猪繁殖与呼吸综合征病毒乌鲁木齐分离株GP5基因遗传变异分析

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猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因的变异分析

*基金项目：国家重点基础研究发展规划(973)项目（No.G1999011901）。

高志强：1974年生，男，博士研究生。

**通迅作者。

Author for correspondence,E-mail:<yhanchun@>.收稿日期：2003-04-17接受日期：2003-05-12农业生物技术学报Journal of Agricultural Biotechnology 2004,12(3):283~287·研究论文·猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因的变异分析*高志强郭鑫查振林陈艳红杨汉春**（中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室，北京100094）摘要：从河北、江西猪场中分离到3株猪繁殖与呼吸综合征病毒（HB-1(sh)/2002、HB-2(sh)/2002和JX-1/2002）。

采用RT-PCR 方法扩增其完整的基因片段，进行了序列测定，并与其它5个国内毒株的基因序列进行了比较和变异分析。

所有这些毒株的基因均编码200个氨基酸，推导的氨基酸相似性在88.2%~99.0%之间。

其中BJ-4、S1及J1间的相似性较高，在98%~99%之间；HB-1(sh)/2002，HB-2(sh)/2002，JX-1/2002及CH-1a 间的相似性为92%~96%之间。

根据基因核苷酸序列的遗传进化距离，这些毒株可分为两个亚群，BJ-4、S1和J1为一个亚群，与VR2332及疫苗毒株接近；HB-1(sh)/2002、HB-2(sh)/2002、JX-1/2002和CH-1a 为另一个亚群。

关键词:猪繁殖和呼吸综合征病毒；基因；变异分析Variation Analysis of the Gene of Porcine Reproductive andRespiratory Syndrome Virus （PRRSV ）GAO Zhi-Qiang GUO XinCHA Zhen-Lin CHEN Yan-Hong YANG Han-Chun**(Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine ，Ministry of Agriculture ，China Agricultural University,Beijing 100094,China)Three porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRSV)isolates (HB-1(sh)/2002，HB-2(sh)/2002and JX-1/2002)were obtained from Hebei and Jiangxi Provinces'pig farms.A RT-PCR method was used to amplify the complete gene of the viruses.Variation analysis ofgene of the three isolates and other five published PRRSV isolates in China showed that all ofthese isolates belonged to American type,and percent identity of amino acid ranged from 88.2%to 99.0%.gene among BJ-4,S1and J1had higher similarity,sharing 98%~99%identity of the deduced amino acid.HB-1(sh)/2002,HB-2(sh)/2002,JX-1/2002and CH-1a showed 92%~96%identity among theirgene.Phylogenetic analysis suggested that these isolates could be dividedinto two subgroups according to the genetic distance.BJ-4,S1and J1belonged to one subgroup,which are more close to VR2332and vaccine strains,whereas HB-1(sh)/2002,HB-2(sh)/2002,JX-1/2002and CH-1a belonged to anothersubgroup.porcine reproductive and respiratory syndrome virus;gene;variation analysis猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus ，PRRSV)为动脉炎病毒科成员之一,可引起妊娠母猪流产、早产、产死胎、弱胎、木乃伊胎、仔猪和肥育猪的呼吸道症状。

猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异及JXA1-R疫苗样流行毒株基因特征

猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异及JXA1-R疫苗样流行毒株基因特征猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是引起母猪严重的繁殖障碍、仔猪和育肥猪的呼吸障碍的重要病原,其疫苗免疫效果尚不理想,严重影响世界养猪业持续健康发展。

PRRSV属于RNA病毒,可引起持续感染,病毒基因容易变异。

该病毒多次传入我国并引起猪群发病和流行,2006年我国出现高致病性PRRSV。

虽然已逐步推广使用PRRSV活疫苗,但至今疫情尚不稳定。

PRRSV疫苗毒株是否存在基因重组、突变和毒力返强等情况尚不十分清楚。

本研究2015年采集我国16个省份72个发病猪场293份患病仔猪样品,通过PRRSV RT-PCR检测、流行毒株全基因组测定及PRRSV流行病学数据库大数据分析,首次发现我国出现高致病性PRRSV JXA1-R疫苗样毒株流行,目前存在4个亚系的美洲型流行毒株及欧洲型PRRSV,为我国该病防控提供了理论基础。

研究具体内容如下:1.猪繁殖与呼吸综合征病毒监到和临床疫情的诊断本研究于2015年收集了我国16个省份72个发病猪场293份患病仔猪肺脏病料,采用RT-PCR和PCR方法检测美洲型和欧洲型PRRSV、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病毒(PRV)等,结果显示,PRRSV阳性率39.93%(117/293),其中,8份病料为欧洲型PRRSV阳性。

选择24个PRRSV PCR检测阳性并具有严重呼吸道疾病的发病猪场,临床病理观察结果显示,发病猪群临床症状主要表现仔猪高烧、持续发热、呼吸困难、耳鼻发蓝、皮疹红斑、耳背有出血点、食欲减退等症状。

病理变化主要为:肺脏增生、水肿、充血,淋巴结严重出血等,采用PRRSV抗体免疫组化检测病猪肺脏组织,均存在明显PRRSV抗原,确诊为PRRS,为PRRSV流。

猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株GP5蛋白ORF5基因的克隆与序列分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株GP5蛋白ORF5基因的克隆与序列分析吴晓薇;刘晓慧;杨谦;熊蕊;郭凤柳;郭霄峰;阳佑天;陈茹【摘要】为揭示广东地区猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)可能的流行规律,本研究采用RT-PCR的方法扩增5株来自广东地区猪场临床样品的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respirato-ry syndrome virus,PRRSV)分离株的GP5蛋白ORF5基因,将其克隆、测序后与国内外部分毒株相应基因进行核苷酸序列比较.结果表明,PRRSV-2011-GD2、PRRSV-2011-GD3、PRRSV-2013-GD1、PRRSV-2013-GD2和PRRSV-2013-GD3株与美洲型参考株(VR-2332)的核苷酸序列同源性分别为88.8％、99.5％、88.7％、88.7％和83.5％.系统进化树分析结果表明,PRRSV-2011-GD2、PRRSV-2011-GD3、PRRSV-2013-GD1、PRRSV-2013-GD2和PRRSV-2013-GD3株均属于美洲型.以上结果为更好地了解PRRSV的分子流行病学特征和抗原变异规律提供依据,同时为研制基因工程疫苗奠定了基础.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2014(041)011【总页数】4页(P40-43)【关键词】猪繁殖与呼吸综合征;GP5蛋白;序列分析【作者】吴晓薇;刘晓慧;杨谦;熊蕊;郭凤柳;郭霄峰;阳佑天;陈茹【作者单位】广东出入境检验检疫局,广东广州510642;保定出入境检验检疫局,河北保定071051;华南农业大学,广东广州 510640;保定出入境检验检疫局,河北保定071051;保定出入境检验检疫局,河北保定071051;华南农业大学,广东广州510640;华南农业大学,广东广州 510640;广东出入境检验检疫局,广东广州510642【正文语种】中文【中图分类】S854.4+3猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus， PRRSV)以引起母猪繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状为临床特征的接触性传染病(田志平等，2012)，是影响全球养猪业最重要的疾病之一。

猪繁殖与呼吸综合征病毒

高背景
抗原变异会影响结果
血清中和试验
（ SN ）
可检测期长
敏感性低耗时抗原变异会影响结果
酶联免疫吸附试自动化操作高品质高背景
验（ ELISA ）
控制
（三）分子生物学诊断技术 1、RT-PCR 2、巢式PCR 3、原位PCR 4、RT-PCR-RFLP 5、核酸探针技术直接检测病料组织中的病毒。
一、PRRSV的形态特征
1、套式病毒目动脉炎病毒科动脉炎病毒属
2、基本形态及核酸病毒粒子呈卵圆形，直
径50～65nm。核衣壳直径30～35nm，
呈二十面体对称。有囊膜。单分子线状单股正链RNA
病毒。
3、病毒蛋白有核衣壳蛋白（N，分子质量120000u）和两种主要囊膜蛋白（M和GP5）。
采用血清学抗体检测技术是应用最为广泛的实验室诊断方法。
目前有4种不同的方法用于检测血清中的 PRRSV抗体，包括：
方法
优点
缺点
间接免疫荧光抗特异性高早期诊断抗原变异会影响结果
体试验（IFA）
结果主观判定
免疫过氧化物酶特异性高敏感性高结果主观判定
单层试验（IPMA）早期诊断
猪繁殖与呼吸综合征病毒
（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)能引起猪的一种高度传染性疾病，又称“猪蓝耳病”。症状:
妊娠母猪的繁殖障碍(流产、死胎、木乃伊胎)。各种年龄猪特别是仔猪的呼吸道疾病。
解该病在猪场的活动状况。
(6)对发病猪场要严密封锁，对发病猪场周围的猪场也要采取一定的防范措施，避免疫源扩散。

猪繁殖与呼吸综合征病毒不同毒株鉴别检测方法研究进展

动物生产的免疫档案，并对本地各类猪可能感染的疾病进行调查，做好猪的进行免疫接种工作。

3.2　做好药物保健工作，增强猪群抗病能力规模越大的养殖场越怕遇见大型的传染类疾病，即饲养人常提到的猪瘟。

猪瘟一旦发生想要消灭则太难，所以饲养人应防患于未然，首先做好相应的防疫接种工作，其次是要做好药物保健工作，进一步加强猪的抗病能力。

总之，规模猪场保育猪养殖管理过程，要结合具体工作实际，不断制定完善的养殖模式，以提高管理能力，进一步保证养殖经济效益。

摘要：本文就当前我国猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）不同毒株鉴别检测方法的研究与应用进展进行综述，对提升我国猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的综合防控能力具有一定的参考价值。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；不同毒株；鉴别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒具有欧洲型和美洲型两个基因型，欧洲型毒株一般不引起严重的临床症状，但易导致混合感染，美洲型毒株可引起严重的临床症状以及感染猪的大批量死亡。

自1995年开始美洲型P R R S V在我国开始流行，流行期间不断发生变异，2006年以J X A1毒株为代表的高致病性美洲型P R R S V 在我国开始流行，高致病性P R R S V的致病性方面发生了很大变化，引起来了猪群的大批量死亡，虽然短时间内即开发出了相应的商品化疫苗，但一直未能完全控制高致病性P R R S V 的流行，2013年以来，一种致病性介于经典株与高致病性毒株之间的美洲型P R R S V开始流行，由于该毒株与美国N A DC30毒株的同源性很高，因此被称为NADC30-like毒株，2011年我国又发现了欧洲型P R R S V感染的病例。

目前，我国PRRSV的流行毒株仍以美洲型为主，但经典株、高致病性株、NADC30-like毒株并存，同时欧洲型的感染时有发生，使PRRSV的鉴别诊断和防治难度加剧。

本文综述了PRRSV不同毒株鉴别检测方法的研究与应用进展，为提升我国PRRSV的综合防控能力提供参考。

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因重组腺病毒的构建及特性研究

维普资讯
２００８年２月
甘
肃
农
业
大
学
学
报
第４３卷
双月刊
第１Ｉ６期～
ＪＯＵＲＮＡＬ０ＦＧＡＮＳＡＧＲＩＵＣＵＬＴＵＲＡＬＵＮＩＶＥＲＳＴＹＩ
猪繁殖与呼吸综合征病毒ＧＰ５因重组腺基病毒的构建及特性研究
录水平检测证实，Ｐ蛋白基因得到了转录；光检测发现，源蛋白已得到表达．Ｇ荧外关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；Ｐ；组腺病毒；Ｇ５重同源重组中圈分类号：Ｑ７４８文献标识码：Ａ文章编号：１０—３５２０）１００—６０３４１（０８０—０１０
Ｃｏｓｒｃｉｎａｄｃａａｔｒｚｔｏｆｒｃｍｂｎｎｄｎｖｒｓｗｉｈｎｔｕｔｏｎｈｒｃｅｉａｉｎｏｅｏｉａｔａｅｏｉｕｔ
ｐｒቤተ መጻሕፍቲ ባይዱｉｅｏｕｃｉｅａｄｒｓｉａｏｒｙｄｒｍｅｖｒｏｃｎｅｒｐｒｄｔｖｎｅｐｒｔｙｓｎｏｉｕｓＧＰ５
马友记ｈ，兴绪。黄连清李发弟。程小磊。柳纪省。赵，，，，
（．中国农业科学院兰州兽医研究所，畜疫病病原生物学国家重点实验室，业部畜禽病毒学重点１家农开放实验室，肃兰州７０４；２甘３０６．甘肃农业大学动物科学技术学院，肃兰州７０７；甘３００３．中农威特生物科学技术股份有限公司，肃兰州７０４）甘３０６

猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组分子遗传特征分析

息。
病毒基因组变异可能导致疫苗免疫效果降低
病毒基因组变异可能导致疫苗免疫效果持续时间缩短
病毒基因组变异可能导致疫苗免疫效果产生耐药性
病毒基因组变异可能导致疫苗免疫效果产生副作用
基因组测序技术：二代测序、三代测序等
基因组组装：利用生物信息学方法进行基因组组装
基因变异分析：通过比对基因组序列，分析基因变异
抗病毒药物的研发和应用，还可以为猪繁殖与呼吸综合征病毒的预防和治疗提供新的手段和方法，提高猪场的生产效益。
汇报人：
猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组遗传标记的定义和
作用
猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组遗传标记的分类和
特点
猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组遗传标记的检测方
法和技术
猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组遗传标记在疾病诊
断和研究中的应用
抗原性变异的定义：病毒表面抗原发生变异，导致
免疫系统无法识别
抗原性变异的原因：病毒基因突变、重组、插入、
基因功能预测：利用生物信息学方法预测基因功能
基因组进化分析：通过比较不同物种的基因组，分析基因组的进化关系
基因组数据可视化：利用生物信息学软件，可视化基因组数据
基因测序：通过DNA测序技术，确定基因序列基因分型：通过基因分型技术，确定基因型基因突变检测：通过基因突变检测技术，确定基因突变基因表达分析：通过基因表达分析技术，确定基因表达情况
病毒免疫逃逸：抗原变异、免疫抑制等
病毒与宿主相互作用：病毒感染、免疫应答、免疫调节等
病毒基因组变异：的能
力
变异与致病力的关系：变异可能导致致病力的增强或减
弱
研究意义：为疫苗研发和疾病防控提供依

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及分子流行病学分析的开题报告

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及分子流行病学分析的开题报告一、研究背景与意义高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）是一种严重危害猪类养殖业的病原体，造成了巨大的经济损失。

PRRSV属于Arterivirus科，是一种单股正链RNA病毒，具有高度的变异性和抗原变异性，主要侵袭猪的肺泡巨噬细胞和单核细胞，导致不同程度的呼吸道病变、腹泻、流产、低产等表现。

我国是世界上最大的猪肉生产和消费国家之一，PRRSV在我国猪类养殖业中的发病率和病死率较高，其对我国经济和社会发展带来了严重的影响，因此对PRRSV的研究具有重要意义。

二、研究目的本研究旨在分离鉴定PRRSV，并进行分子流行病学分析，明确PRRSV的分布特征、变异情况、传播途径等，为制定科学合理的防疫措施和减少PRRSV的传播提供参考。

三、研究内容及进度安排1、收集样本采集猪场病猪及其环境样本，如猪鼻拭子、猪肺、猪脑等，并根据样本来源地点、年份、季节等进行标注和编号。

2、病毒分离与鉴定利用细胞培养技术和PCR技术对样本中的PRRSV进行分离与鉴定，验证PCR方法的准确性和灵敏度。

并将所分离到的PRRSV进行基因测序，并利用BLAST等软件进行同源性分析。

3、分子流行病学分析利用分子标记技术如限制性片段长度多态性（RFLP）、DNA序列测定等技术，对PRRSV进行分子流行病学分析，明确其分布特征，变异情况和传播途径。

4、结论总结根据分离鉴定结果和分子流行病学分析结果，对PRRSV的分布特征、变异情况、传播途径等进行总结，为进一步开展PRRSV的防治研究提供参考依据。

进度安排：第一年：采集样本和建立PCR检测方法；第二年：分离鉴定PRRSV和PCR方法验证；第三年：进行PRRSV的基因测序和分子流行病学分析；第四年：发表论文，并进行结论总结。

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因的克隆和原核表达

综合征病毒基因组ＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，ＰＣＲ扩增获得ＧＰ５基因，片段大小为６００ｂｐ。将ＧＰ５基因亚克隆到原核表达载体ｐＧＥＸ－６Ｐ一１上，茵落ＰＣＲ和限制性内切酶双酶切鉴定，重组质粒ＰＧＥＸ一６Ｐ一１一ＧＰ５构
引发了空前的“ 流产风暴 ” ，给世界养猪业造成巨大的经济损失。２００６年在我国和东南亚地区，该病的暴发导致约２００万的猪死亡，给我国及全世界养猪
业造成了巨大的损失［１。
毒的作用，与病毒激发机体免疫保护作用有关［５］。
白分子质量约为２５ｋｕ。ＧＰ５蛋白具有一段３１个氨基酸的信号肽及３个跨膜区，该蛋白包含６个抗原决定簇，其中１个线性决定簇，能在体外起到中和病
猪业发达国家的一种病毒性疾病，随后在世界各国
建成功，重组质粒转化犬肠埃希菌ＢＬ２１（ＤＥ３），ＩＰＴＧ诱导表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析重组蛋白的表达，Ｗｅｓｔｅｒｎ
ｂｌｏｔ分析重组蛋白的反应原性。结果表明，重组融合蛋白Ｈｉｓ — ＧＰ５分子质量约为４１ｋｕ，主要以包涵体的形
式存在，表达量占菌体总蛋白的３５以上，纯化后的重组蛋白占总蛋白的７５以上；并且该重组蛋白能与猪的阳性血清反应，说明其具有较好的免疫原性。研究结果为基因工程疫苗的研发和ＧＰ５的抗体制备奠定了

猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查分析 6000分析

华中农业大学本科学生毕业论文猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查分析姓名：专业：指导教师：分数：华中农业大学二O一六年四月猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查分析学生姓名、年级专业、指导教师摘要：繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)是猪“高热综合症”的主要病原之一，它能引起机体免疫抑制、导致继发感染，造成免疫失败等，对养猪业造成了巨大的经济损失。

本研究通过对2013年-2015年间****省部分地区发生疑似高致病性PRRSV的猪场进行流行病学调查，一记录发病猪临床症状和解剖症状，采集肺、脾、淋巴结等临床样本，利用RT-PCR 对PRRSV阳性病料中的Nsp2，并经特异性试验、敏感性试验、多重RT PCR检测，以此分析****省近年来PRRSV的流行情况。

关键词：猪；繁殖与呼吸综合征病毒；流行病学前言猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome PRRS)又称“猪蓝耳病”(Blue ear disease)。

PRRS主要引起怀孕母猪流产、早产、死胎和木乃伊胎等繁殖障碍，仔猪和育肥猪出现呼吸道症状，感染猪出现免疫抑制和亚临床感染并对其它致病因子的易感性增加，给养猪业造成巨大的经济损失，被列为我国二类传染病。

猪是PRRSV主要的自然宿主，不同性别、年龄、品种的猪都可被该病毒感染，但以感染的妊娠母猪和初生仔猪表现的临床症状最为明显。

PRRSV在猪体内能形成持续性感染，感染时间可达数月甚至更长。

感染猪可在80-100天内排毒并感染同一猪群。

对持续感染的带毒猪进行病毒分离，发现6-9周龄仔猪分离率最高。

PRRSV在猪群中的持续性感染，给PRRS 的控帘和净化带来巨大挑战。

故本研究通过对2013年-2015年间****省部分地区发生疑似高致病性PRRSV的猪场进行流行病学调查，为更好的控制该病提供科学依据。

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因的亚克隆及原核表达

（北农业大学动物科技学院，北保定河河０１０）７０１
摘要：本研究从河北省保定地区６疑似感染猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＲＶ）病猪的肺脏中，份ＰＲＳ通
过Ｒ —ＣＴＰＲ获得ＰＲＶＧＰＲＳ５蛋白完整的基因片段，克隆至ｐＭＤ１一栽体。经测序鉴定正确后，８Ｔ再设计一对引物从重组载体ｐＭＤ１－ＧＰ８Ｔ— ５中扩增出缺失了Ｎ端３０个氨基酸残基的ｄ５的编码序列ｄＦ，ＧＰＯＲ５克隆至原核表达载体ｐＥ－ｐ１构建原核重组质粒（ＧＸ６ — Ｇ５，化至ＥｃｌＢ２ＧＸ６一，ｐＥ－ｐｄＰ）转．ｏｉＬ１感受态细胞。经ＩＴＧ诱导后，ＤＳＰＰＳ－ＡＧＥ电泳可检测到分子质量为４ｕ的目的蛋白。经ＷｅｔｒｌｔＯｋｓｅｎｂｏ分析表明，蛋白该
基因的高效表达。陈军义等曾去除了Ｎ末端］
ｂｐ的基因片段，并成功地表达了ＧＰ５蛋白。Ｏｌｋ — ｅｓ
工、ｉｌＴ载体、ＴｑＤＳｍｐｅ — ａＮＡ聚合酶、Ｌ２００Ｄ０
的信号肽部分，增了Ｇ５全基因中７ｐ６０ＤｌｓＭａｋｒＴＮＡ连接酶等购自宝生物扩Ｐ９ｂ～０ＮＡｐｕｒｅ、４Ｄ
与ＰＳ阳性血清具有良好的免疫反应性，ＲＲ为进一步研究ＰＲＳ新型基因工程疫苗和诊断试剂奠定了基Ｒ

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其分子流行病学分析

为了弄清这次流行病的病原我们在江西湖南湖北广西安徽河北浙江河南天津辽宁吉林和黑龙江等12个省市的48个发病猪场采集了临床样品进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusprrsv的检测及分离鉴定结果从48个猪场的样品中检测到prrsv并分离出15株prrsv对检测到prrsv阳性的病料和分离到的毒株进行了prrsvnsp2和gp5的序列分析并对从湖南分离的一株prrsvhun4做了感染试验现将试验结果报告如下
ｔｈｅｐｉｇｓｎｉｍａｉｎｓｗｉｎｅｉｎｄｕｓｔｒｙｐｒｏｖｉｎｃｅｓｏｆｍａｉｎｌａｎｄＣｈｎａｉｉｎ２００６．Ｔｏｎｖｉｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃａｕｓａｔｉｖｅａｇｅｎｔｏｆｔｈｅｐａｎｄｅｍｉｃｄｉｓｅａｓｅ，ｗｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｃｌｉｎｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍ４８ｐｉｇｆａｒｍｓｉｎｔｗｅｌｖｅｐｒｏｖｉｎｃｅｓｗｈｅｒｅｓｕｆｅｒｉｎｇｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｆｏｒｖｉｒｕｓｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｅｐｉｄｅｍｉｏ —
＿＿＿＿
Ｉ
Ｃｊ
同 Leabharlann 致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其分子流行病学分析
童光志，周艳君，郝晓芳，田志军，仇华吉，彭金美，安同庆

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及其体外传代遗传变异分析

维普资讯
第３０卷第５期
２０年５月０８
中
国预
防பைடு நூலகம்
兽
医
学报
Ｖｏ．０．．１３Ｎｏ５Ｍａ２０ｙ０８
ＣｈｎｓｏｒａｆＰｅｅｔｅＶｅｅｎｒｅｉｉｅｉｅｅＪｕｎｌｒｖｎｉｔｒａｙＭｄｃｎｏｖｉ
摘
要：从临床 “ 高热综合征”病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＲＳ）ＰＲＶ变异株，经细胞传代
和蚀斑克隆，培育成功增殖性能稳定的新毒株，命名为ＰＲＶＨＲ。该毒株接种细胞后能够产生细胞病变ＲＳ．Ｂ（Ｐ）ＣＥ，随传代次数增加毒价显著提升，第４～６代毒价测定达ｌ’ＴＩ￣Ｌ５００ＣＤｍ。采用免疫过氧化物酶单层细胞试验（ＭＡ检测病毒抗原分布在细胞浆中；电镜观察到的病毒粒子呈圆形，直径约５ＩＰ）０ｍ～５ｌ。分离株Ｎｐｎ５ｎｎｓ２基因序列中第４３８位和５５６位氨基酸存在缺失，属ＰＲＶ变异株。该毒株Ｎｐ３～５３ＲＳｓ２基因序列比较发现，经细胞传４代后第３ｌ５位核苷酸处插入ｌ０ｌ２个碱基序列（ＡＡＣＣＴＴ。用该毒株第５ＧＧＴＧＣＴ）代培养物滴鼻接种试验猪
ＬＵａｇｍｉｇＷＥＩＹａ－，ＨＡＧＺａ－ｉ，ＩＣｈｎ－ｎ，ｎＷＵＺＮｈｏｘａＹＵＡＮｉｇＨＵＡＮＧｉｉｇＪｎ，Ｌ－ｎｐ
（ｖｓｎｏｗｉｎｅｔｕｓａｅ，ｔｎｌｅａｏａｏｙｏｅｅｉａｙＢｏｅｈｏｏｙＨｒｉＶｔｎｒＤｉｉｏｆｉＳｎＩｆｃｉｓＤｉｓｓＮａｉａｙＬｂｒｔｒｆＶｔｎｒｉｔｃｎｌｇ，ａｂｎｅｅａｙｅｏｅｏＫｒｉｒ

猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异分析及DNA疫苗的初步研究

猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异分析及DNA疫苗的初步研究猪繁殖与呼吸综合症(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合症病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)感染引起的以怀孕母猪繁殖障碍及各年龄段猪呼吸道疾病为主要特征的猪传染病。

2006年,我国爆发了高致病性PRRS,给我国养猪业造成巨大的经济损失。

PRRSV具有高度变异性,研究发现：高致病性PRRSV和传统PRRSV毒株存在很大差异。

其中高致病性PRRSV在Nsp2上普遍存在不连续的30个氨基酸的缺失,ORF5也是变异最大的基因之一,ORF7是较为保守的基因。

本研究设计了三对PRRSV特异性引物,分别扩增4株PRRSV毒株的ORF5, ORF7和Nsp2基因,并克隆至pMD-18T载体上,测序得到基因序列。

利用分子生物学软件对测得的序列及一些国内外分离株序列进行比较,分析病毒分子遗传变异规律。

序列分析表明：4个分离株ORF5基因核苷酸序列同源性为89.4%～99.5%;ORF7基因的核苷酸序列同源性为94.1%-100%；Nsp2基因核苷酸序列同源性83.3%～99.7%。

遗传进化树分析表明：HB毒株与国内疫苗株CH-1a高度同源；DL-US毒株与美洲型代表毒株VR-2332高度同源；JX毒株Nsp2缺失30个氨基酸,与国内报道的高致病性PRRSV毒株JXA1毒株高度同源,与传统毒株VR-2332差异较大。

DL-TB毒株Nsp2基因与传统毒株CH-1a同源性最高,但ORF5以及ORF7基因却与高致病毒株具有很高的同源性,由此推测DL-TB毒株可能是高致病性PRRSV 毒株和传统毒株发生重组后的变异株。

PRRSV分子流行病学研究表明：与传统毒株相比,高致病性的PRRSV毒株,在基因水平上发生了较大的变异,在临床症状上具有更高的致病性和死亡率,能够产生更大的危害。

猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株遗传进化分析及通用实时荧光RT-PCR检测方法的建立和应用

猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株遗传进化分析及通用实时荧光RT-PCR检测方法的建立和应用猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus, PRRSV)引起的一种危害全球养猪业的病毒性传染病。

目前,在我国猪群中经典毒株、高致病性毒株和类NADC30毒株等美洲型PRRSV以及欧洲型PRRSV同时存在,导致国内PRRS流行状况十分复杂。

为掌握我国PRRSV的流行状况及其遗传变异特点,本研究对2008-2015年间在国内分离的61株PRRSV毒株进行全基因测序和序列比对,并对主要易变区Nsp2、GP5、GP3蛋白进行分析。

全基因分析结果显示,61个毒株中有5个欧洲型PRRSV和56个美洲型PRRSV。

56个美洲型PRRSV中有2个类NADC30 PRRSV和54个高致病性PRRSV。

54个高致病性PRRSV分离株之间的同源性为95.2%-99.9%,与高致病性PRRSV代表毒株JXA1的同源性为97.2%～99.3%。

2个类NADC30分离株之间的同源性为99.9%,与类NADC30 PRRSV代表毒株NADC30的同源性为95.4%。

5个欧洲型分离株之间的同源性为84.4%～99.7%,与欧洲代表毒株LV的同源性为87.2%-90.9%。

重要蛋白基因分析结果显示,PRRSV在不断变异中,以非结构蛋白Nsp2和结构蛋白GP5的变异最快。

61个分离株在非结构蛋白Nsp2部位均发生了 1-150aa 不等的缺失。

大部分分离株在重要结构蛋白GP5发生氨基酸突变,尤其是糖基化位点的位置和数量发生了不同程度的变化。

欧洲型分离株GP3高变区含有多个缺失及突变。

我们还发现了 4株新的PRRSV基因缺失毒株,这些毒株核苷酸或氨基酸的缺失位置及数量在中国尚未见相关报道。

猪繁殖与呼吸综合征病毒新疆株的分离鉴定

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猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株的分离鉴定及遗传变异分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株的分离鉴定及遗传变异分析王小敏;郭容利;李彬;于洋;何孔旺;周忠涛;茅爱华;俞正玉;汪伟;倪艳秀;温立斌;张雪寒【摘要】A porcine reproductive and respiratory syndrome virus( PRRSV) strain was isolated from the serum of a PRRSV infected pig in Jiangsu Province. The biological characteristics of this isolate was identified and the ge-nome of Nsp2 and ORF5 were determined and analyzed. The serum which were detected PRRSV positive and PPV, PRV negative was inoculated and passaged on Marc-145 cells. This isolate was identified by RT-PCR and CPE,and confirmed by immunofluorescence assay(IFA). The TCID50 of this isolate was measured and the genome of Nsp2 and ORF5 were sequenced and its homology and evolutionary relationship were analyzed by DNAStar software. The results indicated that the PRRSV strain was successfully isolated and it could induce cytopathogenic effect( CPE) on Marc-145 cells. The specific fluorescence could be observed and the TCID50 of this strain was 105. 5 . Comparison a-nalysis of the Nsp2 genome of the isolate 2010 JS02 and other strains revealed that the isolate has a discontinuous deletion of 30 amino acids and another deletion at the position of 495-516 amino acid′s site. According to the se-quences analysis of GP5,the isolate 2010JS02 showed identity of 57. 1%-99. 5% among other strains,a high iden-tity of 99 . 5% with NJ-1106 . The phylogenetic tree was combined and showed that 2010 JS02 belonged to NA and classified into HP-PRRSV like WHU4, NJ-1106 and other HP-PRRSV strains. We successfully isolated a HP-PRRSV variant and named it as 2010 JS02 .These results provided foundations for further studying the genetic varia-tion and the prevention of PRRSV.%从江苏某猪繁殖与呼吸综合征( PRRS)发病猪场采集的血清样本中分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒( PRRSV)毒株,对该毒株的生物学特性进行了鉴定,并对其Nsp2和ORF5序列进行测定和序列比对分析。

湖北省某规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征的诊断及流行毒株GP5基因特性分析

湖北省某规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征的诊断及流行毒株GP5基因特性分析李孝文;章洪皲;樊翠华;姜平【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2017(034)009【摘要】2016年湖北省某猪场暴发一起疫情.通过病史调查、临床观察、实验室诊断,确诊该疫情为猪繁殖与呼吸综合征.对病原测序分析的结果显示:其Nsp2基因存在30个氨基酸缺失;ORF5基因与WUH1野毒株同源性最高.此外,生产母猪群和后备猪群血清样品的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ELISA N蛋白抗体S/P值离散度较大,证明该病原为高致病性PRRSV.【总页数】5页(P11-15)【作者】李孝文;章洪皲;樊翠华;姜平【作者单位】南京农业大学动物医学院,江苏南京 210095;西藏新好科技有限公司,西藏拉萨 850000;国家生猪产业技术体系黄陂综合试验站,湖北武汉 430344;国家生猪产业技术体系黄陂综合试验站,湖北武汉 430344;南京农业大学动物医学院,江苏南京 210095【正文语种】中文【中图分类】S852.23【相关文献】1.猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因对猪的DNA免疫 [J], 任慧英;郭鑫;杨汉春;王芳;赵东升;杜希珍2.规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒与副猪嗜血杆菌混合感染的诊断及防治 [J], 裴仉福;陈瑞爱;贺东生;张显浩;唐续;刘好朋;胡永浩3.山东省猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株GP5基因遗传变异分析 [J], 范玉凤;白娟;姜平4.华中地区猪繁殖与呼吸综合征病毒临床流行毒株Nsp2和GP5氨基酸的遗传变异分析 [J], 李彬;王豪男;彭忠;胡睿铭;吴斌5.共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因及猪γ-干扰素基因的腺病毒载体的构建与鉴定 [J], 牛明福;李翔;曹瑞兵;郑其升;魏建超;姬向波;李鹏;周斌;陈溥言因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白假型病毒体系的建立的开题报告

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白假型病毒体系的建立的开题报告一、研究背景和意义猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）是一种引起猪繁殖和呼吸系统疾病的病毒。

该病毒的感染已经成为影响猪养殖业发展的主要因素之一，严重影响了猪肉产业的经济效益和国家的农业发展。

目前，PRRSV的发病机理还不是很清楚，疫苗研发也存在诸多挑战。

研究表明，PRRSV的GP5蛋白是其重要的免疫表位和致病因子。

因此，将GP5蛋白引入病毒载体中可以构建出类似PRRSV的假型病毒，用于疫苗的研发和生产。

同时，对GP5蛋白的研究还可以深入探究PRRSV的感染机制和致病途径等问题。

二、研究目的本项目旨在建立基于GP5蛋白的PRRSV假型病毒体系，探究其复制特性和免疫原性，为疫苗研发和PRRSV感染机制研究提供技术手段和理论支持。

三、预期结果1.成功构建基于GP5蛋白的PRRSV假型病毒体系；2.检测假型病毒的生长曲线和复制能力；3.评估假型病毒的免疫原性和安全性；4.分析GP5蛋白在PRRSV感染和致病过程中的作用和机制。

四、研究方法1.构建GP5蛋白表达载体：将GP5蛋白的编码序列克隆到表达载体中，利用蛋白表达技术得到高表达的GP5蛋白。

2.构建假型病毒载体：选取合适的病毒载体和辅助质粒，将GP5蛋白和其他必需基因克隆到载体中，构建出类PRRSV的假型病毒。

3.检测假型病毒：通过细胞培养、蛋白表达分析、PCR等方法检测假型病毒的生长曲线和复制能力。

4.评估病毒的免疫原性和安全性：对假型病毒进行免疫学检测和动物体内实验，评估其免疫原性和安全性。

五、研究意义本研究将探究PRRSV的GP5蛋白在感染和致病过程中的作用和机制，为PRRSV 疫苗研发和治疗提供新思路和技术支持。

同时，基于GP5蛋白的假型病毒体系可供其他研究使用，例如探究其他病毒的复制机制和免疫原性等。

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白研究进展刘焕;王一成;袁秀芳;徐丽华【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2007(28)11【摘要】猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的传染病,对养猪业危害很大.GP5蛋白是PRRSV ORF5基因编码的一个糖基化的囊膜蛋白,具有较好的免疫原性,能够诱导产生中和抗体.因此,GP5蛋白在PRRSV的致病性、诊断、预防与控制等方面研究中具有重要意义,是研制基因工程疫苗的最佳候选基因.近年来对GP5蛋白的研究取得了重要的进展,现就GP5蛋白的特征、免疫作用及疫苗等方面做一综述.【总页数】5页(P66-70)【作者】刘焕;王一成;袁秀芳;徐丽华【作者单位】新疆农业大学动物医学院,新疆乌鲁木齐,830052;浙江省农科院畜牧兽医研究所,浙江杭州,320021;浙江省农科院畜牧兽医研究所,浙江杭州,320021;浙江省农科院畜牧兽医研究所,浙江杭州,320021;浙江省农科院畜牧兽医研究所,浙江杭州,320021【正文语种】中文【中图分类】S852.659.6【相关文献】1.整合猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的重组鼠白血病病毒特性 [J], 党占国;夏平安;周斌;尹彦涛;王建举;柴春霞;崔保安;陈溥言2.猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白在疫苗上的应用研究进展 [J], 姚睿智;樊宏超;邓清华;姚春雨;马德慧3.表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因重组犬2型腺病毒的构建及鉴定[J], 周井祥;薛江东;刘晔;张守峰;朱霞;扈荣良4.共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因及猪γ-干扰素基因的腺病毒载体的构建与鉴定 [J], 牛明福;李翔;曹瑞兵;郑其升;魏建超;姬向波;李鹏;周斌;陈溥言5.猪繁殖与呼吸综合征病毒的GP5蛋白信号肽切割:一小部分分子保留诱饵肽可能是引起病毒持续感染的分子机理 [J], Thaa B;刘萌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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ｈｉｓ（ＰＲＲＳＶ）ｉｎＵｒｕｍｑｉ，ｔｈｅＧＰ５ｇｅｎｅｓｏｆｓｕｓｐｅｃｔｅｄＰＲＲＳＶｐｏｓｉｔｉｖｅｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅａｍｐｌｉｉｆｅｄｂｙＲＴ— ＰＣＲ．ＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆｐｏｓｉｔｉｖｅ
蔡扩军，李爱巧，何生，杨启元，韩义忠，陈发喜，梁望旺
（１．乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心，新疆乌鲁木齐８３００６３；２．乌鲁木齐市米东区畜牧兽医站，
新疆乌鲁木齐８３１４００；３．乌鲁木齐市米东区三道坝畜牧兽医站，新疆乌鲁木齐８３１４０３；
Ｇｅｎｅｔｉｃｖａｒｉａｔｉｏｎａｎｄｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ５ｇｅｎｅｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉｒｕｓｉｎＵｒｕｍｑｉ
ｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｃｌｏｎｅｄｎｄａｓｅｑｕｅｎｃｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆａｌｉｇｎｍｅｎｔａｎｌｙａｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔａｌｌｔｈｅｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｏｆＧＰ５ｆｒｏｍ５ｉｓｏｌａｔｅｓｗａｓ
４．重庆市动物疫病预防控制中心，重庆渝北４０１１０２）
摘要：为对乌鲁木齐市猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）的分子遗传变异情况进行研究与分析，应用ＲＴ—ＰＣＲ方法对疑似感染ＰＲＲＳＶ猪的组织脏器进行ＰＲＲＳＶＧＰ５基因的扩增，将阳性样品ＰＣＲ产物进行克隆和测序，并应用分子生物学软件对测序结果进行比对和遗传进化分析。结果显示，５株病毒分离株ＧＰ５基因全长均为６０３ｂｐ，与ＪＸＡ１株亲缘关系较近，同属于美洲株的同一基因亚群。本试验结果为掌握乌鲁木齐市ＰＲＲＳＶ的分子遗传变异情况提供了依据。关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；ＧＰ５基因；遗传变异中图分类号：￥８５２．６５文献标志码：Ａ文章编号：０５２９ — ６００５（２０１７）０５ — ００２０ — ０３
４．ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＡｎｉｍａｌＤｉｓｅａｓｅＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄＣｏｎｔｒｏｌＣｅｎｔｒｅ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０１１０２，Ｃｈｉｎａ）
ＣＡＩＫｕｏ－ｊｕｎ，ＬＩＡｉ — ｑｉａｏ，ＨＥＳｈｅｎｇ，ＹＡＮＧＱｉ — ｙｕａｎ，ＨＡＮＹｉ — ｚｈｏｎｇ，ＣＨＥＮＦａ－ｘｉ，
ＩＪＡＮＧＷａｔ：Ｔｏｓｔｕｄｙａｎｄａｎｌｙａｚｅｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｇｅｎｅｔｉｃｖａｉｒａｔｉｏｎｓｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉ —
（１．ＵｒｕｍｑｉＡｎｉｍａｌＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＤｉａｇｎｏｓｉｓＣｅｎｔｅｒ，Ｕｒｕｍｑｉ８３００６３，Ｃｈｉｎａ；
２．ＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙａｎｄＶｅｔｅｉｎｒａｙｒＳｔａｔｉｏｎｏｆＭｉｄｏｎｇＤｉｓｔｉｒｃｔｏｆＵｒｕｍｑｉ，Ｕｒｕｍｑｉ８３１４００，Ｃｈｉｎａ；３．ＡｎｉｍａｌＨｕｓｂｎｄａｙｒａｎｄＶｅｔｅｉｎｒａｒｙＳｔａｔｉｏｎｏｆＳｎｄａａｏｂａＤｉｓｔｒｉｃｔｏｆＵｒｕｍｑｉ，Ｕｒｕｍｑｉ８３１４０３，Ｃｈｉｎａ；
２０中国兽医杂志
２０１７年（第５３卷）第５期
ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ
猪繁殖与呼吸综合征病毒乌鲁木齐分离株ＧＰ５基因遗传变异分析