ag NPs： 7． 5 × 10 － 6 mol / L； acetaminophen： 8． 0 × 10 － 6 mol / L
图 6 纳米银浓度对发光强度的影响 Fig． 6 Effect of Ag NPs concentration on the CL intensity
Luminol： 1． 0 × 10 － 6 mol / L； NaOH： 0. 05 mol / L； H2 O2 ： 2. 5 × 10 － 3 mol / L； acetaminophen： 8． 0 × 10 － 6 mol / L

药物化学鲁米诺化学发光体系

鲁米诺的衍生物主要有异鲁米诺、4-氨基已基-N-乙基异鲁诺及AHEI和ABEI等。

鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化，发生化学发光反应，辐射出最大发射波长为425nm的化学发光。

在通常情况下鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应相当缓慢，但当有某些催化剂存在时反应非常迅速。

最常用催化剂是金属离子，在很大浓度范围内，金属离子浓度与发光强度成正比，从而可进行某些金属离子的化学发光分析，利用这一反应可以分析那些含有金属离子的有机化合物，达到很高的灵敏度。

其次是利用有机化合物对鲁米诺化学发光反应的抑制作用，测定对化学发光反应具有猝灭作用的有机化合物。

其三是通过偶合反应间接测定无机或有机化合物。

其四是将鲁米诺的衍生物如异鲁米诺（ABEI）标记到羧酸和氨类化合物上，经过高效液相色谱（HPLC）或液相色谱（LC）分离后，再在碱性条件下与过氧化氢－铁氰化钾反应进行化学发光检测。

也可以采用其它分离方法，如将新合成的化学发光试剂异硫氰酸异鲁米诺标记到酵母RNA后，通过离心和透析分离，然后进行化学发光检测。

此外应用的还有N2（B2羧基丙酰基）异鲁米诺，并对其性能进行了研究。

鲁米诺电化学发光关键中间体的质谱在线表征

生成中间产物 A8#继续发生脱水反应生成高能态的 1IY *然而#上述工作对于关键中间体
的存在并未给出直接的实验证据#导致相关反
应机理存在争论#影响后续高效鲁米诺电发光
体系的设计与开发*
质谱的高灵敏度 ,快速响应 ,可解析结构等
鲁米诺因较低的氧化电位和较高的电化学发光$$.$*!(%*0$2+.&2+#$'*$#*$#B3A%量子产率而被广泛应用于免疫分析!8>6",食品安全!?>:"
和电化学发光显微镜等 !<" 领域#然而#对于鲁米
诺电化学发光反应机理的研究则鲜有报道*
第:<卷第8期
676:年8月
质谱学报
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鲁米诺电化学发光关键中间体的质谱在线表征
于凯8乔志媛8张铭旺8朱乾龙8刘吉林6王雪凝8 余千云8姜延晓8张洪8姜杰8
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鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系快速分析生物样品中莱克多巴胺

方法的检出限为２５０ｇ・，克多巴胺浓度Ｌ相． ×１ｍＬ莱ｊ
收稿Ｅ期２１４２，订日期：２１—８１ｔ０卜Ｏ—２修０１０８
如图１所示，分别将铁氰化钾及鲁米诺溶液和载流（水或样品）通过相应的管道以１４ｍＬ・ｎ１．ｍｉ＿的流速输入流通
第３卷，１２第期２０ｌ２年１月
光
谱
学
与
光
谱
分
析
Ｖｏ．２Ｎｏ１ｐ７ — １３．．，ｐ４７７
ＳｅｔｏｃｐｎｐｃｒｌＡｎｌｓｓｐｃｒｓｏｙａｄＳｅｔａａｙｉ
Ｊｎａｙ０２ａｕｒ，２１
文献标识码：ＡＤＩｔ．９４ｊｉｓ．０００９（０２００４０Ｏ．０３６／．ｓｎ１０５３２１）１０７—４
中图分类号：８．０４２５
对发光强度在４００～８００ｇ・范围内呈良． ×１． ×１ｍＬ
１１仪器与试剂．
１实验部分
严重的危及生命［ｌ０２年起，。２０我已严禁在饲料中添加使
用莱克多巴胺。鉴于莱克多巴胺的危害性，检测方法的研其究引起广泛的关注。
ＢＣ，－Ｚ型近紫外灵敏光谱测型微弱发光测量仪；ＰＩ２Ｊ
Ｂ０～ＪＴ１０１型蠕动泵（定兰格恒流泵有限公司）保；ＭＡＳＩ微波萃取反应仪（海新仪微波化学科技有限公司）Ｅ。
莱克多巴胺分析方法包括高效液相色谱法［、气相色３谱质谱联用技术【、液相色谱一质谱联用技术［】７、同位素

鲁米诺化学发光体系的应用

鲁米诺化学发光体系的应用鲁米诺（5-氨基-2，3-二氢-1，4-二杂氮萘二酮，也称3-氨基邻苯二甲酰肼）俗名发光氨luminol，因其结构简单、易合成、水溶性好，以及发光量子效率高等特点，常温下是一种黄色晶体或者米黄色粉末，是一种比较稳定的化学试剂,化学式C8H7N3O2 。

鲁米诺是最常用的液相化学发光试剂之一。

通常用于酶促化学发光实验以及刑侦上的微量血迹检测。

由于其结构简单、易合成、发光量子效率高的特点，现也被用于蛋白质印迹试验western blot 中。

鲁米诺化学发光体系的分析应用主要基于以下几个方面。

一、鲁米诺-过氧化氢化学发光体系应用最为广泛。

许多过渡金属离子对鲁米诺-过氧化氢化学发光反应具有很好的催化作用。

李正平等发现铁蛋白催化，产生很强的化学发光信号，建立简便灵敏的检测铁蛋白的化学发光方法。

方法的线性范围为0.5～10μg/l，检出限为0.36μg/l，为铁蛋白作为纳米粒子标记物及直接检测提供一种新的途径。

戴路等报道了一种新的测定雌性激素的流动注射化学发光方法。

该方法已用于孕妇尿样中雌激素总量的测定。

刘振波等基于人的血清白蛋白对鲁米诺-过氧化氢-叶绿素铜钠化学发光体系的抑制作用，采用流动注射技术建立了一种简单、快速、可连续测定人的血清白蛋白的新方法。

二、鲁米诺-高碘酸钾化学发光体系。

王瑞琪等发现在碱性介质中，镧（iii）对鲁米诺-高碘酸钾体系的化学发光反应有显著的增敏作用。

据此，建立了测定镧（iii）的反相流动注射化学发光新方法，并将此法用于合成样品的测定。

鲁米诺化学发光底物液使用说明书

化学发光液使用说明书
【产品名称】
通用名称：鲁米诺化学发光底物液英文名称：Luminol substrate solution
【包装规格】
组分
规格
发光液A
10mL/瓶，1瓶/盒
发光液B
10mL/瓶，1瓶/盒
【预期用途】
适用于化学发光实验的发光底物液。
【检验原理】
原理是应用酶联免疫学基本原理——抗原-抗体反应的高度特异性与酶催化的高度灵敏性结合起来，利用酶催化底物的化学发光反应以对组
织或细胞内特定物质进行定性或定量。
【主要组成成份】
底物发光液A液（避光保存）：鲁米诺、对碘苯酚、Tris-缓冲液等底物发光液B液：双氧水、Tris-缓冲液【储存条件及有效期】
储存条件：2到8℃保存，避光。有效期：12个月。【自备仪器】
移液器，光子计数仪或发光免疫分析仪。
【使用方法】
1、在加入HRP酶标记物洗涤后，准备加入发光底物液。 2、使用底物时将化学发光底物液A和化学发光底物液B等体积加入。 3、根据具体的实验体系的体积，加入相应的量的混合底物液，然后
置于暗处室温放置5分钟。 4、检测测量得结果（发光值RLU）。
【检验结果的分析】
1．空白对照不加HRP标记的抗体/抗原和阴性对照结果应无色。阳性对照及加HRP标记的抗体/抗原发出蓝色光。
2. 通过绘制标准曲线，检测未知浓度的发光值，对应标准曲线找欲测目标物浓度。
【产品性能指标】
1、外观与结构：发光液A液、B液均为无色透明液体，无沉淀、颗粒
邮政编： 215123 码
电话号： 0512-62950056 码
传真号： 0512-69250163 码
号】【产品标准编号】【说明书批准及修改日期】

精子细胞氧化应激活性氧（ROS）鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒产品说明书

精子细胞氧化应激活性氧（ROS）鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途精子细胞氧化应激活性氧（ROS）鲁米诺化学发光法定量检测试剂是一种旨在通过自由基探针鲁米诺和强化剂的参与下，精子细胞中的活性氧族使发光物氧化降解并发光，在化学发光仪（Luminometer）的帮助下定量检测精子细胞活性氧族（过氧化氢）的生成和数量的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

适用于动物和人体精子细胞的活性氧族的检测。

可以被用于细胞凋亡、衰老、代谢和营养学，以及发育生物学（男性不育）等的研究。

产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定，检测敏感。

技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，甚而导致诸如男性不育、冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。

鲁米诺（luminol），又称氨基邻苯二甲酰肼（luminol;3-aminophthalic hydrazide 5-amino-2,3-dihvdro- 1,4-phthalazinedione），是一种脂溶性的发光剂，氧化后生成鲁米诺自由基而化学发光，具有460nm左右峰值的带状光谱，肉眼可观察到鲜明的紫蓝色。

血催化鲁米诺化学发光与荧光染料的能量转移实验_冯振南

本文介绍了血催化鲁米诺化学发光与荧光染料的能量转移实验，实验视觉刺激，趣味性强，试剂易得，重现性好。

化学反应大多以热的形式释放能量，也有一些化学反应是以光的形式释放能量。

鲁米诺在碱性条件下与氧化剂的作用就是一个化学发光的典型例子。

一般认为，鲁米诺在碱性溶液中转化为负离子，后者在适当的催化剂和氧化剂作用下可生成激发态的鲁米诺中间体。

当激发态返回至基态，就会产生耀眼的蓝光。

在通常情况下鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应相当缓慢，但当有某些催化剂存在时反应非常迅速，发光强度显著增强。

常用的氧化剂如过氧化氢、过硫酸钾和次氯酸钠等，常用的催化剂有金属离子、金属配合物、血红蛋白和辣根过氧化物酶等。

利用这一反应可以检测微量的金属离子、过氧化物、血痕和过氧化物酶等。

微量血痕也可使鲁米诺产生明亮的发光[1]。

早在1937年德国刑侦科学家就发现血液能使鲁米诺发光，此后逐步用于搜索血痕和显现潜血指纹[2]。

利用血痕的高效催化作用，还可观察到鲁米诺化学发光的能量转移作用。

激发态鲁米诺中间体也可将能量传递至激发能量较低的荧光染料分子，受激发的荧光染料分子再通过发出荧光释放能量恢复至基态。

不同荧光染料分子的激发态能量的差异使得其发出的不同颜色的荧光。

1 血痕催化鲁米诺发光实验（1）试剂的配制。

血样的制备：取3.8%枸橼酸钠溶液1份与9份动物血液（健康人血或鸡鸭等其他动物血均可）混合可制得新鲜血液。

再取1.0 mL新鲜血液用蒸馏水稀释至100mL即为实验用血样。

A液：取0.01 克鲁米诺溶于100mL1.0%碳酸钠溶液，另加0.01 克对碘酚作为稳定剂。

B液：取0.5 mL30%过氧化氢用蒸馏水稀释至100 mL，用5%H3PO4调pH至3.0。

（2）实验步骤与现象。

实验需在暗室或晚上进行。

在15 mL试管中加入A、B液各5 mL，混匀后沿管壁加入1.0 mL血样，即可观察到持续耀眼的蓝光。

影响血痕-鲁米诺化学发光的因素较多，碱过强(如氢氧化钠)、碱浓度过大和过氧化氢浓度过大，将使发光非常短暂[3]。

鲁米诺电化学发光用于生物分子分析的研究进展

鲁米诺电化学发光用于生物分子分析的研究进展屠一锋苏州大学化学化工学院分析化学研究所，215123本课题组开展电化学发光分析研究工作的主要目标是应用于生物分子分析：一、对鲁米诺电化学发光行为及机理的理解：文献报道鲁米诺的电化学发光原理类似于其化学发光原理，是基于鲁米诺的两步氧化反应，在第二步氧化开环时生成激发态而产生光辐射，是不可逆过程，我们的研究表明，鲁米诺的电化学发光可能更主要是涉及自由基的过程，其氧化还原过程中形成自由基并在相应的条件下可在未氧化开环的条件下辐射光信号，从而不需要氧化至第二步开环反应，因此鲁米诺分子可以提供可逆的电化学发光反应，从而为研制电化学发光传感器和检测器提供了重要的基础。

多种纳米粒子可以促进鲁米诺在低电位下的可逆电化学发光反应。

二、中性介质中鲁米诺的电化学发光行为：绝大部分文献报道均强调鲁米诺的电化学发光必须在强碱性介质中实施，而我们的研究主要瞄准中性介质中鲁米诺的电化学发光，经过长期研究，我们发现完全可以在中性介质中实施其电化学发光分析，这对开展生物分子的分析是十分有利的。

研究中采用的主要技术措施是多种增敏技术来提高中性介质中鲁米诺电化学发光的效率，如使用增敏剂和电极表面修饰等。

实现中性介质中的电化学发光对生物分子的研究具有重要价值。

三、生物分子分析研究：已探讨了对多种类型生物分子进行分析测定的性能，其主要机理是基于自由基之间的能量转移及自由基湮灭作用等，表现在信号响应上为电化学发光的增强或猝灭，研究对象包括生物小分子如谷胱甘肽、黄酮、维生素、尿酸等，灵敏度高，检测下限可达皮摩尔以下，生物大分子如酶、DNA等，已研究了葡萄糖氧化酶、尿酸氧化酶、谷丙转氨酶等及其催化体系均有响应，对DNA的响应亦已实现，并可用于研究DNA与小分子之间的作用。

四、电化学发光检测与流动分析及分离技术的联用：生物样品大多组成复杂，电化学发光检测池的研制可实现电化学发光检测与分离技术的联用，我们目前已经构建了结构合理、性能优良的电化学发光检测池，与流动分析成功联用，目前正开展毛细管电泳、芯片电泳与电化学发光检测联用的研究。

鲁米诺-Cu(Ⅱ)-盐酸二甲双胍化学发光体系的研究

鲁米诺-Cu(Ⅱ)-盐酸二甲双胍化学发光体系的研究李红;杜建修【摘要】在Cu(Ⅱ)存在下,研究了luminol-Cu(Ⅱ)-盐酸二甲双胍化学发光体系,建立了测定盐酸二甲双胍的流动注射化学发光新方法.结果表明,在优化的实验条件下,化学发光强度与盐酸二甲双胍浓度在1.0×10~(-9)～1.0×10~(-7) g/mL范围内呈线性关系.该方法测定盐酸二甲双胍的检出限为5×10~(-10)g/mL,相对标准偏差为1.1%(1.0×10~(-8)g/mL盐酸二甲双胍溶液,n=11).该方法已用于片剂中盐酸二甲双胍含量的测定.【期刊名称】《陕西师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(038)001【总页数】3页(P54-56)【关键词】盐酸二甲双胍;化学发光;流动注射;luminol;Cu(Ⅱ)【作者】李红;杜建修【作者单位】陕西师范大学化学与材料科学学院,陕西,西安,710062;渭南职业技术学院,陕西,渭南,714000;陕西师范大学化学与材料科学学院,陕西,西安,710062【正文语种】中文【中图分类】O657.3盐酸二甲双胍(Metformin hydrochloride),化学名称为1,1-二甲基双胍盐酸盐,是目前临床广泛使用的双胍类降糖药[1],其常见不良反应为胃肠道反应,严重者会引起乳酸中毒、低血糖昏迷以及过敏性休克等,可威胁用药者的生命安全[2].目前文献报道的测定盐酸二甲双胍的方法主要有光度法[3]、电化学法[4]、液相色谱法[5]以及毛细管电泳法[6]等.利用化学发光分析法测定盐酸二甲双胍已有文献报道[7-9],这些方法分别基于盐酸二甲双胍对N-溴代丁亚酰二胺-荧光素体系[7]和Cu(Ⅱ)-H2 O2-罗丹明B体系[8]的增敏作用或对luminol-H2 O2-Cu(Ⅱ)体系[9]的抑制作用.鲁米诺是最常用的液相化学发光试剂之一.在碱性介质中,鲁米诺可被许多氧化剂氧化产生化学发光.许多无机物或有机物对这些反应具有催化、增敏或抑制作用,据此,建立了这些物质相应的化学发光分析法[10].但是由于鲁米诺自身与这些氧化剂反应产生了较强的发光信号,方法遭遇了较高的背景信号,这在一定程度上限制了方法灵敏度的进一步提高.本文发现,在Cu(Ⅱ)存在条件下,盐酸二甲双胍与鲁米诺反应可检测到强的化学发光信号.基于此发现,结合流动注射技术,对影响化学发光反应的各种因素进行了考察,建立了测定盐酸二甲双胍的流动注射化学发光新方法.由于无需外加氧化剂,该方法的背景信号很低,测定盐酸二甲双胍的检出限达5×10-10 g/m L.该方法已用于片剂中盐酸二甲双胍含量的测定,结果与药典方法——分光光度法[11]的测定值无显著性差异.IFFL-D型流动注射化学发光仪和IFFS-A型多功能化学发光检测器(西安瑞迈电子科技有限公司);TU-1901型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司);p HS-3C(A)型精密酸度计(上海大普仪器有限公司).盐酸二甲双胍标准溶液(1.0×10-3 g/m L):准确称取0.050 0 g盐酸二甲双胍对照品(中国药品生物制品检定所,批号100664-200401),用二次蒸馏水溶解后,定容于50 mL容量瓶中.冰箱中避光保存,使用时用水逐级稀释至所需浓度.鲁米诺工作液(2.5×10-4 mol/L):移取1.0×10-2 mol/L鲁米诺储备液(配制于0.01 mol/L NaOH中)2.50 m L于烧杯中,加入 0.5 mol/L NaHCO3溶液20.0 m L和水60 m L,用1.0 mol/L NaOH溶液调节p H为12.5后,转入100 mL容量瓶中,加水至标线.Cu(Ⅱ)溶液(5.0×10-5 mol/L):称取CuSO4·5H2 O(西安化学试剂厂)0.0125 g,用水溶解并定容于1 000 m L容量瓶中.本实验所有试剂除鲁米诺外均为分析纯,水为二次蒸馏水.流通管分别连接鲁米诺溶液、Cu(Ⅱ)溶液和盐酸二甲双胍标准或样品溶液.启动蠕动泵,泵入溶液,待基线稳定后,通过进样阀将50μL鲁米诺溶液注入到Cu(Ⅱ)溶液和盐酸二甲双胍溶液的合并流中,引发化学发光反应,记录化学发光信号.以相对峰高(ΔI=Is-Ib)对盐酸二甲双胍进行定量,其中Is为样品的化学发光信号;Ib为空白信号. 分别试验了Cu(Ⅱ)、Cr(Ⅲ)、Co(Ⅱ)、Ni(Ⅱ)和Zn(Ⅱ)等过渡金属离子对鲁米诺-盐酸二甲双胍化学发光反应的影响.结果表明,只有Cu(Ⅱ)存在时,才可以检测到强的化学发光信号.进一步考察了Cu(Ⅱ)浓度在1.0×10-5～1.0×10-4 mol/L 范围内对化学发光反应的影响.如图1所示,相对化学发光强度随着Cu(Ⅱ)浓度的增大而增大,当Cu(Ⅱ)浓度增大到5.0×10-5 mol/L时,相对化学发光强度达到最大值.本文选择Cu(Ⅱ)浓度为5.0×10-5 mol/L.在5.0×10-5～1.0×10-3 mol/L范围内考察了鲁米诺浓度与化学发光强度的关系.实验表明,化学发光强度随着鲁米诺浓度的增大而增大,但空白信号亦增大.当鲁米诺浓度为2.5×10-4 mol/L,反应有较高的相对化学发光强度和较低的空白信号.实验选择鲁米诺浓度为2.5×10-4 mol/L.实验以NaHCO3-Na2 CO3缓冲溶液为反应介质,考察了鲁米诺溶液的p H值在10.5～13.0范围内对化学发光反应的影响.相对化学发光强度随鲁米诺溶液p H值的增大而增大,当鲁米诺溶液的p H值为12.5时,相对化学发光强度有最大值.故本文选择鲁米诺溶液的p H值为12.5.阀池距过短或过长都会影响混合溶液进入检测器的时间.为了检测到最大的化学发光强度,固定试剂流速为0.83 mL/min,在5～50 cm范围内,考察了阀池距对化学发光强度的影响.结果表明,当阀池距为20 cm时,反应有最大的化学发光强度.在选择实验条件下,盐酸二甲双胍浓度在1.0×10-9～1.0×10-7 g/mL范围内与相对化学发光强度呈线性关系,线性回归方程为ΔI=3.17c+6.22(c:10-8 g/mL),r=0.997 7.对浓度为1.0×10-8 g/mL盐酸二甲双胍溶液进行11次平行测定的相对标准偏差为1.1%.按照 IUPAC建议,计算得该方法检出限为5×10-10 g/m L 盐酸二甲双胍.在选定的实验条件下,对5.0×10-8 g/m L盐酸二甲双胍溶液进行了干扰试验.结果表明,在保持相对测量误差在±5%范围内,1 000倍的乳糖、葡萄糖、倍的淀粉、M g2+;同量的 Cr3+、A l3+、Pb2+、Cd2+对测定无干扰.取市售不同生产厂家的盐酸二甲双胍片剂各5片,准确称量后研细混匀,求得每片的平均质量.从中称取适量粉末,约相当于50 mg盐酸二甲双胍,加水溶解后,过滤,滤液定容于100 mL容量瓶中.按照实验方法进行含量测定,并与药典方法[11]进行对照,结果列于表1.经t检验,本方法与药典方法的测定结果在95%的置信水平上无显著性差异.据文献报道,二甲双胍可以与Cu(Ⅱ)形成配合物,在这一过程中,Cu(Ⅱ)被还原为Cu(Ⅰ).Cu(Ⅰ)极不稳定,具有很低的还原电位[E(Cu(Ⅱ)/Cu(I))=0.16V),在水溶液中可以将溶解氧还原为超氧阴离子自由基自身被氧化为Cu(Ⅱ)(Cu(Ⅰ)+O2→Cu(Ⅱ)+·).生成的超氧阴离子自由基在碱性介质中氧化鲁米诺产生化学发光[12].在Cu(Ⅱ)存在下,无需加入任何氧化剂,盐酸二甲双胍与碱性鲁米诺间反应可产生强的化学发光.对影响化学发光反应的各种因素进行了考察,建立了测定盐酸二甲双胍的流动注射化学发光新方法.该方法简单,灵敏,已被成功用于片剂中盐酸二甲双胍含量的测定.【相关文献】[1]王敬先,康晨霞.降血糖新药——盐酸二甲双胍[J].中国药理学通报,1996,12(4):335.[2]梁莉,乔华,王婷,等.盐酸二甲双胍的不良反应[J].中国药事,2007,21(8):652-654.[3]Ashour S,Kabbani R.Direct spectrophotometric determination of metfo rmin hydrochlo ride in pure fo rm and in drug formulations[J].Analytical Letters,2003,36(2):361-370. [4]Tian X J,Song J F.Catalytic action of copper(Ⅱ)ion on electrochemical oxidation of metformine and voltammetric determination of metformine in pharmaceuticals[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2007,44(5):1 192-1 196.[5]来晓红.HPLC法测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍的含量[J].药物分析杂志,2001,21(3):195.[6]Yardimci C,Ozaltin N.Method development and validation fo r the simultaneous determination of rosiglitazone and metformin in pharmaceutical p reparations by capillary zone electrophoresis[J].Analytica Chimica Acta,2005,549(1-2):88-95.[7]Wang Z P,Zhang ZJ,Fu Z F,et al.Sensitive flowinjection chemiluminescence determination of metfo rmin based on N-bromosuccinimide-fluoresceinsystem[J].Analytical Letters,2003,36(12):2 683-2 697.[8]He C,Zhang Z J,He D Y,et al.Chemiluminescence determination of metfo rmin based on hydroxyl radical reaction and molecularly imp rinted polymer on-lineenrichment[J].Analytical and Bioanalytical Chemistry,2006,385(1):128-133.[9]Marques K L,Santos J L M,Lima J L F C.A catalytic multi-pumping flow system for the chemiluminometric determination of metformin [J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry,2005,382(2):452-457.[10]Marquette C A,Blum L J.Applications of the luminol chemiluminescent reaction in analytical chemistry[J].Analytical and Bioanalytical Chemistry,2006,385(3):546-554.[11]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社,2005:458.[12]Lu C,Song G.,Lin JM.Reactive oxygen species and their chemiluminescence-detection methods [J].Trends in Analytical Chemistry,2006,25:985-995.。

化学实验鲁米诺实验报告

实验名称：鲁米诺的化学发光实验实验目的：1. 了解鲁米诺的化学发光原理；2. 观察并记录不同条件下鲁米诺的化学发光现象；3. 探究催化剂、酸度和温度对化学发光现象的影响。

实验原理：鲁米诺（Luminol）是一种化学发光剂，化学名称为3-氨基苯二甲酰肼。

在碱性条件下，鲁米诺可以与铁、铜、辣根过氧化物酶等催化剂发生氧化反应，产生能量并通过光子形式发散出来，即荧光。

鲁米诺的发光原理通常有两种：一是次氯酸钠氧化鲁米诺使其发光；二是过氧化氢与次氯酸钠反应生成氧气氧化鲁米诺使其发光。

实验材料：1. 鲁米诺粉末；2. 氢氧化钠溶液；3. 次氯酸钠溶液；4. 过氧化氢溶液；5. 铁氰化钾溶液；6. 水浴加热器；7. 移液管；8. 试管；9. 烧杯；10. 秒表；11. 比色计。

实验步骤：1. 准备好实验材料，分别称取适量鲁米诺粉末、氢氧化钠溶液、次氯酸钠溶液、过氧化氢溶液和铁氰化钾溶液；2. 在试管中加入一定量的氢氧化钠溶液，然后加入适量的鲁米诺粉末，搅拌均匀；3. 将试管放入水浴加热器中，加热至室温；4. 取一定量的次氯酸钠溶液，加入试管中，观察并记录化学发光现象；5. 取一定量的过氧化氢溶液，加入试管中，观察并记录化学发光现象；6. 取一定量的铁氰化钾溶液，加入试管中，观察并记录化学发光现象；7. 分别在室温、25℃、37℃、50℃、65℃的水浴加热器中，重复步骤4-6，观察并记录化学发光现象；8. 使用比色计测定化学发光强度，记录数据。

实验结果：1. 在次氯酸钠溶液的作用下，鲁米诺发生化学发光，产生蓝绿色荧光；2. 在过氧化氢溶液的作用下，鲁米诺发生化学发光，产生蓝绿色荧光；3. 在铁氰化钾溶液的作用下，鲁米诺发生化学发光，产生蓝绿色荧光；4. 随着温度的升高，化学发光强度逐渐增强；5. 在不同温度下，化学发光强度存在差异。

实验分析：1. 鲁米诺的化学发光原理是由于其在碱性条件下与氧化剂发生氧化反应，产生能量并通过光子形式发散出来；2. 催化剂可以加速鲁米诺的氧化反应，从而增强化学发光强度；3. 温度对化学发光现象有显著影响，随着温度的升高，化学发光强度逐渐增强；4. 在实验过程中，观察到的化学发光现象与理论相符。

Fe_3O_4磁性纳米颗粒与鲁米诺的化学发光反应(精)

Fe_3O_4磁性纳米颗粒与鲁米诺的化学发光反应Fe_3O_4磁性纳米颗粒的应用受到了许多研究领域的广泛关注。

Fe_3O_4磁性纳米颗粒通常被认为是化学惰性的,没有很好的生化性能,但最近有研究表明,Fe_3O_4磁性纳米颗粒具有过氧化物酶的某些特性,能催化过氧化氢与其底物的显色反应。

但是有关Fe_3O_4磁性纳米颗粒对过氧化氢化学发光体系影响的研究尚未见报道。

在各类化学发光体系中,鲁米诺化学发光体系是研究最多,应用最广的发光体系。

因此研究Fe_3O_4磁性纳米颗粒对鲁米诺化学发光体系的影响,对揭示该催化反应机理有重要的意义。

为此,本文首先合成了Fe_3O_4磁性纳米颗粒,并研究了Fe_3O_4磁性纳米颗粒与鲁米诺化学发光反应,考察了不同条件下Fe_3O_4磁性纳米颗粒的反应活性,发现Fe_3O_4磁性纳米颗粒所表现出的反应活性与光照和溶解氧等因素有密切关系。

随后本文提出并验证了Fe_3O_4磁性纳米颗粒和鲁米诺的反应机理。

全文包括以下几章的主要研究内容:1.综述了纳米材料的性能,主要是磁性纳米材料的性能和应用。

比较详细地介绍了Fe_3O_4磁性纳米材料的制备方法,归纳了各种制备方法的优缺点。

且对Fe_3O_4磁性纳米材料当前的应用热点进行了概述,并对其研究前景进行了展望。

2.依照文献方法合成了Fe_3O_4磁性纳米颗粒,并采用XRD粉末衍射,扫描电镜,纳米粒度仪对其进行了表征。

结果表明得到的颗粒为粒径在15-20nm的Fe_3O_4磁性纳米颗粒。

利用1,10-菲罗啉分光光度法分析了Fe_3O_4磁颗粒表面二价铁和三价铁的含量比例,结果发现Fe_3O_4磁颗粒表面主要离子为Fe2+。

3.研究了Fe_3O_4磁纳米颗粒与鲁米诺化学发光的反应,并考察不同实验条件对该反光反应的影响,包括磁颗粒浓度和pH,鲁米诺浓度和pH,溶解氧,以及光照等因素。

综合考虑各大因素发现,当磁颗粒浓度为10ppm,pH=3.5,鲁米诺浓度为1.00×10-4mol/L,pH=12时,化学发光强度达到最优值。

化学发光试剂鲁米诺

化学发光试剂鲁米诺简介：鲁米诺(Luminol)，又名发光氨。

一种在犯罪现场检测肉眼无法观察到的血液，可以显现出极微量的血迹形态(潜血反应)。

化学名称为5-氨基-苯二甲酰肼。

常温下是一种蓝色晶体或者苍黄色粉末，是一种比较稳定的人工合成的有机化合物。

化学式为C8H7N3O2。

同时，鲁米诺是一种强酸，对眼睛、皮肤、呼吸道有一定刺激作用。

由于血红蛋白含有铁，而铁能催化过氧化氢的分解，让过氧化氢变成水和单氧，单氧再氧化鲁米诺让它发光。

所以鲁米诺广泛应用于刑事侦查、生物工程、化学示踪等领域。

法医学上，鲁米诺反应可以鉴别经过擦洗，时间很久以前的血痕。

生物学上则使用鲁米诺来检测细胞中的铜、铁及氰化物的存在。

NHNHONH 2鲁米诺【英文名】3-Aminophthalhydrazide【中文名】鲁米诺/3-氨基苯二甲酰肼/发光氨【CAS#】521-31-3【分子量】177.16【分子式】C8H7N3O2【外观】浅黄色粉末【形状】浅蓝粉末【含量】≥98%(HPLC)【熔点】>300°C(lit.)【沸点】309.07°C(rough estimate)【存储条件】室温，避光防潮【类别】有毒物品【毒性分级】中毒【储运特性】库房通风低温干燥【灭火剂】干粉、泡沫、砂土、二氧化碳,雾状水【化学性质】易溶于碱液，能溶于稀酸，几乎不溶于水，难溶于醇。

中性或淡酸性溶液暴露在紫外光中时显强烈的亮蓝色荧光。

【用途】化学发光试剂，常用于化学发光免疫分析，如金属阳离子和血液检测。

作化学分析试剂、指示剂。

化学发光分析检测试剂(如测定金属阳离子或血)。

用于化学发光分析，如：金属阳离子、血液及糖皮质激素。

发光测试:化学发光试剂及指示剂，常用于化学发光分析，如金属阳离子、血液免疫等等。

【发光率检测】最适荧光波长为425nm（在60mMK2S2O8,100mK2CO3,PH11.5溶液中检测化学发光率）。

理论即使犯罪现场的血迹已经被擦过或清除过，法医依旧可以使用鲁米诺找到它们的位置。

水相中荧光素和有机相中鲁米诺、光泽精的电位分辨电致化学发光及鲁米诺化..

生化样品的分析生物化学的迅猛发展为的应用提供了良好的机遇分析法正逐渐地成为生化样品分析中一种重要的分析手段通过检测血液代谢产物等样品中某些物质的含量可以达到帮助疾病诊断的目的利用鲁米诺体系的等测定了人血液中的胆固醇在偶联活化剂碳二亚胺的存在下用标记己知序列的寡聚核普酸片段可以成功地用作的探针并应用于未知序列的识别及含量测定获得满意结果其检出限达到了”几’胺类化合物是一个经典的体系可以产生强的氨基酸中因为含有氨基基团而可用扩十的进行高灵敏的检测陈曦等【设计了一种新型的适用于流动注射检测的薄层电解池建立了氨基酸及肤类物质的’十的流动注射检测系统成功地检测了氨基酸及肤类物质等【】利用的检测了一些陆生和海洋生植物中叶绿素等【川利用发展了螺旋酶的测定方法在检测的分析中受到越来越多的关注等「」报道了一系列用于检测分析的方法利用配合物成功地测定了测定原理见图逆转录聚合酶链反应己广泛用于特异性转录产物的定量和定性分析等〔」把工和相结合可进行细胞表达的灵敏定量分析进而探讨细胞功能和进化的机理图一电致化学发光检测原理免疫分析免疫分析是临床生化检验的一种重要技术抗体和抗原间的免疫性反应经常被用于高选择性的分析测定中在动物母体的免疫反应中多细胞和单细胞的抗体可产生大量的分析物石英晶体微天平法无需标记物就可检测免疫反应【但大量的免疫反应可以用带标记物的抗体或抗原监控常用的标记物有荧光标记物化学发光标记物自由基活性标记物和酶标记物可用于比色法或电化学法电致化学发光免疫分析法是和免疫分析相结合的产物是以具有活性的物质标记抗原或抗体利用抗原与抗体免疫反应前后信号的改变对抗体或抗原进行分析的一种免疫分析方法如图所示目前用于免疫分析的主要有夹心型竞争型取代型等几种类型〔‘沪‘夕喻、图电致化学发光免疫分析的类型夹心型固定抗体的竞争型固定抗原的竞争型固定抗体的取代烈固定抗原的取代烈，一二一一年等【首先提出了由于该法具有非放射性灵敏度高快速动力学范围宽廉价可控性好自动化程度高等优点而备受人们。

微乳液-鲁米诺-H2O2-Co(Ⅱ)化学发光体系与应用

摘
要：究了在微乳液中，ｏＩ）化鲁米诺一系产生化学发光及选择条件试验．ＥＴ研Ｃ（Ｉ催Ｈ０体用ＤＡ做掩蔽剂时，ｏＩ）Ｃ（Ｉ的
最低检出线为９１ｘＯ。，，．ｌｇＩ浓度范围为ｌｌ￣ｌｌｇＬ在检测ｌｌｇｏＩ）５ＪｘＯｘＯ，，ｘＯ／Ｃ（Ｉ￣浓度时，对标准偏差是（Ｓ￣Ｌ相ＲＤ）１．，多数元素不干扰，用于维生素Ｂ２２％大应中痕量Ｃ（Ｉ的测定时，ｏＩ）回收率为９６％～０１６％。
Байду номын сангаас
ＣＭＡ～温微乳液为：ＴＢ吐温：丁醇：庚烷＝ｐＴＢ吐ＣＭＡ：正正Ｈ值为３时，于池内混合１２Ｓ即出现最大发光峰～０５１：．２：．２。鲁米诺储备溶液（ｘＯｍｌ）．：０１５０１５２０１ｌｏＬ：值，／准其化学反应动力学曲线（图２。见）
优点。
分别移取２．ｍＬ鲁米诺分析溶液１Ｌ：５．ｍＨ０溶０Ｃ（ＩｏＩ）标准溶样或试剂溶液于试样储管中，按一定速度打开试样储管活塞，稳定地注入反应池中，录仪及快速记
方法中测定微量及痕量元素时具有增敏，增溶，稳等液，过试剂储管加入洗净的反应池中继续移取２Ｌ增通．ｍ０
乳液为：ＴＢ正丁醇：ＣＭＡ：正庚烷＝．５０２：．５ＣＢ吐０２：５０．Ｐ一．２

鲁米诺如何进行发光检测

鲁米诺如何进行发光检测
鲁米诺又叫发光氨，全称3-氨基苯二甲酰肼，鲁米诺被广泛作为化学发光试剂使用，常用于化学发光免疫分析生化系统中。

常温下外观为黄色晶体或者米黄色粉末，是一种比较稳定的化学试剂。

常用于刑侦现场的血液检测，当鲁米诺试剂喷在血液上，会与活性氧产生氧化作用，释放出蓝紫色荧光，被称为鲁米诺反应。

而鲁米诺如何进行发光检测，有几种检测方法？有许多人还不了解，本文将介绍鲁米诺的发光检测方法。

加入催化剂是目前常运用的方法。

一般情况下，过氧化氢与鲁米诺发光体系的化学发光反应特别缓慢，而在加入了某些催化剂后，反应则变的特别迅速。

目前鲁米诺主要的催化剂有一些金属配合物、过渡金属离子，金属配合物主要有血红蛋白，过氧化酶；过渡金属离子主要有Fe3+、Fe2+、Mn2+、Cr2+等。

在化学发光免疫分析中我们会经常用到的催化剂是过氧化物，特别是辣根过氧化物酶。

一些化合物可以与过氧化物酶标记的抗体进行免疫反应，然后与鲁米诺进行化学发光测定，进而测定这些化合物或抗体。

如地高辛、乙型肝炎表面抗原等都是通过这类方法进行检测分析的。

除去催化剂对检测的加速，在研究中还发现了一些抑制剂，这些有机物可以抑制鲁米诺的化学发光，如含有酚羟基团的还原性化合物，在反应过程中能与氧化剂反应，降低了氧化剂的浓度，使化学发光强度降低，从而间接测定这类有机物质。

另外还有一种方法是通过偶合反应进行间接测定，这里的偶合反应是指将能够产生或者消耗化学发光反应物的一个反应与另一个化学发光反应结合起来,从而可以实现某些物质的间接化学发光测定。

如一些底物在某些酶的作用下产生过氧化氢再与鲁米诺产生化学发光，通过测定化学发光，可以间接地知道测定底物的纯度。

荧光鲁米诺实验报告

根据新思界产业研究中心发布的《2023-2028年中国3-氨基苯二甲酰肼（鲁米诺）行业应用市场需求及开拓机会研究报告》显示，鲁米诺作为一种重要的化学发光剂，其应用范围十分广泛。

以下是对鲁米诺应用领域和市场需求的分析：一、应用领域1. 血迹勘察：鲁米诺与血液中的血红素产生反应后，显出蓝色光亮，这种检验方法高度灵敏，即使血迹时间很久，经历了擦洗，也能识别到血细胞中成分的存在。

因此，鲁米诺被广泛应用于血迹勘察、血液检测、刑事侦察中。

2. 环境分析：鲁米诺可用于检测过氧化物、重金属、过氧化物酶的含量，在环境分析、生物工程、化学示踪、医学研究等领域也有较高应用价值。

3. 化学示踪：鲁米诺在化学示踪领域具有重要作用，可用于追踪化学反应的进程。

4. 医学研究：鲁米诺在医学研究中的应用，如检测肿瘤标志物、病原体等。

二、市场需求1. 法律法规：随着国家对刑侦工作的重视，血迹勘察等领域对鲁米诺的需求将持续增长。

2. 环境保护：随着人们对环境保护意识的提高，鲁米诺在环境分析领域的需求也将不断增加。

3. 生物工程：生物工程领域的快速发展，对鲁米诺的需求也将持续增长。

4. 医学研究：医学研究的深入，对鲁米诺的需求也将不断增加。

综上所述，鲁米诺作为一种重要的化学发光剂，在多个领域具有广泛的应用前景。

随着相关行业的发展，鲁米诺的市场需求有望持续增长。

以下是关于鲁米诺的几个问题及解答：问题1：鲁米诺是什么？解答：鲁米诺，又名发光氨，化学名称为3-氨基苯二甲酰肼，是一种人工合成的有机化合物。

问题2：鲁米诺的发光原理是什么？解答：鲁米诺在碱性条件下可与铁、铜、辣根过氧化物酶等催化剂发生氧化反应，同时产生能量，通过光子形式发散出来，即荧光。

问题3：鲁米诺在哪些领域有应用？解答：鲁米诺在血迹勘察、环境分析、生物工程、化学示踪、医学研究等领域有广泛应用。

问题4：鲁米诺有哪些优势？解答：鲁米诺具有敏感度高、人体危害小、配置方法简单、易操作等优势。