miR-497-5p对人宫颈癌细胞增殖的抑制作用及机制

合集下载

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

探讨ｍｉＲ－４９７－５ｐ对人宫颈癌细胞（ＨｅＬａ）增殖的抑制作用及机制。方法将对数生长期人宫颈
癌ＨｅＬａ细胞随机分为两部分，第一部分细胞随机分为四组：ｍｉＲ－４９７－５ｐｍｉｍｉｃｓＮＣ＋ＩＫＣａｌ３端非翻译区（３．ＵＲＴ）
山东医药２０１７年第— ５ｐ对人宫颈癌细胞增殖的抑制作用及机制
张君，高兰阳，詹平。毛熙光（西南医科大学附属医院，四川泸州６４６０００）
摘要：目的
野生型双荧光素酶重组质粒载体（ＩＫＣａｌ — ｗｔ）转染组、ｍｉＲ４９７－５ｐｍｉｍｉｃｓ＋ＩＫＣａ１．ｗｔ转染组、ｍｉＲ－４９７－５ｐｍｉｍｉｃｓＮＣ＋３＇－ＵＲＴ突变型双荧光素酶重组质粒载体（ＩＫＣａｌ－ｍｕｔ）转染组、ｍｉＲ－４９７ — ５ｐｍｉｍｉｃｓ＋ＩＫＣａ１．ｍｕｔ转染组，分别转染
ｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒＨｅＬａｃｅｌｌｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｈｕｍａｎｃｅｖｉｒｃｌａｃａｎｃｅｒＨｅＬａｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃｇｒｏｗｔｈｐｈａｓｅｗｅｒｅｒａｎｄｏｍ・ｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｗｏｐａｒｔｓ．Ｔｈｅｉｆｒｓｔｐａｒｔｗａｓｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ４ｇｒｏｕｐｓ：ｍｉＲ－４９７－５ｐｍｉｍｉｃｓＮＣａｎｄＩＫＣａｌ — ｔｗｃｏ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｇｒｏｕｐ，ｍｉＲ－４９７－５ｐｍｉｍｉｃｓｎｄａＩＫＣａｌ — ｔｗｃｏ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｇｒｏｕｐ，ｍｉＲ－４９７ — ５ｐｍｉｍｉｃｓＮＣｎｄａＩＫＣａｌ — ｍｕｔｃｏ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｇｒｏｕｐａｎｄｍｉＲ－４９７－５ｐｍｉｍｉｃｓａｎｄＩＫＣａｌ・－ｍｕｔｃｏ－－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｒｏｇｕｐｗｈｉｃｈｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｅｔｅｄｂｙｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｐｌｓｍｉａｄｓｆｏｒ４８ｈ．ＴｈｅｌｕｃｉｆｅｒｓｅａａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＨｅＬａｃｅｌｌｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｄｏｕｂｌｅｌｕｃｉｆｅｒｓｅａｒｅｐｏｒｔｅｒａｓｓａｙｓｙｓｔｅｍ．Ｔｈｅｓｅｃｏｎｄｐａｒｔｗａｓｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ３ｇｒｏｕｐｓ：ｍｉＲ－４９７－５ｐｍｉｍｉｃｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｇｒｏｕｐ，ｍｉＲ－４９７－５ｐｍｉｍｉｃｓＮＣｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｇｒｏｕｐａｎｄｂｌａｎｋｃｏｎｔｒｏｌｒｏｇｕｐ．ＣｅｌｌｓｉｎｅａｃｈｒｏｇｕｐｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ２０００．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩＫＣａｌｍＲＮＡｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｑＲＴ・ＰＣＲ，ＩＫＣａｌｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｎｒｂｌｏｔｔｉｎｇａｎｄｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｂｉｌｉｔｙｏｆＨｅＬａｃｅｌｌｓｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＣＣＫ一８ａｓｓａｙ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｌｕｃｉｆｅｒａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｍｉＲ－４９７－５ｐｍｉｍｉｃｓａｎｄＩＫＣａｌ — ｔｗｃｏ — ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｇｒｏｕｐ
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２ — ２６６Ｘ．２０１７．０５．００５
，
中图分类号：Ｒ７３７．３３
文献标志码：Ａ
文章编号：１００２ — ２６６Ｘ（２０１７）０５－００１５－０４
义（Ｐ均＞０．０５）。第二部分细胞培养２４、４８、７２、９６ｈ，ｍｉＲ－４９７－５ｐｍｉｍｉｃｓ转染组增殖能力均较其他两组降低（Ｐ均
＜０．０５），其他两组比较差异无统计学意义（Ｐ均＞０．０５）。结论ｍｉＲ－４９７－５ｐ可以通过负向调控ＩＫＣａｌ基因表达以抑制宫颈癌细胞增殖。关键词：子宫颈癌；微小ＲＮＡ－４９７－５ｐ；中电导钙激活性钾离子通道；ＩＫＣａｌ基因；ＨｅＬａ细胞；细胞增殖
胞中的ｍｉＲ－４９７－５ｐｍｉｍｉｃｓ＋ＩＫＣａｌ－ｗｔ转染组荧光素酶活性较其他三组降低（Ｐ均＜０．０５），其他三组间比较差异无
统计学意义（Ｐ均＞０．０５），证实ｍｉＲ－４９７－５ｐ与ＩＫＣａｌ３一ＵＲＴ存在特异性结合位点。第二部分细胞中的ｍｉＲ－４９７ — ５ｐｍｉｍｉｃｓ转染组ＩＫＣａｌｍＲＮＡ、蛋白的相对表达量较其他两组降低（Ｐ均＜０．０５），其他两组比较差异无统计学意
（ＴｈｅＡｆｉｌｆｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｏｕｔｈｗｅｓｔＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌｕｚｈｏｕ６４６０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｍｉＲ－４９７ — ５ｐｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎ
ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｏｆｍｉＲ－４９７－５ｐｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｃｅｒｖＪｃａＩｃａｒｃｉｎｏｍａｅｅｌＩＺＨＡＮＧＪｕｎ，ＧＡＯＬａｎｙａｎｇ，ＺＨＡＮＰ，ＭＡＯＸｉｇｕａｎｇ
相应质粒４８ｈ，用双荧光素酶报告基因检测系统检测ＨｅＬａ细胞荧光素酶活性。第二部分细胞随机分为三组：ｍｉＲ．
４９７－５ｐｍｉｍｉｃｓ转染组、ｍｉＲ－４９７－５ｐｍｉｍｉｃｓＮＣ转染组和空白对照组，分别转染相应质粒，用ｑＲＴ．ＰＣＲ技术检测细胞ＩＫＣａｌｍＲＮＡ表达，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｏｈｔｉｎｇ法检测细胞ＩＫＣａｌ蛋白表达，ＣＣＫ－８法检测细胞增殖能力。结果第一部分细