动脉内皮细胞中TIE2启动CREG真核表达质粒pTIE2-CREG-EGFP-N1的表达

动脉内皮细胞中TIE2启动CREG真核表达质粒pTIE2-CREG-EGFP-N1的表达李杰;闫承慧;张效林;梁振阳;冯雪瑶;白净;韩雅玲【摘要】背景:血管内皮发生的分子机制是细胞及基因替代治疗的首要前提.目的:构建一种通过血管内皮细胞特异蛋白TIE2 启动子来启动表达的E1A 激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG) 和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP) 融合的真核表达质粒.方法:根据GenBank 中公布的TIE2 基因的启动子序列,人工合成TIE2 启动子DNA 序列,经AseⅠ和NheⅠ双酶切后,亚克隆入表达质粒pEGFP-N1 中构建pTIE2-EGFP-N1.同时,用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pcDNA3.1 myc-His/hCREG质粒得到CREG 基因,亚克隆入质粒pTIE2-EGFP-N1 中构建pTIE2-CREG-EGFP-N1,酶切鉴定.应用脂质体法将该质粒转染至体外培养的小鼠动脉内皮细胞,荧光显微镜下观察EGFP 的表达;Western blot 检测CREG 蛋白的表达.结果与结论:经酶切鉴定证实实验构建的pTIE2-CREG-EGFP-N1 质粒正确;体外转染48 h,荧光显微镜下可见EGFP的表达,Western blot 检测到CREG 蛋白的表达.说明实验成功构建了pTIE2-CREG-EGFP-N1 重组质粒,其可携带目的基因在小鼠动脉内皮细胞中有效表达.%BACKGROUND: The molecular mechanism of blood vessel endothelium formation is the primary premise for cellular and gene replacement therapy. OBJECTIVE: To construct an eukaryotic expression plasmid for cellular repressor of E1A-stimulated genes (CREG) driven by an endothelial cell specific promoter TIE2 and reported by enhanced green fluorescence protein (EGFP), and then to observe its expression in mouse artery endothelial cells in vitro. METHODS: TIE2 promoter DNA sequencewas synthesized according to GenBank, and was attached with AseⅠ and NheⅠrestriction enzyme recognition sites at bo th ends, respectively. The TIE2 promoter sequence was released from pUC57-TIE2 plasmid by AseⅠ and NheⅠ digestion enzymes, and then was inserted into pEGFP-N1 plasmid to form pTIE2-EGFP-N1 recombinant plasmid. CREG gene fragment was released from pcDNA3.1 myc-His/hCREG plasmid by BamHⅠ and EcoRⅠdigestion enzymes, and then was subcloned into pTIE2-EGFP-N1 plasmid in order to construct pTIE2-CREG-EGFP-N1 plasmid. The recombinant pTIE2-CREG-EGFP-N1 plasmid was then transfected into mouse artery endothelial cells by liposome. The EGFP expression was observed by fluorescence microscopy and the CREG expression was detected by western blot analysis. RESULTS AND CONCLUSION: Identification of pTIE2-CREG-EGFP-N1 by enzyme digestion and sequencing analysis showed that lengths of the target genes which were inserted into the recombinant plasmid were correct, and that the recombinant plasmid was transfected into mouse artery endothelial cells successfully. The strong expression of EGFP was observed by fluorescence microscopy, and the expression of CREG protein was detected by western blot analyis. The results showed that the pTIE2-CREG-EGFP-N1 eukaryotic expression plasmid was successfully constructed and the recombinant vector provides a practical tool in investigating the function and regulation of CREG in the development of cardiovascular diseases and also in producing transgenic mice with endothelial cell specific over-expression of CREG.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2011(015)041【总页数】5页(P7706-7710)【关键词】启动子;TIE2;E1A;激活基因阻遏子;转染;小鼠动脉内皮细胞;基因载体构建【作者】李杰;闫承慧;张效林;梁振阳;冯雪瑶;白净;韩雅玲【作者单位】解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科,辽宁省沈阳市110016;解放军第四军医大学西京医院心内科,陕西省西安市710032;解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科,辽宁省沈阳市110016;解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科,辽宁省沈阳市110016;解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科,辽宁省沈阳市110016;解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科,辽宁省沈阳市110016;解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科,辽宁省沈阳市110016;解放军第四军医大学西京医院心内科,陕西省西安市710032;解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科,辽宁省沈阳市110016【正文语种】中文【中图分类】R3180 引言E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes, CREG)是一个转录调控相关因子[1]。

血管内皮生长因子mRNA在上皮性卵巢癌中的表达及意义

# 580#
M ODERN ONCOLOGY, O ct12005, VO I113, NO15
ations between the expression of VEG FmRNA and lymph node m etastasis and the vo lume o f asc ites ( P < 0. 05). N o co rre lations o fVEGFmRNA expression w ere noted w ith h istor ica l types, patho log ical g rade, clin ica l stage and prognosis (P > 0. 05). Conclusion T he expression of VEG FmRNA in epithelia l ovarian carc inom a m ay enhance the pred ic tab ility o f patients at high risk for tum or progress ion w ho a re po ten tia l cand idates for further aggress ive therapy. 【K ey w ords】 ep ithe lia l ovar ian neoplasm; vascular endo the lial g row th factors mRNA; in situ hyb rid ization
血管内皮生长因子 mRNA 在上皮性卵巢癌中的表达及意义
王静 1, 陈亦乐 1, 陈森林 1, 吴晓英 2, 汪春年 2
【摘要】目的探讨血管内皮生长因子 ( vascular endo the lial grow th factor, VEG F) 核酸在上皮性卵巢癌组织中

洛伐他汀对小鼠主动脉血管内皮生长因子表达的影响

洛伐他汀对小鼠主动脉血管内皮生长因子表达的影响作者：谌宇翔谭志坚欧辉跃来源：《商情》2020年第09期【摘要】目的：研究洛伐他汀（Lovastatin，LOV）对小鼠主动脉内皮生长因子（endothelial cell-derived growth factor， VEGF）表达的影响。

方法：成年昆明小鼠24只，随机分为对照组、给药组（LOV低、高浓度）3组，每组8只小鼠。

将1mg/ml的盐酸肾上腺素用0.9%生理盐水稀释1.5倍，于每日的8∶00 am、12∶00am、4∶00 pm对三组都予以皮下注射，盐酸肾上腺素0.05 ml/100 g，连续5天，建立内皮损伤模型。

建模成功后，各組小鼠分别给予洛伐他汀（5、15mg/Kg）进行灌胃，对照组给予0.3ml生理盐水灌胃。

六周后免疫组化检测小鼠主动脉VEGF的表达。

结果：灌胃6周后，免疫组化显示，与对照组相比，给药组小鼠主动脉VEGF表达明显增强，且浓度越高，VEGF表达越强。

结论：LOV通过促进VEGF的表达改善和治疗内皮损伤，LOV对小鼠主动脉内皮损伤后VEGF的表达具有促进作用。

【关键词】洛伐他汀 ;主动脉内皮损伤 ;血管 ;内皮生长因子引言：内皮损伤被认为是血管壁内的动脉粥样硬化（athero-sclerosis， AS）发生发展的早期启动因素。

而洛伐他汀属于调整血脂药，是临床上常用的降血脂、预防心脑血管疾病的药物。

他汀类药物对血管内皮损伤也有明显的改善作用。

但是其机制尚不明确。

本实验通过观察洛伐他汀对小鼠主动脉内皮损伤后VEGF表达的影响，初步探讨洛伐他汀可能的机制。

一、材料与方法（一）药物试剂与仪器成年昆明小鼠24只，雌雄各半，盐酸肾上腺素，戊巴比妥钠，VEGF免疫组化S-P试剂盒，HE染色试剂盒，洛伐他汀，生理盐水等（二）动物分组及模型制备随机选取16只小鼠作为给药组，8只作为对照组。

将1 mg/ml的盐酸肾上腺素用0.9%生理盐水稀释1.5倍，三组小鼠均于每日的8∶00 am、12∶00am、4∶00 pm在皮下注射稀释后的盐酸肾上腺素0.05 ml/100 g，连续5天，自第4天起每二次给药中间时间将小鼠放入0℃的冰水中冰泳5 min，共4次。

猪瘟病毒石门株E2基因在永生化猪血管内皮细胞的表达

（．ｏｌｇｆｔｒａｙＭｅｉｉｅＮｒｗｅｔｒｕｔｒｎｏｅｔｉｅｓｙＹａｇｉｇ７２０，ｈｎ；１Ｃｌｅｏｅｉｒｄｃｎ，ｏｔｓＡｇｉｌｅａｄＦｒｓｙＵｎｖｒｉ，ｎｌ１１０ＣｉａｅＶｅｎｈｃｕｒｔｎ２ＴｅＧｎｒｌｔｉｎｏｏｔｅｔｎｇｍｅｔＳａｅＦｒｓｙＡｄｎｓｒｔｎＳｅｙｎ０３，ｈｎ）．ｈｅｅａＳａｏｆｉｓＰｓＭａａｅｎ，ｔｔｏｅｔｍｉｉａｉ，ｈｎａｇ１０４ＣｉａｔＦｒｔｏ１
ｖｉｅｄｔｅｉｅｓＳＥ）ｐｓｉｅｃｌｅｅｓｒｅｅｙｐｒｍｙｉｅＥｐｅｓｄＥｒｔｉｗｓｄｔｃｄｂＴＰＲａｄｅｎｏｌｌｌ（ＵＶＣ，ｏｉｖｅｌｗｒｃｅｎｄｂｕｏｃ．ｘｒｓ２ｐｏｅａｅｔｙＲ－Ｃｎｎｈａｃｌｔｓｎｅｎｅｅｉｄｅｔｍｍｕｏｕｒｓｅｃｓｙ．ＡＢｃｍｉｅｗｅｔｐｒｏａｌｉｅｔｄｗｉＵＣｅｐｅｓｇＥｒｔｉ．ｎｉＳＶｎｉｃｒｉｎｆｏｅｃｎｅａｓｓＢＬ／ｃｒｉｒｅｔｎｌｊｃｅｔＳＶＥｘｒｓｉ２ｐｏｅＡｔＣＦｌａｅｎａｉｙｎｈｎｎ－
ＳｈｉｅｓｒｉｅｅｉｔＢＡＢＥ－ｕｏｈｅｐＢＡＢＥ－ｕｒ－ｅｔａｏ－ｒｎｓｅｔｄｗｉｈｌｒｐＳＶ－ｉｏ２９ＧＰｃａｎｍｎｔａｎＥ２ｇｎｎｏｐｐｒ．ＴｐｏＥ２ｖｃｏｒｗｓｃｔａｆｃｅｔｈｅｐｅＶＧｎｔ３ｐａｋｇｉｇｃｌｓｂａｃｕｈｏｐｈｔｒｎｓｅｔｏｎｍｅｔｏｄｔｏｃｓｕｄｏｉｕ，ｗｈｉｈｗａｈｎｕｓｄｔｎｆｃｅ３ｈｉｅｕｂｉｉａｅｌｙｃｌｉｍｐｓａｅｔａｆｃｉｈｏｐｒｄｕｅｐｅｖｒｓｃｓｔｅｅｏｉｅｔｔ０ｔＳｗｎｍｌｌｈｃ

血管内皮细胞生长因子与糖尿病肾病

血管内皮细胞生长因子与糖尿病肾病郭宝强;王季猛【期刊名称】《实用医药杂志》【年(卷),期】2006(23)12【摘要】血管内皮细胞生长因子（VEGF），义称血管通透因子（VPF），是一种二聚体糖蛋白。

内源性的VEGF是由血管内皮细胞、白细胞、血小板、各种组织细胞分泌的。

编码VEGF的基因位于6p染色体（6p21．3）。

其蛋白产物有4种变异体，VEGF121、VEGF165、VEGF189、VEGF206。

人体内多种细胞均有VEGF受体，包括内皮细胞、单核细胞、成纤维细胞、造血细胞、成骨细胞等。

受体类型主要包括VEGFR—1（flt—1）和VEGFR-2（KDR／flk—1），其次还有新近发现的neuropilin-1和neuropilin-2两种具体作用不明确的受体。

【总页数】2页(P1522-1523)【作者】郭宝强;王季猛【作者单位】南华大学内分泌科,湖南衡阳,421001;南华大学内分泌科,湖南衡阳,421001【正文语种】中文【中图分类】R587.2【相关文献】1.血管内皮细胞生长因子基因多态性与糖尿病肾病的相关性 [J], 郭宝强;曹运长;张秋菊;郑薇;王季猛2.芪蛭降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织血管内皮细胞生长因子及细胞外基质的影响 [J], 孟凡辰;郭兆安;于春江;孙春晓;武帅;袁婷;李悦;贾佑铎3.利格列汀结合舒洛地特治疗对糖尿病肾病患者血管内皮细胞生长因子影响的研究[J], 段宇芬4.糖尿病肾病大鼠血管内皮细胞生长因子及其受体表达与厄贝沙坦的干预效应 [J], 王艳;马瑞霞;栾健;翟丽慧5.血清血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)是晚期宫颈癌的特异性生物标记物:VEGF-C与胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)、IGF结合蛋白3(IGF-BP3)及血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)的关系 [J], Mathur S.P.;Mathur R.S.;Gray E.A.;朱国栋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

黄芩素通过调节HIF-1α

黄芩素通过调节HIF -1α/VEGF 信号通路抑制类风湿关节炎大鼠的炎症反应和病理性血管生成*杜红丽1，张晨宇1，赵清2△［1河南中医药大学第五临床医学院（郑州人民医院）风湿免疫科，河南郑州450053；2河南大学淮河医院风湿免疫科，河南开封475099］［摘要］目的：探讨黄芩素（BA ）调节缺氧诱导因子1α（HIF -1α）/血管内皮生长因子（VEGF ）信号通路对类风湿关节炎（RA ）大鼠炎症反应和病理性血管生成的影响。

方法：按照随机数字表法将SD 大鼠分为对照（control ）组、模型（model ）组、低剂量（10mg/kg ）BA （BA -L ）组、高剂量（30mg/kg ）BA （BA -H ）组、雷公藤多苷片（TWP ；6.25mg/kg ）组和BA -H+HIF -1α激动剂二甲基草酰甘氨酸（DMOG ；40mg/kg ）组，每组12只。

除control 组外，其它组大鼠均采用II 型胶原蛋白-完全弗氏佐剂法诱导RA 大鼠模型。

第2次免疫24h 后开始给药处理，每天给药一次，持续4周。

检测大鼠在给药第0、7、14和28天时的足趾肿胀度，计算关节炎指数；计算大鼠胸腺和脾脏指数；HE 染色检测大鼠踝关节滑膜组织病理损伤；ELISA 法检测大鼠踝关节滑膜组织中肿瘤坏死因子α（TNF -α）和白细胞介素6（IL -6）水平；免疫组化检测大鼠踝关节滑膜组织中VEGF 和VEGF 受体2（又称激酶插入域受体，KDR ）表达；Western blot 检测各组大鼠踝关节滑膜组织中HIF -1α和VEGF 蛋白表达。

结果：与control 组比较，model 组大鼠踝关节滑膜组织病理损伤严重，足趾肿胀度、关节炎指数、胸腺和脾脏指数，以及滑膜组织TNF -α、IL -6、VEGF 、KDR 、HIF -1α和VEGF 水平均显著升高（P <0.05）；与model 组比较，BA -L 组、BA -H 组和TWP 组对应指标变化趋势与上述相反（P <0.05）；BA -H 组与TWP 组比较，上述指标变化差异无统计学意义（P >0.05）；DMOG 减弱了BA -H 对RA 大鼠炎症反应和病理性血管生成的抑制作用。

炎症刺激因子上调Tie2基因在动脉内皮细胞中表达的研究

ｉｃｅｓｄ４ｏｒａｔｒｔｍｕａｉｎｆＴＮＦ— ｎＨＡＥｎｎｒａｅ２ｈｕｓｆｅｓｉｌｔｏｏａｉＣＳａｄＨＰＡＥＣＳａｄＬ１ｎＨＰＡＥＣＳｉｎＩ一８ｉ．ｎ
ＨＰＡＥＣＳ，ｔｆｅｔｏｔａｒｖｄｔｅｋａｔ３ｏｕｒｔｒｓｉｕｌｔｏｎ．ＣｏｎｌｓｏＴｈｅｅｒｓｉｎｏｆｈｅｅｆｃｆｂｏｈｒｉｅｈｅｐａ６ｈｓａｆｅｔｍａｉｃｕｉｎｘｐｅｓｏ
能增加原代血管内皮细胞Ｔｅ２基因的表达。ＴＮ — 用于ＨＡＥｓＨＰＥｓ１一ｐ作用于ＨＰＣｉＦａ作Ｃ，ＡＣ及Ｌ１ＡＥｓ
２后，ｅ２的表达明显增加；ＨＰＣ，者的作用均在３４ｈＴｉ在ＡＥｓ两６ｈ达高峰。论炎症刺激因子Ｔ — 结ＮＦａ和１一ｐ人血管内皮细胞可诱导Ｔｅ２基因的表达，可能与炎症状态下的血管形成有关。Ｌ１在ｉ它【键词】肿瘤坏死因子一；白细胞介素一１Ｔｅ２内皮细胞关ａ１；ｉ；３
ＩｆａｎｌｍｍａｉｎｃｔｋｎｓＴ — ｎＬＩｎｒａｅｔｅｅｐｅｓｎｏｉ２ｉａｃｌｒｅｄｔｅｉｌｅ．ｔｙｏｉｅＮＦａａｄＩ－￣ｉｃｅｓｈｘｒｓｉｆＴｅｖｕａｎｏｈｌｌｏｏｎｓａｃ１
ａｔｒｎｏｈｌｌｃｌ（ＡＥＣＳ）ｎｕｅｙｉｆｍｍａｏｙｃｔｋｎｓＲｅｕｔＴＮＦａａｄＩ１ｏｌｒｅｙｅｄｔｅｉｅｌＨＰａｓｉｄｃｄｂｎｌａｔｒｙｏｉｅ、ｓｌｓ — ｎＬ一８ｃｕｄ

神经生长因子与血管内皮生长因子165双基因共表达载体的构建及鉴定

基础研究．
神经生长因子与血管内皮生长因子１６５双基因共表达载体的构建及鉴定
范波胜，娄季宇，白宏英
摘要：目的利用内部核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）序列，构建神经生长因子（ＮＧＦ）与血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）１６５双基因共表达载体ｐＩＲＥＳ－ＮＧＦ — ＶＥＧＦ１６５。方法用分子克隆技术，分别从人血细胞和胎心组织中获得ＮＧＦ和ＶＥＧＦ１６５基因，通过酶切将两者插入质粒ｐｌＲＥＳ中，构建重组载体ｐｌＲＥＳ — ＮＧＦ－ＶＥＧＦ１６５，并鉴定。结果测序
中华老年心脑血管病杂志２Ｏ１３年４月第１５卷第４期
ＣｈｉｎＪＧｅｒｉａｔｒＨｅａｒｔＢｒａｉｎＶｅｓｓｅｌＤｉｓ，Ａｐｒ２０１３，Ｖｏｌ１５，Ｎｏ．４
・４２７・
ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｈｕｍａｎｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓａｎｄｆｅｔａｌｈｅａｒｔｔｉｓｓｕｅ．ＤｏｕｂｌｅｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆＮｈｅＩ／ＸｈｏＩ，ＢａｍＨ工／ＮｏｔＩｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖｅｃｔｏｒｐＩＲＥＳ — ＮＧＦ — ＶＥＧＦ１６５ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ

人血管内皮细胞生长因子165基因真核表达载体的构建及其在大肠杆菌的表达

人血管内皮细胞生长因子165基因真核表达载体的构建及其在大肠杆菌的表达张艳芳;赵春澎【期刊名称】《新乡医学院学报》【年(卷),期】2004(21)6【摘要】目的获得人血管内皮生长因子(hVEGF165)cDNA,构建真核表达载体,并研究其在大肠杆菌中的表达情况.方法采用PCR方法,从HL60细胞中扩增出hVEGF165cDNA,将其克隆至pcDNA3真核表达载体上,构建成为pCD-hVEF165重组质粒.将重组质粒转染感受态的大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,用Western blot检测表达产物.结果经酶切鉴定及基因测序证实hVEGF165cDNA基因克隆成功,并建立了高效表达的pCD-hVEGF165重组质粒.Western blot检测表明,组建了具有高效表达hVEGF165的大肠杆菌菌株.结论成功地克隆和表达出了hVEGF165基因,为进一步建立VEHF转基因动物模型,研究其在视网膜新生血管性疾病中的应用奠定了基础.【总页数】3页(P443-445)【作者】张艳芳;赵春澎【作者单位】新乡医学院生化教研室,河南,新乡,453003;新乡医学院生化教研室,河南,新乡,453003【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.人白血病抑制因子和血管内皮生长因子165双基因真核表达载体的构建与鉴定[J], 栗炳南;李卫东;林俊堂;丰慧根;原志庆2.人白血病抑制因子和血管内皮生长因子165双基因真核表达载体的构建与鉴定[J], 栗炳南;李卫东;林俊堂;丰慧根;原志庆;3.人胶质细胞源性神经营养因子和血管内皮生长因子165双基因真核表达载体的构建与鉴定 [J], 栗炳南;李卫东;林俊堂;丰慧根4.以红色及绿色荧光蛋白为标记基因的血管内皮生长因子165和骨形态发生蛋白2真核表达载体的构建及其在293-T细胞中的共表达 [J], 邹海波;安洪;蒋电明5.人血管内皮细胞生长因子165基因真核表达载体构建 [J], 吴波;陈秉;熊群英;容振勤;张伟林;李永浩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

重组铜绿假单胞菌外毒素A和pcrV基因质粒的构建及真核表达

论著（基础研究）重组铜绿假单胞菌外毒素Ａ和ｐｃｒＶ基因质粒的构建及真核表达姜明子，冯旰珠［摘要］　目的　外毒素Ａ（ｔｏｘＡ基因编码）是铜绿假单胞菌毒力最强的因子之一，ＰｃｒＶ（ｐｃｒＶ基因编码）是铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统的关键调控因子之一。

文中旨在构建重组ｔｏｘＡ和ｐｃｒＶ基因的铜绿假单胞菌核酸疫苗，并在ＨＥＫ－２９３细胞中表达目的蛋白。

　方法　ＰＣＲ法从铜绿假单胞菌基因组基因中扩增出ｔｏｘＡ和ｐｃｒＶ基因，点突变法对ｔｏｘＡ基因进行减毒优化，随后将突变的ｔｏｘＡｍ基因和ｐｃｒＶ基因分别插入ｐＩＲＥＳ真核表达质粒的２个多克隆位点，构建真核双表达重组质粒ｐＩＲＥＳ－ｔｏｘＡｍ－ｐｃｒＶ。

脂质体法将ｐＩＲＥＳ－ｔｏｘＡｍ－ｐｃｒＶ瞬时转染入ＨＥＫ－２９３细胞，通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｔｏｘＡｍ及ｐｃｒＶ在真核细胞中的表达。

　结果　构建的真核表达质粒ｐＩＲＥＳ－ｔｏｘＡｍ－ｐｃｒＶ，经脂质体转染ＨＥＫ－２９３细胞后，在其细胞内检测到目的蛋白的表达。

　结论　成功构建ｐＩＲＥＳ－ｔｏｘＡｍ－ｐｃｒＶ表达载体并在转染的真核细胞中得以有效的表达，为研究铜绿假单胞菌预防性疫苗奠定了实验基础。

［关键词］　铜绿假单胞菌；外毒素Ａ；核酸疫苗；ｐｃｒＶ基因［中图分类号］　Ｒ５６３［文献标志码］　Ａ［文章编号］　１００８－８１９９（２０１４）０７－０６９４－０４基金项目：江苏省卫生厅面上项目（Ｈ２００９１１）作者单位：２１００１１南京，南京医科大学第二附属医院呼吸内科［姜明子（医学硕士研究生）、冯旰珠］通讯作者：冯旰珠，Ｅ－ｍａｉｌ：ｆｅｎｇｇｚ＠ｎｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｅｎｃｏｄｉｎｇＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａｔｏｘＡａｎｄｔｙｐｅⅢｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｐｃｒＶＪＩＡＮＧＭｉｎｇ－ｚｉ，ＦＥＮＧＧａｎ－ｚｈｕ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＮａｎｊｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００１１，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＥｘｏｔｏｘｉｎＡ（ｅｎｃｏｄｅｄｂｙｇｅｎｅｔｏｘＡ），ｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｔｏｘｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓｅｃｒｅｔｅｄｂｙｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉ－ｎｏｓａ（Ｐ．ａ．），ａｎｄＰｃｒＶ（ｅｎｃｏｄｅｄｂｙｇｅｎｅｐｃｒＶ），ｋｅｙｃｏｍｐｏｎｅｎｔｔｏｔｙｐｅⅢｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｏｆＰ．ａ．，ｂｏｔｈｍａｔｔｅｒｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｔｏｔｈｅｖｉｒｕｌｅｎｃｅｏｆＰ．ａ．ＴｈｅａｒｔｉｃｌｅｗａｓｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｎｏｖｅｌＤＮＡｖａｃｃｉｎｅｅｎｃｏｄｉｎｇａｍｕｔａｔｅｄｔｏｘＡｇｅｎｅａｎｄｔｈｅｐｃｒＶｇｅｎｅｏｆＰ．ａ．ａｎｄｉ－ｄｅｎｔｉｆｙｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｉｎｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｃｅｌｌｓ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＴｈｅｇｅｎｅｓｏｆｔｏｘＡａｎｄｐｃｒＶｗｅｒｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲ，ａｎｄｔｈｅｔｏｘＡｇｅｎｅｗａｓｍｕｔａｔｅｄｔｏｒｅｄｕｃｅｔｈｅｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆＥｘｏｔｏｘｉｎＡ．ＴｈｅｎｇｅｎｅｆｒａｇｍｅｎｔｓｔｏｘＡｍａｎｄｐｃｒＶｗｅｒｅｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄｐＩＲＥＳｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＤＮＡｖａｃｃｉｎｅｐＩＲＥＳ－ｔｏｘＡｍ－ｐｃｒＶ．ＴｈｅｎｏｖｅｌｐｌａｓｍｉｄｗａｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＨＥＫ－２９３ｃｅｌｌｓｂｙｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｔｏｘＡｍａｎｄｐｃｒＶｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｄｅｍｏｎ－ｓｔｒａｔｅｄｔｈｅｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｆｒａｇｍｅｎｔｓｅｎｃｏｄｉｎｇＥｘｏｔｏｘｉｎＡａｎｄＰｃｒＶ．ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｅｘｈｉｂｉｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｅｎｃｏｄｅｄｔｏｘＡａｎｄｐｃｒＶｅｘｐｒｅｓｓｅｄｂｙＨＥＫ２９３ｃｅｌｌｓ．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＴｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｐＩＲＥＳ－ｔｏｘＡｍ－ｐｃｒＶｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉ－ｃａｔｅｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｔｏｘＡｍａｎｄｐｃｒＶｉｎＨＥＫ－２９３ｃｅｌｌｓ．ＩｔｍａｙｂｅｕｓｅｄａｓａｐｏｔｅｎｔｉａｌｃａｎｄｉｄａｔｅｏｆｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅｖａｃｃｉｎｅｏｆＰｓｅｕｄｏ－ｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；ＥｘｏｔｏｘｉｎＡ；ＤＮＡｖａｃｃｉｎｅ；ＰｃｒＶ０　引言铜绿假单胞菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，ＰＡ）是常见的条件致病菌，在各种医院感染中居于前位，也是慢性阻塞性肺疾病及气管扩张症反复感染者的常见的致病菌。

血液凝固调节系统

生理性抗凝蛋白（3） ——组织因子途径抑制物
TFPI是一单链糖蛋白，血浆含量为(54～ 142)μ g/L，均值100μ g/L。TFPI属于Kunitz 族丝氨酸蛋白酶抑制物，即分子中含有 Kunitz结构。这一族的典型分子是抑肽酶（aprotinin）。除血浆中存在TFPI以外，血小板的α 颗粒及溶酶体中也有TFPI，含量为 8μ g/L，是由巨核细胞合成的，血小板活化后也会释放入血浆。此外，发现体内活化的巨噬细胞可能合成TFPI。
FXa，FVIIa被灭活
生理性抗凝蛋白（4） ——蛋白Z和蛋白Z依赖的蛋白酶抑制物
PZ是一种维生素K依赖的糖蛋白，由肝脏合成分泌后进入循环血液中。与其他维生素K依赖的因子一样具有 Gla残基，在结构上与因子VII、IX、X和蛋白C 极为相似。华法令可使PZ水平下降到正常时的15%以下；DIC、肝病、骨髓纤维化以及新生儿的PZ水平都是很低的。而凝血酶可以与 PZ结合也可以将PZ裂解。 ZPI 是一种丝氨酸蛋白酶，相对分子质量为 72000 ，由肝脏合成分泌。与别的氨基酸蛋白酶存在 25% ～ 35%的相同构形，与大鼠的存在87%的同源性。ZPI 在血液凝固或血栓形成时会大量消耗。
在这两个调节蛋白中，较早发现有血液凝固调节作用的是PZ。比较明确的实验是检测血浆或者因子 Xa 与 PZ 孵育后，因子 X 活性会明显下降。这种作用在磷脂和 Ca2+ 的存在时变得更加明显。这种现象可以解释为PZ与因子Xa在磷脂表面存在一种反应，而这种反应的结果是使因子Xa失活。在以后的研究中进一步证实，ZPI在PZ的协助下，可形成Xa-ZPI-PZ复合物而使因子Xa在1 min内失去95%以上的凝血活性。
纤溶酶原激活抑制物-2（plasminogen activator inhibitor，PAI-2） PAI-2是一种糖蛋白，含有415个氨基酸，其基因位于18 q21-23，基因全长16.5Kb。PAI-2最早是从人胎盘中提取的，其它如白细胞、单核细胞、巨噬细胞也能合成PAI-2。正常人血浆中浓度极低，＜ 5μ g/L。妇女妊娠期间逐渐升高，分娩后1周降至检测不到水平。PAI-2有两种类型，一种为非糖基化型（低相对分子质量型），相对分子质量为46000；另一种为糖基化型（高相对分子质量型），相对分子质量为70000。PAI-2 的主要作用是有效地抑制tct-PA、tcu-PA，在正常妊娠时调节纤溶活性。

血管内皮生长因子研究进展

血管内皮生长因子研究进展张淑芝【摘要】血管内皮生长因子是一种有效的血管形成和血管通透性诱导因子,特异性地作用于血管内皮细胞,具有维持血管正常状态和完整性、增加血管通透性、促进血管生成的作用。

在正常成人和动物组织中表达水平较低,一些代谢旺盛、血供丰富的组织中VEGF表达水平略高,一些病理情况下可以过度表达。

%Vascular endothelial growth factor（VEGF）is an essential regulator of angiogenesis and vascular permeability,specifically combines with vascular endothelial cell（VEC）,maintains normal vascular structure,increases permeability of the vascular and promotes angiogenesis.VEGF is low expressed in the normal adult human and animal tissue,but hight expressed in metabolic and euangiotic tissue.【期刊名称】《潍坊学院学报》【年(卷),期】2012(000)002【总页数】5页(P54-58)【关键词】血管内皮生长因子;受体;器官发育;组织修复【作者】张淑芝【作者单位】潍坊学院,山东潍坊261061【正文语种】中文【中图分类】R322血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），也称血管渗透因子（vascular permeability factor，VPF），是一种以二硫键相连的寡二聚体糖蛋白化合物［1］，在过去的二十多年中一直被广泛研究和关注。

无论在生理还是病理条件下，VEGF均是血管生成的必须因子，VEGF可维持血管正常状态和完整性、提高血管通透性、促血管生成［2］，VEGF对出生早期动物生长和存活极为重要，在成年动物主要表现为对血管生成方面的作用，近年VEGF最受关注的生理功能是其参与肿瘤生长、转移和炎症反应过程。

TIE2受体基因在野百合碱诱导的肺动脉高压中的表达-精选文档

TIE2受体基因在野百合碱诱导的肺动脉高压中的表达Expression of TIE2 gene in monocrotaline-induced pulmonary hypertensionYANG Chunguang, LI Xiahui(Medical College of Dalian University, Dalian 116622, China)[] Objective: To investigate the effect of TIE2 gene in monocrotaline (MCT)-induced pulmonary hypertension. Methods: MCT-treated rats were used as a model for chronic PHT. The remodeling and cell apoptosis of pulmonary arteries (PAs) were analyzed by immunohistochemical method. RT-PCR was performed to identify the expression of TIE2 mRNA in rat PAs. Results: The pulmonary hypertension was established in MCT rats. The remodeling and protein expression of Caspase-3 were observed in PAs. A lower level of TIE2 mRNA expression was detected in PAs from MCT rats. Conclusion: The lower level of TIE2 mRNA expression might contribute to the remodeling and endothelial cell apoptosis of PAs in MCT-induced pulmonary hypertension.肺动脉高压（pulmonary hypertension，PHT）是一种进行性、消耗性疾病，表现为肺动脉血管阻力持续升高，最终导致右心衰竭，直至死亡[1]。

血管内皮生长因子家族及其基因多态性与动脉粥样硬化

血管内皮生长因子家族及其基因多态性与动脉粥样硬化血管内皮生长因子及其受体是庞大的家族，血管内皮生长因子包括血管生成亚型家族和抗血管生成亚型家族，而受体有三种，在不同的组织有不同的分布，从而发挥相应的生理功能。

对动脉粥样硬化即有促进作用，也能稳定粥样硬化斑块，减少动脉内膜增殖和预防血管成形术后再狭窄，促进侧枝循环形成。

VEGF 以及受体的基因多态性决定了其表达的不同，也决定对动脉粥样硬化不同的影响。

血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）是目前已知的功能最强的促有丝分裂素，特异的作用于血管内皮细胞，诱导内皮细胞的增生、迁移。

它与动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）关系密切，不仅参与AS的病理生理机制，还可以用来治疗AS，故本文在此就VEGF以及其基因多态性与AS的关系综述如下。

1 VEGF及受体家族VEGF基因全长14 kb，由8个外显子和7个内含子组成，由于外显子剪切的不同形成多种亚型，构成血管生成亚型家族和抗血管生成亚型家族两个家族。

血管生成亚型家族包括VEGF（121）、VEGF（165）、VEGF（189）和VEGF（206）和较少见的变异亚型，如VEGF（145）、VEGF（183）和VEGF（162）等。

抗血管生成亚型家族包括VEGF（165）b、VEGF（121）b、VEGF（145）b、VEGF （183）b和VEGF（189）b[1]。

各亚型都以二聚体的形式被分泌出来。

这种二聚体是由两条N端相同而其它区域存某些差异的多肽链通过二硫键连接而成的高度保守糖蛋白二聚体，分子量34～42 KD。

VEGF亚型在不同组织器官中的表达分布有所不同，VEGF121主要分布于胎盘组织，而VEGF145仅在生殖器官细胞中表达[2]。

而VEGF165主要分布于除胎盘之外的其它组织器官中。

一般情况下VEGF165为最主要的亚型。

在正常组织还是病理中，都以VEGF165的表达最高，提示VEGF165的作用可能更广泛，是其生物学作用的主要形式。

塞来昔布诱导人椎间盘细胞表达神经生长因子

塞来昔布诱导人椎间盘细胞表达神经生长因子陈小明;周润梅;欧斌;曹奇【摘要】目的研究环氧化酶2抑制剂塞来昔布以及前列腺素E2(PGE2)对神经生长因子(NGF)表达的影响.方法分离培养人椎间盘(IVD)细胞,用不同浓度的塞来昔布预处理30 min后,加入10 ng/mL IL-1β作用6h.RT-PCR和ELISA分别检测NGF mRNA和蛋白的表达,ELISA检测PGE2的分泌.同时加入外源性PGE2以及其受体(EPs1 ～4)激动剂,观察其对NGF产生的影响.结果 IL-1β作用3h即可以一定的时间依赖性诱导IVD细胞表达NGFmRNA.塞来昔布处理后能使NGF mRNA水平进一步增加1.8倍.IL-1β处理后,PGE2含量达(5.46±0.64) ng/mL.10 mmol/L塞来昔布能将其降低至(1.07±0.04)ng/mL(P ＜0.05).IVD细胞经100 μmol/L PGE2处理后,IL-1β诱导的NGF降低了59％ (P ＜0.05).此外,采用EP2和EP4受体激动剂处理IVD细胞后,也得到了类似的结果,而EP1和EP3激动剂处理对NGF产生无明显影响.结论塞来昔布能促进IVD细胞表达NGF,其机制可能与抑制PGE2的分泌有关.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2014(034)007【总页数】5页(P945-949)【关键词】神经生长因子;椎间盘细胞;前列腺素E2;塞来昔布【作者】陈小明;周润梅;欧斌;曹奇【作者单位】南华大学附属第二医院脊柱外科,湖南衡阳421001;南华大学药学与生命科学学院药物药理研究所,湖南衡阳421001;南华大学附属第二医院脊柱外科,湖南衡阳421001;南华大学附属第二医院脊柱外科,湖南衡阳421001【正文语种】中文【中图分类】R684.3腰痛是脊柱外科最常见的疾病，是导致患者丧失劳动力以及致残的重要因素。

本病在全世界范围内呈上升趋势，虽然人椎间盘(intervertebral disc，IVD)退行性变性是导致腰痛的主要原因，但其发病机制仍不清楚［1］。

血管内皮细胞生长因子及受体在乳腺癌组织的表达研究

血管内皮细胞生长因子及受体在乳腺癌组织的表达研究戴岳楚;潘印【期刊名称】《浙江临床医学》【年(卷),期】2005(007)011【摘要】目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体在乳腺癌组织中表达的意义.方法使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及计算机条带分析半定量方法检测了VEGF异构体及受体mRNA在乳腺癌组织及癌周组织的表达水平.对VEGF121 mRNA及KDRmRNA表达水平和肿瘤大小,淋巴结转移及绝经前后的关系进行统计学分析.结果在乳腺癌组织及癌周组织均检测到VEGF121和KDR,flt-1的mRNA表达,VEGF121和KDR在癌组织表达水平明显高于癌周组织,在癌组织及癌周组织,VEGF121 mRNA表达和KDR121 mRNA表达之间有明显直线正相关及回归依存关系,VEGF121,KDR的mRNA表达在肿瘤≥2cm;淋巴结阳性及绝经前组病人明显高于淋巴结阴性、肿瘤＜2cm和绝经后组病人.结论VEGF、KDR在乳腺癌组织的表达水平明显高于癌周组织,VEGF积极参与乳腺癌的新生血管增殖过程.【总页数】2页(P1124-1125)【作者】戴岳楚;潘印【作者单位】318000,浙江省台州市中心医院;318000,浙江省台州市中心医院【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.老年乳腺癌组织雌激素受体、孕激素受体与富集AT序列的特异性结合蛋白1及人表皮生长因子受体-2表达的相关性 [J], 宋晨;孙利敏2.人表皮生长因子受体3在人表皮生长因子受体2阳性乳腺癌组织中的表达 [J], 闫东3.老年乳腺癌组织中雌激素受体、孕激素受体、人表皮生长因子受体2的表达及临床意义 [J], 陆莉;崔飞伦;肖秀娣;徐雪松4.乳腺癌组织学分级与雌激素受体、孕激素受体、人表皮生长因子受体-2和p53表达及淋巴结转移的相关性 [J], 冉社伟;王小毅;谭金祥5.乳腺癌组织中胰岛素样生长因子结合蛋白-2的表达及其与雌激素受体、孕激素受体相关性的研究 [J], 何杨;吉兆宁;王潞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。