血虚证动物模型造模方法与评析

表 ２ 乙酰苯肼与其他方法复合造模
动物品种
动物体重（ｇ）
造模方式
造模 出处 时间 （参考文献）
雌／雄昆明种小鼠
２０±２
Ｃｏ模型组第 ４ ｄ 用 Ｃｏ 照射（４．０ Ｇｙ），第 ７ ｄ 及第 １０ ｄ 分别给予 ＡＰＨ（０．１ ｍｇ／ｋｇ）； 第 ７ ｄ 及第 １０ ｄ 分别给予 ＡＰＨ（０．１ ｍｇ／ｋｇ），第 ７ ｄ 给予 ＣＴＸ（６０ ｍｇ／ｋｇ）及 ４～５ ｄ ＡＰＨ（０．１ ｍｇ／ｋｇ），第 １０ ｄ 给予 ＡＰＨ（０．１ｍｇ／ｋｇ）
上海中医药大学学报 第 ２０ 卷 第 ３ 期 ２００６ 年 ９ 月
·７５·
表 ４ 免疫介导造模
动物 品种
动物周龄 及体重
造模方式
造模 时间
取 ＤＢＡ／２ 小鼠，断颈处死，９５％酒精浸泡消毒后，无菌条件下取出胸腺及颈、腋下、腹
雌雄各半 Ｂａｌｂ 小鼠、８～１２ 周龄， 股沟淋巴结，加 ＲＰＭＩ－ １６４０ 培养液，除去表面血污从黏附的结缔组织后、制成单细
实验动物包括雌／雄昆明种小鼠、雌／雄 Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠、 雌雄各半 ＩＣＲ 品系小鼠、雌／雄各半 Ｗｉｓｔａｒ 远交系大鼠、
·７４·
ＡＣＴＡ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡＴＩＳ ＴＲＡＤＩＴＩＯＮＩＳ ＭＥＤＩＣＡＬＩＳ ＳＩＮＥＮＳＩＳ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＡＥＱＵＥ ＳＨＡＮＧＨＡＩ Ｖｏｌ．２０ Ｎｏ．３ Ｓｅｐ．， ２００６
要从事肿瘤研究。
效果明显。 动 物 品 种 包 括 雌 ／雄 昆 明 种 、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、Ｃ５７ＢＬＬ、
ＢＡＬｂ／ｃ 小鼠，主要为雌性小鼠；体重在 １４～２５ ｇ 之间，集 中在 １８￣２２ ｇ。造模方法：６０Ｃｏγ射线全身照射，多为一次 性照射，照射距离为 ４ ｍ，照射时间集中在 １６１～２５０ ｓ ，照 射率在 １．２７￣１．３１ Ｇｙ ／ ｍｉｎ，照射剂量大多在 ２．５￣７．０ Ｇｙ 之 间［１～１５］。 １．２ 化学药物造模 １．２．１ 乙 酰 苯 肼 （ ＡＰＨ） 溶 血 造 模 法 该造模方式利用 ＡＰＨ 对较专一地对红细胞有缓慢性的进行性损伤作用［１６］， 造成血液中红细胞数明显减少，网织红细胞和白细胞数 量病理性代偿性升高［１６，１７］，造出血虚证动物模型。（表 １） １．２．２ 乙酰苯肼与其他方法复合造模法 （表 ２） １．２．３ 环磷酰胺化学损伤造模法 该造模原理利用环磷 酰胺作为细胞周期非特异性细胞毒药物，对增殖周期中各 期细胞均有杀灭作用，有抑制骨髓的作用，使白细胞下降， 对粒细胞的影响更为明显，可制造出血虚模型。（表 ３） １．２．４ 其他化学药物造模法 如注射马利兰［２８］、丝裂霉 素、苯［２９，３０］等可制造成白细胞减少的血虚模型。２０ 世纪 ９０ 年代初始马利兰法仅见 １ 篇［２８］，其余方法未见报道。 １．３ 病因造模法 人的血虚证候多因失血过多，新血 未生；或脾胃虚弱，生血不足；或久病不愈，营血消耗过 多等各种因素而致，根据血虚的病因病机理论，动物血 虚证的造模方法又可分为失血法、营养性饥饿法［３１］、劳 倦法［３１，３２］，以及上述等法复合造模。
表 １ 乙酰苯肼溶血造模法造模
动物品种 动物体重（ｇ）
造模方式
造模
出处
时间 （参考文献）
雌／雄昆明种小鼠 ２４．５±５．５ ２％ＡＰＨ ０．２￣０．３ ｍｌ，皮下注射 １ 次，或隔 ３ ｄ 再注射 １ 次（约合 ＡＰＨ ４～６ ｍｇ／只）
＊ ［３，１６，１８，１９］
１％ＡＰＨ 皮下注射，剂量为 １０ ｍｌ／ｋｇ，首次注射后隔 ２ ｄ 等量再注射 １ 次，以后 ＡＰＨ 浓度与剂量
上海中医药大学学报 第 ２０ 卷 第 ３ 期 ２００６ 年 ９ 月
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专题综述
血虚证动物模型造模方法与评析
许 敏 方肇勤
上海中医药大学基础医学院 （上海 ２０１２０３）
【摘 要】 综述和评析 ２０ 余年来血虚证动物模型造模方法。期间该模型的研发工作在持续发展，涉及到 多手段、多技术。目前研究和发展趋势比较集中的是化学药物造模、γ射线造模，各造模方法比较集中的问 题主要是各造模剂量、时间，以及造模后持续时间尚未确定，同时对血虚证模型的认识亦在不断深入。
雌雄不限 ＤＢＡ／２小鼠 １６～２０ ｇ； 胞悬液。计数配成 １ ０００ ０００／ｍｌ 的浓度。其胸腺细胞：淋巴结细胞为 １∶２，并鉴定细胞
（免疫用）
８～１０ 周龄 活性应在 ９５％以上。Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠经 Ｘ 射线 ６．０ Ｇｙ 亚致死剂量照射后 １～４ ｈ 内，立即
经尾静脉输入上述细胞悬液，每只小鼠输入 ０．２ ｍｌ
雄性 Ｗｉｓｔａｒ 大鼠 ２００．０±５０．０
＊ ［２０，２１］
减半，６ 次为 １ 周期，每 １ 周期递增 １ ｍｌ／ｋｇ，共计注射 ３６ 次（首次剂量约合 ＡＰＨ １５～２５ ｍｇ／只）
雄性 Ｗｉｓｔａｒ 大鼠 ２０９．５±２０．５
２％ＡＰＨ 皮下注射，剂量为 １０ ｍｌ／ｋｇ，第 ４，７ ｄ 再次给药，剂量减半（首次剂量约合 ＡＰＨ ３０～５０ ｍｇ／只）
【关键词】 血虚证；动物模型；造模法；综述 【中图分类号】 Ｒ９６５．１；Ｒ２４１．４ 【文献标识码】 Ａ 【文章编号】 １００８－ ８６１Ｘ（２００６）０３－ ００７３－ ０４
中医药动物模型是中医基础医学研究和中医药研 发的重要手段，是发展辨证论治实验研究的基础工作。 为探讨中医血虚证动物造模的发展方向，笔者通过关键 词“血虚证＋实验”，检索了 １９８１ 年～２００３ 年 ＣＮＫＩ 系统和 ＶＩＰ 系统收集的文献共计 ５２ 篇，通过对 ２０ 余年文献回 顾，总结了血虚证动物模型造模方法，并对经验与教训 进行了评析。
［４］
雌／雄 昆 明 种 小 鼠 、ＢＡＬｂ／ｃ 小鼠、ＩＣＲ 小鼠
２０±２
第 ２ ｄ、第 ５ ｄ 皮下先后注射 ＡＰＨ ２０ ｍｇ／ｋｇ、４０ ｍｇ／ｋｇ，第 ５ ｄ 起每日腹腔注射 ＣＴＸ ４０ ｍｇ／ｋｇ
＊
［２３］
表 ３ 环磷酰胺造模
动物品种
动物体重（ｇ）
造模方式
雌雄各半 Ｗｉｓｔａｒ 大鼠、昆明 种小鼠，雌性 Ｃ５７ 小鼠
１ 血虚证动物模型的造模方法
在检索到的 ５２ 篇有关动物血虚证模型的文献，其 中有具体造模报道的文献 ４７ 篇。从年度发表论文数量 统计看，近年来关于血虚证动物模型的研究逐年增多， 发表相关文献数量在 ２００１ 年出现了一个小高潮。（图１）
１５
１０
５
文献篇数
０
１９８１ １９８９ １９９１ １９９２ １９９３ １９９４ １９９５ １９９６ １９９７ １９９８ １９９９ ２０００ ２００１ ２００２ ２００３
２ 有关方法学与实验指标评析
血虚证动物造模方法自 ２０ 世纪 ７０ 年代始一直在发 展和应用，上海中医研究所失血结合限食首次制作出血 虚小鼠模型［４５］后，至今相继出现了化学药物造模、６０Ｃｏγ 射线造模、营养性饥饿法［３１］、劳倦法［３１，３２］、以及上述方法 的复合造模。上述方法各有其优缺点。 ２．１ 关于 ６０Ｃｏγ射线造模法 北京放射医学研究所对 ６０Ｃｏγ射线造模法进行了深入的研究，辐射造模可造成 白细胞数下降和骨髓造血损伤，是一种比较好的造模方 法。而且发现其照射剂量是关键所在，过大则骨髓损伤 不可逆转，过小则达不到造模的要求［４６］。刘永学等［５］对 ２．５ Ｇｙ、５．５ Ｇｙ、７．５ Ｇｙ ３ 种剂量 ６０Ｃｏ 造模进行了比较， 认为 ３ 种剂量都可以诱发小鼠血虚证的产生，但照射剂 量与小鼠骨髓抑制程度成正相关。最近文献报道的造模 剂量定为 ３．５ Ｇｙ，并试图给造模的条件，如照射时间、 照射距离等进行标准化［６～１３］。
８～１４ ｄ
出处 （参考文献）
［４１～４４］
２．２ 关于化学损伤造模法 （１）ＡＰＨ 法利用 ＡＰＨ 较专 一地对红细胞有缓慢性的进行性损伤作用［１６］，最终造成 血液中红细胞数明显减少，网织红细胞病理性代偿性升 高和白细胞数量代偿性升高［１６，１７］。相关文献的研究的实 验指标主要集中在外周血象［３，４，１６，１７，１９，２０，２１，２３，４７］。（２）环磷酰 胺法作为细胞毒药物可对外周血细胞和骨髓细胞造成 损伤，主要使白细胞下降，尤其使粒细胞下降。迄今环磷 酰胺造模剂量并未确认，有人对环磷酰胺的剂量作了尝 试，发现环磷酰胺 １００、２００、７５０ ｍｇ／ｋｇ 给小鼠进行一次 腹腔注射，可使小鼠外周血白细胞在给药后 ３ ｄ 降至最 低，给药后 ５ ｄ 开始回升，对血小板有相似影响。环磷酰 胺分别按 ５０、１００ ｍｇ／ｋｇ 对小鼠腹腔注射，每日 １ 次，连 续 ５ ｄ，５０ ｍｇ／ｋｇ 组白细胞数量在药后 ３ ｄ 降至最低，７ ｄ 后开始回升。１００ ｍｇ／ｋｇ 组在药后 ５ ｄ 降至最低，然后缓 慢回升，外周血小板有相似的规律。各剂量组对红细胞 和血红蛋白均无太大影响［２５，４８］。然而，这类模型也有人 用作脾虚模型，所以其确切定位尚有待研究。 ２．３ 关于病因造模法 病因造模法模型包含了西医范 畴的营养性贫血、失血性贫血。有学者认为失血法可以 有效降低外周血中全血细胞的数量，但放血量难以精确 控制［２９］，其他文献也有类似发现［３４，３５，４２］。同时，有学者认 为单因素造模不符合临床实际，认为根据血虚病因复合 造模更适合中医学的研究［４９，５０，５１］，２０ 世纪 ９０ 年代后至今 血虚病因复合造模法有 ５ 篇，而单因素病因造模法 ４ 篇，所 以没有定论。笔者认为，中医理论中血虚的范畴，具体的 造模，建议针对具体病种、具体目的选择相应的方法。 ２．４ 关于免疫介导造模法 免疫介导造模法最初用于 再障贫血的动物造模，梁毅等 将 ［４１，４２，４４］ 其应用于血虚证 的造模，并观察了动物模型的生物特征。据报道，该造模 模型较为稳定，重复性好，能动态观察血虚证的逐步演 变。但其骨髓造血功能抑制难以逆转，比较适合观察血 虚证模型的骨髓造血功能和补血方药的作用机理。
＊ ［２５，１０，１２］
雄性大鼠
雌雄各半昆明种小鼠； 雌／雄家犬
在灌服当归补血汤后第 ３、第 ６ ｄ 给小鼠后肢皮下注射 ＣＴＸ １ ｍｇ／只，
文献未明
＊ ［２６］
共２次
２３±１； ６～７ ｍｇ／ｋｇ ＣＴＸ 灌胃每日 １ 次，连续 ５ ｄ
＊ ［２，２７］
１０ ０００～１２ ０００
刚断奶雌性 ＳＤ 品系大鼠、雌／雄日本大耳白兔。小鼠体 重在 １８．７～２７．０ ｇ 之间，大鼠成年体重为（３１０±１０）ｇ，幼年 大鼠体重在 ５７．４～８０．０ ｇ 之间，白兔在（２５５０±５５０）ｇ。造模 方法：（１）失血＋限食造模法 ，造 ［２９，３０，３３～３６］ 模 成 形 时 间 在 ２４ ｈ～２０ ｄ 之间。（２）失血法［３７～４０］造模成形时间在 ２ ｈ～５ ｄ 之 间。（３）失血＋限食＋劳倦造模法［４１，４２］造模时间为 １５～１８ ｄ。 １．４ 免疫介导造模法 应用原理是于 Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠经亚 致死量照射后，机体的免疫功能严重受损，再输入同基 因 Ｈ－ ２，但 ＭＨｓ 抗原不同的 ＤＢＡ／２ 小鼠的胸腺、淋巴结 混合细胞，这些免疫活性细胞得以在宿主体内生存，并 通过某种未明的机制，使宿主体内出现造血抑制细跑和 血浆 ＧＦＵ－ ＧＭ 抑制活性，从而导致造血干细胞数量明 显减少并出现缺陷，使自身复制的速率低于分化率，最 终引起全血细胞减少［４３］。（表 ４）
３ ｄ ［２２］
雄性大鼠
文献未明 ２％ＡＰＨ 皮下注射，剂量为 １０ ｍｇ／ｋｇ
２～３ ｄ ［１６ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ１７］
雌／雄家兔
２５００￣ ３０００ ２％ＡＰＨ 注射液，０．５ ｍｌ／ｋｇ 肌肉注射 ２ 次（约合 ＡＰＨ１２．５￣１５．０ ｍｇ／只）
＊ ［１６］
注：＊ 文献无明确记载，或因为拮抗造模药物作用而无造模成形时间描述（下同）。
发表年份 图 １ 历年动物模型文献篇数统计 我们就期间发表的关于血虚证造模文章中的造模 方法分列如下： １．１ ６０Ｃｏγ射线造模法 该造模方式是用放射线照射 小鼠全身，造成白细胞量下降和骨髓损伤，造模血虚证
［基金项目］上海市教委科研基金资助项目（０２ＣＫ０９） ［作者简介］许敏（１９８０－ ），男，浙江嵊州人，在读硕士生，主
２４．５±５．５
小剂量组小鼠用 ３０ ｍｇ／ｋｇ 或 １００ ｍｇ／ｋｇ 的 ＣＴＸ 腹腔注射，隔日 １ 次， 连续 ３ 次
造模 时间
＊
出处 （参考文献）
［２４，２５］
雌／雄 ＣＦ５７ＢＬ／６Ｊ 小鼠
实验第 ４ ｄ 以 ２５０ ｍｇ／ｋｇ 剂量 １ 次腹腔注射 ＣＴＸ 制成血虚证模型小 ２００．０±５０．０ 鼠