第五讲2 中药及其制剂定量分析的方法学
中药及其制剂的定性鉴别方法.ppt
3、色谱条件
选择原则： 在某一规定条件下将检品制成清晰、圆整， 比移值（Rf值）稳定、可重复操作的色谱 图谱
3、色谱条件
吸附剂:硅胶CMC 展开系统：无水乙醇－苯（1：4）、苯－
氯仿（1：3）、丙酮－甲醇（1：1） 可根据被分离目标物质的性质和图谱实际 情况再进行调整 显色方法:先在紫外光下观察有无荧光斑点
其次显色剂显色观察
谢 谢！
应用：
药材及炮制品的外形鉴别特征不明显或外 形相似难于鉴别而组织构造不同；
药材破碎或呈粉末不易肉眼辨认或区分；
含原药材粉末的中药制剂。
显微鉴别方法：
《中国药典》2000版一部附录 “药材和成方制剂显微鉴别法”
特点：快速、简便 要求：显微特征具专属性，
显微特征明显、易查见 多来源药材应选择其共有的显微特征 取样应注意代表性
（一）显微化学反应法
取药材切片或粉末，置载玻片上，滴加各 种试剂，加盖玻片，在显微镜下观察产生 的结晶，沉淀物，以及特殊的颜色变化， 作为鉴别特征。
也可取粉末浸提液少许于载玻片上，滴加 溶剂，显微镜下观察。
（二）微量升华法
操作方法：
取金属片，置具有直径约2cm圆孔的石棉 板上，金属片上 放一高约8mm的金属圈, 对准石棉板的圆孔，圈内放置一薄层药材 粉末，圈上覆盖载玻片， 在石棉板圆孔下 用酒精灯缓缓加热，至粉末开始变焦，去 火待冷，载玻片上有升华物凝 集。将载玻 片反转后，置显微镜下观察结晶形状、色 泽，或取升华物加试液观察反应。
举例：左金丸
组成：黄连、吴茱萸 显微镜下观察：纤维束鲜黄色，壁稍厚，
纹孔明显。非 腺毛1～9细胞，有的充满红 棕色物；腺毛头部多细胞，椭圆形，含棕 黄色至棕红色物， 柄2～5细胞。 上述特征中，黄色纤维束为黄连的主要特 征，腺毛则是吴茱萸的特征。
中药分析 第五讲-中药含量测定与方法学验证.
该法又分为反射法或透射法测定。实际工作中常用
ห้องสมุดไป่ตู้
适用于有荧光性质的成分，例如小檗
碱等。该法仅采用反射法测定，其灵敏度比吸收法
测定波长
（1）单波长 （2）双波长 主要用于吸收测定法 。可消除背景干 （1）单波长 用于荧光测定法，即用某一波长的 紫外光（激发光）进行扫描。 扰，对玻板和斑点的质量要求不高。 （2）双波长 扫描斑点，所测吸收度为ΔA=Aλs
Agilent 6890
Shimadzu 14 B
常用的几种检测器
1. 热导检测器(TCD); 2. 氢火焰离子化检测器(FID); 3. 电子捕获检测器(ECD); 4. 火焰光度检测器(FPD); 5. 氮磷检测器（NPD）也称热离子检测器(Thermionic
detector, TID);
6. 原子发射检测器(AED) 7. 质谱检测器（MSD）
溶液制备
制备 用水蒸汽蒸馏法提取石菖蒲中的挥 发油,称取适量,以α-萘酚,以甲醇溶解,进 样。 � 对照品溶液 称取α-细辛醚、β-细辛醚 对照品适量,加0.2mg·ml– 1 α-萘酚的甲 醇溶液制成含α-细辛醚0.1mg·ml- 1的对 照品溶液(1) 和含β-细辛醚0.5mg·ml- 1 的对照品溶液(2) 。
让我们学习一下操作HPLC吧！！
常用HPLC模式和仪器配置
模式
吸附 键合相 离子交换 尺寸排阻 疏水作用 亲和
色谱柱
C18 C8 Phenyl CN NH2 SiO2 -SO3H
泵
一元 二元 三元 四元
检测器
UV PDA FL RI EC ELSD MSD
反相色谱中极性和保留时间的关系
固定相：C1 固定相：C8 固定相：C18
中药及其制剂分析 PPT课件
中药注射剂及有效部位： tR≤30 min, As/At≥20% RSD%≤±20%
20%>As/At≥10% RSD%≤±25% 10%>As/At≥5% RSD%≤±30% As/At<5% 峰面积比值不作要求，但 必须标定tR tR>30 min, As/At≥10%
3、重现性－不同实验条件、不同分析人 员对样品的测定误差的允许范围－用相似 度表示
二、指纹图谱的类型
1、按测定手段分类
中药化学成分指纹谱－采用色谱、光谱及其他 分析方法建立的用以表征中药化学成分特征的指 纹图谱。
中药生物指纹谱－利用生物技术建立的中药 DNA、中药基因组学和中药蛋白组学指纹图谱。
生物活性指纹图谱：是指中药或中药制剂作用 于某特定细胞或动物后，引起基因和蛋白的复杂 变化
中药及其制剂的含量测定
含测目标的选取原则： 1、弄清楚成分类别、有效成分和指标性成分 2、复方制剂应首选君药及贵重药建立含量测定方法 3、含有毒性药材的必须建立含测项目，应进行重点研究 4、有效成分或指标成分清楚的，应首选测定其含量 5、测定成分应尽量与中医理论、用药的功能主治相近 6、测定成分应考虑与生产工艺的关系 7、测定应归属于某单一药材，若复方中多种药材都含有 则不应选为定量指标 8、确实无法知道成分的，可测定药物的总固体量
微波辅助萃取（Microwave-assisted extraction MAE）：是利用微波产生的能量快速破碎植物 细胞而使化学成分释放进入溶剂中的一种方法。
超临界流体萃取（Supercritical fluid extraction SFE）
中药及其制剂的含量测定方法汇总
中药及其制剂的含量测定方法汇总1.总生物碱含量测定总生物碱含量是中药中常见的一个参数，常用的测定方法是滴定法和酸碱滴定法。
滴定法是将适当加量的酸作用于中药样品中的生物碱，再用酸碱指示剂滴定至终点，通过计算滴定的酸量，计算出总生物碱含量。
而酸碱滴定法则是先将中药样品中的生物碱与酸反应生成盐，再进行滴定，计算出总碱量。
2.总多糖含量测定总多糖含量是中药中常见的活性成分之一，常用的测定方法是酸水解法和酚硫酸法。
酸水解法是将中药样品加入酸溶液中进行水解，然后用酚硫酸试剂加热反应，再用后硫酸染色，并利用分光光度计测定多糖含量。
而酚硫酸法则是将中药样品用酚硫酸试剂加热反应形成紫色复合物，然后用分光光度计测定复合物的吸光度，从而测定总多糖含量。
3.总黄酮含量测定总黄酮含量是中药中的重要指标之一，常用的测定方法是铝盐比色法和斯奈普斯方法。
铝盐比色法是将中药样品与铝盐反应形成结合物，然后测定结合物的吸光度，从而计算出总黄酮含量。
斯奈普斯方法则是将中药样品与氧化氢酶反应生成发色物，再利用分光光度计测定发色物的吸光度，从而测定总黄酮含量。
4.总皂苷含量测定总皂苷含量是中药中常见的一个指标，常用的测定方法是荧光法和高效液相色谱法。
荧光法是将中药样品与荧光试剂反应发生荧光化学反应，然后利用荧光分光光度计测定荧光强度，通过标准曲线计算出皂苷含量。
高效液相色谱法则是将中药样品中的皂苷通过色谱柱进行分离，再利用紫外光检测器进行检测，从而得到皂苷的含量。
5.总生育酚含量测定总生育酚含量是中药中重要的抗氧化成分，常用的测定方法是巴氏法和分光光度法。
巴氏法是将中药样品与酸反应形成络合物，然后利用巴氏试剂滴定至红色终点，从滴定量计算出总生育酚含量。
分光光度法则是将中药样品与化学试剂反应形成发色物，然后利用分光光度计测定发色物的吸光度，从而计算出总生育酚含量。
综上所述，中药及其制剂的含量测定方法多种多样，根据不同的中药成分，选择合适的测定方法可以确保测定结果的准确性和可靠性。
中药制剂分析方法
中药制剂分析方法
中药制剂分析方法是用来确定中药制剂中活性成分的含量和质量的科学方法。
常用的中药制剂分析方法包括以下几种：
1. 高效液相色谱法（HPLC）：可以用于检测和测定中药制剂中的活性成分。
通过溶解样品并通过色谱柱分离，再用紫外光或荧光检测器进行测定。
2. 气相色谱法（GC）：适用于分析挥发性成分和揮發性油类中的活性成分。
通过将样品蒸发到气相色谱柱中进行分离和测定。
3. 索氏萃取法：用于提取中药制剂中的活性成分。
通过在适当的温度下将样品与溶剂连续地浸泡，使活性成分从中药制剂中溶解到溶剂中。
4. 稳定同位素示踪技术（SIDMS）：用于确定中药制剂中活性成分的来源和质量。
通过分析中药制剂中同位素含量的比值来确定活性成分的来源。
5. 核磁共振法（NMR）：用于分析并鉴定中药制剂中的活性成分。
通过检测样品中成分的核磁共振信号来确定其结构和含量。
以上方法仅为常用的中药制剂分析方法之一，根据不同的需求和样品类型，还可以使用其他各种分析方法进行中药制剂的质量评价。
中药制剂分析.pptx
缺点：受热易分解的成分不宜使用。
保和丸（陈皮等）中橙皮苷测定 加甲醇，加热回流至提取液无色为止。
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（四）超声提取法
• 原理：超声波的助溶作用。 • 优点：操作简便，提取速度快。 ※ 需对超声频率、提取时间、提取溶媒等
进行考察。 ※ 超声波可能引起供试品成分的改变。
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优点：操作简单，适于热不稳定的样品，且提取杂质少。 缺点：费时（12~24 h）、费溶剂（10~50倍）。
灵宝护心丹（牛黄、麝香等）中胆酸的含量测定 取本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶
中，加石油醚（60-90℃）4ml，浸泡1小时，滤过，滤渣及滤 纸挥去溶剂，放回锥形瓶中，精密加入冰醋酸无水乙醇溶液 （1 → 10）15ml，摇匀，密塞，称定重量，浸泡12小时，再 称定重量，用冰醋酸无水乙醇溶液（1 → 10）补足减失的重 量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
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（二）蒸馏法
利用某些被测成分具有挥发性，可采用蒸馏法，收集馏出 液进行含量测定，或某些成分经蒸馏分解生成挥发性成分，利 用分解产物（要求结构明确）进行测定。
• 适用于具挥发性的待测组分，如挥发油、小分子 的生物碱、丹皮酚等。
• 最常用水蒸气蒸馏法 –共水蒸馏法(直接加热法) –通水蒸气蒸馏法 –水上蒸馏法
第五章
中药制剂的含量测定
第五章 中药制剂的含量测定
（Content Determination）
★ 含量测定的定义和意义
中药制剂的含量测定系指用化学、物理学或生物学的方 法对中药制剂含有的有关成分进行检测，以评价中药制剂 质量的优劣。
随着现代分析技术的发展和应用，中药定量分析在系统 性、科学性和先进性方面较以前有大幅度提高，在量化指 标方面正在由测定指标成分向测定活性成分转变，由单一 指标成分向有效成分、多指标成分转变。
第二章中药材及其制剂分析的一般步骤
第二章中药材及其制剂分析的一般步骤中药材及其制剂的化学成分是相当复杂的，包括各种类型的无机物和有机物。
其中某些成分有生理活性，有些无活性，亦有的有毒副作用，这些成分共存于同一体系中，特别是复方制剂，各成分之间存在着相互间的作用和变化，这就使中药药物分析面临着十分艰巨的任务，所以对复杂混合体系的分析是共特点一般例行分析中，中药药物分析中，中药分析的一般步骤为：取样→样品制备→鉴别→检查→含量测定→第一节分析样品的制备一、取样及处理中药药物在分析测试之前，首先是取样和样品备，供试样品必须具有代表性、真实性、均匀合理。
一般的应从每个包装的四角及中央五处取样。
深度达1/3~2/3处，取得的样品装入清洁、干燥、具有磨口的容器中或塑料袋中，并标上品名、批次、取样日期、取样人等。
取样人员应熟悉各类中药及其制剂的理化性质，对外观性状已发生变化者，应分别取样，装入不同的容器中。
各类分析样品取样大致如下：1中药材：中药材样品要自然干燥，粉碎，、过筛、粒度在80-100目，按四分法混合均匀。
根据Q=kd2的经验公式取出三份样品，即供试样品，送检样品，保存样品各100g,取样量原则上至少应满足三次分析实验用。
贵重药材可酌情取样Q=kd2式中：Q——应取试样的最低量（kg）k——实验因, 随物质而定，其数值介于0.1-0.5之间d——样品最大颗粒的直径（mm）例 1 有一试样，其为k为0.2，最大颗粒直径为1mm，则取样量为：Q=kd2=0.2×12=0.2kg=200g.若研细至d=0.14mm，则Q=0.2×0.142=3.9g此式反映了最低取样量与物料颗粒细度有关。
即颗粒愈粗，应取样量愈大。
根据我国1985年由中国医药工业公司从实际生产出发，制定的《药品生产管理规范实施指南》规定的“质量管理”为第二项规定抽样办法：凡原辅料总件数（桶、箱等）n≤3时，每件分别抽样；n≤300时，抽样量为n+1；n>300时，抽样量为 n +1。
中药分析学
中药分析学
中药分析学是一门研究中药材及其制剂的分析方法和技术的学科，其目的是研究中药材及其制剂的理化性质，化学成分和含量，以控制质量和安全使用。
中药分析学包括中药本质性研究、中药组分研究、中药活性成分研究和中药毒性成分研究。
中药本质性研究是指对中药材及其制剂物理性状和化学性状的研究，包括外观、旋光性、嗅觉、流动性、溶解性等物理性状，及化学组成和结构、熔点、溶解度、沸点及其子组成物等化学性状的研究。
要进行本质性研究，常用仪器包括容积测定仪、熔点仪、比重秤、易溶度测定仪和光度计等。
中药组分研究是指对中药材及其制剂里面的化学组成物进行研究，确定其各成分的含量、比例及定性、定量。
要研究中药组分，主要应用分光光度法、离子色谱法、紫外-可见分光光度法、气相色谱法和高效液相色谱法等。
中药活性成分研究是指从药物材料或制剂中发现并确定具有特定生物活性的化学组分，以及该组分的特性、含量、活性剂量和形态等。
要研究中药活性成分，主要应用仪器有中药抗氧化活性测定仪、光度计、电导率示波仪和飞行时间质谱仪等。
中药毒性成分研究是指研究中药成分的毒性。
中药及其制剂分析2
中药制剂分析的一般程序
取样
鉴别
检查
含量测定
精选课件
含量测定
测定项目的选定原则
1 首选君药及贵重药、剧毒药建立含量 测定方法 2 其次考虑臣药及其他味药 3 有效成分明确的，可选有效成分 4 成分类别清楚的，可测某一类总成分 的含量
精选课件
5检测成分应归属某单一药味 6检测成分应与中医用药的功能主治相近 7无法含量测定的，可测定浸出物含量
（1）薄层板 均匀、平整
（2）点样量 （3）斑点
准确 应完全分离，不拖尾
（4）显色剂 均匀、适当
（5）保护斑点 用相同大小洁净玻璃盖住薄 层板，并用透明胶纸封住边缘，以起固定和隔
绝空气作用
精选课件
（四）HPLC法 外标法和内标法
RP - HPLC 色谱柱 ODS 流动相 甲醇 - 水
PIC 反离子 氢氧化四丁基铵
低
精选课件
薄层色谱法
薄层酶抑制法----利用某些有机磷农药对胆碱
酯酶具有抑制作用，且酶的基质(β-醋酸萘酯) 水解产物能与特定显色剂结合呈紫色反应原理， 在已有农药展层的薄层板上，其农药斑点部位 因酶的活性被抑制，基质不被水解，不引起呈 色反应，能在薄层板上衬出无色斑点，根据斑 点大小，经扫描测定残留量。
氨基甲酸酯类：萘基氨基甲酸酯类（西维因）、 杂环甲基氨基甲酸酯类（呋喃丹）、涕灭威等
拟除虫菊酯类
精选课件
农残的特性
中药材中农药残留污染具有普遍性 种植药材中农药残留量较高，而野生药材中仅有痕
量检出 中成药中农药残留量一般较低 同一地区的同种药材、同一药材的不同部位农药残
留量也有较大的差异 不易发生急性中毒事件 有机磷和氨基甲酸酯类农药检出率较低，残留量也
中医方剂功效定性和定量分析再探
中医方剂功效定性和定量分析再探背景中医方剂是在中医理论指导下应用多种草药配制而成，具有一定疗效的药物组合。
方剂学是中医学重要的组成部分，其中的功效定性和定量分析是评价方剂临床疗效的重要方法之一。
在临床应用中，对方剂功效的准确把握有利于判断方剂的适应症、治疗效果及不良反应，从而为中医方剂临床应用提供科学依据。
中医方剂功效定性中医方剂功效的定性是通过分析方剂药物组成、药性、归经等因素，综合判断方剂的主治作用和疗效。
中医学认为，方剂药物组成是方剂功效的基础，而药性则是指草药的性质和功效特点。
草药归经是根据中医理论而归纳出来的一种分类方式，主要是根据草药性味特点和疗效归属于某些经脉。
中医方剂功效的定性研究，一般采用比较试验、复核试验、临床观察、报导观察、客观检测等多种方法。
这些方法能够从不同角度、不同方面获得方剂的功效信息，对方剂功效定性具有重要意义。
中医方剂功效定量分析中医方剂功效的定量分析是指通过检测特定指标，对方剂的功效进行量化、评价和比较。
常用的接触化学计量学、生物信息学和免疫测定等方法，能够从分子水平、细胞水平和组织器官水平等多个层次评价中药的药理学作用和临床疗效。
接触化学计量学是一种主要应用于分析化学和药学领域的方法，通过建立数学模型对草药中关键成分进行分析。
针对某些指标分析统计样品特定信息的数量水平及其分布，从而获取原有的指标之间的关系。
生物信息学则是将计算机技术应用于生物学领域中的学科，通过对草药的基因数据、蛋白质数据等信息的定量分析，可以揭示中药物质的作用方式及生物效应。
免疫测定是一种比较成熟的检测方法，其通过检测血浆、血清、唾液、尿液等生物液体中的特定抗体或抗原，确定药物或生物分子的浓度。
中医方剂功效的定量分析较为复杂，需要多学科、多技术的综合运用，但结果的客观性和精准性比较高，能够为方剂的临床疗效和毒副作用提供重要的评价信息。
结论中医方剂功效的定性和定量分析，是评价方剂的临床疗效和毒副作用的重要方法之一。
药学专业中药学的定性与定量分析方法探讨
药学专业中药学的定性与定量分析方法探讨药学专业中的中药学是研究中药的性质、成分、功效和应用的学科。
在中药学研究中，定性与定量分析是非常重要的方法。
本文将探讨药学专业中药学的定性与定量分析方法，以及其在中药研究中的应用。
一、定性分析方法定性分析是通过观察和比较样品的性质、形态、色泽等特征，来确定其成分和性质的方法。
在中药学中，定性分析常用于鉴别中药材的真伪和质量。
以下是几种常见的定性分析方法：1. 宏观鉴别法：通过观察中药材的外观特征，如形状、大小、颜色等，来判断其真伪和质量。
例如，黄芩的外观应为黄色，若发现颜色异常，则可能为假冒品。
2. 显微镜鉴别法：利用显微镜观察中药材的细胞结构和组织特征，来鉴别其真伪和质量。
例如，黄连的表皮细胞应有明显的蓝色细胞壁，若观察到细胞壁缺失或变形，则可能为假冒品。
3. 化学试剂鉴别法：通过与特定化学试剂的反应，来鉴别中药材的成分和性质。
例如，用碘液滴在地黄片上，若出现紫色或蓝色反应，则说明含有甾体类化合物。
二、定量分析方法定量分析是通过测定样品中特定成分的含量，来确定其质量和功效的方法。
在中药学中，定量分析常用于评估中药制剂的含量和药效。
以下是几种常见的定量分析方法：1. 薄层色谱法：将样品溶解后，在薄层色谱板上进行分离，然后用特定显色剂显色，并通过比色法测定色斑的强度，来计算样品中目标成分的含量。
2. 高效液相色谱法：将样品溶解后，通过高效液相色谱仪进行分离，然后根据峰面积或峰高来计算样品中目标成分的含量。
该方法具有灵敏度高、分离效果好的优点。
3. 气相色谱法：将样品挥发后，通过气相色谱仪进行分离，然后根据峰面积或峰高来计算样品中目标成分的含量。
该方法适用于挥发性物质的定量分析。
三、定性与定量分析方法的应用定性与定量分析方法在中药学研究中有着广泛的应用。
定性分析方法可以用于鉴别中药材的真伪和质量，确保中药材的安全有效；定量分析方法可以用于评估中药制剂的含量和药效，指导中药的合理使用。
中药药物分析方法
中药药物分析方法中药药物分析方法系指对中药草药、中成药、中药注射剂等中药制剂进行质量分析、药效成分分析和毒理学评价的科学方法。
中药药物分析方法的发展和应用对于中药药物研究、质量控制和临床应用都有着重要的意义。
本文将从中药药物分析方法的分类和常用分析方法、中药分析的目的与要求以及中药质量控制的现状进行阐述。
中药药物分析方法按照分析对象的不同可分为中药原料的分析方法和中成药、中药注射剂等中药制剂的分析方法。
中药原料的分析方法主要包括外观检查、显微鉴定、酸碱度测定、含量测定、水分测定、矿物质元素测定和有机物分析等。
而中成药、中药注射剂等中药制剂的分析方法则更加复杂，需包含药效成分分析、残留溶剂分析、微生物限度测试、毒性测定等多个方面。
中药药物分析方法的常用分析方法包括色谱法、质谱法、光谱法、电化学法等。
色谱法包括高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）等，可用于药效成分的分离与测定。
质谱法可用于中药药效成分的结构鉴定。
光谱法包括红外光谱法、紫外光谱法和核磁共振波谱法等，可用于中药药效成分的定性与定量分析。
电化学法则可用于分析中药草药中的重金属离子、有机物和生物分子等。
中药分析的目的与要求主要有两个方面，一是为了评价中药的质量和药效成分，确保中药的安全性和疗效；二是为了指导中药的生产加工和质量控制。
中药药物分析方法在中药质量控制方面起着重要的作用，通过分析药效成分的含量、提取率和纯度等参数，可以为中药制剂的生产提供依据，确保质量的稳定和一致性。
中药质量控制的现状存在一些问题，如中药的制备工艺繁复、草药的批次差异和质量不稳定等。
因此，中药药物分析方法的研究和应用亟待加强，以提高中药质量控制的水平。
同时，还需要完善相关的标准和规范，以确保中药药物分析方法的可靠性和可重复性。
总之，中药药物分析方法的研究和应用对于中药草药、中成药、中药注射剂等中药制剂的质量控制和临床应用具有重要意义。
中药药物分析方法的发展和应用应与中药科学研究和中药生产加工相结合，共同推动中药的发展和创新。
最新中药制剂分析_第五章-中药制剂定量分析技术【医学课件】-药学医学精品资料
第二节 仪器分析法
• 一、HPLC • 二、GC • 三、TLCS • 四、毛细管电泳法 • 五、UV-VIR • 六、AAS
一、HPLC
• （一）基本原理
• 1. 塔板理论 用于计算理论塔板数及理论塔板高度，衡量色谱柱的柱效。在系 统适用性试验中，其理论塔板数不得低于各品种项下规定的最小理论塔板数。
一HPLC
• 反相键合相色谱的流动相常选用下述三种；①部分含水溶 剂：以水为基础溶剂，再加入一定量可与水互溶的有机极 性调节剂(如甲醇、乙脂、四氢呋喃)，有机极性调节剂的 性质及其与水的比例对保留值和分离选择性有影响。适用 于分离中等极性、弱极性药物，常用甲醇－水、乙－水系 统。②非水溶剂：用于分离疏水性物质，尤其在柱填料表 面键合的十八烷基硅量较大时，固定相对疏水化合物有异 常的保留能力，需用有机溶剂，可在乙脂或中加入二氯甲 烷或四氢映哺(称非水反相色谱)。③缓冲溶液：适用于可 溶于水并具可解离特性的化合物，如蛋白质、肽及弱酸、 弱碱类化合物。缓冲液及其pH不同会影响组分的保留值， 常用的缓冲液有三乙胺磷酸盐、磷酸盐、醋酸盐溶液，选 用的pH应使溶质尽可能成为非解离形式，使固定相有较 大保留能力(反相离子抑制色谱)。
80ml，分次洗涤，合并洗液与滤液，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰铵滴定 液(0.1mol/L)，滴定，每1ml硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)相当于10.83mg的氧化 汞(HgO)。本品每含红粉以氧化汞计，应为90～110mg。 • 3. 昆明山海棠片的含量测定 • 取本品60片，除去糖衣，精密称定，研细，取约相当于25片的量，精密称定， 置200ml锥瓶中，加适量硅藻士(每1g中加入硅藻士0.2g)，混匀，加乙醇70ml 加热回流40分钟，放冷，过滤，滤渣加乙醇50ml。加热回流30分钟，放冷滤 过，合并滤液，置水浴上蒸干，残渣加盐酸溶液(1→100)30ml置水浴上搅拌 使溶解，放冷，滤过，残渣加盐酸溶液(1→200)同法提取3次(50ml，15ml， 15ml)，合并滤液于分液漏斗中，加氨试液使溶液呈碱性，用乙醚振摇提取4 次(40ml，30ml，25ml，20ml)，合并乙醚液用水振摇洗涤2次，每次10ml， 乙醚液滤过，滤液置已100℃在干燥恒重的蒸发皿中，在低温水浴上蒸去乙醚， 残渣里加少许无水乙醇，蒸干在，在100℃干燥至恒重，称定重量，计算，即 得。 • 本品每片含总生物碱不得少于1.0mg。
中药及其制剂的含量测定方法汇总
1.2流动相的选择 甲醇－水或乙腈－水的混合水溶液。 分离酸性组分（丹参素、黄芩苷、甘草 酸等），在流动相中加入适量酸，如醋酸、磷 酸；酸性较强的组分，加入反离子试剂氢氧化 四丁基铵等反离子试剂。 分离碱性组分（小檗碱、麻黄碱等）， 在酸性流动相中加入烷基璜酸，有机酸盐， 也可使用无机阴离子，如磷酸盐作为反离子。
应用实例-RP—HPLC法测定桂枝及桂枝茯苓胶 囊中桂皮醛和桂皮酸含量 色谱条件： 色谱柱：Zobax ODS柱（25cm×4.6×44um)； 流动相：乙腈－0．1％磷酸溶液(34：76)； 检测波长285nm； 流速：0．9mL/min； 柱温为室温。
在此条件下样品各组分得到良好分离
精密吸取样品溶液，进样20ul按上述色谱条 件测定3次，按外标二点法计算桂皮醛及桂皮酸的 含量。
合并滤液于分液漏斗，加氨试液， 用乙醚提取四次，合并乙醚液， 用水振荡洗涤2次，滤纸过滤
于蒸发皿中蒸去乙醚，加少许乙醇， 蒸干，在100℃干燥至恒重，称重 （每片含生物碱不得小于1.0mg）。
分光光度法
该法是中药及其制剂含量测定的一种常用方 法，具有灵敏、简便的优点。 由于中药制剂成分复杂，不同组分的紫外吸收 光谱往往彼此重叠、干扰，应此在测定前必须经过 提取、纯化等步骤，以排除干扰。同时应取阴性对 照品在相同条件下测定，应无吸收。 中国药典中，紫外分光光度法主要用于几个最 大吸收波长较高，吸收较强的组分的含量测定，如 小檗碱、芦丁、黄芩苷、丹皮酚等。
缺点:有一定局限性，灵敏度低，操作繁琐， 耗时长，专属性不高，对于微量成分准 确性不理想。
应用实例－昆明海棠片的含量测定 (萃取重量法)
取本品60片，去除糖衣，精密称定，研细， 精密称取适量（约25片），置200ml锥形瓶中
第五讲2 中药及其制剂定量分析的方法学
第五讲2中药与其制剂定量分析的方法学一、提取方法的选择由于在提取过程中参与因素较多，所以一般以正交设计试验筛选提取条件。
(1)提取方式(2)浸泡时间(3)提取时间二、分析方法的选择用于中药含量的测定方法很多，在选用分析方法时，要根据被测成分的性质、干扰成分的性质等因素进行综合考虑。
另外还要考虑方法的灵敏性、准确性和普与性。
中药制剂含量测定大多需用对照品。
(1)国家标准收载的含量测定用对照品(2)国家标准收载的定性鉴别用对照品(3)自制对照品，需经过结构确认、纯度检查和含量测定等几个步骤。
三、测定条件的选择选择的原则要根据仪器性能和测试方法进行选择如化学分析中指示剂种类、指示剂用量与终点颜色的选择；可见分光光度法中显色剂种类、最大吸收波长、显色剂用量、最佳pH值、最佳显色温度、最佳显色时间与线性范围的选择；紫外分光光度法中最佳pH值、最大吸收波长与吸收系数的测定等；薄层扫描法中展开剂选择、显色剂选样、检测方式选择、最大吸收波长选择、仪器的线性比参数选择、测定方式、狭缝宽度、扫描宽度、灵敏度等；气相色谱法中固定相选择、检测器选择、内标物选择、柱效的测定、分离度测定等；高效液相色谱法中固定相选择、流动相选择、检测器选择、最大吸收波长选择（紫外检测器）、内标物选择、柱效的测定、分离度测定等。
四、线性范围试验线性范围试验的意义范围试验目的有以下三种。
(1)确定样品浓度或样品量与响应值是否呈线性关系(2)确定样品浓度或样品量的线性范围(3)考察标标准曲线是否通过原点，以便确定采用一点法或二点法定量相关系数r五、稳定性试验六、精密度试验RSD(七、重复性试验)八、耐用性试验九、灵敏度分析方法的灵敏度是指单位浓度（或量）与响应值的比值。
检测限：以信噪比来确定检测限的最低水平。
十、空白试验空白试验是消除测定过程中系统误差的一个重要手段。
空白试验是在不加试样的情况下，按照试样的分析步骤和条件而进行分析的试验。
在中药制剂分析中，因为常常是测量成药中某一味中药中的某一比学成分，要想得到真正的“空白”比较困难。
第五章中药制剂分析总论0529ppt-长春中医药大学
（4）薄层色谱的扫描定性鉴别 TLC展开后，斑点的检识 方法，有通用性的，如在紫外光灯下观察出现的荧光，或用 碘蒸气、稀硫酸、磷钼酸显色等，这类方法专属性不强。另 一类是专属性较好的显色剂，例如碘化铋钾试液，茚三酮试 液和三氯化铝试液等，一般可依次说明斑点归属。
（2）展开剂的选择 选用能突出主要斑点，便于分析比较的展开剂，如果 鉴别的对象相同，应首先试用已有的、较成熟的展开剂。
如无现有展开剂，可先以无水乙醇-苯（1∶4）展开，如主要物质的Rf在 0.8以上，改用苯-氯仿（1∶3），如主要物质的Rf在0.3以下，改用丙酮-甲 醇（1∶1）。
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（3）对照品的选择 中国药典(一部)作薄层鉴别用的对 照物有对照品和对照药材两种。
（3）木类 可见导管、管胞、木纤维、木射线及木薄壁细胞。细胞壁 通常均木化。不应有木栓细胞及绿色组织等。
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4.花类 （1）苞片及花萼 构造类同叶片，表面上可见到气孔及毛茸。
（2）花冠 上表皮细胞常呈乳头状或绒毛状突起而无气孔， 下表皮细胞常不呈乳头状， 细胞壁微波状弯曲。 维管束组织细小。 （3）雄蕊 1）花粉囊内壁细胞的壁不均匀地增厚，呈网状、螺旋状、 环纹状及点状等； 2）花粉粒具圆形、长圆形或多面形等多种形状。 通常具内外两层壁，外壁多数具各种雕纹。
丁香切片滴加30％氢氧化钠饱和溶液，略放置，可见油室 内有针状丁香酚钠结晶析出。
肉桂粉末加氯仿2～3滴，略浸渍，速加2％盐酸苯肼1滴，可见黄色针状或 杆状结晶(肉桂酸反应)。
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2.取药材粗粉加适当的溶剂浸提，将浸提液置载玻片上，滴加各 种试剂，加盖玻片，在显微镜下观察反应。
例如： 槟榔粉末0.5g，加水3～4ml及稀盐酸1滴，微热数分钟，过
中药药物分析方法
(ⅳ)样品测定
精密称取约2.5g样品粉末加50ml氯仿回流提取4小 时，常压回收氯仿至干，用60％醋酸溶解，定容 于10ml量瓶中，精密吸取1.0ml样品液于15ml具塞 刻度试管中，按标准曲线项下操作，测峰-谷振幅 值D，按回归方程计算样品中胆酸含量。 本法平均回收率：102.9％，RSD＝0.6％。
第三章
中药药物分析方法
药物分析教研室
控制中药质量，对保证中医临床用药安全、合 理、有效、可靠极为重要。而中药中有效成分含量 的多少与其质量优劣有直接关系，另一方面，含有 毒剧成分的中药，只有严格控制其毒剧成分的含量， 才能确保临床用药的安全和有效。因此，中药成分 的定量分析是中药质量标准研究的核心部分，亦是 质量控制中最能有效考察中药材内在质量的项目， 同时也是中药稳定性考察的依据。
滴定分析法
标准溶液
化学计量关系 指示剂
标准溶液
被测物质
待测溶液
第三节 紫外-可见分光光度法的应用
当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度A与其浓度和 液层厚度成正比， A kbc
即k 为比例系数，与溶液性质、温度和入射波长有关。
当浓度以 g/L 表示时，称 k 为吸光系数，以 a 表 A abc 示，即
激发光谱 测定样品对每一波长的激发光所发射的 荧光强度，以激发光波长为横座标，荧光强度为 纵座标作图，得荧光物质的激发光谱。 发射光谱 从激发光谱上可找到发生荧光最强时的 激发光波长，以此进行激发，将物质发射的荧光 通过单色器分光，测定每一个波长的荧光强度， 以荧光强度对荧光波长作图，得荧光光谱。
（2）荧光光谱的特点
，并对混合液进行测量，得到：
A1=A1a + A1b + A1s A2 =A2a + A2b + A2s 若两波长处的背景吸收相同，即A1s= A2s 二式相减，得，A=(A2a- A1a)+( A2b- A1b) 由于 a 组份在两波长处的吸光度相等，因此， A=( A2b- A1b)=(2b-1b)lcb 从中可求出cb 同理，可求出ca.
《中药分析》
中药分析摘要中药是中国传统医学的重要组成部分，在世界范围内有着广泛的应用。
中药分析是研究中药的成分、质量和功效的方法。
本文将介绍中药分析的基本原理、方法和应用。
1. 中药分析的基本原理中药分析的基本原理是通过化学方法对中药样品中的化学成分进行定性和定量分析。
其中，定性是确定中药中所含化学成分的种类，定量是确定化学成分的含量。
中药的化学成分主要包括活性成分和辅助成分。
活性成分是中药中起到药理作用的成分，辅助成分是对活性成分具有辅助作用的成分。
中药分析的基本原理可以归结为以下几个方面：•分离技术：通过色谱、电泳等分离技术将中药中的化学成分分离出来，便于进一步的定性和定量分析。
•检测技术：通过光谱、质谱等检测技术对分离出的化学成分进行检测，以确定其种类和含量。
•标定方法：通过建立标准曲线，将待测样品的浓度与标准物质的浓度进行比较，从而确定样品中化学成分的含量。
•数据分析：通过统计学方法对实验数据进行分析，得出准确的结果。
2. 中药分析的方法中药分析的方法主要包括物理方法和化学方法。
2.1 物理方法物理方法是指利用物理性质对中药进行分析和检测的方法，主要包括以下几种：•光谱分析：如红外光谱、紫外光谱、核磁共振等，用于对中药中的化学成分进行定性和定量分析。
•质谱分析：通过质谱仪对中药中的化学成分进行分析，可以确定其分子结构和分子量。
•热分析：如差示扫描量热法、热重分析等，用于对中药的热稳定性和热分解过程进行研究。
2.2 化学方法化学方法是指采用化学反应对中药进行分析和检测的方法，主要包括以下几种：•色谱分析：如气相色谱、液相色谱等，用于对中药中的化学成分进行分离和分析。
•其他化学方法：如酸碱滴定法、络合滴定法等，用于对中药中特定成分的含量进行定量分析。
3. 中药分析的应用中药分析在中药研究和生产中有着广泛的应用。
3.1 中药研究中药分析在中药研究中起到了重要的作用。
通过对中药样品中的化学成分进行分析，可以确定中药的质量和纯度，研究中药的药理作用和机制，为中药的研发和改良提供依据。
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第五讲中药及其制剂定量分析的方法学
一、提取方法的选择
由于在提取过程中参与因素较多，所以一般以正交设计试验筛选提取条件。
()提取方式()浸泡时间()提取时间
二、分析方法的选择
用于中药含量的测定方法很多，在选用分析方法时，要根据被测成分的性质、干扰成分的性质等因素进行综合考虑。
另外还要考虑方法的灵敏性、准确性和普及性。
中药制剂含量测定大多需用对照品。
()国家标准收载的含量测定用对照品
()国家标准收载的定性鉴别用对照品
()自制对照品，需经过结构确认、纯度检查和含量测定等几个步骤。
三、测定条件的选择
选择的原则要根据仪器性能和测试方法进行选择
如化学分析中指示剂种类、指示剂用量及终点颜色的选择；
可见分光光度法中显色剂种类、最大吸收波长、显色剂用量、最佳值、最佳显色温度、最佳显色时间及线性范围的选择；
紫外分光光度法中最佳值、最大吸收波长及吸收系数的测定等；
薄层扫描法中展开剂选择、显色剂选样、检测方式选择、最大吸收波长选择、仪器的线性比参数选择、测定方式、狭缝宽度、扫描宽度、灵敏度等；
气相色谱法中固定相选择、检测器选择、内标物选择、柱效的测定、分离度测定等；
高效液相色谱法中固定相选择、流动相选择、检测器选择、最大吸收波长选择（紫外检测器）、内标物选择、柱效的测定、分离度测定等。
四、线性范围试验
线性范围试验的意义
范围试验目的有以下三种。
()确定样品浓度或样品量与响应值是否呈线性关系
()确定样品浓度或样品量的线性范围
()考察标标准曲线是否通过原点，以便确定采用一点法或二点法定量相关系数
五、稳定性试验
六、精密度试验
(七、重复性试验)
八、耐用性试验
九、灵敏度
分析方法的灵敏度是指单位浓度（或量）与响应值的比值。
检测限：以信噪比来确定检测限的最低水平。
十、空白试验
空白试验是消除测定过程中系统误差的一个重要手段。
空白试验是在不加试样的情况下，按照试样的分析步骤和条件而进行分析的试验。
在中药制剂分析中，因为常常是测量成药中某一味中药中的某一比学成分，要想得到真正的“空白”比较困难。
所以常用阴性对照法。
十一、回收率
．加样回收率
即于已知被测成分含量的成药中再精密加入一定量的被测成分纯品
．以成药空白所做的加样回收率
在成药空白(即除去欲测成分的药材后制成的成药)中加入一定量的被测纯品,依法测定。
示例治伤软膏中苦参碱的含量测定
■苦参为豆科植物苦参 .的干燥根，具有清热燥湿，杀虫，利尿的功效。
苦参中主要含生物碱类成分，有：苦参碱()、氧化苦参碱()、槐定碱()、槐果碱()、氧化槐果碱()等
■本研究建立了法测定治伤软膏中苦参碱的含量，以控制治伤软膏的质量。
．试剂和仪器
■高效液相色谱仪；色谱工作站（日本岛津公司）■苦参碱对照品（供含量测定用），批号；氧化苦参碱，批号；槐定碱，批号；氧化苦参碱，批号，均购自中国药品生物制品检定所；
■槐果碱，成都曼思特生物科技有限公司，纯度≥；
色谱条件的选择
固定相的选择
■曾采用苯基柱、、、硅胶柱、和氰基柱，苦参碱、槐定碱和槐果碱均不能达到良好的分离；■考虑到用反相色谱柱时，软膏基质影响色谱柱寿命
■最终参考苦参国家标准中苦参碱、氧化苦参碱的含量测定方法，选用氨基键合硅胶为固定相,本试验采用(×250mm，μ，江苏淮阴汉邦科技有限公司)色谱柱。
流动相的选择
■采用氨基柱，试验了如下几种流动相系统，见表。
最终采用苦参国家标准中苦参碱、氧化苦参碱含量测定用流动相：乙腈无水乙醇磷酸，结合本药实际情况，将比例调整为：：。
检测波长的选择
■采用苦参国家标准中苦参碱、氧化苦参碱的含量测定用波长。
前处理方法的选择
■先后采用甲醇水浴提取法，乙醇水浴提取法，氯仿放置过夜提取法，氯仿振摇提取法，氯仿回流法，氯仿超声提取法。
■甲醇、乙醇水浴提取方法简单，但提取出的成分复杂，干扰苦参碱的测定。
■以氯仿作为提取溶剂提取率高且杂质干扰少，我们比较了以下几种提取方法：氯仿放置过夜提取法、氯仿振摇提取法、氯仿回流法、氯仿超声提取法。
氯仿放置过夜提取和氯仿振摇提取法提取率均不高且操作不便，费时。
通过比较，超声提取和回流提取测得的含量接近，因超声提取操作步骤简单，所以选择此方法处理供试品。
超声时间的考察
冰浴时间的考察
■为了防止软膏中脂溶性基质影响色谱柱寿命，采取冰浴的方式使脂溶性基质尽可能析出，再离心除去。
表冰浴时间的考察
冰浴时间()
测得含量()
试验结果表明：冰浴小时以内不会造成样品含量降低考虑时间长有利于基质析出，最终确定为。
复溶溶剂的选择
■曾选用甲醇作为复溶溶剂，图谱显示对苦参碱峰有干扰，采用流动相复溶没有干扰，所以选择流动相为溶剂。
测定法
■色谱条件及系统适用性以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈无水乙醇磷酸溶液()为流动相；检测波长。
理论板数按苦参碱峰计算应不低于。
■对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品适量，加流动相溶解，制成每含苦参碱μ的溶液，即得。
■供试品溶液的制备取本品内容物约，精密称定，置具塞锥形瓶中，尽可能平铺于底部，加氨水，充分浸润膏体后，精密加入氯仿，密塞，称定重量，60℃超声处理（功率，频率）小时，放冷，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，摇匀，转移至分液漏斗中，分取氯仿层，滤过，精密量取续滤液置烧杯中，80℃水浴蒸干，残渣精密加入流动相，密闭，超声分钟，并时时振摇，所得溶液转移至具塞玻璃离心管中，密塞，置冰浴中静置小时，离心分钟（转分），取上清液作为供试品溶液。
■测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各μ，注入液相色谱仪，测定，即得。
■本品每支含苦参碱（）不得少于。
方法学验证
专属性试验
①空白溶剂的制备
流动相作为空白溶剂：乙腈无水乙醇磷酸（）；
②苦参碱对照品溶液的制备
取苦参碱对照品约，精密称定，置容量瓶中，流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取置容量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量取μ，注入液相色谱仪，测定，即得；
③苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、槐果碱、氧化槐果碱混合对照溶液的制备
分别取上述对照品适量，流动相溶解，摇匀，即得；
④不含苦参的阴性对照供试品溶液的制备
取不含苦参的阴性对照软膏内容物约g，依“测定法”中供试品溶液的制备方法操作，即得；
⑤软膏供试品溶液的制备
定量限
■苦参碱对照溶液稀释浓度为每含的溶液时，色谱图中苦参碱的信噪比约为，所以苦参碱的最低定量限为。
线性试验
■精密称取苦参碱对照品，置量瓶中，加流动相溶解并稀释制成每含μ的溶液，作为贮备液；
■分别精密量取贮备液、、、和于量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，得稀释液()、()、()、()和()。
■分别精密量取各稀释液μ，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定结果见表。
（μ）。