mcs puc19质粒多克隆位点图谱
质粒图谱大全
〔转载〕Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbApTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNAProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKitsTEcoR?pGEX-1I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3PTYB1PTYB2PTYB11PTYB12pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZαApBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
pUC18+和+pUC19质粒图谱
pUC18 和pUC19质粒图谱pUC18 和pUC19 大小只有2686bp ，是最常用的质粒载体，其结构组成紧凑，几乎不含多余的DNA 片段，GenBank注册号为L08752（pUC18）和X02514（pUC19）。
由pBR322 改造而来，其中lacZ（MSC）来自M13mp18/19 图3-4 是其质粒图谱。
这两个质粒的结构几乎是完全一样的，只是多克隆位点的排列方向相反。
这些质粒缺乏控制拷贝数的rop基因，因此其拷贝数达500-700 。
pUC 系列载体含有一段lacZ蛋白氨基末端的部分编码序列，在特定的受体细胞中可表现α-互补作用。
因此在多克隆位点中插入了外源片段后，可通过α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组质粒。
特征序列区位：pBR322_origin1471 - 852Ampicillin2486 - 1626lac_promoter543 - 514AmpR_promoter2556 - 2528M13_pUC_rev_primer500 - 478M13_reverse_primer479 - 461M13_forward20_primer379 - 395M13_pUC_fwd_primer364 - 386lacZ_a398 - 250pGEX_3_primer51 - 29Orf22486 - 1626NOS terminator sequence:ggatccatcgttcaaac atttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatgattatcatataattt ctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttttatgattagagtccc gcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcat ctatgt tactagtaatcgat设计引物：Forward primer: 5’ ggaGGATCC ggatccatcgttcaaac 3’(含Bam H I 位点GGATCC及三个保护碱基)Reverse primer: 5’ atcGAATTC ATCGATTACTAGTAACATAG 3’(含Eco R I 位点GAATTC及三个保护碱基)请查一下NOS终止子序列内有没有这两个酶切点。
pUC18 和 pUC19质粒图谱
wowenwenpUC18 和pUC19质粒图谱pUC18 和pUC19 大小只有2686bp ，是最常用的质粒载体，其结构组成紧凑，几乎不含多余的DNA 片段，GenBank注册号为L08752（pUC18）和X02514（pUC19）。
由pBR322 改造而来，其中lacZ（MSC）来自M13mp18/19 图3-4 是其质粒图谱。
这两个质粒的结构几乎是完全一样的，只是多克隆位点的排列方向相反。
这些质粒缺乏控制拷贝数的rop基因，因此其拷贝数达500-700 。
pUC 系列载体含有一段lacZ蛋白氨基末端的部分编码序列，在特定的受体细胞中可表现α-互补作用。
因此在多克隆位点中插入了外源片段后，可通过α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组质粒。
特征序列区位：pBR322_origin1471 - 852Ampicillin2486 - 1626lac_promoter543 - 514AmpR_promoter2556 - 2528M13_pUC_rev_primer500 - 478M13_reverse_primer479 - 461M13_forward20_primer379 - 395M13_pUC_fwd_primer364 - 386lacZ_a398 - 250pGEX_3_primer51 - 29Orf22486 - 1626NOS terminator sequence:ggatccatcgttcaaac atttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatgattatcatataattt ctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttttatgattagagtccc gcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcat ctatgt tactagtaatcgat设计引物：Forward primer: 5’ ggaGGATCC ggatccatcgttcaaac 3’(含Bam H I 位点GGATCC及三个保护碱基)Reverse primer: 5’ atcGAATTC ATCGATTACTAGTAACATAG 3’(含Eco R I 位点GAATTC及三个保护碱基)请查一下NOS终止子序列内有没有这两个酶切点。
☆如何阅读质粒图谱
如何阅读质粒图谱最近由于实验需要,需要查阅载体图谱,到园子里搜罗一番,发现虽然有人问载体图谱阅读的问题,也有前辈回答,但都不详细,借自己也在琢磨这个问题的机会,将我学到的东西整理一下,于大家分享。
载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
一、一个合格质粒的组成要素#复制起始位点Oril 即控制复制起始的位点。
原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。
而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。
＃抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+l ,Kan+＃多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段l＃P/E 启动子/增强子l＃Termsl 终止信号＃加poly（A）信号l 可以起到稳定mRNA作用二、如何阅读质粒图谱第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。
（1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。
（3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
（4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（卡那霉素衍生物）失活（5）hygr 使潮霉素β失活。
第三步：看多克隆位点（MCS）。
它具有多个限制酶的单一切点。
便于外源基因的插入。
如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。
决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源DNA插入片段大小。
质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。
一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。
第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。
这是用来区别克隆载体与表达载体。
克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。
选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。
启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号＃启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。
基因克隆的载体系统
4.1.2.4 影响质粒DNA产量的因素 （1）寄主菌株的遗传背景 （2）质粒的拷贝数及分子大小 （3）实验操作误差
4.1.3 质粒载体的构建及类型 4.1.3.1 天然质粒的局限性 天然质粒在抗生素标记、限制性内切酶酶切位点、分子 量、拷贝数等等很多方面不能满足基因克隆的要求，所以绝 大部分质粒载体是在天然质粒的基础上根据基因工程的需要 而改造而来的。 4.1.3.2 质粒载体必备的条件 1、具有复制起点 2、具有抗菌素抗性基因（理想情况下2种抗性基因） 3、具有若干个限制酶单一识别位点 4、具有较小的分子量和较高的拷贝数
① 来自pBR322的复制起点；
② 无限制位点的氨苄青霉素抗性基因（ ampr）；
③ 大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的启动子及其编码 α-肽链的DNA序列，此结构特称为lacZ′基因；
④ 位于lacZ′基因中的靠近5′-端的一段MCS位点（并不 破坏lacZ′基因的功能）
pUC18 及 pUC19 质粒载体的多克隆位点（MCS）
pSC101应 用实例1： 金黄色葡 萄球菌的 Ampr 基 因插入 pSC101 质粒
pSC101应用实例2：
应用pSC101质粒作载体在大肠杆菌细胞中 克隆非洲爪蟾的rDNA基因片段
4.1.4.2 pBR322 pBR322 质粒由3个不同来源的部分组成：第一部分来源 于pSF2124质粒易位与Tn3的氨苄青霉素抗性基因（ampr）； 第二部分来源于pSC101质粒的四环素抗性基因（tetr）；第 三部分来源于CoLEI的派生质粒pMB1的DNA复制起点。
§4 基因克隆的载体系统
4.1 质粒（plasmid）载体
大肠杆菌主要的天然质粒类型： ① F 质粒：致育因子或性因子 ② R 质粒：抗药性因子 ③ Col 质粒：产生大肠杆菌素因子 基因工程中使用的质粒载体都是在天然质粒的基础上人 工改造而成的。质粒载体是重组DNA研究中最常用的也是最 重要的基因克隆载体。
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（转载）一.九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNAProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
质粒提取、纯化、电泳检测
质粒DNA的提取、纯化和电泳检测【实验目的】1、掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用；2、掌握碱变性法提取质粒DNA的方法；3、学习并掌握凝胶电泳进行DNA分离纯化的实验原理；4、学习并掌握凝胶的制备方法；5、学习并掌握凝胶中DNA的分离纯化方法；6、验证E.coli DH5α与E.coli DH5α（pUC19）在含有氨苄培养基上的生长情况并了解其原理。
【实验原理】1、携带外源基因并将外源基因导入宿主细胞，使之进行扩增和表达的媒介称为载体。
在基因工程操作中载体具有以下性质：A.具有自主复制的起点；B.具有多个限制性核酸内切酶的单一识别位点（多克隆位点）；C.具有可供选择的遗传标记；D.具有高拷贝数。
2、质粒 DNA 是原核生物除类核中的染色体 DNA以外 ,细胞质中含有的一个或多个能独立复制并稳定遗传的小环状双链 DNA 分子。
除酵母的杀伤质粒为RNA 外 , 迄今发现的所有质粒均为双链环状DNA 。
多数质粒只有几千个 bp但也有一些质粒达105bp 以上 ,一般分子量在 ( 4～100) × 106道尔顿范围内。
不同的质粒在细胞内的拷贝数不同。
细胞内含有1-3个拷贝的质粒为低拷贝质粒（严紧型复制），当质粒数在10个拷贝以上，为高拷贝质粒（松弛型复制），用于载体构建质粒多为松弛型。
3、pUC19质粒大小约为2.69kb，含有以下构件：来自于E.coli质粒ColE1的松弛型复制起点；氨苄青霉素抗性基因（Amp r）；E.coliβ-半乳糖苷酶基因（LacZ）的启动子及编码β-半乳糖苷酶的DNA序列；多克隆位点（MCS）区段。
图1.pUC18/pUC19质粒图谱4、质粒在细胞内以共价闭合环状DNA的形式存在，呈超螺旋状态（cccDNA）。
在抽提质粒DNA的过程中，由于各种因素影响，使超螺旋的共价闭合环状结构的质粒DNA的一条链断裂，变成开环DNA(ocDNA)，若两条链发生断裂则转变为线状DNA（L DNA）。
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（转载）一. 九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二. 克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET 系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNAProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits四.PGEX 系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六. 真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZα APYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类, 其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
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（转载）一.九种表达载体Pllp-OmpA,pllp-STII,pMBP-P,pMBP-C,pET-GST,pET-Trx,pET-His,pET-CKS,pET-DsbA 二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusion Systems39band40bProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressio nSystem33bProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressio nSystemsProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressio nSystemsplusCompetentCellsProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusio nSystems41and42ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusi onSystems43.1and44ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDN AProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinRes insandPurificationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAP pGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
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基因工程载体(质粒-3章)幻灯片(1)
非接合型质粒的寄主细胞中同时存在一 种接合型质粒，那么它们通常也是可以 被转移的。这种由共存的接合型质粒引 发的非接合型质粒的转移过程，叫质粒 的迁移作用（mobiligation）又叫质粒 的诱动。
带有大肠杆菌素基因的Col质粒和带有抗菌素抗性基因的R 质粒既有属于接合型的，也有属于非接合型的。
如果在非接合型质粒的寄主细胞中同时存在一种接合 型质粒，那么它们通常也是可以被转移的。这种由共存的 接合型质粒引发的非接合型质粒的转移过程，叫质粒的迁 移作用(mobilization)又叫质粒的诱动。ColE1是一种可以 迁移但属于非接合型质粒。
2）F 因子
F因子是最有代表性的接合型质粒，又称致育因子 (fertility factor)或性质粒(Sex plasmid)。它在寄主细胞中有 三种存在方式：①独立于染色体之外，闭环双链DNA形式 存在。这种细胞称F+细胞。②独立于染色体之外，闭环双 链DNA形式存在，但其DNA上还携带有寄主菌染色体基因 或DNA区段。这种细胞称之为F-细胞。③以线性DNA形式， 从不同位点整合到寄主菌染色体上，这种细胞称为Hfr细胞 (高频重组细胞)。
如加入不同启动子序列，用于生产单链 DNA或RNA，外源基因的大量表达。又加 入COS位点，使载体能容纳更大的DNA片 段等等。
质粒载体的选择标记：
外源DNA片段与质粒载体DNA连接，再转化入 宿主菌，经培养后需筛选鉴定转化子。这就需 要利用质粒载体的可选择标记。
质粒载体的选择标记
抗生素抗性基因选择标记
蓝-白斑实验
构建的质粒人工载体，应用最广的是 PBR322，分子量为2.6×106，含46332bp。 含有选择标记抗氨苄青霉素（Apr）基因来 自天然质粒RSF2124和抗四环素（Ter）基因 来自PSC101质粒。复制子部分来自PMB9 （一类Co1E1质粒）。多克隆限制性内节切 酶位点有9个
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质粒载体分类及阅读
质粒载体分类及阅读一.九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二.克隆载体pTZ19R DNApUC57 DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescript II KS (+)L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET Dsb Fusion Systems 39b and 40bProtein Expression » Prokaryotic Expression » pET Expression System 33b Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET Expression Systems Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET Expression Systems plus Competent CellsProtein Expression » Prokaryotic Expression » pET GST Fusion Systems 41 and 42Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET NusA Fusion Sy stems 43.1 and 44Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET Vector DNAProtein Purification » Purification Systems » Strep•Tactin Resins and Purification Kits四.PGEX系列表达载体T EcoR pGEX-1 I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYB systemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1(+)pPICZ alpha ApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
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.（转载）一.九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNAProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAP.pGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
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（转载）一.九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNAProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
pUC18+和+pUC19质粒图谱
pUC18 和pUC19质粒图谱pUC18 和pUC19 大小只有2686bp ，是最常用的质粒载体，其结构组成紧凑，几乎不含多余的DNA 片段，GenBank注册号为L08752（pUC18）和X02514（pUC19）。
由pBR322 改造而来，其中lacZ（MSC）来自M13mp18/19 图3-4 是其质粒图谱。
这两个质粒的结构几乎是完全一样的，只是多克隆位点的排列方向相反。
这些质粒缺乏控制拷贝数的rop基因，因此其拷贝数达500-700 。
pUC 系列载体含有一段lacZ蛋白氨基末端的部分编码序列，在特定的受体细胞中可表现α-互补作用。
因此在多克隆位点中插入了外源片段后，可通过α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组质粒。
特征序列区位：pBR322_origin1471 - 852Ampicillin2486 - 1626lac_promoter543 - 514AmpR_promoter2556 - 2528M13_pUC_rev_primer500 - 478M13_reverse_primer479 - 461M13_forward20_primer379 - 395M13_pUC_fwd_primer364 - 386lacZ_a398 - 250pGEX_3_primer51 - 29Orf22486 - 1626NOS terminator sequence:ggatccatcgttcaaac atttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatgattatcatataattt ctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttttatgattagagtccc gcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcat ctatgt tactagtaatcgat设计引物：Forward primer: 5’ ggaGGATCC ggatccatcgttcaaac 3’(含Bam H I 位点GGATCC及三个保护碱基)Reverse primer: 5’ atcGAATTC ATCGATTACTAGTAACATAG 3’(含Eco R I 位点GAATTC及三个保护碱基)请查一下NOS终止子序列内有没有这两个酶切点。
mcs多克隆位点序列
mcs多克隆位点序列
MCS（多克隆位点序列）是一种常用于基因工程和分子
生物学研究中的技术。
它是一段DNA序列，包含了多个限
制酶切位点，用于插入外源DNA片段。
MCS的设计通常考虑
到以下几个因素：限制酶切位点的选择、序列长度和位置
的优化、以及克隆向量的适配性。
首先，选择适当的限制
酶切位点对于MCS的设计至关重要。
常见的限制酶有EcoRI、BamHI、HindIII等。
这些限制酶具有特异性切割DNA序列
的能力，因此在MCS中选择这些限制酶切割位点可以方便
地插入外源DNA片段。
其次，MCS的序列长度和位置也需要
进行优化。
较短的序列长度可以减少错误连接和重组事件
发生的可能性。
此外，将MCS放置在适当位置可以方便后
续实验操作和分析。
最后，克隆向量的适配性也需要考虑到。
不同类型的克隆向量可能具有不同的限制酶切割位点
和背景序列。
因此，在设计MCS时需要确保其与所选克隆
向量相匹配，并且能够方便地插入外源DNA片段。
综上所述，设计MCS需要考虑限制酶切割位点的选择、序列长度
和位置的优化，以及克隆向量的适配性。
一个合理设计的MCS可以方便地进行基因工程和分子生物学研究，为科学家
们提供了一个强大的工具。
质粒图谱大全
（转载）一.九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNAProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。