RASSF1A基因与结直肠癌关系的研究进展

１００ｈｅａｄｅｄｓｐｅｒｍａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｄｅｆｉｃｉｅｎｔｏｏｚｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎＣａ－ｐａｃｉｔｙ［Ｊ］．ＦｅｒｔｉｌＳｔｅｒｉｌ，１９９７，６８（６）：１１４４—１１４７．［２８］ＨｅｉｎｄｒｙｅｋｘＢ，ＶａｎｄｅｒＥｌｓｔＪ，ＤｅＳｕｔｔｅｒＰ，ｅｔａ１．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｐｔｉｏｎｆｏｒｓｐｅｒｍ－ｏｒｏｅｃｙｔｅ－ｒｅｌａｔｅｄｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｆａｉｌｕｒｅ：船－ｓｉｓｔｅｄｏｏｃｙｔｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｆｏｌｌｏｗｉｎｇｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓＩＣ・ＳＩ［Ｊ］．ＨｕｍＲｅｐｒｏｄ，２００５，２０（８）：２２３７－２２４１．［２９］ＢｅｒｋｏｖｉｔｚＡ，ＥｈｅｓＦ，Ｙａａｒｉｓ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｎｏｒ－ｍａｌｃｙｏｆｔｈｅｓｐｅｒｍｎｕｃｌｅｕｓａｎｄｐｒｅｇｎａｎｃｙｒａｔｅｏｆｉｎｔｒａｃｙｔｏ－ｐｌａｓｍｉｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｌｙｓｅｌｅｃｔｅｄｓｐｅｒｍ［Ｊ］．ＨｕｍＲｅｐｒｏｄ，２００５，２０（１）：１８５—１９０．［３０］ＢａｒｔｏｏｖＢ，ＢｅｒｋｏｖｉｔｚＡ，ＥｈｅｓＦ，ｅｔａ１．Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅｆｉｎｅｍｏｒ－ｐｈｏｌｏｇｙｏｆｍｏｔｉｌｅｈｕｍａｎｓｐｅｒｍｃｅｌｌｓｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＩＶＦ－ＩＣＳＩｏｕｔｃｏｍｅ［Ｊ］．ＪＡｎｄｒｏｌ，２００２，２３（１）：１—８．（收稿日期：２００９—１１—１２修回日期：２００９一１２一１５）ＲＡＳＳＦｌＡ基因与结直肠癌关系的研究进展黄克强综述莫维光审校（广西医科大学第一附属医院病理科，南宁市５３００２１）【关键词】ＲＡＳＳＦｌＡ基因；结直肠癌；抑癌基因【中图分类号】Ｒ７３５．３【文献标识码】Ａ【文章编号】０２５３－４３０４（２０１０）０１－０１００－０５结直肠癌是我国常见的胃肠道恶性肿瘤，其发生发展是多阶段、多步骤的病理过程，与多个癌基因的激活及抑癌基因的失活有关。

但是其真正的病因、关键性基因、基因调控的确切机制尚未完全明了。

最近发现的定位于染色体３ｐ２１．３的抑癌基因ＲＡＳＳＦｌＡ（ＲａｓａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｄｏｍａｉｎｆａｍｉｌｙｌｉｓｏｆｏｒｍＡ）可能与结直肠癌的发生有关，本文综述该基因与结直肠癌关系的研究进展。

１ＲＡＳＳＦｌＡ的发现及结构２０００年Ｄａｍｍａｎ等…利用酵母双杂交筛选方法在３ｐ２１．３内１２０ｋｂ长最小纯合缺失区克隆出一个他们称之为ＲＡＳＳＦｌ（Ｒａｓａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｄｏｍａｉｎｆａｍｉｌｙ１）的基因，与鼠的Ｒａｓ效应蛋白Ｎｏｒｅｌ和Ｍａｘｐｌ高度同源，包含一个公认的Ｒａｓ相关（ＲＡ）区域和一个ＡＴＭ磷酸化位点。

ＲＡＳＳＦｌ大约１１０００ｂｐ，包含８个外显子（１ｄ、ｌＢ、２ａ［３、２，／、３、４、５、６），外显子３—６共用，编码Ｒａｓ相关区域。

由于选择性剪接和使用２个不同的启动子，目前已发现它至少有８个不同的转录本ＲＡＳＳＦｌＡ．ＲＡＳＳＦｌＨ。

转录本之一ＲＡＳＳＦＩＡ其ｃＤＮＡ全长１８７３ｂｐ，含６个外显子（１ｅｔ、２０ｔｆｌ、３、４、５、６），编码一个相对分子量为３８．８ｋＤ含有３４０个氨基酸的蛋白多肽，其Ｎ端与富含半胱氨酸的甘油二酯或佛波酯结合区高度同源，也被称作蛋白激酶Ｃ保守区１（Ｃ１）。

２生物学功能和作用机制研究表明，ＲＡＳＳＦＩＡ在人体正常组织普遍表达，但是在肺癌、乳腺癌、鼻咽癌、肾癌、前列腺癌和膀胱癌等绝大多数肿瘤中却表达下降或缺失旧】。

将ＲＡＳＳＦｌＡ转染人不表达该基因的癌细胞株后，可显著抑制肿瘤细胞克隆的形成和非贴壁肿瘤细胞的生长，接种裸鼠后其成瘤生长能力也明显下降，由此确定其作为抑癌基因的作用。

目前对ＲＡＳＳＦｌＡ作为抑癌基因的作用机制和途径还没有完全明确，主要有促进凋亡、调节细胞周期和调节微管稳定、维持基因组稳定性等。

２．１促进凋亡目前认为癌蛋白Ｒａｓ与三磷酸鸟苷（ＧＴＰ）结合后不需外界生长信号的刺激便自身活化，激活型的Ｋ－ｒａｓ可能因与一系列不同的下游效应分子相互作用而发挥两种截然不同的功能：既可以促进细胞生长增殖和分化，又可通过诱发细胞休眠，诱导终末分化和促进细胞凋亡和衰老来抑制细胞生长。

在正常细胞中，Ｒａｓ的这两种效应可能通过动态的平衡来维系细胞正常代谢及生长。

ＲＡＳＳＦｌＡ可能是Ｒａｓ下游信号转导中的一个效应物，抑制了Ｒａｓ的活化，在人类肿瘤中因甲基化所引起的ＲＡＳＳＦＩＡ表达缺失可能使Ｒａｓ更多地发挥促进生长效应而最终导致肿瘤发生一Ｊ。

研究证实ＲＡＳＳＦＩＡ通过与Ｒａｓ的效应因子ＮＯＲＥｌ形成异二聚体调节一条促凋亡通路，并通过ＳＡＲＡＨ基序与促进凋亡的丝氨酸一苏氨酸万方数据￡鱼垦鲎至Ｑ！Ｑ：生！旦笙三呈鲞笙！塑激酶ＭＳＴｌ（ｍａｍｍａｌｉａｎｓｔｅｒｉｌｅ２０一ｌｉｋｅ１）结合，激活ＭＳＴｌ，ＭＳＴｌ能调节活化的Ｒａｓ的促凋亡作用Ｈ１。

因此，ＲＡＳＳＦｌＡ蛋白在抑制Ｒａｓ激活的生长信号通路上起作用。

如果ＲＡＳＳＦｌＡ功能失活，也就破坏了与Ｒａｓ激活的促进与抑制生长效应之间的平衡，导致肿瘤发生。

Ｂｅｌ－２家族成员Ｂａｘ表达并不阻断凋亡，但是具有对抗Ｂｃｌ－２蛋白抑制凋亡的作用。

ＲＡＳＳＦｌＡ能够通过与Ｂａｘ的一个结合蛋白即凋亡调节因子Ｉ（ＭＯＡＰＩ）直接结合口】，调节Ｂａｘ活性，活化的Ｋ—ｒａ８增强ｍ坞ＳＦｌＡ和ＭＯＡＰｌ之间的相互作用№ｊ，突变的ＲＡＳＳＦｌＡ与ＭＯＡＰｌ相互作用减弱，敲除ＲＡＳＳＦｌＡ则削弱Ｋ—ｒａ￥激活Ｂａｘ的能力。

说明这条通路的破坏则促进肿瘤形成，Ｒａｓ．ＲＡＳＳＦＩＡ．ＭＯＡＰｌ复合物是Ｒａｓ诱导的细胞凋亡所必需的。

Ｂａｋｓｈ等ｏ¨也观察到相似结果，并发现ＲＡＳＳＦｌＡ的表达也增强ＴＮＦ吨诱导转化的和非转化的细胞的凋亡，这也与ＲＡＳＳＦｌＡ－ＭＯＡＰｌ介导的Ｂａｘ的活化有关。

２．２调节细胞周期Ｇ—Ｓ期细胞周期检查点（ｃｅｌｌｃｙｃｌｅｃｈｅｅｋｐｏｉｎｔ）由Ｒｂ基因家族控制，ｅｙｃｌｉｎＤＩ的累积可以形成一个旁路使细胞绕过Ｒｂ控制的检测点而促进细胞增殖。

Ｓｈｉｖａｋｕｍａｒ等¨Ｊ研究发现ＲＡＳＳＦｌＡ能抑制ｃｙｃｈｎＤ１的积累，通过控制Ｒｂ家族细胞周期检查点诱导细胞周期停滞。

他们将ＲＡＳＳＦｌＡ瞬时转染人不表达该基因的ＮＣＩ．Ｈ１２９９肺癌细胞株后发现该细胞周期被阻断在Ｇ，／ｓ期，认为ＲＡＳＳＦｌＡ从翻译水平上抑制了ｃｙｃｌｉｎＤＩ的聚集即阻断了ｃｙｃｌｉｎＤ１介导的细胞增殖旁路，从而阻止了细胞从Ｇ。

向Ｓ期转变，但是ｃｙｃｌｉｎＤ１及其下游激活因子（如细胞周期蛋白Ａ或Ｅ７）自表达的增多又可抑制ＲＡＳＳＦｌＡ诱导细胞周期停滞。

Ｐ１２０（Ｅ４Ｆ）可以负性调节Ｓ期开始阶段和Ｇ２／Ｍ期转换的关键细胞周期调节因子ｃｙｃｌｉｎＡ２的转录，导致细胞周期阻滞在Ｇｌ期旧】。

Ａｈｍｅｄ—Ｃｈｏｕｄｈｕｒｙ等ｕ训通过小干扰ＲＮＡ抑制乳腺癌细胞ＨＢ２和宫颈癌细胞Ｈｅｌａ实验发现，ＲＡＳＳＦＩＡ提高Ｐ１２０（Ｅ４Ｆ）抑制ｃｙｃｌｉｎＡ２的能力并协同Ｐ１２０（Ｅ４Ｆ）诱导细胞周期停滞。

细胞周期调控蛋白２０（Ｃｄｃ２０）是一个完成有丝分裂需要的重要的细胞周期调节基因，结合并激活分裂后期促进复合物（ＡＰＣ），导致后期和有丝分裂结１０１束‘１¨。

Ｓｏｎｇ等‘１２３认为ＲＡＳＳＦｌＡ通过Ｃｄｃ２０抑制ＡｐＣ和诱导Ｇ：期向Ｍ期转换停滞在的有丝分裂的前中期。

然而ｎｕ等¨３】的研究未能证明ＲＡＳＳＦｌＡ和Ｃｄｃ２０之间的关系。

２．３调节微管稳定微管是高分子物质，在延长和减短期之间不断地转换，维持着动态稳定性。

微管动力学受一系列直接连接微管的微管相关蛋白（ＭＡＰｓ）调控¨引，ＲＡＳＳＦＩＡ能够通过直接结合作为其配体的ＭＡＰｓ与微管联系。

ＲＡＳＳＦｌＡ蛋白在分裂间期分布在胞质微管，在有丝分裂期分布在细胞中心体和纺锤体，在细胞周期中和微管相结合增加了微管蛋白的稳定性，控制有丝分裂¨引。

２．４维持基因组稳定性ＲＡＳＳＦｌＡ集中于中心体和有丝分裂纺锤体，并能够调节微管动力学，参与维持基因组稳定性¨６Ｉ。

Ｃ１９０ＲＦ５可能在ＲＡＳＳＦｌＡ聚集到中心体和纺锤体过程中起到关键作用。

利用ＲＮＡｉ抑制Ｃ１９０ＲＦ５的表达能够促进遗传不稳定性，与ＲＡＳＳＦｌＡ被减量调节观察到的结果相似¨６’１７Ｊ。

Ｃ１９０ＲＦ５的作用可能是增强ＲＡＳＳＦｌＡ稳定有丝分裂的细胞周期蛋白的能力。

３失活原因染色体缺失和点突变可以导致ＲＡＳＳＦｌＡ失活，但是其功能丧失的原因通常是启动子超甲基化引起的转录子的沉默。

这个表遗传机制能够导致很多抑癌基因失活，现在被认为是肿瘤发生的主要原因。

基因启动子ＣＰＧ岛的甲基化可引起甲基化结合蛋白（ＭＢＤｓ）和转录抑制物组蛋白乙酞化酶（ＨＤＡＣｓ）等结合到ＣＰＧ岛，从而阻断转录因子结合到启动子上，抑制基因的表达。

Ｄａｍｍａｎｎ等¨１分析了１６例ＳＣＬＣ细胞株中ＲＡＳＳＦｌＡ启动子区域一个长２０４ｂｐ的片段内１６个ＣＰＧ岛甲基化的情况，１５例在这１６个位点完全甲基化，另ｌ例也发生了部分甲基化。

研究同时发现ＳＣＬＣ和ＮＳＣＬＣ癌组织中也分别存在１００％和３８％的ＲＡＳＳＦｌＡ启动子过度甲基化，而非恶性肺组织中无ｌ例发生甲基化。

用甲基化抑制剂５一氮杂．２：脱氧胞苷（５－ａｚａ－２＂－ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ，５－Ａｚａ—ＣｄＲ）处理Ａ５４９肺癌细胞株后可以发现ＲＡＳＳＦｌＡ的重新表达，证实甲基化在ＲＡＳＳＦｌＡ失活中起重要作用。

除高甲基化外，ＲＡＳＳＦｌＡ所在染色体３ｐ２１．３区万方数据１０２段的杂合性缺失（ＬＯＨ）也在多种肿瘤中被发现，并且ＬＯＨ和ＲＡＳＳＦＩＡ甲基化两者经常同时出现。

一项针对散发性肺癌的研究发现，在３ｐ２１．３存在ＬＯＨ的肿瘤中７６％同时也存在ＲＡＳＳＦｌＡ启动子的高甲基化嵋１，相似的结果在非小细胞肺癌、膀胱移行细胞癌和宫颈鳞状细胞癌中也有报告。

遗传和表遗传机制的联合作用导致ＲＡＳＳＦｌＡ基因的失活，与Ｋｎｕｄｓｏｎ的二次打击模型是一致的，即ＲＡＳＳＦｌＡ启动子区域甲基化是“第一次打击”，未甲基化的等位基因发生杂合性缺失是“第二次打击”，导致ＲＡＳＳＦｌＡ完全失活，失去对细胞异常增殖的抑制调控，促进肿瘤的发生。

４ＲＡＳＳＦｌＡ与结直肠癌的关系目前已有不少结直肠癌相关基因甲基化状态的报告，ＲＡＳＳＦｌＡ作为一个新近发现的抑癌基因，亦逐渐被重视。

利用甲基化特异性ＰＣＲ进行检测，发现ＲＡＳＳＦｌＡ在结直肠癌细胞系、各种类型的实体肿瘤及结直肠癌患者血清中均存在较高的启动子甲基化。

Ｗａｇｎｅｒ等¨引发现８０％（４／５）的结肠癌细胞系和４５％（１３／２９）的原发性结直肠癌病例发生了ＲＡＳＳＦＩＡ基因启动子甲基化，其中３６％（４／１１）的癌旁正常黏膜组织也发生了ＲＡＳＳＦｌＡ基因启动子甲基化，而３ｐ２１．３等位基因丢失却并没有检测到，同时未发现ＲＡＳＳＦｌＡ与ｐ１６ＩＮＫ４Ａ甲基化及ＴＮＭ分期有何相关。