红树林放线菌的筛选与抗真菌和抗肿瘤活性的测定

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红树林土壤稀有放线菌的分离及分类鉴定的开题报告

红树林土壤稀有放线菌的分离及分类鉴定的开题报告一、研究背景红树林是在盐水海岸岩石上生长的一种特殊植被，具有独特的环境条件和生物多样性。

其土壤含有大量的盐分、重金属和有机质，是一种充满挑战性的生态系统。

研究红树林土壤中的微生物群落及其特殊代谢产物，对于理解这种生态系统的生态学和生化学基础，以及寻找具有药用和农业价值的化合物具有重要意义。

而放线菌是一类广泛存在于土壤、水体和植物内的微生物，具有广泛的生物活性和药用潜力，被广泛应用于医学、农业和工业领域。

因此，本研究旨在从红树林土壤中分离稀有放线菌，并进行分类鉴定及生物学特性研究，为发现具有生物活性的化合物提供基础。

二、研究内容1、红树林土壤中稀有放线菌的分离利用不同的分离方法，如平板培养、土砂平板法、稀释平板法和筛选法等，从红树林土壤样品中分离得到不同类别的放线菌，如链霉菌、放线菌、细菌素菌等。

并采取生理生化和基因技术等方法确定其菌株的特征。

2、菌株生产代谢产物利用发酵法对分离得到的稀有放线菌进行培养，并利用液相层析技术等方法分离得到主要的次级代谢产物。

并采用质谱分析技术对代谢产物进行鉴定和结构表征。

3、放线菌群落结构及差异分析通过16S/18S/ITS rDNA的扩增和测序，对红树林土壤中的放线菌菌群落结构及组成进行深入分析，并比较不同生态系统的放线菌群落的差异。

三、研究意义和预期结果本研究可以有效地分离与红树林区域土壤中稀有的放线菌，利用生理生化和基因技术等方法对其种类进行分类鉴定，为进一步进行相关应用提供了基础。

同时，通过对红树林土壤中放线菌的群落结构和代谢物的分离与鉴定，可以更深入地了解红树林土壤的微生物群落结构和生化代谢规律，为生态系统的保护和管理提供科学依据。

预期结果包括分离到稀有的放线菌株，鉴定、筛选出具有生物活性的代谢产物，并对红树林土壤中放线菌的群落结构进行分析和比较。

四、研究方法和技术路线1、样品采集与处理：收集红树林区域的土壤样品，并进行过滤、稀释等处理。

红树林植物内生菌分离鉴定及其抑菌活性研究

红树林植物内生菌分离鉴定及其抑菌活性研究谢星朋１，戴悦１，彭金菊１，罗帅帅１，李杨１，马浩天１，刘志军１，张怡１，马驿１，２∗（１．广东海洋大学滨海农业学院动物医学系，广东湛江５２４０００；２．岭南现代农业科学与技术广东省试验室茂名分中心，广东茂名５２５０００）摘要㊀［目的］从红树林植物组织中分离出对动物病原菌具有广谱抑菌活性的植物内生菌㊂［方法］以铜绿假单胞菌㊁多杀性巴氏杆菌㊁产气肠杆菌㊁粪肠球菌４种常见的致病菌作为指示菌，采用Ｍ１０和Ｐ３培养基从红树林植物根㊁茎㊁叶组织中分离内生菌，以固体琼脂打孔法筛选具有抑菌活性的菌株，提取菌株的基因组ＤＮＡ，ＰＣＲ扩增１６ＳｒＤＮＡ基因并测序，通过邻接法构建系统发育树㊂［结果］从红树林植物组织中共分离８５７株可培养的内生菌，有１４５株菌有抑菌活性，占分离菌株的１６．６％㊂其中通过Ｍ１０培养基从红树林植物叶组织分离的菌株３２－５对铜绿假单胞菌㊁产气肠杆菌都具有最强抑菌活性，其抑菌圈直径分别为３８和４２ｍｍ；通过Ｐ３培养基从红树林植物茎组织分离的菌株１２－４对粪肠球菌具有最强抑菌活性，其抑菌圈直径为５６ｍｍ；通过Ｍ１０培养基从红树林植物茎组织分离的菌株１３－２对多杀性巴氏杆菌具有最强抑菌活性，其抑菌圈直径为６４ｍｍ㊂有抑菌活性菌株分为１０个属，其中芽孢杆菌属是优势菌属㊂［结论］该试验初步揭示红树植物根㊁茎㊁叶组织中植物内生菌的抑菌活性和多样性，为开发新型抗菌药物及应用提供理论依据㊂关键词㊀红树林；植物内生菌；分离；鉴定；抑菌活性；海洋细菌中图分类号㊀Ｑ９３９．９㊀㊀文献标识码㊀Ａ㊀㊀文章编号㊀０５１７－６６１１（２０２４）０４－０００１－１０ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０５１７－６６１１．２０２４．０４．００１㊀㊀㊀㊀㊀开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＡｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＥｎｄｏｐｈｙｔｉｃＢａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍＭａｎｇｒｏｖｅＰｌａｎｔｓＸＩＥＸｉｎｇ⁃ｐｅｎｇ，ＤＡＩＹｕｅ，ＰＥＮＧＪｉｎ⁃ｊｕｅｔａｌ㊀（ＤｅｐａｒｉｍｅｎｔｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｏａｓｔａｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＯ⁃ｃｅａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈａｎｊｉａｎｇ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ５２４０００）Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ｔｏｉｓｏｌａｔｅｐｌａｎｔｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓｗｉｔｈｂｒｏａｄ⁃ｓｐｅｃｔｒｕｍａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｓ．［Ｍｅｔｈｏｄ］Ｐｓｅｕｄｏ⁃ｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ，ＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓａｎｄＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｓｉｎｄｉｃａｔｏｒｂａｃｔｅｒｉａ．Ｍ１０ａｎｄＰ３ｓｏｌｉｄｍｅｄｉａｓａｎｄａｇａｒ⁃ｗｅｌｌｄｉｆｆｕｓｉｏｎｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｉｓｏｌａｔｅａｎｄｓｃｒｅｅｎｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｆｒｏｍｒｏｏｔ，ｓｔｅｍａｎｄｌｅａｆｔｉｓｓｕｅｓｏｆｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓ．ＥｘｔｒａｃｔｅｄＤＮＡｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｔｅｍｐｌａｔｅｆｏｒＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅ１６ＳｒＤＮＡｇｅｎｅａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｂｙｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃ｊｏｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄ．［Ｒｅｓｕｌｔ］Ａｔｏｔａｌｏｆ８５７ｃｕｌｔｕｒａｂｌｅｂａｃｔｅｒｉａｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｓａｎｄ１４５ｓｔｒａｉｎｓｈａｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃ⁃ｔｉｖｉｔｙ，ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｆｏｒ１６．６％ｏｆｔｈｅｉｓｏｌａｔｅｓ．Ｔｈｅｓｔｒａｉｎ３２⁃５，ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｌｅａｆｔｉｓｓｕｅｕｓｉｎｇＭ１０ｓｏｌｉｄｍｅｄｉｕｍ，ｈａｄｔｈｅｓｔｒｏｎｇｅｓｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａａｎｄＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ，ｗｉｔｈａｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｃｉｒｃｌｅｄｉａｍｅｔｅｒｏｆ３８ｍｍａｎｄ４２ｍｍ，ｒｅｓｐｅｃ⁃ｔｉｖｅｌｙ．Ｓｔｒａｉｎ１２⁃４ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｔｅｍｔｉｓｓｕｅｕｓｉｎｇＰ３ｓｏｌｉｄｍｅｄｉｕｍｓｈｏｗｅｄｔｈｅｓｔｒｏｎｇｅｓｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓｗｉｔｈａｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｃｉｒｃｌｅｄｉａｍｅｔｅｒｏｆ５６ｍｍ．Ｓｔｒａｉｎｓ１３⁃２ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｔｅｍｔｉｓｓｕｅｓｕｓｉｎｇＭ１０ｍｅｄｉｕｍｓｈｏｗｅｄｔｈｅｓｔｒｏｎ⁃ｇｅｓｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔＰａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａｗｉｔｈａｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｃｉｒｃｌｅｄｉａｍｅｔｅｒｏｆ６４ｍｍ．Ｂａｃｔｅｒｉａｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｗｅｒｅｃｌａｓｓｉ⁃ｆｉｅｄｉｎｔｏ１０ｇｅｎｕｓ，ｏｆｗｈｉｃｈＢａｃｉｌｌｕｓｗａｓｔｈｅｄｏｍｉｎａｎｔｇｅｎｕｓ．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］Ｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｉｎｉｔｉａｌｌｙｒｅｖｅａｌｅｄｔｈｅａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｄｉ⁃ｖｅｒｓｉｔｙｏｆｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｉｎｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｒｏｏｔｓ，ｓｔｅｍｓａｎｄｌｅａｆｔｉｓｓｕｅｓ，ｐｒｏｖｉｄｉｎｇａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｎｅｗａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｄｒｕｇｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀Ｍａｎｇｒｏｖｅ；Ｐｌａｎｔｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ；Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ；Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ；Ｍａｒｉｎｅｂａｃｔｅｒｉａ基金项目㊀广东省自然科学基金项目（２０２３Ａ１５１５０１２１８１）；湛江市科技局科技专项资金竞争性分配项目（２０２１Ａ０５２３１）；茂名实验室科研启动项目（２０２１ＴＤＱＤ００２）㊂作者简介㊀谢星朋（１９９９），男，江西吉安人，硕士研究生，研究方向：兽医药理学与毒理学㊂∗通信作者，教授，博士，硕士生导㊀㊀红树林是一种处在热带和亚热带交界地带的木本植物群落，是海洋与陆地两大生态系统的过渡区域，其独特的地理环境导致其中的微生物及其产物具有特殊性，红树植物内生菌复杂多样的代谢产物可成为重要的抗菌活性物质来源㊂目前，从红树林植物如木榄㊁秋茄㊁红海榄和海桑等宿主植物中均发现抗菌化合物［１－２］㊂随着陆地来源的药物研发难度不断加大，以蓝色海洋药库为资源库研制新药物已成为当今医药研究的重要方向㊂海洋微生物天然产物的研究最早是从海洋真菌开始的，海洋细菌天然产物的研究相对较晚㊂植物内生菌主要是指定殖于植物组织器官以及细胞间隙中的内生细菌［３］㊂研究显示，植物内生菌其特殊的代谢途径使其次级代谢产物可以产生大量结构新颖㊁抑菌效果较好的生物活性物质，成为开发新型抗微生物药物的良好资源［４－５］㊂该试验从广东湛江红树林自然保护区采取红树植物根㊁茎㊁叶样品，分离对动物病原菌有抑菌活性的内生菌，对其进行分子鉴定和系统发育分析，为开发新型抗菌药物及其在动物疫病防治领域的应用提供理论依据㊂１㊀材料与方法１．１㊀试验材料１．１．１㊀培养基㊂Ｍ１０培养基：可溶性淀粉１０．０ｇ，水解酪素０．５ｇ，复合盐母液１０ｍＬ，琼脂１４．０ｇ，去离子水１０００ｍＬ，ｐＨ７．２７．４，复合盐母液溶解㊂Ｐ３培养基：燕麦粉２０．０ｇ，复合盐母液１０ｍＬ，琼脂１４．０ｇ，去离子水１０００ｍＬ，ｐＨ７．２７．４，复合盐母液溶解㊂复合盐母液：ＫＮＯ３１．０００ｇ，Ｋ２ＨＰＯ４０．５００ｇ，ＮＨ４ＮＯ３０．１００ｇ，ＭｇＳＯ４㊃７Ｈ２Ｏ０．５００ｇ，ＮａＣｌ０．５００ｇ，ＦｅＳＯ４０．０１０ｇ，ＭｎＣｌ２㊃Ｈ２Ｏ０．００１ｇ，ＺｎＳＯ４㊃７Ｈ２Ｏ０．００１ｇ，去离子水１０ｍＬ㊂ＬＢ液体培养基㊁ＬＢ固体培养基购自北京酷来博科技有限公司㊂１．１．２㊀指示菌㊂多杀性巴氏杆菌（批号ＣＶＣＣ３９３）㊁产气肠杆菌（批号ＡＴＣＣ１３０４８）㊁粪肠球菌（批号ＡＴＣＣ２９２１２）㊁铜绿安徽农业科学，Ｊ．ＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃ．Ｓｃｉ．２０２４，５２（４）：１－１０㊀㊀㊀１．２㊀试验方法１．２．１㊀样本采集㊂从广东湛江红树林自然保护区采集红树植物根㊁茎㊁叶各５０份，装于密封袋，室温保存㊂１．２．２㊀样本的分组和处理㊂将采集的红树植物组织根㊁茎㊁叶样品各５０份随机排序标记㊂将样本植物清洗干净，依次用５％次氯酸钠㊁７５％乙醇浸泡３ｍｉｎ，在消毒液浸泡后用无菌水冲洗多次㊂消毒完成后晾干，采用电动匀浆器将植物组织充分研磨，加入无菌水制成组织原液㊂１．２．３㊀菌株培养与分离㊂吸取植物组织原液０．１ｍＬ均匀涂布到Ｍ１０㊁Ｐ３培养基上，２８ħ培养７２１ｄ，挑选单菌落，进一步纯化分离后的菌株－８０ħ保存㊂１．２．４㊀有抑菌活性菌株的筛选㊂采用固体琼脂打孔法筛选红树植物根㊁茎㊁叶组织中有抑菌活性的菌株，将大肠杆菌㊁金黄色葡萄球菌㊁沙门氏菌㊁链球菌４种指示菌分别加入ＬＢ固体培养基，用无菌打孔器打孔，将分离菌株培养过夜并用ＬＢ液体培养基稀释至１０５ＣＦＵ／ｍＬ，接种至孔中，２８ħ培养２４ｈ，测量抑菌圈直径㊂１．２．５㊀１６ＳｒＤＮＡ测序和系统发育树分析㊂对筛选的有抑菌活性的菌株采用试剂盒提取细菌基因组ＤＮＡ，进行１６ＳｒＤ⁃ＮＡ序列ＰＣＲ扩增㊂扩增的引物设计如下：上游引物２７Ｆ（５ᶄ－ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ－３ᶄ），下游引物１４９２Ｒ（５ᶄ－ＣＴＡＣＧＧＣＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡ－３ᶄ）㊂ＰＣＲ扩增条件：９４ħ预变性５ｍｉｎ；９４ħ变性３０ｓ，５７ħ退火３０ｓ，７２ħ延伸４５ｓ，３０次循环；最后７２ħ延伸１０ｍｉｎ㊂扩增产物经１％琼脂糖凝胶电泳检测，委托上海生工生物工程股份有限公司进行测序分析㊂序列经ＢｉｏＥｄｉｔＳｅｑｕｅｎｃｅＡｌｉｇｎｍｅｎｔＥｄｉｔｏｒ软件整理后，利用ＥｚＢｉｏＣｌｏｕｄ数据库（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｅｚｂｉｏｃｌｏｕｄ．ｎｅｔ／）进行在线比对；选取同源性最高菌株的序列作为参比对象，运用ＭＥＧＡ１０．０软件，采用Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ法构建系统发育树，Ｂｏｏｓｔｒａｐ１０００次检测各分支的置信值，对各菌株的系统发育地位进行分析㊂２㊀结果与分析２．１㊀分离菌株的抑菌效果㊀从红树植物根㊁茎㊁叶组织中分离出内生菌共８５７株，其中根２２７株，茎３１０株，叶３２０株㊂Ｍ１０培养基共分离出具有抑菌活性菌株９５株，从红树林植物根分离出具有抑菌活性菌株２２株，如表１所示，菌株４５－４对铜绿假单胞菌抑菌活性最强，菌株２９－１对产气肠杆菌抑菌活性最强，菌株１４－１对粪肠球菌和多杀性巴氏杆菌均表现出最强抑菌活性且呈现广谱抑菌效果；从红树林植物茎分离出具有抑菌活性菌株３８株，如表２所示，菌株１３－２对铜绿假单胞菌㊁粪肠球菌和多杀性巴氏杆菌均表现出最强抑菌活性且呈现广谱抑菌效果，菌株２１－４对产气肠杆菌抑菌活性最强且具有广谱抑菌效果；从红树林植物叶分离出具有抑菌活性菌株３５株，如表３所示，菌株３２－５对铜绿假单胞菌和产气肠杆菌均表现出最强抑菌活性且具有广谱抑菌效果；菌株３－３对粪肠球菌具有最强的抑菌活性；菌株３１－５对多杀性巴氏杆菌具有最强抑菌活性和广谱抑菌效果㊂Ｐ３培养基分离有抑菌活性细菌共４７株，从红树林植物根分离出具有抑菌活性菌株３０株，如表４所示，其中菌株７－３对铜绿假单胞菌抑菌活性最强，菌株１１－１对粪肠球菌抑菌活性最强且具有广谱抑菌效果，菌株２６－１对产气肠杆菌抑菌活性最强且具有广谱抑菌效果，菌株７－２对多杀性巴氏杆菌抑菌活性最强；从红树林植物茎分离出具有抑菌活性菌株７株，如表５所示，其中菌株１２－４对铜绿假单胞菌㊁粪肠球菌㊁多杀性巴氏杆菌抑菌活性均最强且具有广谱抑菌效果，菌株１４－４对产气肠杆菌抑菌活性最强；从红树林植物叶分离出具有抑菌性菌株１０株，如表６所示，其中菌株１４－１对铜绿假单胞菌抑菌活性最强，菌株３１－４对粪肠球菌和产气肠杆菌抑菌活性均最强，菌株４２－４对多杀性巴氏杆菌抑菌活性最强㊂表１㊀Ｍ１０培养基从红树林植物根分离出具有抑菌活性的菌株Ｔａｂｌｅ１㊀ＳｔｒａｉｎｓｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｒｏｏｔｓｕｓｉｎｇＭ１０ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ单位：ｍｍ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ４－４１１２０－３１７１２１２－３１３４４－１１３２８－２１２２－２１４１４－１１０２８１２１８２０－２１６４４－２１７２８－１１４４５－４１３４５－２１４４１－３１１２９－４１２４０－６１２１３－５１２４１－６９３１－４１２３６－１１１４６－１９４１－５１２２９－１１３㊀注：表示无抑菌圈或不明显㊂２㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２４年表２㊀Ｍ１０培养基从红树林植物茎分离出具有抑菌活性的菌株Ｔａｂｌｅ２㊀ＳｔｒａｉｎｓｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｔｅｍｕｓｉｎｇＭ１０ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ单位：ｍｍ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ４４－１２１１２１８－６１５２１２３－２２１２０４０－１１９１８１９４７－１１６１４３２２２－４２０１６１３－２２７４０２０６４４８－１－２１１２０４９－１－２１２１４１４１３－１１８２０１２－１１３１４２５２１－４１３１６２４２８１６－１１６２８－２１９２０－７２０１２１８２６１８－３１８４９－１－１２０１６１８３０２２－７１９２２－１１８１８１３－７１８２５１２－２３６１８－４１８４７－２１５１２２３１５１０－１２３２１－２１９２０１１３０－６３０１８２８５－４１５２０５－２１２１７４７－３１４１９９４５－５１１３５－３１０１３５－３１３４８－３１２７－１１０４８－６１０４８－５１０３９－１１２３９－３１１㊀注：表示无抑菌圈或不明显㊂㊀Ｎｏｔｅ：－ｉｎｄｉｃａｔｅｓｎｏａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｚｏｎｅｏｒｉｎｃｏｎｓｐｉｃｕｏｕｓ．表３㊀Ｍ１０培养基从红树林植物叶分离出具有抑菌活性的菌株Ｔａｂｌｅ３㊀ＳｔｒａｉｎｓｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｌｅａｆｕｓｉｎｇＭ１０ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ单位：ｍｍ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ３２－１１２１４１４１５５－２３２５０３６３４１５－１１２９－５２０１６１２１－１１０３－３２０６０３８２７－３３７２０４４－３２４２３－１２０１６３０－２１８３０－３１３３３－２２６３８２３３１－３１７１６１９４１－２３４６－２１２１６１３１３３０－４２０３６－３１３１７１７２２４６－７３２３６４２１４１３－５２０２２１６２５３４－３１２２６１２１２－３１３１６１３１８－４１２２２１２３２２６－５１５１６４７－２１７２９１６１５３２－５３８２６４２３２４８－１１７１０２９－３１４１４１６２０－２２８２１２３３１－５１６２０３０３８４０－３２０１８３３－５１４１６１０－５１２１０４９－３１４１２４７－３１６２３１５１６２０－３１８２０１４９㊀注：表示无抑菌圈或不明显㊂－３５２卷４期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀谢星朋等㊀红树林植物内生菌分离鉴定及其抑菌活性研究表４㊀Ｐ３培养基从红树林植物根分离出具有抑菌活性的菌株Ｔａｂｌｅ４㊀ＳｔｒａｉｎｓｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｒｏｏｔｓｕｓｉｎｇＰ３ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ单位：ｍｍ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ２８－２１１２０－３１１３５－３１０３８－１１４１１１１１４４８－２１１１８－１１３４７－２１１１９－３１１１５１２１０４３－３１１１９１１１４３５－４１１２４－１１０１５１５４０－２１４３６－１１２１９１１１４７－２１２３８４０１９１５－３１８１５１６１６４１－４１２２８３０１４－１１５２１１４１５１１－１１６４３３７１４３３－１１５４８－３１５２０３７１６５－１２６３４－１１３２２１７８－３１９１６１８１５－２１０２２３７８－１２１２８１８４５－１１５２４３５１３８－４１８２６－１１３３０４２１０１９－２１０７－３２４１９㊀注：表示无抑菌圈或不明显㊂㊀Ｎｏｔｅ：－ｉｎｄｉｃａｔｅｓｎｏａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｚｏｎｅｏｒｉｎｃｏｎｓｐｉｃｕｏｕｓ．表５㊀Ｐ３培养基从红树林植物茎分离出具有抑菌活性的菌株Ｔａｂｌｅ５㊀ＳｔｒａｉｎｓｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｔｅｍｕｓｉｎｇＰ３ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ单位：ｍｍ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ１２－４３１５６３１２９１６－１１８４０１６２２１４－４２０３６１５－２１６１６４５－２１９２９２３－２３０２０１９２０３９－３１４㊀注：表示无抑菌圈或不明显㊂㊀Ｎｏｔｅ：－ｉｎｄｉｃａｔｅｓｎｏａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｚｏｎｅｏｒｉｎｃｏｎｓｐｉｃｕｏｕｓ．表６㊀Ｐ３培养基从红树林植物叶分离出具有抑菌活性的菌株Ｔａｂｌｅ６㊀ＳｔｒａｉｎｓｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｌｅａｆｕｓｉｎｇＰ３ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ单位：ｍｍ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ３１－４１３２４２０３３－２１６１４９１４１４－１２０１０４８－１２５４２－４３０３４－１２５８－１２７２９－２１５１３－１１５１３１３－２１５１３２．２㊀有抑菌活性菌株的基因测序和系统发育分析㊀分别对２种培养基分离筛选出的有抑菌活性的菌株构建Ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃Ｊｏｉｎｉｎｇ系统发育树，如图１６所示㊂Ｍ１０培养基从红树林植物根分离的菌株主要分为４个属，分别为变形杆菌属㊁肠球菌属㊁葡萄球菌属㊁芽孢杆菌属；从红树林植物茎分离的菌株主要为８个属，分别为芽孢杆菌属㊁肠球菌属㊁葡萄球菌属㊁草螺菌属㊁黄单胞菌属㊁不动杆菌属㊁肠杆菌属㊁分散泛菌属；从红树林植物叶分离的菌株主要为４个属，分别为分散泛菌属㊁黄单胞菌属㊁芽孢杆菌属㊁葡萄球菌属㊂Ｐ３培养基从红树林植物根分离的菌株主要分为６个属，分别为芽孢杆菌属㊁黄单胞菌属㊁肠球菌属㊁肠杆菌属㊁埃希氏菌属㊁分散泛菌属；从红树林植物茎分离的菌株主要为４个属，分别为芽孢杆菌属㊁肠球菌属㊁变形杆菌属㊁黄单胞菌属；从红树林植物叶分离的菌株主要为２个属，分别为芽孢杆菌属㊁葡萄球菌属㊂其中芽孢杆菌属为优势菌属，占分离菌株总数的４８．６％㊂３㊀讨论与结论海洋环境具有高压㊁高盐㊁无光照等特殊性，海洋微生物在海洋生态独特环境下会产生独特的代谢产物，而这些特殊代谢产物作为新型抑菌物质在生物医药具有巨大的研究意义，目前已经有针对海洋微生物及其次级代谢产物研究［６］㊂许多研究显示海洋微生物中的优势菌属芽孢杆菌属，可以产生具有抗菌作用的抑菌活性物质［７］，如罗曼等［８］从南极海洋沉积物中分离纯化出草芽孢杆菌斯氏亚种对层生镰刀菌具有较强抑菌活性，Ｚｈｏｕ等［９］从南大西洋的深海沉积物中分离筛选得到一株能抑制曲霉突变株菌丝生长的环状芽孢杆菌㊂红树林是一种处在热带和亚热带交界地带的木本植物群落，是海洋与陆地两大生态系统的过渡区域，其独特的４㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２４年图１㊀Ｍ１０培养基分离的红树植物根有抑菌活性菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因序列Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ系统发育树Ｆｉｇ．１㊀Ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃Ｊｏｉｎｉｎｇｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｒｏｏｔｓｏｆｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｉｎＭ１０ｍｅｄｉｕｍ树林植物如木榄㊁秋茄㊁红海榄和海桑等宿主植物中均发现抗菌化合物［１－２］㊂根据戴悦等［１０］对红树林植物根际土壤细菌分离鉴定及其抑菌活性研究显示芽孢杆菌和肠杆菌为优势菌属，从红树林植物根际提取的内生菌具有产生活性物质的潜力㊂该试验从广东湛江红树林自然保护区采集的植物（９５株）比Ｐ３培养基（４７株）更多㊂戴悦等［１０］从红树林植物根际土壤中分离得到１０８株具有抑菌活性的菌株，占分离菌株的１６．５％，且Ｐ３培养基比Ｍ１０培养基在分离具有抑菌性菌株中更具有优势㊂李静等［１１］从海南东寨港红树林植物内生菌中共分离得到１４６株放线菌，其中４０株具有抗菌活性，５５２卷４期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀谢星朋等㊀红树林植物内生菌分离鉴定及其抑菌活性研究图２㊀Ｍ１０培养基分离的红树植物茎有抑菌活性菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因序列Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ系统发育树Ｆｉｇ．２㊀Ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃Ｊｏｉｎｉｎｇｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｓｔｅｍｏｆｍａｎｇｒｏｖｅ６㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２４年图３㊀Ｍ１０培养基分离的红树植物叶有抑菌活性菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因序列Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ系统发育树Ｆｉｇ．３㊀Ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃Ｊｏｉｎｉｎｇｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｌｅａｖｅｓｏｆｍａｎｇｒｏｖｅ７５２卷４期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀谢星朋等㊀红树林植物内生菌分离鉴定及其抑菌活性研究图４㊀Ｐ３培养基分离的红树植物根有抑菌活性菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因序列Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ系统发育树Ｆｉｇ．４㊀Ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃Ｊｏｉｎｉｎｇｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｒｏｏｔｓｏｆｍａｎｇｒｏｖｅ８㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２４年图５㊀Ｐ３培养基分离的红树植物茎有抑菌活性菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因序列Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ系统发育树Ｆｉｇ．５㊀Ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃Ｊｏｉｎｉｎｇｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｓｔｅｍｏｆｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｉｎＰ３ｍｅｄｉｕｍ中提取的内生菌产生抑菌活性物质研究具有巨大的潜力㊂通过分子鉴定和系统发育树分析，在属水平上，有抑菌活性菌株共１０个属，分别是芽孢杆菌属㊁肠球菌属㊁葡萄球菌属㊁草螺菌属㊁黄单胞菌属㊁不动杆菌属㊁肠杆菌属㊁分散泛菌属㊁埃希氏菌属㊁变形杆菌属，其中芽孢杆菌属为优势菌属，占分离菌株总数的４８．６％，在Ｍ１０和Ｐ３培养基中，Ｍ１０培养基在叶部提取分离芽孢杆菌属菌株数量最多，在根部提取芽孢杆菌属菌株数量最少，Ｐ３培养基在根部提取分离出菌，其中芽孢杆菌为优势菌属㊂张雅慧等［１３］从山口红树林根际土壤中获得１１７株细菌，其中芽孢杆菌为优势属，占所有菌株的２８．２０％㊂Ｖａｒｇｈｅｓｅ等［１４］研究表明海洋大型藻类相关异养细菌芽孢杆菌属细菌萎缩芽孢杆菌具有较好的抗菌活性，其中萎缩芽孢杆菌ＳＨＢ２０９７（ＭＷ８２１４８２）对临床上重要的病原体表现出显著的抗菌活性㊂这与该试验结果一致，优势菌属皆为芽孢杆菌属㊂以上数据表明湛江红树林植物各组织内生菌具有产生９５２卷４期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀谢星朋等㊀红树林植物内生菌分离鉴定及其抑菌活性研究图６㊀Ｐ３培养基分离的红树植物叶有抑菌活性菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因序列Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ系统发育树Ｆｉｇ．６㊀Ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃Ｊｏｉｎｉｎｇｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｌｅａｖｅｓｏｆｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｉｎＰ３ｍｅｄｉｕｍ参考文献［１］徐志勇，冯昭，徐静．红树林微生物抗菌活性成分研究进展［Ｊ］．中国抗生素杂志，２０１７，４２（４）：２４１－２５４．［２］闫璧滢，陈渝川，雷丽娟，等．海南东寨港红树林植物和沉积物真菌多样性及其药用活性［Ｊ］．中国抗生素杂志，２０２３，４８（２）：１５８－１７１．［３］方珍娟，张晓霞，马立安．植物内生菌研究进展［Ｊ］．长江大学学报（自科版），２０１８，１５（１０）：４１－４５．［４］ＥＬ⁃ＳＡＹＥＤＭＯＵＲＡＤＭＨ．ＮｅｗｂｉｏａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓｆｒｏｍＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍａｌ⁃ｂｏａｔｒｕｍａｎｄＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｌｅｐｔｏｂａｃｔｒｕｍ［Ｊ］．Ａｕｓｔｒａｌｉａｎｊｏｕｒｎａｌｏｆｂａｓｉｃ＆ａｐ⁃ｐｌｉｅｄｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１０，４（８）：２１６６－２１７５．［５］ＪＯＵＤＡＪＢ，ＭＡＷＡＢＯＩＫ，ＮＯＴＥＤＪＩＡ，ｅｔａｌ．Ａｎｔｉ⁃ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅｓｆｒｏｍＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｓｐ．ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＧａｒｃｉｎｉａｎｏｂｉｌｉｓａｇａｉｎｓｔＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｍｅｇｍａｔｉｓ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｊｏｕｒｎａｌｏｆｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉ⁃ｏｌｏｇｙ，２０１６，５（２）：１９２－１９６．［６］李贺，林学政，何培青，等．南极抗细菌活性菌株的筛选及系统发育分析－ａｕｒｅｕｓａｎｄｉｎｖｉｖｏｅｖａｌｕａｔｉｏｎｕｓｉｎｇｅｍｂｒｙｏｎｉｃｚｅｂｒａｆｉｓｈｔｅｓｔｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｉｎ⁃ｄｉａｎｊｏｕｒｎａｌｏｆｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１６，７８（３）：４１７－４２２．［８］罗曼，万婧倞，黄仕新，等．南极沉积物来源抗菌细菌的筛选及抑菌物质的鉴定［Ｊ］．微生物学通报，２０２０，４７（６）：１７８７－１７９４．［９］ＺＨＯＵＹ，ＷＡＮＧＪＹ，ＧＡＯＸＪ，ｅｔａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆａｎｏｖｅｌｄｅｅｐ⁃ｓｅａＢａｃｉｌ⁃ｌｕｓｃｉｒｃｕｌｕｓｓｔｒａｉｎａｎｄｕｎｉｆｏｒｍｄｅｓｉｇｎｆｏｒｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｉｔｓａｎｔｉ⁃ａｆｌａｔｏｘｉ⁃ｇｅｎｉｃｂｉｏａｃｔｉｖｅｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ，２０１９，１０（１）：１３－２２．［１０］戴悦，张汝军，张腾月，等．红树林植物根际土壤细菌分离鉴定及其抑菌活性的研究［Ｊ］．黑龙江畜牧兽医，２０２３（３）：７３－７８．［１１］李静，戴素娟，庹利，等．海南东寨港真红树植物内生放线菌多样性及其抗菌活性［Ｊ］．微生物学通报，２０１６，４３（８）：１７５３－１７６５．［１２］李蜜，候师师，银江林，等．北部湾徐闻海域红树内生细菌物种多样性及其杀线虫活性研究［Ｊ］．广西植物，２０２０，４０（３）：３０１－３１０．［１３］赵雅慧，张舒琳，吴家法，等．山口红树林根际土壤可培养细菌多样性及其活性筛选［Ｊ］．海洋学报，２０１８，４０（８）：１３８－１５１．０１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２４年。

海南三亚红树林放线菌多样性及抗菌活性

海南三亚红树林放线菌多样性及抗菌活性冯玲玲杨芹张露崔艳阳孙青青谢则平郭琳* 张淑敏*【摘要】摘要：目的研究海南三亚红树林底泥样品中放线菌的多样性及抗菌活性，以期发现可以产生新颖活性物质的药用放线菌资源。

方法采用11种分离培养基以稀释涂布法对样品中的放线菌进行选择性分离；对分离菌株的16S rRNA基因序列进行扩增、比对，开展多样性分析；放线菌发酵液经乙酸乙酯萃取，采用纸片法对粗提物进行抗菌活性筛选；同时对放线菌的生物合成基因NRPS、PKS I和PKS II进行筛选。

结果共分离到149株放线菌，它们分布于6个目12个科16个属，其中小单孢菌属为优势菌属；菌株MG16072的16S rRNA基因序列与最近有效菌株Actinomadura hallensis H647-1T的相似率为97.94%，为潜在Actinomadura属新种；抗菌活性检测结果显示，有20株放线菌至少对1株检定菌具有抗菌活性；NRPS、PKS I、PKS II基因筛选结果显示，有82株放线菌至少含有1种生物合成基因。

结论海南三亚红树林含有丰富的药用放线菌资源，具有从中发现新颖活性物质的潜力。

【期刊名称】中国抗生素杂志【年(卷),期】2018(043)011【总页数】9【关键词】红树林；放线菌；多样性；抗菌活性微生物药物筛选中国分类号：R9基金项目：国家自然科学基金(No.81503040)；山东省自然科学基金(No.ZR2014HM034)红树林生态系统一般位于热带和亚热带的海陆交界处，是海洋、淡水和陆地各种动植物的栖息地[1]。

世界红树林主要分布在美洲、非洲和东南亚的热带以及亚热带地区，以印度尼西亚和巴西面积最大，覆盖60%～70%的世界海岸[2]。

我国红树林主要分布在海南、广东、广西，约占全国红树林总面积的95%[3]。

红树林具有高湿度、高盐度和缺氧的特点[4]，它孕育了丰富多样的微生物资源，并且能够产生多种具有生物活性的天然产物[5-8] 。

红树林放线菌的筛选与抗真菌和抗肿瘤活性的测定

ａｄ２ｗａｅａｐｌｓｃｌｃｅｒｍａｇｒｅｆｒｓｎＦｕｔａｎｔｒｓｍｅｏｌｅｔｄｆｏａｍｎｏｖｏｅｔｉｉｎ，ｓｕｈｏｈｅｚｅｏｔｆＳｎｈｎ，Ｃｈｉｎａ，ｏｆ
ＡｂｔａｔＴｈｅｔｖｈｉｔｄｙｉｏｉｏａｅｍａｒｅｆｒｓｒｖｅｃｉｏｙｅｔａｎｏｓｒｃ：ｅｏｂｃｉｅｏｆｔｓｓｕｓｔｓｌｔｎｇｏｖｏｅｔｄｅｉｄａｔｎｍｃｓｓｒｉｓｆｒ
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ｗｅｅｓｒｐｏｃｔｃａ．Ｎｉｔｏｇｎｓｗｅｅｕｅｏｔｓｈｅａｔｆｎｌａｔｖｔｒｔｅｔｍｙｅａｅｅｎｅｐａｈｅｒｓｄｔｅｔｔｎｉｕｇａｃｉｉｙｏｆ
关键词：红树林；线菌；真菌活性；肿瘤活性放抗抗
中图分类号：７．Ｒ９９１
文献标识码：Ａ
ＴｈｔｆｎａｎｄＡｎｉｕｏｔｖｔｅｆｔｅＩｏａｅａｒｖｅＡｎｉｕｇｌａｔｔｍｒＡｃｉｉｉｓｏｈｓｌｔｄＭｎｇｏｅＦｏｅｔＡｃｉｏｙｅｅｒｓｔｎｍｃｔｓ
第２９卷第１期
食品与生物技术学报
ＪｕｎｌｏｏｃｅｃｎｄＢｉｔｃｎｌｇｏｒａｆＦｏｄＳｉｎｅａｏｅｈｏｏｙ
Ｖｏ１２９Ｎｏ．．１
２１Ｏ０年１月

广西北部湾红树林土壤放线菌的筛选和抗菌活性研究

红树林根部土样，分离得到３株土壤放线菌，编号为ＢＬＨＫ０３３、２方法ＢＬＨＫ０４３、ＢＬＨＫ０９８，对其发酵液进行抗菌活性试验，对多种病原２．１放线菌的分离称取红树林根部土壤５ｇ，放入４５ｍｌ无菌菌具有较强的抑制作用。在确定其具有广谱抗菌活性后，又进行水的三角瓶中，振荡１０ｍｉｎ，即为稀释１Ｏ的土壤悬液。另取装初步的分类鉴定研究。现报告如下。有９ｍｌ无菌水试管４支，用记号笔标记１０～、１０～、１０～、１０～。用无菌吸管吸取稀释成１Ｏ土壤悬液１ｍｌ，加入１０的无菌水１．１供试菌株２０１０年７月至２０１０年１２月，标本采集于广西北的试管中，吹吸数次使之充分混匀，即成１０Ｉ２土壤稀释液。同法部湾北仑河口国家级自然保护区珍珠湾管理站、钦州港矛尾海红依次连续稀释至１Ｏ一、１０一、１Ｏ土壤稀释液。分别吸取土壤稀树林保护区和钦州湾７２径三地海岸红树林根部１０ｃｍ土壤海释液１ｍｌ放入无菌培养皿，再取已熔化保温５０ ℃ 左右的高氏１泥，共采集海泥标本６５份，采用稀释分离法、用高氏１号培养基号琼脂培养基１５ｍｌ，分别倒入培养皿中，凝固后倒置于２８ ℃恒
摘要：目的采用平板稀释法对红树林土壤放线茵进行筛选、分离和鉴定，并对其抑茵活性进行初步研究。方法采用纸
碟法、管碟法试验、稻瘟霉（Ｐ．ｏｒｙｚａｅ）模型筛选具有抗茵活性菌株，并通过提取其基因组ＤＮＡ，ＰＣＲ１６ＳｒＲＮＡ保守序列，对其进行初步分类鉴定。结果分离得到３６８株放线菌，其中３株都具有较好的抗菌、抗稻瘟霉活性，初步鉴定

红树林内生真菌抗细菌和抗真菌活性的初步研究

红树林内生真菌抗细菌和抗真菌活性的初步研究（作者： _________ 单位： ___________ 邮编：___________ ）【摘要】目的分离和筛选具有抗细菌和抗真菌活性的红树林内生真菌。

方法从红树林植物桐花树、海漆、秋茄、木榄、白骨壤、银叶树中分离到60株内生真菌，对其代谢产物进行抗菌检测，通过滤纸片法来检测内生真菌代谢产物抗细菌和抗真菌活性。

结果共有35株内生真菌具有抗细菌活性，占待侧菌株总数的58.3 %，其中以不产孢类、青霉属、曲霉属、镰孢属为主，分别占活性菌株总数的51.4 %、8.6%、8.6%、8.6%;共有49株内生真菌具有抗真菌活性，占待侧菌株总数的81.7 %，其中以不产孢类和盘长孢属为主，分别占活性菌株总数的44.9 %、17.1 %。

结论红树林内生真菌是抗菌活性物质的一个潜在的、丰富的资源库，值得进一步研究和开发。

【关键词】红树林；内生真菌；代谢产物；生物活性Abstract:Objective To isolate and scree n fun gal en dophytes with an tibacterial and an tifu ngal activities from man grove plants.Methods The antibacterial and antifungal activities test offun gal en dophytes from man grove pla nts were used by paper disc method.Results Sixty strai ns of en dophytic fungi were isolated from Aegiceras corni culatum, Excoecaria agallocha, Kan delia can del, Bruguiera gymnorrhiza, Avicennia mariana, Heritiera littoralis.The result of the antibacterial and antifungal assay shows that thirty five strains of the endofungi (58.3% of total tested strains ) have antibacterial activities, the active strains mostly belong to sterile groups (51.4 % of active strai ns), Pe nicillium(8.6%),Aspergillus(8.6%), Fusarium(8.6%); forty nine strains (81.7% of total tested stra ins) have an tifu ngal activites, most of them bel ong to sterile groups (44.9 % of active strains), and Gloeosporium (17.1%).C on clusi on Man grove fun gal en dophytes were pote ntial and rich resources of antimicrobial compounds, which need to explore further.Keywords: man grove pla nts, fun gal en dophytes, metabolites , bioactivity内生真菌(endophyte)指生活于健康植物组织内部、不引发植物产生明显病症的一类真菌。

红树林细胞毒活性放线菌的筛选及其所产活性物质的初步研究

株 ’０９５６０１ &１２４３８２和１２４０９２ # 其中 " 菌株０９５６０１ &１２４３８２所产细胞毒活性物质主要存在于菌体中 " 其ＩＤ５０值为
３２０$ 菌株１２４０９２所产细胞毒活性物质在发酵上清液和菌体中都大量存在 " 其ＩＤ５０值为５１２０ $ 这３株菌所产活

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红树林内生真菌抗细菌和抗真菌活性的初步研究

红树林内生真菌抗细菌和抗真菌活性的初步研究邓祖军;曹理想;谭红铭;;周世宁【期刊名称】《广东药学院学报》【年(卷),期】2007(23)5【摘要】目的分离和筛选具有抗细菌和抗真菌活性的红树林内生真菌.方法从红树林植物桐花树、海漆、秋茄、木榄、白骨壤、银叶树中分离到60株内生真菌,对其代谢产物进行抗菌检测,通过滤纸片法来检测内生真菌代谢产物抗细菌和抗真菌活性.结果共有35株内生真菌具有抗细菌活性,占待侧菌株总数的58.3%,其中以不产孢类、青霉属、曲霉属、镰孢属为主,分别占活性菌株总数的51.4%、8.6%、8.6%、8.6%;共有49株内生真菌具有抗真菌活性,占待侧菌株总数的81.7%,其中以不产孢类和盘长孢属为主,分别占活性菌株总数的44.9%、17.1%. 结论红树林内生真菌是抗菌活性物质的一个潜在的、丰富的资源库,值得进一步研究和开发.【总页数】6页(P563-567,571)【作者】邓祖军;曹理想;谭红铭;;周世宁【作者单位】广东药学院,基础学院,广东,广州,510006;中山大学生命科学学院,有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广东,广州,510275;中山大学生命科学学院,有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广东,广州,510275;中山大学生命科学学院,有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广东,广州,510275;香港城市大学,应用生物与化学系;中山大学生命科学学院,有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广东,广州,510275【正文语种】中文【中图分类】R282.71【相关文献】1.老瓜头耐盐内生真菌抗真菌活性筛选研究 [J], 刘悦;段海婧;刘成;吴秀丽;陈靖2.红树林内生真菌的分离及代谢产物生物活性的初步研究 [J], 邓祖军;曹理想;周世宁3.几种药用植物内生真菌抗真菌活性的初步研究 [J], 李桂玲;王建锋;黄耀坚;郑忠辉;苏文金4.药用植物中具有抗真菌活性的内生真菌及其次级代谢产物的研究 [J], 武艳霜;陆悦;朱作斌;陈莹;李颖5.凤尾菇深层发酵液抗细菌抗真菌活性的研究 [J], 曾志恒;郑怡;刘艳如;林勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

放线菌的分离与筛选方法

放线菌的分离与筛选方法放线菌（Actinomycetes）是一类革兰氏阳性细菌，常见于土壤和水体中。

由于其多样的形态和代谢特性，放线菌具有广泛的生物学和工业应用价值。

分离和筛选放线菌的方法是研究和利用其功能的基础，本文将介绍几种常用的方法。

一、分离方法：1.稀释和均匀涂布法：首先，将环境样品（如土壤、水样）进行适当稀释，并在培养基平板上平均涂布样品。

随着放线菌的生长，单个菌落会形成，然后可以通过挑选单个菌落进行分离纯化。

2.稀释和涂布法：方法类似于前者，但将初步培养得到的单菌落拖线在新的培养基平板上进行再次分离，以获得更纯的放线菌。

3.祛除污染菌法：样品前处理的关键是去除非放线菌细菌的干扰。

常见的处理方法有在分离培养基中加入抗生素、改变pH值等。

4.冷冻-融化法：利用放线菌对低温和高温的耐受性不同，将样品进行多次冻结-融化处理，可以选择性地分离出放线菌。

二、筛选方法：1.对抗菌活性筛选：放线菌具有对其他菌株的抗菌活性，可以使用对抗菌活性筛选方法，通过将待测分离物与感兴趣的致病菌共同培养，观察是否产生抑菌圈来筛选放线菌。

2.抗真菌筛选：放线菌不仅对细菌有抑制作用，也能抑制真菌的生长。

可以通过共培养放线菌和待测真菌，并观察是否产生抑菌圈来筛选放线菌。

3.溶磷筛选：放线菌具有溶解磷酸盐的能力，可以利用Na-P亚硝酸盐琼脂平板培养基来筛选放线菌。

4.产生生物活性化合物筛选：放线菌可以生成一系列生物活性化合物，如抗生素、酶、生物胺等。

可以根据需要设计相应的试剂盒，进行营养检测、酶活性测定或染色方法进行筛选。

5.双层平板筛选法：放线菌在液体培养基上生长一段时间后，将其转移到固体上层培养基上继续培养。

这种方法可以筛选出产生生物活性化合物的放线菌。

以上介绍的方法只是一小部分常用的放线菌分离和筛选方法，随着技术的不断发展，还有更多新的方法被提出。

分离和筛选放线菌是一个复杂且耗时的过程，需要根据具体的研究目的和条件来选择适合的方法。

红树林放线菌筛选及其抗肿瘤活性测定

周中流徐立军，
（．湛江师范学院化学科学与技术学院，东湛江５４４；２１广２０８．北京中医药大学中药学院，京１００）北０１２
摘要：目的从我国湛江红树林采集的海泥样品中分离纯化微生物菌株并进行筛选及抗肿瘤活性测定。法采用形态学方法鉴定放线方菌菌株；用四氮唑盐（Ｆ法测定筛选出的７放线菌发酵液对肺癌细胞Ａ４采ＭＴ）２株５９与人类慢性髓性白血病细胞Ｋ６５２两种肿瘤细胞的
ＭＹａｓｙｗｓｐｌｄｔｍａｕｅｔｏｕｏｅｓｌｅ（５９ｎ５２ｃｔｏｉｉｆ７ｔｉｓｆａｔｏｙｅｅｆｍｎａｏＴｓａａａｐｅｏｅｓｒｗｔｒｃｌｉｓＡ４ａｄＫ６）ｙｔｃｙｏ２ｓａｏｃｎｍｃｔｅｅｔｔｎｉｍｌｎｏｘｔｒｎｉｒｉ
ＺｏｏｇｉＸｉｎｈｕＺｈｎｌ，ｕＬｕ。ｕｊ
（．ｈｍｉｒｃｎｅａｄＴｃｎｌｙＳｈｏ，ｈｎａｇＮｒａＵｉｒｔ，ｈ￣ｉｎ，ｕｎｄｎ，ｈｎ５４４；．ｃｏｌｏｈｎｓＰａｍｃ，ｅＪＣｅｓｙＳｉｃｎｅｈｏｏｃｏｌＺａｊｎｏｍｌｎｖｓｙＺａａｇＧａｇｏｇＣｉａｔｅｇｉｅｉ２０８２ＳｈｏｆＣｉｅｈｒａｙＢｉｅ — ｉｎｖｓｙｆＴａｉｏａｈｎｅｄｃｅＢｎＣｉａｒｇＵｉｒｔｏｒｄｔｎｌＣｉｓＭｅｉｎ，ｅｇ，ｈｎ１００）ｎｅｉｉｅｉ０１２

广西北仑河口红树林植物根际淤泥放线菌的分离、鉴定、多样性及抗菌活性研究

Ａｂｓｔｒａｃｔ０ｂｉｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ．
ｍａｎｇｒｏｖｅｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｓｌｕｄｇｅｉｎＢｅｉｌｕｎｅｓｔｕａｒｙ，Ｇｕａｎｇｘｉ．ＭｅｔｈｏｄｓＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｕｓｉｎｇｔｈｅ仃ａｄｉｔｉｏｎａｌｄｉｌｕｔｉｏｎｐｌａｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄｗｉｔｈｓｉｘｉｓｏｌａｔｉｏｎｍｅｄｉａ．Ｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ．ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｙＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｗｅｒｅｓｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏｇｅｎｅｄａｔａｂａｓｅｆｏｒＢＬＡＳＴｓｅａｒｃｈｅｓ．Ｔｏｔｅｓｔａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅｄｉｓｋｄｉｆｌｕｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．ｔｈｒｅｅｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｏｒｇａｎｉｃ１ａｙｅｒ，Ｗａｔｅｒｌａｙｅｒ’ａｎｄａｃｅｔｏｎｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｍｙｃｅｌｉｕｍ．ＲｅｓｕｉｔｓＡｔｏｔａｌｏｆ５６ｓｔｒａｉｎｓ．ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄｔｏ７ｆａｍｉｌｉｅｓｗｉｔｈｉｎ７ｏｒｄｅｒｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄｆｒｏｍｆｉｖｅｓｌｕｄｇｅｓａｍｐｌｅｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ．ＴｈｅｄｏｍｉｎａｎｔａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓｗｅｒｅＭｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａａｎｄＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ．Ｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓｏｆｌ６ｓｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｂｅｔｗｅｅｎ

【doc】广西红树林放线菌的分离和DNA的提取

【doc】广西红树林放线菌的分离和DNA的提取广西红树林放线菌的分离和DNA的提取安徽农业科学,JournalofAnhuiA.Sci.2009,37(31):15155—15156责任编辑常俊香责任校对况玲玲广西红树林放线茵的分离和DNA的提取徐雅娟,陈森洲,骆耐香,孔杰,黄大林(桂林医学院微生物学与免疫学教研室,广西桂林541004)摘要从广西红树林海泥样芩中分离放线茵,提取其基因组DNA并进行16SrDNAPCR扩增,对所得放线菌进行鉴定:结果表明,从红树林土壤中提取的放线菌基因组DNA可成功扩增出16SrDNA:关键词红树林;放线茵;基因组DNA中图分类号$718.521.3文献标识码A文章编号0517—6611(2009)31—15155—02 IsolationofActinomyeetesfromMangroveinGuangxiandExtractionofItsGenomicDN AXUYa-juanetal(DepartmentofMicrobiologyandImmunolo~',GuilinMedicalUniversity, Guilin,Guangxi541004)AbstractThea(tinomycetesinseanmdsamplesthatfrommangroveinGuangxiwasi solatedanditsgenomicDNAwasextractedfor16SrDNAPCRamplification,andtheisolatedactinomvceteswasidentified.Theresultsshow edthatthegenomicDNAofactinomycetesfrommangrovesoilcouldSO('cessfullyamplified16SrDNA.KeywordsMangrove:Actinomvcetes:GenomicDNA 红树林是热带海岸潮间带特有的植物群落,蕴藏着巨大的生物多样性.放线菌不仅能产生多种抗生素,同时也可产生多种具有抗肿瘤活性的物质:而红树林下的土壤底泥对微生物来说是一个特殊的生存环境,此生境中放线菌资源的多样性具有非常重要的研究价值:我国南部边陲潮间带的海岸红树林主要分布于广西,广东,海南,台湾,福建和浙江南部沿岸其中,广两红树林资源最为丰富,其资源量居全国第2位,广西合浦的山口,东兴的北仑河,防城港的新地和北海的大冠沙等红树林自然保护区内放线菌资源也十分丰富笔者对广西红树林土壤放线菌的多样性进行了初步研究采用溶菌酶,蛋白酶K消化破壁,酚一氯仿抽提的方法,有效提取了放线菌基冈组DNA,所获得的DNA可直接作为模板用于16SrDNA的扩增鉴定: 1材料与方法1.1材料1.1.1红树林海泥样本一,西合浦LlJ口海泥样本32份,东兴北仑河海泥样本13份,防城港新地海泥样本10份,北海大冠沙海泥样本2O份1.1.2高氏1号培养基.培养基组成:可溶性淀粉2.O%,KNO0.1%,K2HPO40.05%,MgSO40.05%,FeSO0.001%,重铬酸钾0.01%,用过滤海水t000ml配制,调节其pH值为 7.2,7.41.1.3主要试剂琼脂糖,氯仿,异戊醇,乙醇,XDNAHind ?等1.1.4仪器:恒温水浴锅,离心机,振荡仪,电泳仪,PCR 仪等.1.2方法.1.2.1红树林土壤放线菌的分离.1.2.1.1土壤稀释液制备:称取土壤5g,放人45ml盛无菌海水的i角烧瓶中,振荡10nfin,得稀释1O倍的土壤悬液另取盛有9ml无菌海水的试管4支,取稀释1O倍的土基金项目作者简介收稿日期广西教育厅科研资助项目(2006[26]No.138): 徐雅娟(1957一),女,内蒙古科尔沁左翼中旗人,实验师,从事医学微生物学与免疫学实验教学及科研工作通讯作者2009436.30壤悬液1rrd加入试管中,使之充分混匀,即得10土壤稀释液;采用同样的方法依次得到lO,,l0,,lO.土壤稀释液. 1.2.1.2放线菌的分离纯化:吸取土壤稀释液各1ml放入培养皿中.将熔化保温50?左右含有0.0l%重铬酸钾的高氏1号培养基分别倒入上述培养?中,轻轻转动培养皿,使菌液和培养基混匀铺平,凝固后倒置于28—30?恒温箱中培养6,7d.将形态较典型的放线菌菌落挑出,经过2—3 次平板划线分离纯化后转种到高氏1号斜面培养基中保存, 编号后置于4?冰箱中保存备用.1.2.2放线菌基因组DNA提取.1.2.2.1菌体准备.将分离的放线菌转接到高氏1号液体培养基中培养5—7d,取生长良好的放线菌菌液2ml置于 EP管中,10000r/min离心8min,弃上清,保留菌体. 1.2.2.2DNA提取.?破壁,蛋白质和核酸分离:每个EP 管加入TE溶液300Ixl,用枪头吹吸3次充分混匀,10000 r/min离心5min,弃上清液,再加入20mg/ml的溶菌酶溶液 l5l,用枪头充分混匀,37?水浴4h;每个EP管中加入20 mg/ml蛋白酶K溶液8txl,再加入10%SDS溶液和0.5 mol/L的EDTA溶液各40l,轻摇,55?水浴过夜?抽提: 加等体积的Tris饱和酚,颠倒使之充分混匀,t01300r/min离心8min,取上清转至另1支新的1.5rnlEP管中,再加等体积24:1的氯仿/异戊醇,充分混匀,10000r/min离心8min, 取上清转至另1支1.5mlEP管中.?沉淀:加等体积异丙醇,一20?沉淀30min,8000r/rain离心5min,弃上清保留沉淀.?洗涤:加70%乙醇洗涤沉淀2次,每次洗涤后8000 r/min离心5min,弃上清保留沉淀DNA.?洗脱:将EP管倒置于滤纸上,充分干燥后加.rE溶液20l,室温放置l5 min,4oC过夜使DNA充分溶解.1.2.2.3放线菌基因组DNA提取效果检测:取5I基因组 DNA用0.8%琼脂糖凝胶电泳(电压80V)进行检测,260nm 紫外灯下观察电泳结果.1.2.316SrDNAPCR扩增:将得到的放线菌基因组DNA 进行16SrDNA扩增(PCR反应采用大连宝生物公司提供的 ExTaq试剂盒),取所提DNA各500ng作为模板,10×ExTaq buffer(Mg"Plus)5.0txl,dNTPMixture(各2.5mmol/L)4.0 l,设计其16SrDNA特异性引物如下:引物A:5一AGAGTIT— 15156安徽农业科学2009笠GATCCTGGCTCAG一3;引物B:5.AAGGAGGTGATCCAGC— CGCA--3,引物(上海生工提供,0.02nmoUL)各1txl,Takara ExTaq(5U/1)1.01,最终补足反应体系至50txl.PCR 扩增条件为:94oC预变性5rain,95?变性1min,65?退火1 min,72oC延伸3min,共30个循环,最后72qC延伸10min. 取部分PCR扩增产物用0.8%的琼脂糖凝胶电泳进行检测, 其余扩增产物于一2O?条件下保存.2结果与分析2.1放线菌基因组DNA提取结果选取6株生物学特性比较典型的菌株提取DNA,所得DNA电泳后在19Kb以上位置出现明显的DNA条带区(图1).M1234562313094166557436123222027注:M.DHAHind111;1—6.放线菌菌株基因组DNA.Note:M.DNAHind111:1—6.DNAextractedfromactinomycete strains.图1基因组DNA电泳Fig.1TheelectrophoresisofgenomicDNA 2.216SrDNAPCR扩增结果以所提基因组DNA为模板进行PCR扩增,可有效扩增出16SrDNA基因(图2).器000bp700bp400bp200bp注:M.Marker12;1,6.放线菌菌株基因组DNAPCR产物.Note:M,Marker12;1—6,PCRproductsofthegenomicDNAfrom actinomyeetestrains.图216SrDNAPCR产物电泳Fig.2PCRproductelectrophoresisof16SrDNA 电泳后目的条带特异性较强,产量较大,说明所提DNA完全可用作PCR反应的模板,而且DNA中不含酶促反应的抑制物.PCR产物纯化后送上海生工进行测序,成功获得了放线菌样本的序列.(上接第15143页)[11]BROCKINGTONSF,MAVRODIEVE,RAMDIALJ,eta1.KeeptheDNArolling:multipledisplacementamplificationofarchivalplantDNAextracts [J].TAXON,20O8,57(3):944—948【12]邹喻苹,葛颂,王晓东.系统与进化植物学中的分子标记[M].北京:科学出版社,2001:9—29.3讨论目前,实验室提取细菌DNA的方法主要有以下几类:高温加热法,碱裂解法,SDS裂解法及超声裂解法等],这些方法往往只能提取革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌中的一类,缺乏通用性,步骤繁琐,费时,效率低.该研究建立了一种简便的红树林放线菌基因组DNA的提取方法,得到的基因组DNA具有较好的完整性,无需纯化即可用于16S rDNAPCR扩增等分子生物学操作,为鉴定放线菌奠定了基础.红树林是自然分布于热带,亚热带海岸潮间带的木本植物群落,海岸潮间带是海洋和陆地的过渡带,具有不同于陆地的性质:水分和盐分高,氧气缺乏,地下微生物与其他生态系统地下微生物具有很大差异.研究表明,红树林根系放线菌的种类和数量,均较菜园,湖畔,海泥等地放线菌丰富. 有效获得放线菌基因组DNA是对其进行分类鉴定的前提, 可为研究放线菌代谢产物和筛选新的生物活性物质奠定基础.目前,抗药性微生物数量不断增加,急需寻找新的抗生素来源物种.而从陆地放线菌中很难发现和筛选到生物活性物质.据不完全统计,到目前为止,由放线菌产生的抗生素已达40oo种以上.从海洋中寻找新的放线菌物种是目前放线菌研究的一个新方向.目前,陆地微生物药物的筛选率逐渐降低,而占地球表面积70%的海洋为新药的开发带来了新的契机.海洋放线菌是海洋细菌抗肿瘤活性物质的重要来源,海洋微生物作为活性物质的新来源正Et益受到国内外学者的重视,最先成为海洋微生物研究的热点.笔者认为,红树林土壤中放线菌资源的研究尚处于起步阶段,深入研究红树林土壤中放线菌资源的分布,可筛选出高产抗肿瘤活性物质的放线菌菌株.参考文献[1]李星群,文军.广西红树林自然保护区资源保护现状与对策[J].林业调查规划,2007,32(6):59—62.[2]郑维,权春善,朴永哲,等.一种快速提取细菌总DNA的方法研究[J]. 中国生物工程杂志,2OO6,26(4):75—8o.[3]姜淑梅,张龙,戴世鲲,等.一种简单有效的适于PCR操作的放线菌 DNA提取方法[J].生物技术,20O7,17(1):39—41.[4]曾乐平,周洪波,黄菊芳,等.一种经济简单的微生物基因组DNA的提取方法[J1.生态环境,2OO5,14(6):945—946.[5]张宁,王凤山.DNA提取方法进展[J].中国海洋药物,2oo4(2):40—45. [6]姜怡,唐蜀昆,王永霞,等.海洋放线菌分离方法[J].微生物学通报, 2OO6,33(6):153—155.[7]刘丽华,沈振国,阮继生,等.26株具有细胞毒活性的海洋放线菌的系统发育研究[J].生物技术通报,2006(S1):494—499.[8]徐丽华,李文均,刘志恒,等.放线菌系统学[M].北京:科学出版社, 2007:19.[13]周延清.DNA分子标记技术在植物研究中的应用[M].北京:化学工业出版社,2OO5:7—125.[14]XUYB,DINGZE.Observationforleafepidermalcharacteristicsoffourdifferentpomegranatecuhivarsunderscanningelectronmicroscope[J] AgnculturalScience&Technology,2OO8,9(3):99—102.。

海南红树林底泥海洋放线菌的抗菌及抗群体感应活性筛选

海南红树林底泥海洋放线菌的抗菌及抗群体感应活性筛选莫杰;钱生辉;钱嘉兴;缪莉
【期刊名称】《生物学杂志》
【年(卷),期】2024(41)1
【摘要】采用滤纸片法以紫色色杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等为指示菌对84株分离自红树林底泥的海洋放线菌进行抗菌及抗群体感应活性筛选,再对高活性菌株进行活性复筛以及薄层层析化学多样性分析。

结果显示,菌株HN2-56具有很强的抗群体感应活性及较弱的抗菌活性,且代谢产物较为丰富。

对该菌的代谢产物进行初步分离及GC-MS分析,从其活性组分中鉴定出13个可能的化合物,且多个化合物具有一定的生物活性。

活性验证试验发现,化合物4(二乙基甲苯甲酰胺)和12(莪术烯醇)具有抗群体感应活性。

经16S rDNA序列分析,结合形态观察和系统发育分析,将菌株HN2-56鉴定为链霉菌(Streptomyces chumphonesis)。

该菌株在抗群体感应方面有一定的应用潜力,具有进一步研究的价值。

【总页数】6页(P88-93)
【作者】莫杰;钱生辉;钱嘉兴;缪莉
【作者单位】扬州大学环境科学与工程学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q939.132
【相关文献】
1.具有群体感应抑制活性海洋放线菌的筛选与鉴定
2.群体感应抑制活性海洋放线菌的分离筛选及优化培养
3.一株群体感应抑制活性海洋放线菌的筛选与鉴定
4.海洋放线菌 Nocardiopsis dassonvillei JS106 的抗群体感应活性物质研究
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一株红树林来源放线菌的抗菌活性物质

一株红树林来源放线菌的抗菌活性物质张骏梁;史蔷;吴昊;张萌;徐颖【期刊名称】《深圳大学学报（理工版）》【年(卷),期】2024(41)3【摘要】红树林沉积物微生物资源丰富,是新型天然产物以及药物先导化合物的重要来源之一.为获得具有新颖结构的微生物次级代谢产物,以活性为导向对红树林来源菌株进行筛选,对表现出抗细菌、生物膜和真菌活性的GP3T5(Streptomyces sp.)菌株的次级代谢产物进行研究.通过萃取、C18反相硅胶柱层析、Sephadex LH20凝胶柱层析和制备高效液相色谱,从菌株发酵液中分离出3种化合物,分别记为化合物1、2和3.利用高分辨电喷雾质谱、核磁共振波谱和紫外光谱等技术,鉴定化合物1、2和3依次为pyrisulfoxin A、collismycin A和echinomycin A.对化合物1、2和3进行活性评价,结果表明,3种化合物均有不同程度的抗菌和抗生物膜活性.其中,化合物3的抗菌活性最好,对食源性病原菌有很好的抗菌活性,对单增李斯特菌和无乳链球菌的最小抑菌质量浓度均为0.06μg/mL.化合物1、2和3对鲍曼不动杆菌的最小生物膜抑制质量浓度分别为32、16和1μg/mL.化合物2和3具有良好的抗植物病原真菌活性,化合物2的半数抑制质量浓度IC50≤10μg/mL,化合物3的IC50≤1μg/mL.以上红树林来源菌株GP3T5的研究结果可为深入挖掘红树林土壤微生物生物活性物质提供参考.【总页数】9页(P358-366)【作者】张骏梁;史蔷;吴昊;张萌;徐颖【作者单位】深圳大学生命与海洋科学学院【正文语种】中文【中图分类】Q939.9【相关文献】1.一株海洋放线菌抗菌活性物质的分离与结构解析2.一株具有抗菌活性红树林土壤放线菌的分离和鉴定3.一株红树林来源稀有放线菌的鉴定和抑菌活性物质的初步研究4.红树林放线菌产抗菌活性物质的分离纯化研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

红树林放线菌的分离及其生物活性物质的初步研究的开题报告

红树林放线菌的分离及其生物活性物质的初步研究的开题
报告
标题：红树林放线菌的分离及其生物活性物质的初步研究
背景和研究意义：
红树林是一种特殊的湿地生态系统，具有重要的生态和经济价值。

其中，红树林土壤是富含微生物资源的重要来源之一，而放线菌是其中一类重要的微生物资源。

据报道，红树林中的放线菌广泛存在，并且具有丰富的生物活性物质，具有重要的药用和工业应用价值。

因此，研究红树林中放线菌的分离及其生物活性物质，具有深远的科学和应用价值。

研究内容和方法：
本研究旨在分离红树林放线菌并筛选其生物活性物质。

具体内容包括：
1. 从红树林中采集土壤样品，进行放线菌培养和筛选。

2. 对分离的放线菌进行形态学和生理生化鉴定，并进行16S rDNA序列分析。

3. 筛选放线菌菌株中的生物活性物质，如抗菌活性、抗肿瘤活性等。

4. 对具有生物活性的物质进行初步结构鉴定和药理学评价。

预期成果和意义：
本研究旨在分离红树林中的放线菌并筛选其生物活性物质，预期成果为：
1. 分离红树林中的放线菌菌株，并对其进行形态学和生理生化鉴定；
2. 筛选出具有生物活性的物质，并初步鉴定其结构和药理活性；
3. 探讨红树林中放线菌资源的多样性和分布规律；
4. 为深入挖掘红树林中微生物资源并推动其生物利用提供科学依据。

预期的研究方法为：土壤采集、放线菌分离和鉴定、生物活性筛选、结构鉴定和药理学研究等。

研究周期为2年。

红树林放线菌研究进展

红树林放线菌研究进展
伍水龙;江黎明
【期刊名称】《生物技术进展》
【年(卷),期】2012(2)5
【摘要】红树林是生长在热带和亚热带海岸潮间带的一种独特植物群落,构成陆地与海洋间的过渡,具有水分高、盐分高、耐缺氧等特征的特殊生态系统及很高的生物多样性,是筛选和发现放线菌新物种和药用生物活性次级代谢产物的宝贵资源.在物种鉴定方面,放线菌分类学是目前红树林放线菌物种鉴定的重要手段.本文综述了红树林放线菌物种鉴定主要方法、红树林放线菌生态环境和物种分布特征、生物学活性及其次级代谢产物等,并展望了该领域研究与发展的重要问题与趋势.
【总页数】6页(P335-340)
【作者】伍水龙;江黎明
【作者单位】广东医学院生物化学与分子生物学教研室,广东湛江524023;广东医学院生物化学与分子生物学教研室,广东湛江524023
【正文语种】中文
【相关文献】
1.红树林放线菌生物多样性及其代谢产物的研究进展 [J], 蒋莲秀;莫刚;戴支凯;陈建宏;黄大林
2.福建九龙江口红树林放线菌及其天然产物研究进展 [J], 陈为国
3.海南西海岸红树林伴生植物内生放线菌多样性及其延缓衰老活性初筛 [J], 李蜜; 易湘茜; 杨彩妮; 庞晓婷; 姜舒; 高程海
4.一株红树林来源稀有放线菌的鉴定和抑菌活性物质的初步研究 [J], 张骏梁;张诗玲;吴佳慧;许姗姗;梁锦有;徐颖
5.广西茅尾海红树林土壤放线菌多样性及功能酶活性研究 [J], 李菲;李喆;胡文进;黄庶识;刘泾泾;黄媛林;王巧贞;潘信利
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红树林放线菌的筛选与抗真菌和抗肿瘤活性的测定

红树林放线菌的筛选与抗真菌和抗肿瘤活性的测定李蓉;张京良;江晓路;管华诗【期刊名称】《食品与生物技术学报》【年(卷),期】2010(029)001【摘要】通过从深圳福田红树林根际于不同季节采集的3份土样和2份水样中分离得到95株放线菌,94%的放线菌为链霉菌属.测定95株放线菌发酵液对9种病原真菌的抗菌活性,其中31.6%的放线菌发酵液有不同程度的抗病原真菌作用.同时采用MTT法测定了它们对肺癌细胞A549、白血病细胞株K562两种肿瘤细胞的细胞毒活性,其中21%放线菌发酵液具有细胞毒活性.s33、s62、s65和 s68这个4株放线菌发酵液具有抑制5种以上真菌的作用,并且对两种肿瘤细胞株均有作用.【总页数】4页(P94-97)【作者】李蓉;张京良;江晓路;管华诗【作者单位】中国海洋大学,食品科学与工程学院,山东,青岛,266003;中国海洋大学,医药学院,山东,青岛,266003;中国海洋大学,食品科学与工程学院,山东,青岛,266003;中国海洋大学,食品科学与工程学院,山东,青岛,266003;中国海洋大学,医药学院,山东,青岛,266003【正文语种】中文【中图分类】R979.1【相关文献】1.红树林放线菌筛选及其抗肿瘤活性测定 [J], 周中流;徐立军2.2株无抗肿瘤活性放线菌野生株的抗生素抗性突变株及其抗肿瘤活性筛选 [J], 田从魁;崔承彬;赵卫权;李长伟;姚志伟3.深圳福田红树林生态中放线菌的筛选及其抗菌活性测定 [J], 江晓路;梁晓婷;曹杰铭4.一株南海红树林底泥抗真菌放线菌(No.H74-18)的化学成分研究 [J], 许琳雅;王成;徐文;沈会芳;周光雄;林壁润5.蜚蠊肠道抗真菌活性放线菌的筛选与鉴定 [J], 曾还雄;方霞;刘凌燕;金小宝因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

一株具有抗菌活性红树林土壤放线菌的分离和鉴定

一株具有抗菌活性红树林土壤放线菌的分离和鉴定作者：黄大林,袁桂峰,徐雅娟,骆耐香,陈建宏,刘菁,蒋莲秀,陈森洲来源：《湖北农业科学》2011年第04期摘要：分离和鉴定具有抗菌活性的红树林土壤放线菌。

基于形态特征、生理生化特性和１６ＳｒＤＮＡ序列分析，研究通过稀释分离法从广西北海红树林的高盐泥样中分离到１株细菌。

系统进化分析表明，分离菌株与链霉菌属ＡｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｓＡＹ９９９７７３具有９９％的同源性，因此，ＢＨ０９５１初步被鉴定为链霉菌属ＡｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｓＡＹ９９９７７３的变种。

说明放线菌ＢＨ０９５１具有抗菌活性，本研究能为本菌株乃至广西北海红树林的微生物资源的开发和利用提供初步数据。

关键词：放线菌；链霉菌属；抗菌活性；１６ＳｒＤＮＡ；系统发育分析中图分类号：Ｓ１５４．３８＋４，Ｑ９３９．１３文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）04－0734-03ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ MａｎｇｒｏｖｅｓｏｉｌＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓｗｉｔｈ Aｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ AｃｔｉｖｉｔｙＨＵＡＮＧＤａ－ｌｉｎ，ＹＵＡＮＧｕｉ－ｆｅｎｇ，ＸＵＹａ－ｊｕａｎ，ＬＵＯＮａｉ－ｘｉａｎｇ，ＣＨＥＮＪｉａｎ－ｈｏｎｇ，ＬＩＵＪｉｎｇ，ＪＩＡＮＧＬｉａｎ－ｘｉｕ，ＣＨＥＮＳｅｎ－ｚｈｏｕ（ＴＲＳｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ＧｕｉｌｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｌｉｎ，５４１００４，Ｇｕａｎｇｘｉ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓｓｐ. ｏｆｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｓｏｉｌ were proceeded．Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ，ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄ１６ＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｈｏｍｏｌｏｇｙａｎａｌｙｓｉｓ，ａｎｉｓｏｌａｔｅｄｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｒｏｍｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｏｆｓａｌｔ－ｈｉｇｈｓｏｉｌｆｒｏｍＢｅｉｈａｉｍａｎｇｒｏｖｅｆｏｒｅｓｔｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｅｄ．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎｂａｓｅｄｏｎｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆ１６ＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｉｔｗａｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｓＡＹ９９９７７３ｗｉｔｈ９９％ｉｄｅｎｔｉｔｙ．Ｓｏ， tｈｅｉｓｏｌａｔｅｄｓｔｒａｉｎｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓｏｎｅ variety ｏｆＳ．ａｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｓＡＹ９９９７７３．ＩｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓｓｐ．ＢＨ０９５１ｗａｓｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙ．Ａｎｄｔｈｕｓ it ｗｏｕｌｄｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｏｒｉｇｉｎａｌｄａｔａｆｏｒｄｅｖｅｌｏｐｔｉｎｇａｎｄｅｘｐｌｏｉｔｔｉｎｇｔｈｅｓｔｒａｉｎｏｆＢＨ０９５１ａｎｄｔｈｅｏｔｈｅｒ aｃｔｉｎｏｍｙｃｅteｓｒｅｓｏｕｒｃｅｓｏｆｔｈｅｍａｎｇｒｏｖｅｆｏｒｅｓｔｓｏｉｌｏｆＧｕａｎｇｘｉＢｅｉｈａｉ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ： aｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ；Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ； aｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙ；１６ＳｒＤＮＡ； pｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓ自抗生素发现以来，微生物来源的药物随着人们的需求在不断地增加，近年来海洋微生物资源研究成为科学界关注的热点领域之一。