维生素E联合硒防治大鼠肝纤维化及抗氧化作用的实验研究

７．９１ ±５．１４ ２４２．８８ ±６２．９９
１０．５９ ±５．３５ ４３２．１６ ±４９．３０＊
１３．４３ ±５．６４△ ３３１．０１ ±８３．９５＊
１５．２８ ±４．７８△ ５０２．１５ ±７７．２５＊
红细胞
ＧＰＸ（ Ｕ ／ｇ Ｈｂ） ５．９１ ±３．４７△ ２．４５ ±０．８６ １０．３３ ±６．８０＊ ６．０５ ±３．０６△ １１．２３ ±２．８９△
实 用 医 学 杂 志 ２００７ 年 第 ２３ 卷 第 １９ 期
２９８５
维生素 Ｅ 联合硒防治大鼠肝纤维化及抗氧化作用的实验研究
汪余勤 吴建新 瞿春莹 陈梅梅 李定国
摘 要 目 的 ： 研 究 维 生 素 Ｅ（ ＶｉｔＥ） 联 合 硒 对 大 鼠 抗 氧 化 和 肝 纤 维 化 的 影 响 。方 法 ： 采 用 ＣＣｌ４ 诱 导 大 鼠 肝 纤 维 化 模 型 ， 同 时 单 独 补 充 硒 （ ０．２ ｍｇ ／ｋｇ） 、ＶｉｔＥ（ ２５０ ｍｇ ／ｋｇ） 及 二 者 联 合 应 用 ， 观 察 其 对 大 鼠 抗 氧 化 功 能 及 肝 纤 维 化 各 项 指 标 的 影 响 。结 果 ： 补 充 适 当 剂 量 硒 （ ０．２ ｍｇ ／ｋｇ） 和 ＶｉｔＥ（ ２５０ ｍｇ ／ｋｇ） 能 显 著 降 低 大 鼠 血 清 丙 氨 酸 氨 基 转 移 酶 、Ⅲ 型前胶原以及血清和肝组织中脂质过氧化物丙二醛； 显著提高谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性； 并能 显 著 减 轻 肝 脏 胶 原 纤 维 增 生 程 度 。二 者 联 合 应 用 ， 其 抗 氧 化 及 抗 纤 维 化 作 用 更 加 明 显 。结 论 ： 联 合 应 用 ＶｉｔＥ 和 硒 能 显著增强机体抗氧化功能和抗肝纤维化作用。
鼠数 ７ ５ ５ ５ ５
肝组织 ＳＯＤ（ ｎｇ ／ｍｇ） ８．１４４ ±１．４１４＊ ２．３８６ ±１．４０９ ９．４１８ ±５．６０８△ ３．３６２ ±０．７６７ ８．２５４ ±０．８５９＊
ｘ ±ｓ
ＭＤＡ（ ｎｍｏｌ ／ｍｇ） ２．２８４ ±０．８１７＊ １０．３８４ ±４．３２２ １０．７２５ ±２．５２３ ５．８９２ ±２．６６６△ ４．４９２ ±１．５６２△
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实 用 医 学 杂 志 ２００７ 年 第 ２３ 卷 第 １９ 期
表 １ 各组血清和肝组织中 ＳＯＤ 和 ＭＤＡ 的比较
组别
鼠数
血清 ＳＯＤ（ ｎｇ ／ｍＬ）
正常对照组
１２
５６．７１０ ±２９．３６０△
病理造模组
１０
２１．４５０ ±９．０１０
硒补充组
１０
３９．６４０ ±１１．９２０△
ＶｉｔＥ 补 充 组
表 ２ 各 组 大 鼠 血 清 ＶｉｔＥ、硒 与 红 细 胞 中 ＧＰＸ 比 较 ｘ ±ｓ
组别 鼠数
正 常 对 照 组 １２ 病 理 造 模 组 １０ 硒 补 充 组 １０ ＶｉｔＥ 补充组 １０ 联 合 应 用 组 １０
血清
ＶｉｔＥ（ !ｇ ／ｍＬ）
硒 （ !ｇ ／Ｌ）
１３．１２ ±３．６７△ ３２８．３９ ±４２．４２＊
注 ： 与 病 理 造 模 组 比 较 ， ＊ Ｐ ＜ ０．０１， △Ｐ ＜ ０．０５
２．３ 对大鼠肝功能和肝纤维化指标的影响 由表 ３ 可知， 与病理造模组相比， 正常对照组 ＡＬＴ 和 ＡＳＴ 非 常明显低于病理造模组 （ Ｐ ＜ ０．０１） ， ＶｉｔＥ 补充组和联 合 应 用 组 ＡＬＴ 和 ＡＳＴ 明 显 低 于 病 理 造 模 组 （ Ｐ ＜ ０．０５） ， 硒补充组 ＡＬＴ 和 ＡＳＴ 低 于 病 理 造 模 组 但 无 明 显差异。５ 个组 ＨＡ 比较， 正常对照组和联合应用组 血 清 中 ＨＡ 明 显 低 于 病 理 造 模 组 （ Ｐ ＜ ０．０５） ， 但 硒 补 充组 、ＶｉｔＥ 补 充 组 和 病 理 造 模 组 间 却 无 统 计 学 意 义 。 与病理造模组比较， 正常对照组、ＶｉｔＥ 补充组和联合 应 用 组 血 清 ＰＣⅢ 非 常 明 显 低 于 病 理 造 模 组 （ Ｐ ＜ ０．０１） ， 硒补充组血清 ＰＣⅢ与病 理 造 模 组 相 比 则 无 显 著意义（ Ｐ ＞ ０．０５） 。
作 者 单 位 ： ２０００９２ 上 海 第 二 医 科 大 学 新 华 医 院 消 化 内 科
１．３ 检测指标及方法 １．３．１ 生化指标 血清和组织硒含量测定采用 ＤＡＮ 荧 光测定法； 红细胞中 ＧＰＸ 采用 ＤＴＮＢ 直接法； 血清丙 氨酸氨基转移酶（ ＡＬＴ） 和天冬氨酸氨基转移酶（ ＡＳＴ） 用 Ｍｏｎａｒｃｈ－７６１ 全自动生化仪测定； 血清和组织中脂质过 氧化物丙二醛（ ＭＤＡ） 含量测定用硫代巴比妥比色法； ＳＯＤ 活性、血清 ＨＡ 和 ＰＣⅢ均采用放射免疫法测定。 １．３．２ 病 理 组 织 学 判 定 标 准 ［１］ 新 鲜 肝 组 织 立 即 浸 入 １０％福 尔 马 林 ， 经 石 蜡 包 埋 ， 切 片 作 ＨＥ 染 色 观 察 组织病理变化； 另作 Ｍａｓｓｏｎ 三色胶原染色， 按如下半 定量标准判定胶原纤维增生程度： （ － ） 示正常肝组织， 无胶原增生； （ ＋） 示胶原明显增生， 从汇管区或中央静 脉呈星状向外延伸， 无纤维隔形成； （ ＋ ＋） 示胶原明显 增多， 形成彼此不连接的不完全性纤维隔； （ ＋ ＋ ＋） 示 胶原细胞增多形成完全的相互连接的纤维隔分隔肝
性， 少数水样变， 坏死及炎症明显； 汇管区纤维组织增 生， 形成厚薄不一的纤维隔分割包绕肝小叶， 并可见 肝细胞再生及假小叶形成。而硒补充组和 ＶｉｔＥ 补充 组细胞变性程度及纤维结缔组织增生程度明显减轻。 ３ 讨论
一般来说， 对于正常机体， 体内存在着强有力的 抗氧化系统， 包括酶性的 ＳＯＤ、ＧＰＸ、过氧化氢酶和非 酶性的维生素类。硒是机体必需的微量元素之一， 它 既可直接清除自由基， 又是 ＧＰＸ 的重要成分。同时它 除抗氧化作用外， 也可影响其他微量元素代谢［２］。自 从 １９９１ 年 Ｂｅｒｒｙ 发现Ⅰ型 脱 碘 酶 为 含 硒 酶 后［３］ ， Ⅱ和 Ⅲ型也相继被确定为含硒酶［４］ 。Ⅰ型脱碘酶和Ⅱ脱碘 酶催化生理活 性 低 的 形 式 Ｔ４ 向 生 理 活 性 高 的 形 式 Ｔ３ 转化， 而Ⅲ型脱碘 酶 则 是 催 化 Ｔ４ 转 化 为 反 Ｔ３， 它 们 的 共同作用是维持甲状腺激素代谢的动态平衡， 在体内 发 挥 重 要 作 用 。所 以 硒 在 体 内 的 水 平 显 著 影 响 脱 碘 酶 的活性， 因此硒也影响体内激素分泌及其激素调控的 细胞因子的变化， 从而抑制或增强机体免疫力。Ｗｅｉｓｓ 等［５］ 指出缺硒时肝脏中 ＧＰＸ 的活性非常低， 其活性随 着饲料中硒的增加（ ０．０２～０．１５ ｍｇ ／ｋｇ） 而升高。本实验 采用 ＣＣｌ４ 制备肝纤维化模型， ＣＣｌ４ 进入机体后， 在肝 亚铁细胞色素 Ｐ４５０ 催化下， 经单电子还原而生成氯甲 基自由基和过氧化三氯甲基自由基。这些自由基进而 启动二次反应， 引起肝细胞死亡， 最终导致肝纤维化的 发生［６］。此外， ＣＣｌ４ 中毒机制中， 可能也与抑制机体免 疫反应有关。
模组稍高， 但无统计学意义。病理造模组血清中硒浓 度 非 常 显 著 低 于 其 他 ４ 组 （ Ｐ ＜ ０．０１） ， 其 中 联 合 应 用 组硒浓度最高。正常对照组、硒补充组、ＶｉｔＥ 补充组和 联合应用组的红细胞中 ＧＰＸ 活性均显著高于病理造 模组（ Ｐ ＜ ０．０５ 和 Ｐ ＜ ０．０１） 。见表 ２。
关 键 词 肝 硬 化 ＶｉｔＥ 硒 抗 氧 化 剂 脂 质 过 氧 化 作 用
硒是人和动物体内必需的微量元素之一， 自 １９７３ 年 Ｒｏｔｒｕｃｋ 等 发 现 硒 是 谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶 （ ＧＰＸ） 必要的结构成分以来， 人们日益重视硒在细胞 抗氧化系统中的重要作用， 许多文献报道硒具有提高 机体抗氧化能力、增强免 疫 等 作 用 。 维 生 素 Ｅ（ ＶｉｔＥ） 是存在于细胞膜上第一线的脂溶性抗氧化剂， 它能有 效地捕获和清除自由基， 保护细胞膜免受脂质过氧化 的损害， 但在此保护过程中它本身也被消耗。因此当 机体在病理条件下存在脂质过氧化时 ， 补充 ＶｉｔＥ 对 抗 脂 质 过 氧 化 损 害 是 相 当 有 效 的 。本 实 验 拟 用 四 氯 化 碳 （ ＣＣｌ４） 诱导大鼠肝纤维化模型， 观察单独 补 充 硒 和 ＶｉｔＥ 及 二 者 联 合 应 用 对 大 鼠 抗 氧 化 功 能 和 肝 纤 维 化 的影响， 为临床合理补充抗氧化营养素防治肝纤维化 提供参考依据。 １ 材料与方法 １．１ 主要试剂 ＣＣｌ４， 分析纯， 江苏胥县化学试剂厂； 硒酵母， 上海酵母厂产品； Ｖｉｔｍｉｎ Ｅ－ａｃｅｔａｔｅ： Ｒｏｃｈｅ 公司 产品。２， ３－ 二氨基萘（ ＤＡＮ） ， Ｆｌｕｋａ 公司产品； 四乙氧基 丙烷， 谷胱甘肽购自 Ｓｉｇｍａ 公司； 人Ⅲ型前胶原（ ＰＣ Ⅲ） 、透明质酸（ ＨＡ） 及超氧化物歧化酶（ ＳＯＤ） 放免试剂 盒均为上海海军医学研究所产品。 １．２ 动物模型及分组 ６０ 只雄性 Ｗｉｓｔａｒ 大鼠随机分 成 ５ 组 ： 正 常 对 照 组 （ １２ 只 ） ， 病 理 造 模 组 （ １２ 只 ） ， 硒 补充组（ １２ 只） ， ＶｉｔＥ 补充组（ １２ 只） 和联合应用组（ １２ 只） 。各组预先饲以标准饲料适应期 １ 周， 后各组用相 应补充营养素饲料饲养至实验结束（ 硒补充组补充硒 ０．２ ｍｇ ／ｋｇ， ＶｉｔＥ 补充组补充 ＶｉｔＥ ２５０ ｍｇ ／ｋｇ， 联 合 应 用组补充硒 ０．２ ｍｇ ／ｋｇ 和 ＶｉｔＥ ２５０ ｍｇ ／ｋｇ） 。继之 ５ 组 分别作不同处理： 病理造模组、硒补充组、ＶｉｔＥ 补充组 和联合应用组大鼠腹腔注射 ４０％ ＣＣｌ４ 中性茶油溶液 （ ０．３ ｍＬ ／１００ ｇ 体 重 ） ， 首 剂 加 倍 ， 每 周 ２ 次 ， 共 ８ 周 ； 而 正 常 对 照 组 则 相 应 注 射 生 理 盐 水 作 为 对 照 。所 有 动 物处理至 ８ 周末全部处死。