20156340014-15食品-陈阳

潍坊医学院实验报告
科目食品理化检验班级： 15级食品质量与安全本科班组别：4 姓名：陈阳学号： 20156340014 试验项目：克伦特罗检测
日期： 2018.5.1
一、实验目的：
1、通过本次试验同学们能够掌握ELISA法检测瘦肉精的原理
2、掌握快速检测的基本程序及操作，具有独立进行快速检测的基本技能。

二、实验原理：
间接竞争ELISA方法
在酶标板孔条上预包被克伦特罗抗原，加入抗克伦特罗抗体，样本残留的克伦特罗和微孔条
上预包被的抗原竞争抗克伦特罗抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物（标记物为辣根过氧化
物酶）显色。

样本吸光值与其残留物克伦特罗呈负相关，与标准曲线比较再乘以其相对应的
稀释倍数，即可得出样品中克伦特罗的含量。

三、实验主要仪器设备：
仪器：微孔板酶标仪450/630nm、电子称（0.01g）、漩涡混合振荡器、离心机（15ml管和
1.5ml ep管）、恒温培养箱
耗材：小号研钵、15ml离心管、1.5ml ep管、（10-50ul、50-250ul）微量移液器及配套枪
头、3ml一次性吸管、酶标板架、滤纸、锡箔纸
试剂：0.1M HCI、0.1MNaOH溶液、乙腈-0.1MHCI 溶液
克伦特罗酶标物、克伦特罗抗试剂、去离子水、底物A、底物B、终止液
标准品：浓度为0、0.1、0.3、0.9、2.7、8.1ppb（10-3ug/ml）
对照品：浓度为100ppb
四、实验步骤：
1、样品前处理
组织用剪刀剪碎，研钵内研成匀浆，取2g肉/肝脏匀浆放入15ml离心管中
1.加入6ml去离子水，充分震荡2min，室温4000r/min以上离心10分钟，（注若组织样本
中油脂含量较高，可在振荡后放入85℃水浴10min后再离心。

）
2.取20ul上层液进行分析，样本稀释4倍。

2、分析
微孔板编号，如1-12号标准品，13/14号样品等(每样品或标准品均做平行对照即各2孔)
加标准品/样品：微孔中加入20ul样品或标准品+50ul克伦特罗酶标物+80ul克伦特罗抗试剂，
轻轻振荡混匀，盖板膜盖板后，25℃避光30min
洗板：孔内液体甩干，用去离子水液300ul/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干（若有未拍干的气泡用枪头戳破）
显色：每孔加入50ul底物A+50ul底物B，轻轻振荡混匀，盖板膜盖板后，25℃避光15-20min （蓝色）
测定：加入50ul终止液（黄色），轻轻振荡混匀。

酶标仪450nm/630nm双波长检测OD值（可在加入终止液前目测含量）。

五、实验结果及计算：
克伦特罗浓度与吸光度值
0 0.1 0.3 0.9 2.7 8.1 肉肝
3.021 2.164 1.570 0.796 0.398 0.137 1.737 1.188
2.786 2.221 1.474 0.835 0.320 0.155 1.697 1.512
肉的百分吸光度值百分比为59.14，即y=59.14，代入公式y = -19.03ln(x) + 30.22，
解得x=0.21878
猪肉中克伦特罗的含量：0.21878*4=0.875
肝的百分吸光度值百分比为46.5，即y=46.5，代入公式y = -19.03ln(x) + 30.22，
解得x=0.425
猪肝中克伦特罗的含量：0.425*4=1.7
即猪肉中克伦特罗的含量为0.875ppb，猪肝中克伦特罗的含量为1.7ppb
六、讨论
我国规定猪肉中不得检出克伦特罗，现测得结果严重超出国家标准。

当五个标准品都采用时，R平方值较低只有0.964左右，现删除第三组和第五组数值所得曲线较好R平方值达到了0.9987。

分析：说明在加样过程中可能个别样品的加样操作不够标准；
使用的移液枪出现故障，导致加样量不准确；
可能受到了光照的影响；
室温不在25摄氏度。