霉菌和酵母菌检验

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化妆品微生物检验标准

化妆品微生物检验标准一、菌落总数菌落总数是指化妆品中可培养的微生物总数，包括细菌、霉菌和酵母菌等。

这些微生物可能来自原料、生产过程、包装材料、运输和贮存等环节。

菌落总数是评价化妆品卫生质量的重要指标之一，可以反映化妆品受污染的程度。

二、霉菌和酵母菌总数霉菌和酵母菌是常见的真菌，在化妆品中可能污染原料或生产过程中。

霉菌和酵母菌大量繁殖会导致产品变质，对皮肤产生不良影响。

因此，对霉菌和酵母菌总数的检测是化妆品卫生质量检测的重要内容之一。

三、耐热大肠菌群耐热大肠菌群是指一群嗜热、不产气的革兰氏阴性杆菌，其中包括埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属等。

在大肠杆菌中，有一种不耐热的“大肠菌群”是食品污染的指示菌。

耐热大肠菌群可以反映肠道致病菌污染的可能性。

四、金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌是一种常见的革兰氏阳性球菌，是一种常见的细菌性病菌。

耐热性较强，对食品和化妆品的污染具有一定危险性。

因此，对金黄色葡萄球菌的检测也是化妆品卫生质量检测的重要内容之一。

五、铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌是一种常见的革兰氏阴性杆菌，是一种条件致病菌，可引起皮肤感染和败血症等。

铜绿假单胞菌在化妆品中是一种常见的污染菌，对化妆品的卫生质量有一定影响。

因此，对铜绿假单胞菌的检测也是化妆品卫生质量检测的重要内容之一。

六、细菌总数细菌总数是指化妆品中可培养的细菌总数，包括革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌等。

这些细菌可能来自原料、生产过程、包装材料、运输和贮存等环节。

细菌总数可以反映化妆品受污染的程度。

七、粪大肠菌群粪大肠菌群是指一群能够产气的肠杆菌科细菌，主要分布于动物粪便和自然界中。

在化妆品中，粪大肠菌群的检出可能提示产品受到肠道致病菌的污染，具有潜在的危险性。

因此，对粪大肠菌群的检测也是化妆品卫生质量检测的重要内容之一。

霉菌和酵母菌的鉴定方法(2016.10.12)

霉菌和酵母菌的鉴定方法
霉菌酵母菌计数常用的培养基是孟加拉红（虎红），其中加入了一定量的氯霉素可有有效地抑制绝大多数细菌菌落的生长。但是由于一些难以预计的因素，例如培基的质量等。在孟加拉红培基上也可能生长出细菌菌落来，有时候未凸出琼脂表面的霉菌菌落也不太好判断。前面有很多网友以及在培训中碰到的许多学员都有问到这个问题。马群飞老师也曾做过专门的介绍鉴别的方法。我在马老师的基础上，专门针对这一问题做了一些比较性的实验。希望大家看了之后能有所收获。
可见明显的菌丝体
（三）染色法
挑取菌落用亚甲基蓝或革兰氏染色，酵母菌或霉菌在低倍镜下即可见到孢子或菌丝，而细菌不可见。
若是肉眼观察菌落形态还无法判断的话可以采用马老介绍的方法用普通光学显微镜观察菌落的边缘较薄较透光的部分。观察是否菌落
霉菌菌落
边缘交规整，调节聚焦螺旋可见到细腻如细沙的结构。若无法确认可用接种从边缘稍稍刮开菌落，即可在镜下见到卵圆形的孢子。
菌落紧密，边缘整齐，不易透光，几乎看不到细沙粒样的结构
（一）观察菌落特征
通常情况下三种菌落在孟加拉红培基上的特征比较
酵母菌菌落
细菌菌落
霉菌菌落
光滑、湿润、常带黏性，白色或粉红色。
培养时间较长时可呈皱缩状，切较干燥。
由于受到抑制，通常会很小，红色，常呈橄榄形。
绒毛状、棉絮状、蛛网状。具有菌丝体，菌落较大，扁平，较干燥。颜色多样，白色、黑色、黄色多见
（二）低倍镜观察菌落边缘形态：

霉菌和酵母菌检测

霉菌和酵母菌检测方法
GB 4789.15-2010
一、稀释
1、无菌吸管吸取25ml样品至装有225ml无菌蒸馏水的无菌锥形瓶中，充分混
匀。

2、吸取1ml混匀的样品，缓慢注入装有9ml稀释液的无菌试管中（枪头不要
接触液面），混匀。

3、按步骤2制备10倍系列稀释样品，每次更换无菌枪头。

4、根据估计，选择合适的2~3个样品匀液，吸取1ml至无菌平皿，每个梯度
做两个平皿，同时用1ml稀释液做空白对照。

5、将15~20ml冷却至46℃左右的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基倾注平皿，转动
混匀。

二、培养
1、琼脂凝固后倒置28℃±1℃培养5d，观察记录。

三、计数
1、选择菌落数在10~150之间的平皿，根据菌落形态分别计算霉菌和酵母数。

霉菌蔓延生长整个平板记录多不可计。

菌落数应采用两个平皿的平均数。

四、报告
1、计算两个平皿菌落的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。

2、若所有平皿菌落数均大于150，则对稀释度最高的平皿进行计算，其他平皿
可记录为多不可计，结果按最高稀释倍数计算结果报告。

3、若所有平皿菌落数小于 10，则对稀释度最低的平皿进行计算。

4、若所有平皿均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释度计算，如为原液，
则以小于1计算。

5、小于100菌落数时，四舍五入原则取两位有效数字。

大于或等于100菌落
数时，第三位四舍五入原则，取前两位，剩余位数为0。

6、空白对照有菌落生长，结果无效。

化妆品原料微生物检验标准

化妆品原料微生物检验标准一、细菌总数1.目的：评估化妆品原料的细菌污染程度，反映化妆品生产过程中的卫生状况。

2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行细菌总数的测定。

3.判定标准：细菌总数小于或等于1000 CFU/g（CFU/ml）为合格，超过此标准为不合格。

二、霉菌和酵母菌总数1.目的：评估化妆品原料的霉菌和酵母菌污染程度，反映原料的卫生状况。

2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行霉菌和酵母菌总数的测定。

3.判定标准：霉菌和酵母菌总数小于或等于100 CFU/g（CFU/ml）为合格，超过此标准为不合格。

三、耐热大肠菌群1.目的：检测化妆品原料中是否存在耐热大肠菌群，反映原料的卫生状况。

2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行耐热大肠菌群的测定。

3.判定标准：未检出耐热大肠菌群为合格，检出耐热大肠菌群为不合格。

四、金黄色葡萄球菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在金黄色葡萄球菌，预防感染性疾病的发生。

2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行金黄色葡萄球菌的测定。

3.判定标准：未检出金黄色葡萄球菌为合格，检出金黄色葡萄球菌为不合格。

五、铜绿假单胞菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在铜绿假单胞菌，预防感染性疾病的发生。

2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行铜绿假单胞菌的测定。

3.判定标准：未检出铜绿假单胞菌为合格，检出铜绿假单胞菌为不合格。

六、沙门氏菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在沙门氏菌，预防感染性疾病的发生。

2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行沙门氏菌的测定。

3.判定标准：未检出沙门氏菌为合格，检出沙门氏菌为不合格。

七、志贺氏菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在志贺氏菌，预防感染性疾病的发生。

2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行志贺氏菌的测定。

3.判定标准：未检出志贺氏菌为合格，检出志贺氏菌为不合格。

八、大肠埃希氏菌O157:H71.目的：检测化妆品原料中是否存在大肠埃希氏菌O157:H7，预防感染性疾病的发生。

霉菌以及酵母菌检测

酵母及酵母菌的检测一、霉菌和酵母菌介绍：霉菌和酵母菌及其检验酵母菌是真菌中的一大类，通常是单细胞，呈圆形,卵圆形、腊肠形或杆状。

霉菌也是真菌，能够形成疏松的绒毛状的菌丝体的真菌称为霉菌。

霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。

长期以来，人们利用某些霉菌和酵母加工一些食品，如用霉菌加工干酪和肉，使其味道鲜美；还可利用霉菌和酵母酿酒、制酱；食品、化学、医药等工业都少不了霉菌和酵母。

但在某些情况下，霉菌和酵母也可造成中腐败变质。

由于它们生长缓慢和竞争能力不强，故常常在不适于细菌生长的食品中出现，这些食品是pH低、湿度低、含盐和含糖高的食品、低温贮藏的食品，含有抗菌素的食品等。

由于霉菌和酵母能抵抗热、冷冻，以及抗菌素和辐照等贮藏及保藏技术，它们能转换某些不利于细菌的物质，而促进致病细菌的生长；有些霉菌能够合成有毒代谢产物－霉菌毒素。

霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。

例如，酵母在新鲜的和加工的食品中繁殖，可使食品发生难闻的异味，它还可以使液体发生混浊，产生气泡，形成薄膜，改变颜色及散发不正常的气味等。

因此霉菌和酵母也作为评价食品卫生质量的指示菌，并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。

目前已有若干个国家制订了某些食品的霉菌和酵母限量标准。

我国已制订了一些食品中霉菌和酵母的限量标准。

二、检验方法：霉菌和酵母的计数方法，与菌落总数的测定方法基本相似。

主要步骤为：将样品制作成10倍梯度的稀释液，选择3个合适的稀释度，吸取1mL于平皿，倾注培养基后，培养观察，计数。

对霉菌的计数，还可以采用显微镜直接镜检计数的方法。

具体检测标准参见：GB4789.15-94，《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物检验霉菌和酵母计数》三、说明：1．样品的处理。

为了准确测定霉菌和酵母数，真实反映被检食品的卫生质量，首先应注意样品的代表性。

对大的固体食品样品，要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料，再混合磨碎。

霉菌及其酵母菌

1、样品的稀释培养
（1）以无菌操作将检样25mL(或25g)放于含
有225mL灭菌蒸馏水的三角瓶中，振摇30min，
即为1：10稀释液。
（2）用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，
沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌蒸馏水的试管内，
振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。
（3）另取1mL灭菌吸管，按上项操作顺序，
制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换
用1支1mL灭菌吸管。
（4）根据标准要求或对污染情况的估计，选
择3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的
同时，以吸取该稀释度的吸管移取1mL稀释液
于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。
及时将15mL～20mL 冷却至46℃的马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基(可放置于 46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。待琼脂凝固后，将平板倒置，28℃±1℃培养 5d，观察并记录。
制片镜检观察，可见分生孢子梗很粗糙。顶囊呈烧瓶形或近球形。分生孢子在小梗上呈链状着生，分生孢子的周围有小突起、球形、粗糙。制片镜检观察，可见分生孢子梗很粗糙。顶囊呈烧瓶形或近球形。分生孢子在小梗上呈链状着生，分生孢子的周围有小突起、球形、粗糙。
二、黄曲霉毒素检测方法
可归纳为化学方法、生物学方法和免疫学方法三大类。 1、生物学方法 1. 抑菌试验通过平皿中抑菌圈大小来衡量AFT含量 2. 荧光测定法将待检菌株接种于培养基中，28—30 ℃培养48 ～72h，产生的毒素便浸入培养基中，在紫外灯光下照射培养基会呈现出特异的荧光。此法操作简便对AFT最低检出量为5pg/mL(拷贝数/毫升)。 3. 动物试验大白鼠试验法、鸡胚试验、鸭雏试验

牙膏中霉菌和酵母菌总数检验方法

牙膏中霉菌和酵母菌检验方法Molds and Yeasts Count in Toothpaste1范围本规范规定了牙膏中霉菌和酵母菌的检验方法。

本规范适用于牙膏中霉菌和酵母菌的测定。

2定义霉菌和酵母菌数测定Molds and yeasts count牙膏检样经过处理，在一定条件下培养后，1g检样中形成的霉菌和酵母菌总数，藉以判明牙膏被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。

本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置28℃±2℃培养5d，计算所生长的霉菌和酵母菌数。

3仪器和设备3.1恒温培养箱：28℃±2℃。

3.2振荡器。

3.3三角瓶：250mL。

3.4试管：18mm×150mm。

3.5灭菌平皿：直径90mm。

3.6无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或者移液器及吸头。

3.7量筒：200mL。

3.8酒精灯。

3.9高压灭菌器。

3.10恒温水浴箱。

4培养基和试剂4.1SCDLP液体培养基见总则中3.1。

4.2虎红（孟加拉红）培养基成分：蛋白胨5g葡萄糖10g磷酸二氢钾1g硫酸镁（无水）0.5g琼脂20g1/3000虎红溶液100mL（四氯四碘荧光素）蒸馏水加至1000mL氯霉素100mg制法：将上述各成分（除虎红外）加入蒸馏水中溶解后，再加入虎红溶液。

分装后，121℃高压灭菌20min，另用少量乙醇溶解氯霉素，溶解过滤后加入培养基中，若无氯霉素，使用时每1000mL加链霉素30mg。

5操作步骤5.1样品稀释牙膏样品的稀释分别见牙膏中菌落总数检验方法5.1。

5.2取5.1的样品稀释液各2mL，分别注入2个灭菌平皿内，每皿1mL，注入融化并冷却至44℃~48℃的虎红培养基，充分摇匀。

凝固后，翻转平板，置28℃±2℃培养5d，观察并记录。

同时吸取1mL空白稀释液加入灭菌空平皿中，加入约15mL虎红培养基，待琼脂凝固后，翻转平皿，置28℃±2℃培养箱内培养5d，为空白对照。

微生物限度检查

微生物限度检查微生物限度检查是一种常见的检验方法，用于评估制药产品、食品和环境的微生物质量。

微生物限度检查主要包括总大肠菌群、总菌落计数、霉菌和酵母菌的检验。

总大肠菌群是一类常见的微生物群体，其检验结果可以反映样品中可能存在的致病性微生物的数量。

在微生物限度检查中，常用的方法是将样品置于适当的培养基上进行培养，然后通过观察菌落形态和计数来确定总大肠菌群的数量。

在制药产品和食品领域，总大肠菌群的检验结果必须符合相关法规的要求，以确保产品的安全性和质量。

总菌落计数是评估样品中细菌和真菌总数量的常用方法。

在微生物限度检查中，常用的方法是将样品进行适当的稀释，然后将稀释液均匀涂布或点接到琼脂平板上进行培养。

经过一定时间的培养后，通过观察菌落形态和计数来确定总菌落计数。

总菌落计数的结果可以反映样品中微生物的总数量，是评估样品微生物质量的重要指标。

霉菌和酵母菌是常见的真菌类微生物，其检验结果可以反映样品中可能存在的霉变和腐败情况。

在微生物限度检查中，常用的方法是将样品进行适当的稀释，然后将稀释液均匀涂布或点接到含有抑制剂的琼脂平板上进行培养。

经过一定时间的培养后，通过观察菌落形态和计数来确定霉菌和酵母菌的数量。

霉菌和酵母菌的检验结果可以帮助评估样品的质量，并采取相应的控制措施。

在微生物限度检查中，还有其他一些常用的检验项目，如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等。

这些项目的检验方法与总大肠菌群和总菌落计数类似，通过培养和观察菌落形态和计数来确定微生物的数量。

这些检验项目主要用于评估样品中可能存在的致病性微生物的数量，以确保制药产品和食品的安全性。

总之，微生物限度检查是一种重要的质量控制方法，可以评估样品中微生物的数量和质量。

通过采用适当的培养和观察方法，可以得到准确的微生物检验结果，为制药产品、食品和环境的质量控制提供科学依据。

项目十八酵母菌、霉菌检验

1.霉菌和酵母菌及其检验酵母菌是真菌中的一大类，通常是单细胞，呈圆形,卵圆形、腊肠形或杆状。 2.霉菌形态和镜检观察
项目十八酵母菌、霉菌检验
项目知识点
1.设备和材料恒温培养箱冰箱恒温振荡器架盘药物天平0g~500g 显微镜10×、100×灭菌玻塞三角瓶300mL 灭菌试管 15mm×150mm 灭菌平皿直径9cm 酒精灯灭菌吸管 1mL、10mL 载玻片盖玻片灭菌广口瓶 500mL 牛皮纸袋金属勺刀试管架接种针橡皮乳头
项目十八酵母菌、霉菌检验
2.培养基和试剂
孟加拉红培养基马铃薯-葡萄糖琼脂培养基灭菌蒸馏水乙醇
项目十八酵母菌、霉菌检验
3.检验程序
检样
取25g或25mL，加入225mL无菌水
做成几个适当倍数的稀释样
选择3个适宜稀释度，各以1mL加入灭脂培养基
项目十八酵母菌、霉菌检验
6.报告每克（或每毫升）食品所含霉菌和酵母数以个/g（或个/mL）表示。
项目十八酵母菌、霉菌检验
4）培养倒置于25～28℃温箱中，3d后开始观察，共培养观察5d。 5）计数选取菌落数10～150之间的平板进行计数。（稀释度选择和菌落报告方式参考菌落总数的测定）
项目十八酵母菌、霉菌检验
5.计算方法通常选择菌落数在10~150之间的平皿进行计数，同稀释度的2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克（或每毫升）检样中所含霉菌和酵母数。
项目十八酵母菌、霉菌检验
学习任务：任务1.学习霉菌、酵母菌的检验方法。任务2.学习配制孟加拉红培养基。任务3.学习对霉菌、酵母菌的判断及计数。
项目十八酵母菌、霉菌检验
任务要求
掌握霉菌、酵母菌的检验方法。掌握孟加拉红的配制。掌握霉菌、酵母菌的判断及计数。

霉菌和酵母菌检测方法

霉菌和酵母菌检测方法
常见的霉菌和酵母菌检测方法包括以下几种：
1. 直接镜检法：采集被检物表面样品，然后在显微镜下直接观察样品中是否存在霉菌和酵母菌。

2. 培养法：将样品分别接种在含有适当营养物质的培养基中，然后在一定条件下培养，观察生长情况，判断其中是否有霉菌和酵母菌。

3. PCR检测法：对样品中的霉菌和酵母菌的特定基因进行PCR扩增，并通过电泳等技术检测扩增产物的种类和数量。

4. 气相色谱法：通过分析样品中的挥发性有机化合物，判断其中是否存在霉菌和酵母菌。

5. 快速检测法：利用特定化学试剂或生物标记物，在短时间内快速检测样品中的霉菌和酵母菌。

霉菌和酵母菌检验方法验证报告

方法验证报告方法验证报告一、方法依据/原理1.1方法依据：化妆品安全技术规范（2015）第五章 6 霉菌和酵母菌检验方法1.2原理：化妆品检样在一定条件下培养后，1g或1mL化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，藉以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。

本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置28℃±2℃培养5d，计算所生长的霉菌和酵母菌数。

二、使用范围2.1适用于化妆品霉菌和酵母菌的测定。

三、设备情况表1使用仪器设备一览表表2标准物质和关键物料登记表四、环境条件情况表3环境条件五、人员能力情况表4相关人员六、方法验证/确认情况6.1 实验步骤6.1.1样品前处理6.1.1.1液体样品：水溶性的液体样品，用灭菌吸管吸取 10mL 样品加到 90mL 灭菌生理盐水中，混匀后，制成 1：10检液。

6.1.1.2油性液体样品：取样品10g，先加5mL灭菌液体石蜡混匀，再加10mL灭菌的吐温80，在40℃—44℃水浴中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐水75mL（在40℃—44℃水浴中预温），在40℃—44℃水浴中乳化，制成1：10的悬液。

6.1.1.3膏、霜、乳剂半固体状样品：亲水性的样品：称取10g，加到装有玻璃珠及90mL灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡混匀，静置 15min。

用其上清液作为 1:10 的检液。

疏水性样品：称取10g，置于灭菌的研钵中，加10mL灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加入10mL灭菌吐温 80，研磨待溶解后，加70mL灭菌生理盐水，在40℃—44℃水浴中充分混合，制成 1：10 检液。

6.1.1.4固体样品：称取10g，加到90mL灭菌生理盐水中，充分振荡混匀，使其分散混悬，静置后，取上清液作为1：10 的检液。

使用均质器时，则采用灭菌均质袋，将上述水溶性膏、霜、粉剂等，称10g 样品加入90mL灭菌生理盐水，均质1min—2min；疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g样品，加10mL灭菌液体石蜡，10mL吐温80，70mL 灭菌生理盐水，均质3min—5min。

20 观察酵母菌和霉菌

2、用解剖针挑取少许长有孢子的菌丝，制成临时装片，置于显微镜下观察，注意观察菌丝有没有颜色，直立菌丝的顶端有没有扫帚状的孢子囊以及孢子的着生状态和颜色
扫帚状孢子囊
放射状孢子囊
观察酵母菌
1、取一滴酵母菌培养液，滴在载玻片上，盖上盖玻片，用显微镜观察。 2、在盖玻片的一侧滴一滴碘液，用吸水纸从另一侧吸引，对酵母菌进行染色。在显微镜下能看到酵母菌细胞中染上颜色的细胞核和淀粉粒。有的细胞上长出大小不一样的突起。这就是酵母菌在进行出芽生殖。
Hale Waihona Puke 酵母菌观察霉菌1、从培养皿中取一块长有青霉的橘子皮，垫上白纸，用放大镜观察。直立的白色绒毛— —直立菌丝；顶端长有的成串的青绿色—— 孢子。

06-食品中酵母菌、霉菌测定

知识点：果汁中酵母菌、霉菌测定情境：微生物检测技术任务：酵母菌、霉菌测定课程：食品微生物技术酵母菌、霉菌测定原理一、霉菌、酵母菌什么叫霉菌、酵母菌？❞霉菌：为丝状真菌的统称。

凡是在营养基质上能形成绒毛状、网状或絮状菌丝体的真菌（除少数外），统称为霉菌。

❞酵母菌：一些单细胞真菌。

一种肉眼看不见的微小单细胞微生物，能将糖发酵成酒精和二氧化碳，分布于整个自然界，是一种典型的兼性厌氧微生物，在有氧和无氧条件下都能够存活，是一种天然发酵剂。

二、霉菌、酵母菌测定原理❞霉菌和酵母菌菌数的测定是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1mL检样中所含的霉菌和酵母菌菌落数（粮食样品是指1g粮食表面的霉菌总数）。

❞霉菌和酵母数主要作为判定食品被污染程度的标志，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。

本方法适用于所有食品。

酵母菌、霉菌测定原理与菌落总数测定类似，选用平板菌落计数法。

平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。

统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。

酵母菌、霉菌测定步骤1.液体样品稀释以无菌吸管吸取25 mL样品至盛有225mL无菌稀释液（蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液）的适宜容器内（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）或其他无菌均质袋中，充分振摇或用拍击式均质器拍打1 min～2min，制成1:10 的样品匀液。

2.梯度稀释❞取1 mL 1:10 样品匀液注入含有9 mL 无菌稀释液的试管中，另换一支1 mL 无菌吸管反复吹吸，或在漩涡混合器上混匀，此液为1:100 的样品匀液。

❞按上述操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。

每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。

四、倒平板❞根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。

霉菌和酵母菌菌数检验技术

2.7 旋窝混合器
2.8 无菌平皿：直径90mm
2.9 恒温水浴箱：46℃±1℃
2.10 显微镜：10倍~100倍
2.11 微量移液器及枪头：1.0mL
2.12 折光仪
2.13 郝氏计测波片：具有标准计测室的特制玻片 2.14 盖玻片 2.15 测微1器：具标准刻度的玻片
2.2 旧版本均振荡式进行样品表面冲洗，均质不够。使用旋转刀均质器，可能会切断霉菌菌丝体。 2.6 无菌试管规格由10mm×75mm，修改为18mm×18mm，有利于样品稀释液混匀。 2.7 增加漩涡混合仪，可以保证样品稀释液的混匀，减少污染机会。过去使用移液器或移液管反复吹吸样品及稀释液，会造成有害溶胶，以及增大污染风险。 2.9 增加恒温水浴，准确控制倾注琼脂的温度。 2.11 增加微量移液器及枪头1.0mL：包容实际工作中常用方式。删除500mL无菌广口瓶，原因：包括牛皮纸袋在内的包装材料实验室使用频率越来越低。删除：冰箱和恒温振荡器：标准没有用到。
生物学检验方法第3部分：酵母、霉菌菌落计数》
本标准与GB 4789.15-2010相比，主要变化如下：
—修改了设备和材料；
—修改了培养基和试剂；
—修改了检验程序和操作步骤； —修改了附录A；
—修改了结果与报告； —附录B修改为第二法
1 范围
GB 4789.15-2016 标准解读
规定主题内容与适用范围
5 操作步骤
GB 4789.15-2016 标准解读
5.2 培养待琼脂凝固后，正置平板，置28 ℃±1 ℃培养箱中培养，观察并记录培养至第5d的结果。
新版本：增加了平板正置培养的规定。正置培养是避免反复观察的过程中，上下点到平板导致霉菌孢子扩散形成此生小菌落的一种手段。

细菌、霉菌、酵母菌检查标准操作规程

细菌、霉菌、酵母菌检查标准操作规程细菌、霉菌、酵母菌检查是微生物学实验室常用的一项技术，用于确定食品、饮料、药品、环境样品等中是否存在这些微生物。

细菌、霉菌、酵母菌都是常见的微生物，它们在生物学和工业上具有重要的作用。

本文将以标准操作规程的形式详细介绍细菌、霉菌、酵母菌检查的步骤和要求。

一、实验前准备1.环境准备：实验室环境要保持清洁、无尘、无飞虫等干扰因素，确保实验的准确性。

2.器材准备：准备好必要的实验器材，包括培养基、试剂、仪器设备等。

3.样品准备：样品应遵循卫生标准及实验要求，确保样品的可靠性和代表性。

二、样品处理1.样品消毒：将样品进行适当的消毒处理，以消除外源性微生物的干扰。

2.预培养：将样品接种到含有适宜培养基的试管中，进行预培养，以增加微生物的数量。

三、分离与纯化1.罩口接种：将样品中微生物接种到含有相应培养基的平板上，通过罩口接种的方式，避免次生污染。

2.培养条件：根据微生物的特性，设置适宜的培养温度、时间和培养基组成等条件，促进微生物的生长。

3.单菌分离：观察接种后的菌落形态和特征，选取单菌落转接到新的培养基上，以实现纯化。

四、鉴定与检测1.形态观察：观察菌落形态、边缘、颜色、透明度等特征，与已知细菌、霉菌、酵母菌的特征进行比对。

2.生理生化试验：通过一系列的生理生化指标和试验，如盖氏染色、革兰氏染色、培养基反应等，对菌株进行进一步鉴定。

3.分子生物学检测：采用PCR、序列比对等分子生物学技术，对菌株进行分子水平的鉴定。

五、结果处理与分析1.定量分析：根据菌落的数量和菌落形状比例，计算并报告样品中细菌、霉菌、酵母菌的数量。

2.图像记录：对鉴定结果进行拍照记录，确保结果的真实性和可追溯性。

六、质量控制1.消毒控制：实验室应定期对实验环境进行消毒处理，保持无菌状态。

2.正负对照：每次实验都应设置正、负对照，确保实验结果的准确性和可靠性。

3.重复实验：对怀疑结果的样品可以进行重复实验，验证结果的可靠性。

菌落总数、霉菌和酵母菌总数等微生物检验方法

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霉菌与酵母菌检验

2.1真菌毒素对我国农产品的影响
我国是一个农业大国，小麦、玉米、大米及花生等是居民的主要食品原料，各类粮油食品均不同程度地被真菌及其毒素污染，几乎所有的真菌毒素在我国农产品中均可检出。我国每年约有2%的（二千五百万公斤）的粮食因受真菌毒素污染而不能食用。
青霉毛霉
分布广
墙壁上的霉菌
青霉
报告
一、检验程序
检样→处理→稀释→平板分离培养 →菌落计数→报告
二、操作要点
（一）、采样
1、粮食(包括粮库贮粮，粮店或家庭小量存粮) 样品的采集，可根据粮囤或粮垛的大小和类型，分层定点取样，一般可分三层五点，或分层随机采取不同点的样品，充分混合后，取500g左右送检。小量存粮可使用金属小勺采取上、中、下各部位的混合样品。
霉菌在孟加拉红培养基上典型特征为红色菌落，有黑色孢子。
检测中的注意事项：
1、取样的代表性。
2、取样工具的无菌。
空气中霉菌的孢子含量很高，所以，取样的工具、容器等要经过严格的高压灭菌。
3、检样的方法。
（1）、由于霉菌易被携带，所以，检样时操作人员应尽量避免自身携带的可能。
（2）、样品的均质及充分振摇。因为有些孢子是连成串的，故均质和振摇能使其充分散开，同时，在各梯度连续稀释时，也要用灭菌吸管反复吹吸几次，使孢子充分散开。
3、取1ml 1∶10稀释液注入含有9ml灭菌水的试管中，另取一支1ml灭菌吸管吹吸五次，此液为 1∶100稀释液。
4、按上述操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。根据食品卫生标准要求或对污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml 稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。

霉菌酵母菌检验

液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品置盛有225ml无菌稀释液（蒸馏水或磷酸盐缓冲液或生理盐水）的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中混匀，为1:10样品匀液。
用灭菌吸量管吸取1∶10稀释液10mL，注入试管中，另用带橡皮乳头的1mL灭菌吸量管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。
取1mL1∶10稀释液注入含有9mL灭菌水的试管中，另换一支1mL灭菌吸量管吹吸5次，此液为1∶100稀释液。
（3）如大于或等于100时，则报告前面两位有效数字，第三位数按四舍五入计算。
（4）称重检样以克CFU/g为单位报告，体积取样以毫升CFU/ml为单位报告
三、霉菌直接镜检计数法
（1）流程
取样→称样→稀释→调节视野→涂片→观察→记录→计算 4步骤
（2）检样制备
取定量检样，加蒸馏水稀释至折光指数为1.344～1.3460（即浓度为7.9～8.8％）。用糖度计或折光仪测定折光指数或浓度，如果折光指数过大或过小，须加水或样品，直至配成标准样液，才能进行检验。
菌落计数
根据试验结果，报告检测结果试样中酵母菌数是微生物指标≤20cfu/ml产品合格
（注：可编辑下载，若有不当之处，请指正，谢谢!）
霉菌数（％）＝ ×100％
举例：记录的阳性视野数，片1为15，片2为16，
则样品的霉菌数为：样品霉菌数（％）＝ ×1/2×100％＝31％
（9）注意事项
部颁标准为阳性视野不超过40％，在国际贸易中，合同上无要求时按部颁标准执行，合同上有要求时按合同执行;每抽取一罐样品制两个片子，每片观察50个视野，如果超过标准指标，应该继续制片，但片子数量不得少于3片即150个视野，如果计测结果相近时，可取其平均值;如对抽样结果有异议，应加倍抽样。全部合格，作为合格处理，其中有一罐不合格，该批作为不合格处理。