两相体系中微生物转化法制备依西美坦

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依西美坦有关物质的研究重点

2009年第40卷第2期《浙江化工》文章编号：１００６－４１４８－（２００９）０２－０００５－０２依西美坦有关物质的研究潘一斌俞利琴（浙江医药股份有限公司新昌制药厂，浙江新昌312500）摘要：目的：采用高效液相色谱法确证依西美坦中有关物质的结构，测定有关物质含量。

方法：以Agilent C18柱（250mm ×4.6mm,5μm ），甲醇-水（65：35）为流动相，检测波长为247nm 。

结果：有关物质检测限为0.2ng ，响应因子为0.85。

结论：确证了主要杂质的结构，采用杂质对照品法测定杂质，结果准确可靠。

关键词：依西美坦；高效液相色谱；有关物质。

修回日期：2008-09-02作者简介：潘一斌（1967-），男，高级工程师，本科，毕业于浙江大学，从事药品研发的质量分析。

依西美坦是一种副作用低,使用方便的甾体-不可逆性芳香化酶抑制剂，能不可逆地与芳香化酶结合，阻止雌激素的合成。

主要用于治疗绝经期妇女的晚期乳腺癌，抗癌专属性强。

本药品已在国内上市，也有相关报道此产品的有关物质及含量测定。

但由于生产工艺不同，可能的杂质也有所不同。

按照ICH 对人用药品的要求，我们对其杂质进行了定性及测定，为用药的安全有效提供有力的保障。

1仪器与试药1.1仪器HPLC-10AVP 高效液相色谱仪，SPD-10A 紫外检测器。

1.2试药依西美坦（浙江医药股份有限公司新昌制药厂，批号060901，060902，060903）；起始原料（ADD ）,中间体Ⅰ，中间体Ⅱ（浙江医药股份有限公司新昌制药厂）；其余试剂均为分析纯或色谱纯。

2实验方法及结果2.1溶液的制备2.1.1供试品溶液精密称取依西美坦适量，加流动相溶解，稀释制成1mg/mL 的溶液，作为供试品溶液。

2.1.2对照溶液精密称取ADD 适量，加流动相溶解，稀释制成10μg/ml 的溶液，作为对照溶液。

2.2色谱条件色谱柱：Agilent C18柱（250mm ×4.6mm,5μm ），流动相为甲醇-水（65：35）；紫外检测器，检测波长为247nm ，流速1mL/min;进样量10μL 。

两相体系中微生物转化法制备依西美坦

410081)
乐
*
( 湖南师范大学生命科学学院微生物系 , 中国长沙摘要
采用有机介质中微生物转化的方法 , 对甾体 C1, 2 位的生物脱氢进行了研究 . 通过考察有机溶剂对甾
体底物和产物的溶解度 , 微生物细胞在不同有机溶剂中的存活率以及有机溶剂的加入量 , 构建了较合适的二甲苯 / 发酵液两相体系 , 且二甲苯加入量占总体积的 15% 为宜 . 然后以雄甾 4 烯 6 亚甲基 3, 17 二酮为底物 , 利用简单节杆菌 ( A rthrobacter s i m p lex ) 完整细胞在两相体系中对甾体 A 环 C1, 2 位进行生物脱氢 , 得到抗肿瘤药物依西美坦 ( 雄甾 1, 4 二烯 6 亚甲基 3, 17 二酮 ). 对转化时间、转化温度、摇床转速、摇瓶装液量等条件进行了一系列的研究 . 结果表明 , 在装液量为 20 mL 每 100 mL 三角瓶 , 温度为 32 化率可达到 13 . 6% . 关键词有机溶剂 /水两相体系 ; 微生物转化 ; 简单节杆菌 ; 依西美坦 Q 939. 9 文献标识码 A 文章编号 1000 2537( 2010) 02 0112 06 中图分类号 , 转速为 180 r /m in , 转化时间为 24 h 的条件下 , 转
K ey w ord s o rgan ic / aqueous tw o phase system; m icrobial transfo r m ation; A rth robacter si m p lex; exem estane
微生物转化在当前甾体激素药物的生产中具有重要应用意义 . 然而甾体在水介质中溶解度极低 , 一般甾体、甾醇化合物在水中的溶解度通常低于 0 . 1 mm o l /L或 1 m ol /L 粉化甾体底物

依西美坦原料药抗肿瘤及免疫抑制剂

武汉贝尔卡生物医药有限公司产品简介中文品名依西美坦CAS 号107868-30-4英文品名Exemestane (USP)产品编号MB1674依西美坦分子式：C20H24O2分子量：296.40物理性状及指标：外观：……………………白色或类白色结晶性粉末熔点：……………………191~195℃溶解性：…………………易溶于N,N二甲基甲酰胺、三氯甲烷，溶于乙酸乙酯、丙酮、甲醇和乙醇，几乎不溶于水。

干燥失重：………………≤0.5%含量：……………………98.0~102.0%IC50：……………………半数致死剂量 (LD50) 经口 - 大鼠 - > 5,050 mg/kg ……………………………半数致死剂量 (LD50) 腹膜内的 - 大鼠 - 404 - 488 mg/kg ……………………………半数致死剂量 (LD50) 腹膜内的 - 老鼠 - 396 - 419 mg/kg用途及描述：科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面。

乳腺癌细胞的生长可依赖于雌激素的存在，女性绝经期后循环中的雌激素（雌酮和雌二醇）主要由外周组织中的芳香酶将肾上腺和卵巢中的雄激素（雄烯二酮和睾酮）转化而来。

通过抑制芳香酶来阻止雌激素生成是一种有效的选择性治疗绝经后激素依赖性乳腺癌的方法。

依西美坦为一种不可逆性甾体芳香酶灭活剂，结构上与该酶的自然底物雄烯二酮相似，为芳香酶的伪底物，可通过不可逆地与该酶的活性位点结合而使其失活（该作用也称“自毁性抑制”），从而明显降低绝经妇女血液循环中的雌激素水平，但对肾上腺中皮质类固醇和醛固醇的生物合成无明显影响。

在高于抑制芳香酶作用浓度的600倍时，对类固醇生成途径中的其他酶不产生明显影响。

储存条件：室温，避光防潮密闭干燥。

注意：我司产品为非无菌包装，若用于细胞培养，请提前做预处理，除去热原细菌，否则会导致染菌。

以上数据仅供参考交流之用。

依西美坦的溶解性，依西美坦在水中的溶解性，依西美坦在生理盐水中的溶解性，依西美坦在PBS缓冲液中的溶解性，依西美坦在DMSO、乙醇等有机溶剂中的溶解性，依西美坦在细胞实验方面的应用，依西美坦在大鼠等动物实验方面的应用。

抗肿瘤新药_依西美坦的合成工艺研究

表5 黄芪多种成分抗HSV-2333株的中效方程参数:成分中效方程参数M(斜率)Dm(ED50,ug/ml)Y轴截距相关系数(自由度)ACV0.58*16.45-0.210.98(7)*0.76*18.62-0.480.99(7)0.69*10.85-0.200.99(8)黄芪总皂苷 1.28 1.73-0.0030.99(5)1.912.710.0660.98(5)1.952.740.0740.98(5)黄芪总多糖 1.69 6.04-0.0040.99(7)1.24 5.43-0.0550.98(7)1.727.50-0.1020.92(7)黄芪总黄酮 2.32 3.56-0.1130.97(7)2.353.93-0.1370.97(7)2.38 6.27-1.4700.98(7)*注:表中的数值排列同表3。

另外所有的P值均小于0.0005.2.3 黄芪多种成分对Hep-2细胞的细胞毒作用:A CV对Hep-2细胞的细胞毒IC50为1085ug/ml.黄芪总皂苷、总多糖、总黄酮对Hep-2细胞的细胞毒I C50依次分别为259. 9ug/ml,1452ug/ml,161.4ug/ml。

3 讨论通过对黄芪三种成分抗HSV药效的比较,我们发现总皂苷抗HSV-1HS-1株药效稍比总黄酮好,抗HSV-2 333株药效最好,说明总皂苷是黄芪抗HSV的主要成分。

但是,三种成分抗HSV药效均比ACV好。

用HSV-1HS-1株感染豚鼠皮肤的动物实验得到了一致的结果(载于其他文章)。

侯云德等[4]早期对黄芪抗V ZV、Sindbis、流感病毒等的作用进行了研究,发现黄芪抗这些病毒的活性主要存在于黄酮及皂苷部分,与我们的结果是一致的。

治疗指数(T r eatment Index,T I)=IC50/ED50。

如果按照直接杀灭、感染阻断、增殖抑制的顺序排列,ACV对HSV -1HS-1株的T Is为35,67,54;对HSV-2333株的T Is 为65,100,58。

依西美坦片及其制备工艺[发明专利]

[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101468023A[43]公开日2009年7月1日[21]申请号200710173063.7[22]申请日2007.12.26[21]申请号200710173063.7[71]申请人上海复星医药（集团）股份有限公司地址200010上海市复兴东路2号共同申请人上海朝晖药业有限公司[72]发明人熊洁蔡胜包玉林[74]专利代理机构上海新天专利代理有限公司代理人王巍[51]Int.CI.A61K 31/5685 (2006.01)A61K 9/20 (2006.01)A61K 47/38 (2006.01)A61P 35/00 (2006.01)A61P 35/04 (2006.01)A61P 15/14 (2006.01)权利要求书 2 页说明书 7 页[54]发明名称依西美坦片及其制备工艺[57]摘要本发明提供了依西美坦片剂及制备方法。

本发明减少羧甲淀粉钠和羟丙纤维素的用量，增加微晶纤维素的量，对依西美坦进行微粉化，克服了现有工艺的不足。

并且产品质量提高，溶出度好，利于规模型的工业化生产。

200710173063.7权利要求书第1/2页1、一种依西美坦片剂，其特征在于该制剂由下列重量配比的成份组成：每1000片：依西美坦 25g乳糖 90g羧甲淀粉钠 3.6g羟丙纤维素 5.5g微晶纤维素 50g硬脂酸镁 1.0g8％PVP乙醇溶液 40.0g。

2、一种依西美坦片剂的制备工艺，其特征在于该工艺包括下列步骤： (1)配方每1000片依西美坦 25g乳糖 90g羧甲淀粉钠 3.6g羟丙纤维素 5.5g微晶纤维素 50g硬脂酸镁 1.0g8％PVP乙醇溶液 40g(2)制备工艺1)依西美坦微粉化10-25um和乳糖混合均匀过80目筛；羧甲淀粉钠、羟丙纤维素、微晶纤维素、硬脂酸镁分别过100目筛；2)将过筛后的依西美坦、乳糖、羧甲淀粉钠、羟丙纤维素和微晶纤维素投入高速湿法制粒机，开低速120转/分搅拌3min，高速180转/分搅拌2min，加入8200710173063.7权利要求书第2/2页％ PVP乙醇溶液40g制粒，低速120转/分搅拌2min，低速1200转/分制粒1min；3)在60～70℃通风干燥1.5～2.5小时，16目筛整粒；4)加入硬脂酸镁，混合50转3转/分钟后，取样测定中间体的含量和干燥失重；5)依据中间体含量测定结果，按每片素片含依西美坦25mg计算素片重量；6)压片；7)包衣。

一种依西美坦口腔崩解片及其制备方法[发明专利]

专利名称：一种依西美坦口腔崩解片及其制备方法专利类型：发明专利
发明人：赵辉,赵冠淇,郭涛,胡晓川
申请号：CN201410158617.6
申请日：20140418
公开号：CN103961326A
公开日：
20140806
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种依西美坦口腔崩解片及其制备方法，本发明药物含有依西美坦主成分和崩解剂、填充剂、矫味剂等辅助成分。

本发明药物的制备工艺包括混合直接压片，包衣等步骤，依西美坦口腔崩解片剂型的优点是在口腔内不需水即能崩解或溶解的片剂，随吞咽动作入消化道，体内行为与普通片剂一致。

具有服用方便、吸收快、生物利用度高等特点，可提高患者适应性，增加医师和患者临床用药的选择。

申请人：赵辉
地址：266000 山东省青岛市市南区莱阳路57号
国籍：CN
代理机构：北京众合诚成知识产权代理有限公司
代理人：龚燮英
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一种两步微生物转化法制备R

专利名称：一种两步微生物转化法制备R‑扁桃酸的方法专利类型：发明专利
发明人：欧志敏,马兰
申请号：CN201610576427.5
申请日：20160719
公开号：CN106086090A
公开日：
20161109
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种两步微生物转化法制备R‑扁桃酸的方法，所述方法为：以苯甲酰甲酸乙酯为底物，以酿酒酵母经发酵培养获得的菌体为催化剂，以pH值6‑8的缓冲液为反应介质，在
20‑45℃、100‑200rpm条件下进行转化反应，获得R‑扁桃酸乙酯；以R‑扁桃酸乙酯为底物，以蜡样芽孢杆菌经发酵培养获得的菌体为催化剂，以有机溶剂为助溶剂，以pH值7‑9的缓冲液为反应介质，在20‑40℃、100‑200rpm条件下进行反应，获得R‑扁桃酸。

本发明方法成本低廉，环境友好，反应条件温和；易于大规模工业化生产；操作简便，摩尔转化率较高；可将产率提高到99.8％，ee值提高到100％。

申请人：浙江工业大学
地址：310014 浙江省杭州市下城区潮王路18号
国籍：CN
代理机构：杭州天正专利事务所有限公司
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一种抗癌药物依西美坦制备方法[发明专利]

专利名称：一种抗癌药物依西美坦制备方法专利类型：发明专利
发明人：朱勤,潘俊芳
申请号：CN02137599.2
申请日：20021024
公开号：CN1491957A
公开日：
20040428
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种制备依西美坦的方法，该方法采用由雄甾－4－烯－3、17二酮作起始原料与原甲酸三烷酯在催化剂催化下生成烯醇醚，再直接与N－甲基苯胺、甲醛反应，所得反应物在惰性溶剂及惰性气体保护下用脱氢试剂IBX在一定温度下反应得到依西美坦。

本法具有操作简单，后处理方便，不污染环境，大大降低成本，适合工业生产。

申请人：上海华拓医药科技发展有限公司
地址：200093 上海市杨浦区舒兰路90号
国籍：CN
代理机构：上海开祺专利代理有限公司
代理人：费开逵
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生物转化法制备依西美坦的研究的开题报告

生物转化法制备依西美坦的研究的开题报告一、课题背景依西美坦（Ezetimibe）是一种治疗高胆固醇血症的药物，主要通过抑制小肠上皮细胞内的胆固醇吸收来降低血液中总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的水平。

其结构中含有嘧啶和吡咯烷环等功能团，具有良好的口服生物利用度和低毒性。

目前，依西美坦的工业生产主要采用化学合成法，但其对环境和人体的毒性问题仍困扰着生产厂家和消费者。

因此，寻求一种更环保、更安全的生产方法具有重要意义。

生物转化法是一种利用微生物、酶等生物体来进行合成的方法。

它具有选择性高、反应条件温和、废弃物少等优点，可以被广泛应用于制药、化学等领域。

因此，将生物转化法应用于依西美坦的制备具有很高的研究价值。

二、研究内容与目标本论文拟以依西美坦为研究对象，通过综合文献调研和实验研究，探究生物转化法制备依西美坦的可行性和优化技术。

具体内容和目标如下：1. 研究细菌对依西美坦的生物转化能力通过筛选和鉴定，确定具有较高生物转化能力的细菌菌株，比较不同细菌种类对依西美坦的生物转化效果，并优化培养条件，提高转化率。

2. 研究酶对依西美坦的生物转化能力筛选和纯化依西美坦转化酶，考察不同酶的生物转化效果及其对反应速率、选择性等因素的影响。

3. 优化生物转化反应条件综合考虑酶的种类、反应底物、反应温度、pH值、反应时间等因素，确定最佳反应条件，提高产率和选择性。

4. 验证生物转化依西美坦的产物结构和活性通过质谱和核磁共振等手段，验证生物转化产物的结构和活性，并与化学合成品进行对比，验证其有效性和可行性。

三、研究意义本研究旨在探究一种更环保、更安全的依西美坦制备方法，通过生物转化法来降低对环境的污染和对人体的危害。

在实践中，还可以为生物转化法的应用提供新的思路和方法，促进生物技术的发展和转化。

同时，本研究也为开发其他具有相似结构和功能的多环有机化合物提供了有益的参考。

依西美坦胶囊溶出度测定

依西美坦胶囊溶出度测定
高磊;闫占军;王伟;张丽华
【期刊名称】《中国药品标准》
【年(卷),期】2002(003)002
【摘要】选择三种不同溶剂作为溶出介质,绘制溶出度曲线图,确定测定依西美坦胶囊溶出度的具体实验条件.
【总页数】2页(P58-59)
【作者】高磊;闫占军;王伟;张丽华
【作者单位】内蒙古药品检验所,呼和浩特,010020;内蒙古药品检验所,呼和浩特,010020;内蒙古药品检验所,呼和浩特,010020;赤峰丹龙药业有限公司研究所,024001
【正文语种】中文
【中图分类】R9
【相关文献】
1.胶囊壳影响氟康唑胶囊剂溶出度测定考察 [J], 蔡建华
2.依西美坦胶囊的人体生物等效性研究 [J], 李军;郭瑞臣;王本杰
3.诺氟沙星胶囊溶出度测定方法的比较与探讨 [J], 汤慧
4.塞来昔布胶囊的制备及其溶出度测定 [J], 茅为;张卫香;马丁楠
5.阿莫西林胶囊溶出度测定方法研究 [J], 沈川;程义;曾令高;姜学美;沈丹丹
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RP-HPLC法测定依西美坦片中依西美坦的含量及其有关物质

RP-HPLC法测定依西美坦片中依西美坦的含量及其有关物质厉伟兰;郑向宇
【期刊名称】《中国药科大学学报》
【年(卷),期】2002(33)6
【摘要】目的建立 RP- HPL C测定依西美坦片中依西美坦的含量及其有关物质。

方法以甲醇∶乙腈∶ 0 .0 5mol/ L KH2 PO4( p H=4.5 ) ( 5 0∶ 3 5∶ 65 )为流
动相 ;流速 :1.5 m l/ min;检测波长 2 47nm。

结果依西美坦在 40～2 10 .6μg/ ml浓度范围内线性关系良好 ,平均回收率为 99.97% ,RSD为 0 .5 7% ,最小检出浓度为0 .4112μg/ ml。

【总页数】3页(P537-539)
【关键词】RP-HPLC法;依西美坦;高效液相色谱法;有关物质;含量测定;片剂
【作者】厉伟兰;郑向宇
【作者单位】东南大学附属中大医院
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.RP-HPLC法测定依西美坦片的含量 [J], 俞彩萍;冒宜兰;缪玉山;蒋金元
2.RP-HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸多奈哌齐口腔崩解片中有关
物质的含量 [J], 刘小均;罗军波;李培海;郑强;柯潇
3.RP-HPLC法测定凡德他尼片中主药和有关物质的含量 [J], 赵玲;赵春才;杨博;刘
艳艳;张露
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5.RP-HPLC法测定利培酮口腔崩解片中主药及有关物质的含量 [J], 张述耀
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乳腺癌依西美坦耐药细胞株的建立及耐药机制的初步研究

乳腺癌依西美坦耐药细胞株的建立及耐药机制的初步研究胡丽霞;袁媛;杜瀛瀛;潘跃银【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2012(47)12【摘要】Objective To establish stable MCF-7 cell lines resistant to exemestane and describe its resistant mechanisms. Methods Using gradual increase of exemestane concentrations in culture, a exemestane-resistant human breast carcinoma cell line( MCF-7/EXE ) was established in vitro. The IC50 and resistance index( RI )of MCF-7 and MCF-7/EXE cell lines were measured by MTT. Cell cycles were assayed with flow cytometry method. Western blot analysis was used to investigate the expression of ERK activation and Bel-2. Results The IC50 increased from ( 27. 06 ±3. 47 )μmol/L in MCF-7 to( 128. 43 ±0. 91 ) μmol/L in MCF-7/EXE and the RI was 4. 75( P <0. 05 ). The cell cycles of G0/G1 period and S period had a significant difference between these two cell lines( P < 0. 05 ), the G2/M period change was not obvious. Compared with its parental cell line, the expression of ERK activation and Bcl-2 was significantly increased in MCF-7/EXE cell line. Conclusion MCF-7/EXE, the exemestane resistant phenotype,is suitable cell model for studying exemestane resistant in breast cancer.%目的建立稳定传代的抵抗依西美坦的人乳腺癌细胞株MCF-7/EXE,并探讨其可能耐药机制.方法采用体外浓度梯度递增的诱导方法建立依西美坦获得性MCF-7/EXE耐药细胞株;采用MTT法计算出MCF-7和MCF-7/EXE的半数抑制浓度(IC50)和耐药倍数(RI);用流式细胞仪技术检测其细胞周期;用Western blot方法检测p-ERK和Bcl-2蛋白的表达.结果依西美坦对MCF-7和MCF-7/EXE的IC50分别为(27.06±3.47)、(128.43±0.91)μmol/L,RI为4.75(P<0.05).这两种细胞株的G0/G1期、S期差异有统计学意义(P<0.05),G2/M 期差异无统计学意义.与亲本细胞相比,MCF-7/EXE中p-ERK和Bcl-2蛋白表达升高.结论成功建立一株耐依西美坦的人乳腺癌细胞株MCF-7/EXE,适合于乳腺癌中依西美坦耐药机制的研究.【总页数】4页(P1404-1407)【作者】胡丽霞;袁媛;杜瀛瀛;潘跃银【作者单位】安徽医科大学第一附属医院肿瘤科,合肥,233022;合肥市滨湖医院中心实验室,合肥,230601;安徽医科大学第一附属医院肿瘤科,合肥,233022;安徽医科大学第一附属医院肿瘤科,合肥,233022【正文语种】中文【中图分类】R737.9【相关文献】1.结肠癌TRAIL耐药细胞株的建立及其耐药机制的初步研究 [J], 陈琳琳;朱玉萍;宋章法;黄学锋;毛伟芳2.乳腺癌耐药蛋白(BCRP)高表达耐药细胞系的建立及其耐药机制的初步研究 [J], 张会来;孙燕;宋拯;刘贤明;王华庆3.依西美坦与低剂量甲氨蝶呤对依西美坦耐药人乳腺癌细胞的协同效应及逆转耐药机制 [J], 居伶俐;袁媛;潘跃银4.鼠源乳腺癌多药耐药细胞株的建立及耐药机制的初步研究 [J], 邓印根;张志杰;卢敏莹;贾小婷;彭聪;贺智敏5.乳腺癌帕博西尼耐药细胞株的建立及耐药机制研究 [J], 唐瑶;杨建;郭正成;郝峰;宁金鹰;康金森因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。