银染步骤——精选推荐

银染方法一
实验操作程序：
固定：30min或者更长时间
100ml 乙醇40% 乙醇
25ml冰醋酸 10% 冰醋酸
加水到250ml
致敏：30min
75ml 乙醇30% 乙醇
17g 乙酸钠28.2g 三水乙酸钠
0.5g硫代硫酸钠
加水到终体积250ml
水洗：3 x 10min
银染：20min
0.625g AgNO3
100 ul 37%甲醛（在使用前加入）
加水到终体积250ml
水洗：2 x 1 min (注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色) 显色：视情况而定
6.25 g Na2CO3
50 ul 37% 甲醛（在使用前加入）
加水到终体积250ml
终止：10min
3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸
加水到终体积250ml
保存：1% 冰醋酸，4 ℃
注意事项：
1．固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶太脆而破碎。

2．甲醛在使用前加入。

3．最好多配制一份显色液，第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液，显色到点清晰。

4．显色过程很快，要注意把握时间，避免染色过度。

5．银染液和显色液需要预冷。

6．所用器皿要很洁净，不用手直接接触，以免杂蛋白污染！
7．清洗用水尽量用高纯度去离子水，蒸馏水更佳，可以减少背景着色。

银染方法二
固定乙醇100ml 60 min
冰醋酸25ml
纯水加至250ml
敏化醋酸钠17g（先溶于适量水30 min
乙醇75ml
Na2S2O3 0.5g (临用前加)
加纯水至250ml
漂洗纯水5min×3
银染AgNO3 0.625g（临用配）20 min
加纯水至250ml
漂洗纯水1min×2
显色无水碳酸钠6.25g 约4min（根据显色速度和实验目的调整）
甲醛100μl（临用加）
加纯水至250ml
终止冰醋酸12.5ml 10 min
加纯水至250ml
漂洗纯水5min×3
注意事项：
1。

敏化：百分之0.02硫代硫酸钠，1MIN;水洗两次；
2。

染色：百分之0.1硝酸银（100mL硝酸银染液加75微升百分之37甲醛）20min;
3。

水洗两次；(水洗后3min内要显色！！！！)
4。

显色：2.5%无水碳酸钠(100mL显色液加75微升37%甲醛,加2mL 0.02%硫代硫酸钠可以提高灵敏度！！！！）
＃＃＃注意：显色分两次，第一次加显色液后溶液转为黄色时，要很快倒掉溶液;第二次显色至条带清晰可见!
5；终止：5%冰醋酸；（在条带清晰可见时应迅速终止显色，否则胶会显色过度变黑！！）银染关键是1：水洗后3min内要显色！！！！)
2：在条带清晰可见时应迅速终止显色，否则胶会显色过度变黑！！）。