链霉菌实验操作手册

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霉菌试验的工作流程修订原件2霉菌试验技术手册

霉菌试验工作流程二零零零年四月二十五日二零零二年十一月待修改目录一、试验前的准备1、灭菌方法（附录A）2、选择菌种3、制备培养基4、倒平板5、菌种的移植、培养及保藏6、无机盐溶液、浸渍（营养）液的制备方法7、试验设备准备8、试验场所及用具的灭菌9、试验所需用具10、对照样品的准备11、试验样品的准备12、安装试验样品及对照样品13、预处理二、制备混合孢子悬浮液三、试验四、样品出箱及最终检测五、出具试验报告及资料归档六、附录A灭菌方法（包含整个霉菌试验过程中的灭菌方法）一、试验准备1、选择菌种1.1 菌种来源菌种来源必须是经国家认可的菌种保藏和研究机构提供的纯正菌种。

1.2 试验菌种按照试验标准有关条款规定的菌种名称和菌号准备菌种（各行业标准要求试验菌种名称和菌号见表1、各种菌种受影响的材料见表2）。

1.3 菌种检查在菌种移植前，对试验用菌种进行纯度检查，如有不纯或变异的菌种应及时更换。

菌种留试验备用及菌种贮存。

2、制备培养基霉菌试验中常用的培养基有：查氏培养基（Ca）、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）。

菌种保存时查氏培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）应交替使用,防止菌种退化。

2.1 查氏培养基2.1.1主要成份硝酸钠（NANO3） 3.0g磷酸氢二钾（K2HPO4） 1.0g氯化钾（KCL） 0.5g硫酸镁（MgSO4•7H2O） 0.5g硫酸亚铁（FeSO4•7H2O） 0.01g蔗糖 30g琼脂（15～20）g蒸馏水 1000mlPH 6.8表1 各行业标准要求试验菌种名称和菌号注：菌种编号为中国科学院北京微生物研究所保藏的菌种编号表2 各菌种受影响的材料2.1.2 制备方法a) 材料和器皿⑪ DT100单盘天平，电炉子或电磁炉，石棉网，烧杯，1000ml的容器，漏斗，试管，玻璃棒等。

⑫其它F20APH计，牛角匙，洁净纱布、棉花等。

b) 方法和步骤⑪预先在容器内倒入半量的蒸馏水（500ml）；⑫用DT-100单盘天平称出各种成份（详见电子天平称的使用说明书）；⑬配制时除磷酸氢二钾以外，其余成份和蔗糖依次溶入蒸馏水中；⑭每加一种成份后应用玻璃棒充分搅拌，待完全溶解后再加第二种；⑮磷酸氢二钾另溶于200ml的蒸馏水中，然后加入上述的溶液中，最后加蒸馏水至规定体积，并加入琼脂；⑯将装有各种成份的烧杯放在石棉网上，用文火加热并用玻璃棒徐徐搅拌，使各种试剂完全溶解，放入蔗糖，溶化后加蒸馏水至1000ml；⑰初配好的查氏培养基是偏酸性的，故要氢氧化钠（NaOH）调PH；为避免过碱，应缓慢加入氢氧化钠（NaOH），边加边搅拌并不时地用F20APH 计测试或用PH试纸测得PH值为6.8；⑱过滤培养基可用2层纱布趁热过滤（适宜温度应为50℃左右）。

霉菌实验操作方法

霉菌实验操作方法霉菌实验是一种常用的微生物实验，用于观察和研究霉菌的生长和繁殖情况。

以下是一种常用的霉菌实验操作方法：1. 准备所需材料和试剂：- 霉菌菌种（如青霉菌、曲霉菌等）- 培养基（如琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂等）- 干燥的无菌培养皿- 培养皿密封膜或胶带2. 无菌操作：- 洗手并进行必要的消毒，确保实验环境无菌。

- 将所需材料和试剂进行高温高压灭菌或丙酮消毒。

- 使用无菌技术操作，避免外界的菌群污染。

3. 制备菌种悬液：- 从保存的霉菌菌种中取出一小部分，通过接种环或接种针悬浮于无菌生理盐水或无菌培养基中。

- 使菌种悬液均匀分布。

4. 霉菌培养：- 将无菌培养基熔化并冷却至适宜的温度。

- 将培养基倒入无菌培养皿中，待其固化形成培养基平板。

- 使用接种环或接种针，分别在培养基表面划线或刺激式接种菌种悬液。

- 均匀划线或刺激式接种以确保霉菌的均匀分布。

5. 培养皿密封：- 用无菌的培养皿密封膜或胶带将培养皿密封，防止外界空气和其他菌群的进入。

- 将密封后的培养皿标记上必要的信息（菌株名称、日期等）。

6. 培养条件：- 将密封后的培养皿置于适宜的温度和湿度条件下。

- 注意避光，霉菌一般在暗处生长。

7. 观察和记录：- 在培养一段时间后，观察培养皿上是否有霉菌生长。

- 记录霉菌的生长情况，包括菌落的形态、颜色和分布等。

- 还可以进一步进行镜检，观察霉菌的菌丝和孢子等微观结构。

8. 结果分析：- 根据观察和记录的结果，分析和总结霉菌的生长和繁殖情况。

- 可以进行统计分析或比较不同实验组的结果。

请注意，实验中的操作和培养条件可能因具体的实验目的和研究对象而有所不同。

在进行实验前，应仔细研究和理解所用菌种的特性，以及相应的实验操作方法和安全注意事项。

链霉素纯化实验报告

实验名称：链霉素纯化实验实验日期：2023年X月X日实验地点：实验室实验目的：1. 学习和掌握链霉素的提取和纯化方法。

2. 了解不同纯化步骤对链霉素纯度的影响。

3. 优化实验条件，提高链霉素的纯度和回收率。

实验材料：1. 链霉素发酵液2. 乙酸乙酯3. 无水乙醇4. 氯化钠5. 硅胶6. 重结晶溶剂（如甲醇、丙酮等）7. 分析纯试剂8. 实验器材：离心机、旋转蒸发仪、玻璃棒、漏斗、滤纸、烧杯、锥形瓶等实验方法：1. 预处理将发酵液在室温下静置，使沉淀物沉淀，取上清液备用。

2. 初步纯化将上清液用乙酸乙酯萃取，静置分层后，取下层有机相，使用旋转蒸发仪去除溶剂，得到初步纯化的链霉素。

3. 柱层析将初步纯化的链霉素用甲醇溶解，过硅胶柱，收集洗脱液。

调节洗脱液pH至6.0-7.0，以氯化钠溶液作为洗脱剂，收集目标组分。

4. 精制将收集到的目标组分用无水乙醇进行重结晶，得到精制的链霉素。

5. 分析对纯化的链霉素进行HPLC分析，测定其纯度和含量。

实验结果：1. 初步纯化通过乙酸乙酯萃取，初步纯化的链霉素纯度约为60%。

2. 柱层析经过硅胶柱层析，链霉素纯度提高至90%。

3. 精制通过重结晶，链霉素纯度达到98%以上。

4. HPLC分析HPLC分析结果显示，纯化后的链霉素纯度为98.5%，含量为1.5mg/mL。

实验讨论：1. 在初步纯化过程中，乙酸乙酯萃取效果较好，可以有效地去除发酵液中的杂质，提高链霉素的纯度。

2. 柱层析是纯化过程中的关键步骤，通过调节洗脱剂pH和氯化钠浓度，可以进一步分离和纯化链霉素。

3. 重结晶是提高链霉素纯度的有效方法，通过选择合适的溶剂和结晶条件，可以使链霉素结晶析出，从而提高其纯度。

4. 在实验过程中，应注意操作规范，避免污染和损失，以保证实验结果的准确性。

实验结论：本实验成功地从发酵液中提取和纯化了链霉素，通过乙酸乙酯萃取、柱层析和重结晶等步骤，将链霉素纯度从60%提高到98.5%，为后续研究提供了高质量的实验材料。

印片法链霉菌实验报告

印片法链霉菌实验报告
实验目的：
本实验旨在研究印片法对链霉菌进行分离和鉴定的效果，为链霉菌的研究提供实验数据和参考。

实验材料：
1. 链霉菌培养基
2. 无菌培养皿
3. 恒温培养箱
4. 实验室常用器材和试剂
实验步骤：
1. 准备工作：将链霉菌培养基培养至适宜的生长状态，确保培养基无污染。

2. 取一块无菌的培养基，倒入培养皿中，并均匀摊开。

3. 取一支火针，在火焰中消毒并冷却后，将其沾取链霉菌培养液的菌落，然后将其均匀涂抹在培养基上。

4. 用无菌的铁环或火针，在链霉菌菌落上进行串联接种，即将链霉菌菌落划过培养基表面，使菌落由密集到稀疏排列。

5. 将培养皿盖好，置于恒温培养箱中，在适宜的温度下培养一段时间，通常为24-48小时。

6. 观察菌落生长情况，并记录其形态、颜色、直径等特征。

7. 根据菌落的形态特征，进行初步的链霉菌鉴定。

8. 如有需要，可进行进一步的生化实验或分子生物学实验，以确认链霉菌的鉴定结果。

实验结果：
根据实验观察，链霉菌在培养基上形成了典型的菌落，呈现出特定的形态和颜色。

菌落直径在一定范围内，具有一定的变异性。

初步鉴定结果表明，该菌落为链霉菌。

实验结论：
本实验通过印片法成功分离和鉴定了链霉菌。

印片法是一种简单、快速且有效的方法，可用于微生物的分离和鉴定。

该实验结果可为链霉菌的进一步研究提供参考和基础数据。

农用细黄链霉菌使用说明书

农用细黄链霉菌使用说明书
农用细黄链霉菌（Bacillus subtilis）使用说明书
1. 产品介绍
农用细黄链霉菌是一种对多种病原菌有抑制作用的微生物制剂，广泛应用于农业生产中的病害防治。

2. 使用方法
2.1 喷雾
将适量的农用细黄链霉菌制剂溶解于适量的水中，按照农作物叶面的湿度和药液浓度的要求进行喷雾处理。

2.2 种植基质处理
在种植基质中添加适量的农用细黄链霉菌制剂，并与基质充分混合，确保农作物根系与制剂接触。

3. 使用剂量
根据不同的作物病害发生程度和作物生长阶段，以及制剂浓度可能的误差等因素进行适量的剂量调整。

4. 注意事项
4.1 使用前请先进行小范围试验，确保农用细黄链霉菌对目标
病原菌有有效的抑制作用，并不对作物产生明显的伤害。

4.2 适量使用，避免过量喷洒或过度浓度的种植基质处理，以
免对作物产生不良影响。

4.3 储存于阴凉、干燥的地方，避免阳光直射和高温环境，以
免降低制剂活性。

4.4 使用过程中请佩戴防护手套、口罩等个人防护装备，避免
直接接触制剂。

5. 包装和保存
农用细黄链霉菌制剂按照标准包装，密封保存，避免潮湿和温度过高的环境。

请在保质期内使用，并在开封后尽快使用完毕。

6. 效果评估
为了评估产品的效果，请在施用后一定时间内观察农作物的生长和病害的发展情况，根据实际情况进行调整并进行效果评估。

7. 技术咨询
如需了解更多关于农用细黄链霉菌的技术信息和应用建议，请咨询相关专业人士或联系产品供应商。

链霉素实验报告

链霉素实验报告链霉素实验报告一、引言链霉素是一种广谱抗生素，被广泛用于临床上的治疗。

本次实验旨在探究链霉素的抗菌活性及其对细菌生长的影响。

二、实验设计与方法2.1 实验材料- 链霉素标准品- 大肠杆菌培养基- 培养皿- 移液管- 灭菌棉签- 离心机2.2 实验步骤1. 准备不同浓度的链霉素溶液。

2. 将大肠杆菌培养液均匀涂布在培养皿上。

3. 在培养皿上分别滴加不同浓度的链霉素溶液。

4. 使用灭菌棉签将链霉素溶液均匀涂抹在培养皿上。

5. 将培养皿置于恒温培养箱中，培养一定时间。

6. 观察培养皿上的菌落生长情况。

三、结果与讨论3.1 结果分析通过观察实验结果，我们可以得出以下结论：1. 链霉素对大肠杆菌具有明显的抑菌作用。

随着链霉素浓度的增加，菌落的生长明显减少。

2. 在链霉素浓度较低时，菌落生长受到一定程度的抑制，但仍有少量菌落能够存活和繁殖。

3. 链霉素浓度较高时，菌落生长完全被抑制，培养皿上几乎没有菌落形成。

3.2 结果讨论链霉素是一种抗生素，通过抑制细菌蛋白质合成来发挥抗菌作用。

实验结果表明，链霉素对大肠杆菌具有明显的抑菌效果。

这是因为链霉素能够与细菌的核糖体结合，阻止蛋白质的合成，从而抑制细菌的生长和繁殖。

实验中观察到随着链霉素浓度的增加，菌落的生长明显减少。

这是因为链霉素的浓度越高，与细菌核糖体结合的机会越大，抑制蛋白质合成的效果越明显。

当链霉素浓度较低时，菌落的生长虽然受到一定程度的抑制，但仍有少量菌落能够存活和繁殖。

这可能是由于链霉素的抗菌作用与菌株的敏感性有关，不同的大肠杆菌株对链霉素的敏感程度不同。

当链霉素浓度较高时，菌落生长完全被抑制，培养皿上几乎没有菌落形成。

这说明链霉素在一定浓度范围内对大肠杆菌具有较高的抗菌活性。

这为临床上链霉素的应用提供了依据，适当提高链霉素的浓度可以更好地抑制细菌的生长。

四、结论通过本次实验，我们得出了以下结论：链霉素对大肠杆菌具有明显的抑菌作用，随着链霉素浓度的增加，菌落的生长明显减少。

5406链霉菌

上海保藏生物技术中心
Shanghai Bioresource Collection Center
菌种说明
一菌种简介
菌种名称5406链霉菌
编号
规格冻干粉
菌种主要应用
二保存条件
斜面、穿刺菌和冻干粉应在4-10度保存，甘油菌在-80度保存。

三培养条件
培养基高氏合成一号培养基
培养温度28-30度
培养时间5-7天
培养条件
四活化步骤
冻干粉首次活化，将菌粉甩至底部，将尖头一侧用酒精消毒后敲开，取0.2-0.3ml溶解液加入至菌种管中，轻轻弹至菌粉混合均匀，用无菌吸头全部吸出溶解液，全部接种至2支斜面上培养。

注意真空菌种管一旦敲开里面的冻干粉就必须全部被用掉，留着也没用。

五注意事项
1 微生物菌种应保存于低温、清洁和干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；
2 菌种操作在无菌条件下进行，接种完毕应该灭菌再做丢弃处理；
3 斜面菌种和穿刺菌种保存时间通常为3-6个月，应根据菌种状况及时结转；冻干粉保存时间通常是2-25年；甘油菌保存时间为2-5年。

高氏合成一号培养基：
硝酸钾1g；可溶性淀粉20g；磷酸氢二钾0.5g；七水合硫酸镁0.5g；氯化钠0.5g；硫酸亚铁0.01g；琼脂20g；蒸馏水1000ml；pH 7.2-7.4
版权归上海保藏生物技术中心所有。

发酵工程制药实验-链霉菌发酵

实验2灰色链霉菌的活化一、实验目的学习制备高氏一号斜面培养基的方法以及斜面接种技术。

二、实验原理高氏一号斜面培养基是一种合成培养基，用于培养放线菌。

三、实验试剂与仪器1. 菌种：灰色链霉菌；2. 培养基：可溶性淀粉20g，硝酸钾1 g，氯化钠0.5 g，磷酸氢二钾0.5 g，硫酸镁0.5 g，硫酸亚铁0.01 g，琼脂20 g，水1000毫升，PH7.2—7.4（配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中）；3. 器材：天平、500mL刻度量杯、小刀、牛角匙、玻棒、纱布、18mL×180mL试管、棉花、电炉、烧杯、记号笔、酒精灯、接种环等。

四、实验步骤1. 高氏一号培养基的制备（1）按配方称量药品，加热搅拌至琼脂完全熔化，补水至1000mL。

趁热分装于18mL×180mL试管，斜面以8mL为宜。

（3）分装完毕后，塞好棉塞并将试管捆扎好。

高压蒸汽灭菌：121℃灭菌20min，灭菌后趁热摆斜面。

2. 斜面接种接种是将纯种微生物，在无菌操作条件下，移植到已灭菌并适宜该菌生长繁殖所需要的培养基中。

为了获得微生物的纯种培养，要求接种过程中必须严格进行无菌操作。

一般是在无菌室内，超净工作台或实验台酒精灯火焰旁进行。

（1）左手拿试管菌种，右手拿接种环，先将金属环烧灼灭菌，再将接种环在空白培养基处冷却，挑取菌落，在火焰旁稍等片刻。

（2）左手将试管菌种放下，拿起斜面培养基。

在火焰旁用右手小指和手掌边缘拔下棉塞并夹紧，迅速将接种环伸入空白斜面，在斜面培养基上轻轻划线，将菌体接种于其上。

划线时由底部向上划一直线，一直划到斜面的顶部。

注意勿将培养基划破，不要使菌体沾污管壁。

（3）灼烧试管口，在火焰旁将棉塞塞上。

接种完毕，接种环上的余菌必须灼烧灭菌后才能放下。

（4）斜面置于28℃恒温箱中，培养5～6d观察结果。

实验3 灰色链霉菌的摇瓶种子制备一、实验目的学习制备摇瓶种子培养基的方法以及种子扩大培养技术。

链霉菌基因实验操作

LALB中加入终浓度为1.5-2%的琼脂粉(不同的琼脂加的量不同，如青岛琼脂大概需1.5%，而华美的需要2%)。

＊做蓝白斑筛选时不加葡萄糖基本培养基（MM）溶液：L-天冬酰胺0.5g，K2HPO4 0.5g,MgSO4·7H2O 0.2g,FeSO4·7H2O 0.01g,蒸馏水至1000ml将每250ml溶液分装到装有2.5g琼脂的500ml三角瓶中，灭菌，使用时每瓶加入50％葡萄糖（8磅灭菌）5ml，调pH7.0。

配置MM的琼脂有lab agar、Ice agar(IA)R5（1L）链霉菌原生质体转化时用蔗糖103gK2SO4 0.25gMgCl2·6H2O 10.12g葡萄糖10gDifco酪蛋白氨基酸0.1g微量元素溶液2mlOxoid酵母提取物5gTES 5.73g加蒸馏水至1000ml称取5.5g Difco琼脂放入500ml三角瓶中，倒入250ml上述溶液，然后塞上塞子后8磅灭菌（114度15分种）。

使用时，将培养基融化，每瓶中加入：KH2PO4(0.5%) 2.5mlCaCl2·2H2O(5M) 1mlL-脯氨酸(20%) 3.75mlNaOH(1M)调pH至7.3对营养缺陷型菌株加入适当的营养因子（请参考《手册》）YEME(酵母膏-麦芽膏培养基) 1L（液体培养链霉菌）Oxoid酵母提取物3gOxoid蛋白胨Tryptone 5g麦芽提取物（BD公司原Difco公司218630）3g葡萄糖10g蔗糖＊340g蒸馏水至1000ml高压灭菌后加入：（8磅灭菌，113－114゜C，15min，自动灭菌锅一次不能灭过多东西，否则会灭不彻底。

）MgCl2·6H2O(2.5M) 2ml/L制备原生质体时，还要加入：甘氨酸（20%）＊25ml/L＊蔗糖的主要作用是维持链霉菌生长时的渗透压。

＊甘氨酸被认为能干扰链霉菌细胞壁的形成，使菌丝体片段更短，利于溶菌，有利于外源DNA的导入。

《生物制药技术》实验指导-实验一

《生物制药技术》实验指导-实验一第一篇：《生物制药技术》实验指导-实验一《生物制药技术》实验指导实验一金霉素链霉菌培养基的制备（验证型）实验目的：1、学会培养基的配制2、掌握灭菌方法。

实验原理：金霉素链霉菌（Streptomyces aureofaciens）亦称“金色链霉菌”，放线菌门(Actinobacteria)，放线菌纲(Actinobacteria)，放线菌目(Actinomycetales)，链霉菌科(Streptomycetaceae)，链霉菌属(Streptomyces)。

在固体培养基上产生金色色素，故名。

其菌落为草帽型, 菌落直径一般为3～5毫米, 表面较平坦, 中间有隆起。

菌落开始为白色，长孢子后变青色。

在显微镜下可以看到短杆状的菌丝。

抗菌素工业上用以生产金霉素。

放线菌是一类介于细菌与真菌之间的单细胞微生物。

放线菌在土壤中分布最多，大多数生活在含水量较低、有机质丰富和微碱性的土壤中。

多数情况下，泥土中散发出的“泥腥味”就是由放线菌中链霉菌产生的土腥素造成的。

放线菌大都好氧，属于化能异养，菌丝纤细，分枝，常从一个中心向周围辐射生长。

因其生长具辐射状，故名放线菌。

放线菌能像真菌那样形成分枝菌丝，并在菌丝末端产生外生的分生孢子，有些种类甚至形成孢子囊，因而曾被误认是真菌。

但其菌落较小而致密，不易挑取。

不少菌种在医药、农业和工业上广泛应用，可产生抗菌素，现已发现和分离出的由放线菌产生的抗生素多达4 000多种，其中，有50多种抗生素已经广泛地得到应用，如链霉素、红霉素、土霉素、四环素、金霉素、卡那霉素、氯霉素等用于临床治疗人的多种疾病；有些可生产蛋白酶、葡萄糖异构酶；有的用于农业生产，如灭瘟素、井冈霉素、庆丰霉素等。

四环素类抗生素是由链霉菌生产或经半合成制取的一类广谱抗生素。

抗菌谱极广，包括革兰氏阳性和阴性菌、立克次体、衣原体、支原体和螺旋体。

品种主要包括金霉素、四环素和土霉素。

四环素早在1948年即开始用于临床，至今已有50余年历史。

霉菌试验工作流程修订原件2霉菌试验技术手册

1.2 试验菌种按照试验标准有关条款规定的菌种名称和菌号准备菌种（各行业标准要求试验菌种名称和菌号见表1、各种菌种受影响的材料见表2）。

1.3 菌种检查在菌种移植前，对试验用菌种进行纯度检查，如有不纯或变异的菌种应及时更换。

菌种留试验备用及菌种贮存。

2、制备培养基霉菌试验中常用的培养基有：查氏培养基（Ca）、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）。

菌种保存时查氏培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）应交替使用,防止菌种退化。

2.1 查氏培养基2.1.1主要成份硝酸钠（NANO3） 3.0g磷酸氢二钾（K2HPO4） 1.0g氯化钾（KCL） 0.5g硫酸镁（MgSO4•7H2O） 0.5g硫酸亚铁（FeSO4•7H2O） 0.01g蔗糖 30g琼脂（15～20）g蒸馏水 1000mlPH 6.8表1 各行业标准要求试验菌种名称和菌号注：菌种编号为中国科学院北京微生物研究所保藏的菌种编号表2 各菌种受影响的材料2.1.2 制备方法a) 材料和器皿⑴ DT100单盘天平，电炉子或电磁炉，石棉网，烧杯，1000ml的容器，漏斗，试管，玻璃棒等。

⑵其它F20APH计，牛角匙，洁净纱布、棉花等。

b) 方法和步骤⑴预先在容器内倒入半量的蒸馏水（500ml）；⑵用DT-100单盘天平称出各种成份（详见电子天平称的使用说明书）；⑶配制时除磷酸氢二钾以外，其余成份和蔗糖依次溶入蒸馏水中；⑷每加一种成份后应用玻璃棒充分搅拌，待完全溶解后再加第二种；⑸磷酸氢二钾另溶于200ml的蒸馏水中，然后加入上述的溶液中，最后加蒸馏水至规定体积，并加入琼脂；⑹将装有各种成份的烧杯放在石棉网上，用文火加热并用玻璃棒徐徐搅拌，使各种试剂完全溶解，放入蔗糖，溶化后加蒸馏水至1000ml；⑺初配好的查氏培养基是偏酸性的，故要氢氧化钠（NaOH）调PH；为避免过碱，应缓慢加入氢氧化钠（NaOH），边加边搅拌并不时地用F20APH 计测试或用PH试纸测得PH值为6.8；⑻过滤培养基可用2层纱布趁热过滤（适宜温度应为50℃左右）。

链霉菌操作手册

链霉菌室实验操作手册（2003 年）第一章培养基抗生素生长因子 (3)常用抗生素及其使用浓度 (3)LB （Luria-Bertani ）培养基 (3)LA (3)基本培养基（MM ） (3)R5（1L）链霉菌原生质体转化时用 (4)YEME（酵母膏-麦芽膏培养基）1L （液体培养链霉菌） (4)TSBY （1L）（液体培养链霉菌） (4)MS培养基 (5)2CMY 培养基（用于井岗的接合转移） (5)YMS培养基（阿维，井岗产孢） (5)YD培养基 (5)生长因子补充物的使用浓度 (6)第二章DNA 基本操作 (7)大肠杆菌质粒的抽提 (7)酶连反应 (7)DNA片段凝胶回收 (8)DNA纯化 (9)E.coil总DNA的提取 (9)链霉菌质粒DNA的小量提取（还需改进） (10)去磷酸化处理（详见分子克隆实验指南以及Takara的CIAP使用说明） (10)AT克隆（详见说明书） (10)Souther n Blot (11)第三章PCR及相关技术 (13)PCR (13)PCR重组（详见《PCR技术实验指南》p429重叠延伸技术） (14)PCR定点诱变（Dpnl法） (14)第四章基因片段转移技术 (15)大肠杆菌CaCl 2法制备感受态细胞及DNA转化 (15)DNA转化 (15)大肠杆菌质粒的快速检测 (15)接合转移（详见英文《手册》249页） (16)链霉菌原生质体的制备 (16)链霉菌原生质体的转化 (17)PCR-Targeting技术中E.coli电转化感受态的制备及电转化 (17)第五章RNA操作技术 (19)链霉菌总RNA的抽提 (19)链霉菌的RT-PCR （promega RT kit ） (19)第六章蛋白质基本操作技术 (21)SDS-PAGE，考马斯亮蓝染色 (21)大肠杆菌可溶性蛋白表达及抽提（用于由IPTG诱导的表达体系）： (21)链霉菌总蛋白扌由提： (22)大肠杆菌目标蛋白的诱导及总蛋白检测（含T7表达系统如BL21菌株中的pET系列表达体系）： (22)Western Blot (23)第七章遗传作图相关技术 (25)链霉菌孢子悬液的制备 (25)链霉菌中NF的证明 (25)孢子杂交 (25)在遗传图谱上两个标记基因之间定位新的基因 (25)第八章其他技术 (27)链霉菌菌种保藏 (27)检测链霉菌淀粉酶的活性 (27)第一章培养基抗生素生长因子常用抗生素及其使用浓度抗生素英文名称及缩写抗性基因贮藏液浓度（mg/ml）MM 使用终浓度（卩链霉菌g/ml）大肠杆菌LA 或LB 2CM YBME氨苄青霉素Ampicillin, Amp bla100R R R50-100氯霉素Chloramphenicol, Cml cat25（无水乙醇配）10——25潮霉素Hygromycin, Hyg hyg501025—50卡那霉素Kanamycin, Km aac 或aph252?50—50壮观霉素Spectinomycin, Spc aadA5050505050链霉素Streptomycin, Str str501025—25硫链丝菌素Thiostrepton, Thio tsr25(DMSO 配)510 2.5不敏感红霉素Erythomycin, Ery ermE100100——20阿泊拉霉素Apramycin, Am aac (3) IV5010505030-50 *-表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制*此表仅供参考！！！*R表示不敏感*Km和Am有交叉抗性，所以同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并作好对照。

实验十四链孢霉杂交和子囊孢子鉴定

实验十四链孢霉杂交和子囊孢子鉴定一、实验目的1．了解链孢霉的生活史和培养条件；2．学会链孢霉的杂交和着丝粒作图的方法；3．掌握各种基因转换的发生的原理。

二、实验准备（按每实验小组2人准备）1．仪器显微镜1台、冰箱1、培养箱1、干燥箱1、灭菌锅2．器械（均放在小磁盘内）镊子2、解剖针2、50ml烧杯1、100ml烧杯、250ml烧杯、500ml烧杯1、接种环2、吸管1、玻片架13．药品（4人一套）二甲苯（通用）[均分装在60ml滴瓶]、蒸馏水10L（通用）、生理盐水4．耗材载玻片4、盖玻片6、滤纸2、擦镜纸1本（通用）、手套、口罩、试管（20×200）500支、土豆、棉花、纱布、玉米粒（浸泡）5．材料链孢霉（常年培养、冰箱保存）三、实验原理1．lys+×lys – → 第一次分裂分离和第二次分裂分离2．着丝粒作图：四、实验步骤第一周：在完全培养基中和补充lys的培养基中分别接种lys+和lys–→28℃培养3d→ 在杂交培养基中，接种lys+×lys – →28℃培养2周第三周：取比较成熟的黑色子囊果→置放已放有1d生理盐水的干净玻片上→分散→加一新玻片→覆纸→ 带液加劲速压→ 两个玻片共同在显微镜下观察子囊孢子类型→计算重组型子囊类型所占的百分率→计算R（C-lys）→统计基因转换类型和所占频率五、作业1．填下表：子囊型类型子囊数+ + + + – – – –– – – – + + + ++ + – – + + – –– – + +– – + ++ + – – – – + +– – + + + + – –2．计算基因转换类型，并填下表基因转换子囊型子囊数百分率原因+ + + + + + – –+ + – – – – – –+ + + + + – – –– – – + + + + ++ + + – + – – –。

微生物学实验链霉菌的形态结构几种常见霉菌形态结构的观察PPT学习教案

(Penicillium)
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根酶
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毛霉属：无匍匐菌丝、假
根和囊托；犁头霉属和根霉属：有匍匐菌丝、假根和囊托；犁头霉属：孢囊梗不与假根相对，孢子囊梨形；
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曲霉
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Aspergillus
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青霉
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霉菌的形态观察方法
插片法玻璃纸法印片法试管直接观察法
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直接制片观察霉菌
在载玻片上加1d乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从菌落边缘处，挑取少量菌丝（或取很薄的一层切片），先于50%乙醇中浸一下，洗去脱落的孢子，再放在载玻片上的染液中，用解剖针将菌丝分开。盖第上26页盖/共30页玻片，置低倍镜下观察，必要时换高倍
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结果
绘图说明放线菌与霉菌自然生长状态的个体形态特征。
思考题
怎样才能在显微镜下观察到自然生长状态的放线菌与丝状真菌？
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下次实验
实验11. 平板菌落计数法实验12. 光电比浊计数实验13. 直接计数法(显微镜 )
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感谢您的观看！
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微生物学实验链霉菌的形态结构几种常见霉菌形态结构的观察
会计学
1
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菌落计数
(p208 页 )
1.单个菌落; 2.菌落数量; 3.分布状况.
10-5 358
352
363
10-6 35
33
38
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灰色链霉菌实验室培养流程

灰色链霉菌实验室培养流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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硫酸链霉菌实验报告

硫酸链霉菌实验报告本实验旨在进一步了解硫酸链霉菌的特征和生长条件，以及对其进行定量分析。

实验原理：硫酸链霉菌（Streptomyces griseus）是一种常见的土壤细菌，其菌丝呈灰色，能产生许多有用的代谢物，如链霉素和利福平等抗生素。

因此，研究硫酸链霉菌的生物学特性对于新药开发和环境治理具有重要的意义。

硫酸链霉菌的培养基包含了海藻粉、葡萄糖、维生素和无机盐等成分。

其中，葡萄糖是菌落生长所需的碳源，维生素是生物合成细胞壁和酶的辅助因子，无机盐则是提供菌落生长所需的微量元素。

实验步骤：1. 准备硫酸链霉菌的培养基，包括海藻粉、葡萄糖、维生素和无机盐等成分。

2. 将制备好的培养基倒入无菌琼脂平板中，并用无菌铁针制作菌落点。

3. 用无菌铁针将硫酸链霉菌菌落接种到琼脂平板上。

4. 置于恒温培养箱中，以适当的温度（通常为28C）进行培养。

5. 观察硫酸链霉菌的菌落生长情况。

实验结果：通过观察和记录，我们得到了以下实验结果：1. 硫酸链霉菌菌落呈灰色，具有一定的延展性，且呈珠状生长。

2. 在28C的恒温培养箱中，硫酸链霉菌的菌落开始在接种点周围扩散生长，并最终形成规则的圆形菌落。

3. 菌落的直径随着培养时间增加而逐渐增大，生长速度逐渐加快。

4. 菌落的颜色仍然保持灰色，没有明显变化。

实验讨论：根据实验结果，我们可以得出以下结论：1. 硫酸链霉菌的菌落生长适宜温度为28C，这是因为在这个温度下，菌落能够更快地进行代谢活动和生长。

2. 硫酸链霉菌在合适的培养基中能够迅速适应环境，并通过分泌抗生素等物质来抑制竞争菌的生长。

3. 菌落的颜色是硫酸链霉菌特有的特征之一，但与生长时间和环境因素无明显相关性。

4. 硫酸链霉菌在固体培养基中的生长方式是以菌丝为主，通过延伸和分枝来扩展菌落。

结论：通过本实验，我们进一步了解了硫酸链霉菌的特征和生长条件。

通过观察菌落的形态和生长规律，我们可以对菌落生长进行定量分析，并为进一步研究硫酸链霉菌的生物学特性提供参考依据。

1-1-4 实训链霉菌的鉴定技术

各种色调的蓝色
褐至黑各种色调的黄色多种多样
轮生一级或二级直形，波曲形，钩形或螺旋形
柱形，长圆形，卵圆形或球形，表面光滑，个别小短刺或长刺
（五）实训结果观察并绘制放线菌的孢子丝形态，并指明其着生方式。通过对每种链霉菌进行归类鉴定，实验中各个菌种各分属于哪个种群？（六）思考题用显微镜观察链霉菌的气生菌丝时，有哪些注意事项？
还可观察菌株的生长状况，如生长好坏，气生菌丝呈现的状态—绒状、粉状或棉絮状等作为参考特征。
2．形态特征观察气生菌丝、孢子丝及孢子的观察（1）将培养3～4天的链霉菌的培养皿打开，放在显微镜低倍镜下寻找菌落的边缘，直接观察气生菌丝和孢子丝的形态(分枝情况、卷曲情况等)。（2）取清洁的盖玻片一块，在菌落上面轻轻按压一下，然后将印有痕迹的一面朝下放在有一滴美蓝染液的载玻片上，将孢子等印浸在染液中，制成印片。用油镜观培养及形态特征，与下表进行对比，将每种链霉菌进行归类鉴定，各分属于哪个种群。
表放线菌不同种群的形态及培养特征
类群名称白孢类群黄色类群球孢类群
气生菌丝颜色
白色黄白或黄淡绿灰黄
基内菌丝颜色
各种颜色各种色调的黄色
可溶性色素有或无有或无有或无有或无
有或无在蛋白质培养基产生黑色素有或无，多数在蛋白质培养基产生黑色素有或无有或无有或无有或无有或无
淡紫灰类群
表面光滑
多数带刺或有发状物，个别种孢子表面光滑表面结构多种多样表面结构多种多样表面有的光滑，有的带刺表面结构多种多样
青色类群绿色类群蓝色类群灰褐类群金色类群轮生类群
（三）材料和用具链霉菌不同类群的纯培养物（培养物可在高氏一号合成培养基、察氏琼脂合成培养基、葡萄糖天门冬素琼脂等合成培养基上，接种培养10~14天左右。）

链霉菌RNA提取

5.5.10 转录谱的测定5.5.10.1 链霉菌总RNA的提取①液体培养基中生长的菌体经离心收集并用吸水纸洗干（固体培养时，应在培养基表面铺上玻璃纸，刮取生长在玻璃纸表面的菌体），迅速放入用液氮预冷的研钵中，研磨至粉末状；②取50-100 mg菌体放入预冷的无RNase污染的离心管中（15磅灭菌1小时），迅速加入1 ml Trizol试剂，用微量移液器吹匀并在振荡器上振荡2分钟，室温放置5分钟后12,000 g，4°C离心10 min；③将上清转移至一新的离心管中，加入200 μl氯仿，充分混匀，室温放3分钟后于12,000 g，4°C离心15 min；④将上清转移至一新的离心管中，再加入200 μl氯仿抽提一次，12,000 g，4°C离心10 min；⑤将上清转移至一新的离心管中，加入500 μl异丙醇，-20°C或-70°C沉淀30 min，12,000 g，4°C离心10 min；⑥弃上清，加入1 ml 70％乙醇洗两次，室温干燥后加入适当体积的DEPC处理过的H2O溶解，-70°C冻存，或用甲酰胺溶解RNA沉淀贮存于-20°C。

5.5.10.2 DNase处理RNA样品RNA样品用RQ-RNase free DNase（50 μl体系加1 μl 酶）处理1 h，加水至500 μl，酚、氯仿抽提后，加1/10体积的3 M醋酸钠（pH 5.0），2倍体积的无水乙醇沉淀，最后溶解于适量的水中。

PCR是否有DNA污染。

5.5.10.3 RNA浓度和纯度的检测①利用紫外分光光度计测定所提取RNA在260和280 nm的光吸收值，确定RNA的纯度和浓度。

纯净RNA样品的OD260/OD280比值应介于1.9和2.05之间，比值小于1.8表明蛋白污染，大于2.1可能是降解严重。

根据OD260为1相当于40 μg/ml RNA来计算浓度。

链霉菌总DNA提取

1. 链霉菌总DNA提取讲义1。

1 菌丝体用YEME、TSB、TSBY培养，蔗糖浓度：34% SCO, Slividans，分散菌丝体; 10 % 其他菌种，有的不适于在高糖条件下生长。

是否污染：闻气味；看清汤。

1。

2 DNA提取NaOH使线形DNA变性苯酚不能除去多糖，使上清不澄清，此时可用盐析法除多糖和蛋白质。

注意：菌丝体用量不能多。

SDS量：2%SDS与溶菌酶溶液等体积。

乙醇（2X）沉淀：特异性优于异丙醇，然而体积大。

-20︒C，1 hs, 或 4︒C，O/N，时间越长越好，可用于长距离携带。

异丙醇沉淀时间：=< 10 MIN,room temperature,不能置于 4︒C， -20︒CA 溶菌：菌丝体用量不能多！需溶菌酶，作用时间可长可短，溶菌完全即可，但不能O/N溶菌酶溶液用缓冲液配，高渗或等渗：原生质体同步裂解，在不需要时不裂解。

菌丝体培养基中加入甘氨酸，使肽聚糖骨架变松，对溶菌酶更敏感。

BCDEFGHIJSDS法2.9.1 链霉菌总DNA少量快速提取收集链霉菌菌丝体并用10.3%蔗糖洗涤1次，将100ul菌丝体在eppendorf离心管中用TE洗涤1次, 于菌体沉淀块中加入500ul溶菌酶溶液, 用自动移液器吸管头快速、强烈抽吸以悬浮和裂解细胞直到溶液变粘稠。

加入50ul 20% SDS,（或100ul 10% SDS）混匀, 37℃保温10分钟后, 加入0.5倍体积的中性苯酚/氯仿, 混匀后离心, 向上清液加入0.1倍体积NaAC(pH4.8)和等体积异丙醇, 颠倒混匀, 将白色絮状沉淀挑出到70%乙醇中洗涤, 离心, DNA沉淀块再分别用70%乙醇和无水乙醇洗涤后溶解在适量TE缓冲液中。

2.9.2 大片段链霉菌总DNA提取(用于构建基因文库)适量的菌丝体(50ml液体培养物), 溶于10ml含2mg/ml溶菌酶的LRTE溶液(2mg/ml溶菌酶, 25mM Tris-HCl pH8.0), 100mM EDTA (pH8.07, RNase 50ug/ml)中, 37℃溶菌至溶液清澈透亮。