高效液相色谱法测定芍药苷含量的不确定度分析 重点参考

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中国医院药学杂志２００８年第２８卷第９期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，２００８ Ｍａｙ，Ｖｏｌ ２８，Ｎｏ』！
ｍＬ量瓶中，分别取２（）肛Ｌ依次进样，以峰面积积分值为纵坐 标（ｙ），对照品质量浓度（ｍｇ·Ｌ。１）为横坐标（ｘ），进行线性 回归，大黄素的线性方程为Ｙ＝６８ ４１４Ｘ一４ ０２４．９，ｒ＝ ０。９９９ ２，表明在１．１～２２．０ ｍｇ·Ｌ。１内线性关系良好；大黄酚 的线性方程为Ｙ＝１００ ６７０ Ｘ一１６ ６４８，，．＝０．９９９ ７，表明在 １．２～２４．０ ｍｇ·Ｌ１范围内线性关系良好。 ２．２．６精密度试验取对照品溶液，连续进样５次，每次进 样２０弘Ｌ，记录峰面积积分值，结果大黄素ＲＳＤ为１．ｏ ０Ａ；大 黄酚为１．２％。 ２．２．７稳定性试验取对照品溶液，分别在０，２，４，６，２４ ｈ 进样，每次进样２（）肚Ｌ，记录峰面积积分值，结果大黄素ＲＳＤ 为１．３％，大黄酚为１．１％，表明溶液稳定性良好。 ２．２．８加样回收率试验取批号为２００６０８０１的样品粉末６ 份，每份约２ ｇ，精密称定。分别精密加入大黄素对照品液 ０．９ ｍＬ（Ｏ．２２ ｇ·Ｌ。１）、大黄酚对照品液０．４ ｍＬ（０．１２ ｇ· Ｌ１），按“２．２．４”项下操作，测定，结果见表１。 表１ 回收率试验结果（ｎ＝６） Ｔａｂ １ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｒｅｃｏｖｅｒｙ（咒＝６）
［作者简介］王晓飞，女，硕士，主管药师，电话：１３９１０２０９４５２，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｘｉａｏｆｅｉｌ３１７＠１６３．ｃｏｍ
万方数据
中国医院药学杂志２００８年第２８卷第９期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，２００８ Ｍａｙ，Ｖｏｌ ２８，Ｎｏ．０９
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过程的不确定因素分析，并对上述５个因素进行归纳，其不 确定度可以归纳为４个方面：样品制备重复性、对照品溶液 配制、回收和测定精密度的不确定度［４］。 ４．１样品重复配制带入的不确定度取同批样品５份，分 别制备供试品溶液，检测记录芍药苷峰面积，计算样品含量。 ４．１．１ 称量不确定度 从天平校准证书上得到，最大允许
大黄素／ｔ，ｇ·ｇ。１
２２．４ １０．２
！！：垒
大黄酚／ｔ，ｇ·ｇ。
６４．４ ６１．６
！！：：
葸醌类化合物是大黄主要有效成分，分为游离型和结合 型。游离型蒽醌包括大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚 等。本实验采用ＴＬＣ和ＨＰＬＣ法同时进行大黄素、大黄酚 两种成分的鉴别和含量测定。实验参考相关文献，用氯仿作 为该制剂的供试品液制备的萃取溶剂，回收率结果表明，该
由以上３项合成为体积不确定度Ｕ（Ｕ）＝
￣／０．０２９２＋０．０４３２＋０．０２９２＝０．０５９ ｍＬ。 故样品量取的相对不确定度‰ｌ（亿）＝０．０５９／５０＝
０．００１ ２ ｍＬ。
４．１．３测定带入不确定度５份供试品ＨＰＬＣ检测，相应 的峰面积分别为５６９８９５，５６５５０１，５６９７２０，５６８６４１，５８１３８３，标 准不确定度“（／ｋ）＝Ｓ（Ｕ）＝６ ０５１．１５８，相对标准不确定度 “叫（屯）＝“（允）／Ａ＝１．０６％。
得１０。
ｍＬ；Ｕ１２（Ｃｏ）＝０．００８，／３＝４．６２×１０～ｍＬ。 因此，校准不确定度 甜。 （Ｃｏ） ＝
￣／（７．５ｌ ｘ １０－３）２＋（４．６２ ｘ １０。３）２＝８．８２×１０～ｍＬ。 ４．２．２温度不确定度实验过程中温度的波动范围均为± ３℃，溶剂膨胀系数ａ为１×１０ｑｋ～，故５ ｍＬ量瓶和２ ｍＬ 移液管引起的温度不确定度分别为地，（Ｇ）＝１ｘ１０ｑ×５ｘ
ＬＧ２０１０ＨＴＣ高效液相色谱仪（日本岛津公司）；芍药苷 对照品（中国药品生物制品检定所，批号０７３６－２００２１９，供含 量测定用）；开元颗粒（武警上海总队医院，规格：１５ ｇ，批号
０６０９１０，０６１００２，０６０９２０）。 ２测量方法 ２．１对照品储备液的制备取芍药苷对照品约６ ｍｇ，置５ ｍＬ量瓶中，加甲醇适量，超声处理２０ ｍｉｎ，放至室温，加甲醇 至刻度，摇匀，作为储备液。精密吸取储备液２ ｍＬ置５０ ｍＬ 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（０．４５ ｐｍ）滤 过，即得。 ２．２供试品溶液的制备开元颗粒样品适量，研磨，取粉末 （过４号筛）约８ ｇ，置５（Ｊ ｍＬ量瓶巾，加甲醇适量，超声处理 ２０ ｍｉｎ，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，再 用微孑Ｌ滤膜（（）．４５”ｍ）滤过，即得。 ３数学模型
（２）：１２３—１２５．
［收稿日期］２００７－０８—２０
高效液相色谱法测定芍药苷含量的不 确定度分析
王晓飞，于玲，光新兰 器检验所，北京１０２６１３）
（中国人民武装警察部队药品仪
［摘要］ 目的：对高效液相色谱法测定芍药苷含量的测量不 确定度进行分析，以找到影响不确定度的因素，为评价检测 报告提供科学依据。方法：采用高效液相色谱法测定开元颗 粒中芍药苷含量，简化不确定度来源，评估不确定度。结果： 不确定度结果为０．００８ ｍｇ·ｇ～，扩展不确定度为０．３１ ｅ。结 论：测量不确定度可用于芍药苷标准限量的制定；方法的确 立对药品质量控制具有重要意义。 ［关键词］测量不确定度；芍药苷；高效液相色谱 ［中图分类号］Ｒ９２７．２ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１—
从本实验看出，在影响此法检测结果的各个分量中，温 度对结果的影响很小，可以忽略不计；仪器、量具等带人的不 确定度相对显著，在分析了不确定度后，采取相应措施，误差 可以得到进一步减小。通过不确定度的分析，可以为合理改 进分析方法以期待将检验方案误差降至最小提供可靠依据。 以本实验为例，按照常规计算样品检测结果为０．３１ ｍｇ·ｇ一， 然而考虑了分析各个环节中对结果带来的不确定度后，经计 算，检测结果应为一个范围：（０．３１０±０．０１６）ｍｇ·ｇ～，即 ０．２９４～０．３２６ ｍｇ·ｇ～。由此，在药品检验过程中，环境、人 员、仪器、量具等都会对检验结果带来一定不准确因素，故在 进行合格的判定时应当考虑到不确定度，把不确定度加入判 定结果，才能够保证结果的公平、公正。 参考文献： ［１］中国合格评定国家认可委员会．化学分析中不确定度的评估指
Ｕｃ（ｙ）／Ｙ＝，／１．８％２＋１．０７％２＋１．２２％２＋０．６３％２＝２．５％。 将芍药苷含量的合成标准不确定度乘以样品芍药苷含量，得 到芍药苷含量的合成不确定度％（ｙ）＝０．３１０×２．５％＝
０。００８ ｍｇ·ｇ～。 ４．６扩展不确定度Ｕ Ｕ＝ｋ·Ｕｃ（ｙ），取置信水平为９５％ 时，包含因子愚（９５）＝２，则Ｕ＝２×０．００８＝０．０１６ ｍｇ·ｇ～，因 此，样品芍药苷含量为（Ｏ．３１０±０．０１６）ｍｇ·ｇ。１ ５讨论
Ｘ：冬阜出 Ａｏ‘ｍ
ｘ－样品中芍药苷含量，ｍｇ·ｇ’１；Ａ；一样品中芍药苷色谱 峰面积；Ｃｏ一芍药苷对照品的质量浓度，ｇ·Ｌ叫；Ａ一芍药 苷对照品的色谱峰面积；优一样品取样量，ｇ；Ｕ一样品稀释 体积，ｎ１Ｌ。 ４不确定度计算
根据数学模型分析，单份供试品含量测定的不确定度主 要来源于Ｃｏ、ｍ、．４０、允和Ｕ５个分量Ｅ２－３］。经过对检验整个
方法能把胶囊中的大黄素和大黄酚提取完全。另外，在流动 相的选择过程中，发现流动相的ｐＨ值对样品的峰形有较大 的影响，与文献报道相同［２１。实验发现，使用不同产地的大 黄作为原料药，会使成品中大黄素和大黄酚含量存在差异， 所以尽量可能选择同一产地的大黄药材作为制剂原料。 参考文献： ［１］中国药典．一部［Ｓ］．２００５：１７；附录ＶＩＢ． Ｅ２３贾英，董娥，杨松．ＨＰＬＣ法同时测定胃痛欣颗粒剂中大黄
７．５５２ ７＝９．２９ｘ１０一。
４．１．２样品配制过程体积不确定度 （１）校准不确定度 实验用５０ ｍＬ量瓶为Ａ类，限值为 ０．０５，假设为矩形分布，Ｋ＝３，得校准不确定度Ｕｔ（Ｕ）＝ ０．０５｜６＝０．０２９ ｍＬ， （２）温度不确定度 温度的波动范围为±３℃，溶剂膨胀系 数ａ为１×１０ｑｋ～，故５０ ｍＬ量瓶引起的温度不确定度Ｕ： （Ｕ）＝１×１０—３×５０×３×１００／２√３＝０．０４３ ｍＬ。 （３）重复性不确定度用水定容，称重，重复１０次，计算不确 定度Ｕ３（Ｕ）＝０．０２９ ｍＬ。
“订雨Ｆ而丽＝０．０１５ ０．００８ ｍＬ。将以上两项合成，得重复性不确定度Ｕ，（Ｃｏ）＝ ｒｎＬ。 由以上３项合成为对照品溶液配制带入的不确定度
“（Ｇ）＝￣／（８．８２×１０—３）２＋０．００４ ６２＋０．０１５２＝１．８％。 ４．３回收带入的不确定度取５份已知芍药苷含量的样品 （２．２５，２．６７，２．１１，３．０１，２．６１ ｍｇ），精密加入一定量的对照 品溶液（２．４８ ｍｇ），制备供试品溶液，测定。回收率分别为 １０３．０５％，１０１．６８％，１０２．１１％，９９．９１％，１０２．７８％。计算得 到标准不确定度“（Ｒ）＝１．２４，相对标准不确定度“。ｎ（Ｒ）＝ １．２２％。 ４．４测定精密度的不确定度对照品重复进样７次，得峰 面积分别为３９６８４７，３９４０２８，３９３１６３，３９１７３０，３９３１３７， ３９６９０２，３９８４１６，以芍药苷峰面积计算精密度不确定度Ｕ烈 （Ａｏ）＝０．６３％。 ４．５合成标准不确定度Ｕ。（ｙ） 将４项相对标准不确定度 用方和根法合成，得到芍药苷含量的合成相对标准不确定度
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２．２．９样品测定取３个批号的样品，按“２．２．４”项下操 作，测定，计算含量，结果见表２。 表２样品测定结果（咒＝２） Ｔａｂ ２ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｓａｍｐｌｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ（竹＝２）
批号
２００６１２２８ ２００６０８０１
１业业型！ ３讨论
４．１．４将上述３项不确定度合成，得到样品重复配制带入
的相对 不确 定度
”。ｂ
＝
￣／（９．２９×１０。６）２＋０．００１ ２２＋１．０６％２＝１．０７％。
４．２对照品溶液配制带入的不确定度
４．２．１校准不确定度实验用５ ｎ１Ｌ量瓶和２ ｍＬ移液管
为Ａ类，限值分别为０．０１３和０．００８，假设为矩形分布，Ｋ＝３，
３×ｌｏｏ／２，／ｇ＝０．００４ ３ ｍＬ；ｕ２２（Ｇ）＝１ ｘ １０。３ ｘ ２ ｘ ３×ｌｏｏ／