药剂学实验指导——热原检查

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热原的检查方法

热原的检查方法
热原是一个广义名称，用于描述产生或传递热量的物体、物质或现象。

在工业、能源和环境等领域中，检查热原的方法对于确保过程的正常运行和预防故障至关重要。

以下是几种常见的热原检查方法：
1. 热传导检测法：这是一种测量热量传递速率的方法。

热传导检测仪通常包括一个发热体和一个温度传感器。

当电流通过发热体时，它会产生热量并传递到周围的物体。

这样就可以测量热量的传递速率以及物体的热导率。

2. 热扫描电镜（SEM）：热SEM利用电子束来扫描样本，并通过观察样本的热反应来检查热原的性能。

可以通过观察样品的温度分布图来确定样品的热特性。

3. 红外线热成像（IRT）：这是一种无接触的检测方法，可以用于观察对象的表面温度分布。

热成像仪使用红外线相机（或传感器）来捕捉物体或物质的表面温度，并将其转换成彩色图像。

这种方法可以用于检测特定区域的温度梯度以及区域的温度变化。

4. 热重量分析（TGA）：这是一种测量样品热性能的方法。

TGA可以测量样品的质量随时间和温度的变化，从而确定样品的热稳定性和分解特性。

5. 示温器法：这种方法通常用于测量液体和气体的表面温度。

温度的变化可以观察到指针的变化和液晶显示屏的变化。

总的来说，选择特定的热原检测方法取决于所需的精度、检测对象的类型、要求的速度和测量条件。

在选择特定的热原检测方法之前，最好先了解不同方法的优缺点。

最终的目标是针对特定的应用选择最适合的检测方法，以确保最准确、快速和可靠的结果。

热原检查标准操作规程(2015版药典)

热原检查标准操作规程（2015版药典）1．目的：通过本规程的制定，使该检查操作进一步规范化，标准化，以减少误差的发生。

2．依据：《中国药典》2015年版四部通则1142 P153。

3．适用范围：本标准适用于本公司有热原检查的操作。

4．责任：热原QC检验人员对本规程的实施负责。

5．程序：5．1．概述本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。

5．2．实验材料及用具5．2．1．天平（精度50g，家兔称重用）。

5．2．2．电热干燥箱（0~300±）℃5．2．3．恒温水浴箱（37~100）℃5．2．4．家兔固定盒5．2．5．实验用具：注射器、针头、金属直镊、注射器盒、时钟、75％酒精棉球、手术镊。

5．3．将供试品放入恒温水浴箱中，温热至约38℃。

5．4．供试用家兔供试用的家兔应健康合格，体重1.7kg以上，雌兔应无孕。

预测体温前7日即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。

未曾使用于热原检查的家兔；或供试品判定为符合规定，但组内升温达0.6℃的家兔；或3周内未曾使用的家兔，均应在检查供试品前7日内预测体温，进行挑选。

挑选试验的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30分钟测量体温1次，共测8次，8次体温均在38.0~39.6℃的范围内，且最高与最低体温相差不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。

用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可再供热原检查用，其中升温达0.6℃的家兔应休息2周以上。

对用于血液制品、抗毒素和其他同一抗原性供试品检测的家兔可在5天内重复使用1次。

如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔不再使用。

5．5．试验前的准备5．5．1．用具的除热原：所有与药液接触的器具，都必须清洗干净后，置电热干燥箱中经250℃、50分钟加热除热原。

注射器、针头、手术镊清洗干净后，放入注射器盒内，密闭，放入电热干燥箱中经250℃，50分钟加热除热原。

热原检查法

热原检查法热原检查法是一种用于检测微生物的方法，它基于微生物在特定温度下产生的热量来进行检测。

该方法被广泛应用于食品、水质、医药等领域，具有灵敏度高、快速、可靠等优点。

下面将从原理、操作步骤、优缺点和应用等方面进行详细介绍。

一、原理热原检查法是通过测量微生物在特定温度下产生的热量来进行检测的。

该方法主要基于微生物代谢活动所产生的热量，利用热电偶或红外线传感器对微生物所产生的热量进行实时监测。

当微生物数量较多时，其代谢活动所产生的热量也会相应增加，从而能够通过仪器显示出来。

二、操作步骤1. 样品制备：将待测样品按规定方法处理后，制备成适宜的试样。

2. 检测设备准备：根据使用说明书正确安装设备，并连接好电源和计算机。

3. 仪器调试：按说明书要求对仪器进行调试，并进行空白测试和标准曲线建立。

4. 样品检测：将制备好的样品加入检测仪器中，按要求设定温度和时间，进行检测。

5. 结果分析：根据仪器显示结果进行分析判断，确定样品中微生物的种类和数量。

三、优缺点优点：1. 灵敏度高：热原检查法对微生物的检测灵敏度高，可以检测到微生物数量较少的样品。

2. 快速：该方法操作简便，可以在短时间内获得检测结果，适用于快速筛查大批量样品。

3. 可靠性强：该方法结果准确可靠，并且不受环境影响。

4. 适用范围广：热原检查法适用于多种类型的样品，包括食品、水质、医药等领域。

缺点：1. 无法区分微生物种类：热原检查法只能确定样品中是否存在微生物以及其数量，并不能区分不同种类的微生物。

2. 对温度要求高：该方法对温度要求较高，在操作过程中需要掌握好温度控制以及时间控制等参数。

3. 不适用于活菌数的计数：由于热原检查法只能检测到微生物代谢产生的热量，因此不适用于活菌数的计数。

四、应用热原检查法广泛应用于食品、水质、医药等领域。

在食品领域中，该方法可以用于检测肉制品、水产品、奶制品等样品中的微生物。

在水质领域中，该方法可以用于检测自来水、污水等样品中的微生物。

药典规定的检测热原质的方法

药典规定的检测热原质的方法1. 微生物法：微生物法是药典规定的一种常用的检测热原质的方法。

该方法是通过观察热原质对微生物的生长和繁殖的影响来判断样品中是否含有热原质。

药典通常使用大肠杆菌（Escherichia coli）或鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）等细菌来进行测试。

具体的方法是将待检样品与细菌培养基混合，观察一定时间后，观察细菌的生长情况。

如果待检样品中存在热原质，就会抑制细菌的生长，从而判断样品中存在热原质。

2.物理法：物理法是药典规定的另一种常用的检测热原质的方法。

该方法是通过测量待检样品的热效应来判断样品中是否含有热原质。

药典中常用的物理法包括热量计法和热成像法。

热量计法是使用热量计来测量待检样品在加热或反应过程中产生的热量，如果样品中存在热原质，就会产生明显的热效应。

热成像法是使用红外热像仪来观察样品在加热或反应过程中的温度变化，如果样品中存在热原质，就会在红外热像仪上显示出明显的热点。

3.化学法：化学法是药典规定的另一种常用的检测热原质的方法。

该方法是通过化学反应来判断样品中是否含有热原质。

药典中常用的化学法包括直接显色法和间接显色法。

直接显色法是将待检样品与其中一种试剂直接混合反应，如果样品中存在热原质，则会产生明显的颜色变化。

间接显色法是将待检样品与其中一种试剂混合反应后，再加入其他试剂观察颜色变化，如果样品中存在热原质，则会产生明显的颜色变化。

药典规定的上述方法在检测热原质方面具有可靠性和准确性，被广泛应用于药物制剂的质量控制和检测中。

但需要注意的是，不同药典对于检测热原质的方法可能会有一些差异，具体的检测方法应根据具体的药典要求进行操作。

另外，在实际操作中也应注意正确选择适用的方法，并且保证实验操作的准确性和标准化，以获得可靠的检测结果。

药品的安全性检查-热原

热原
二、家兔检查法
3只兔：0.5小时测1次，共6次，最高-最低＝升高的温度结果：均升高在0.6℃以下且升高的总数在1.3℃以下认为符合规定。
药品的安全性检查——热原
热原
一、基本知识
（一）基本概念热原(pyrogen)系指药品中含有的能引起体温升高的杂质，
主要为细菌性热原。方法：家兔检查法，即将一定剂量的供试品，静脉注入家
兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限量是否符合规定。（二）检查对象
供静脉滴注用的注射剂以及容易感染热原的品种。

执业西药师《药学综合知识与技能》：热原检查

热原检查目前各国药典仍为家兔法。

家兔法：选用家兔作试验动物，是因为家兔对热原的反应和人是相同的。

具体试验方法和结果判断标准参看《中国药典2005版》二部附录。

采用直肠热电偶代替直肠温度计，热电偶在整个实验中固定在直肠内，其温度可在仪表中显示出来。

因而免除对单个家兔温度多次测量操作。

国内四川绵阳医用电子仪器厂生产的RY型热原测试仪基本上符合这种要求，具有分辨率高，读数精确的优点，同时可测虽16只动物，能满足一般热原测定需要。

鲎试验法：利用鲎的变形细胞溶解物与内毒素之间的胶凝反应，试验时制备或购买鲎热原试剂，即送变形细胞溶解物。

然后取一定量的热原试剂，加入一定量的供试品放入洁净的无热原试管中，于37℃水溶液中培育60分钟，观察结果。

同时作阴性对照。

判断如下：如试验品出现凝胶或粘稠度和不透明度增加者为阳性反应，表明供试品有热原。

贵州学|习网收集整理若供试品无变化或仅有絮状物者为阴性，表明供试品无热原。

有人比较兔试验与鲎试验法的灵敏性，结果说明鲎试验法能检出0.0001ug的内毒素，而兔试验法只能检出0.001ug的内毒素，故认为鲎试验比免试验灵敏十倍。

鲎试验特别适用于某些不能用家免进行热原检测的品种，如放射性药剂、肿瘤抑制剂等。

因为这些制剂具有细胞毒性具有一定的生物效应，用家兔检测是不适宜的。

其对革兰氏阴性以外的内毒亲不够敏感，不能代替家兔热原试验法。

热原检查法课件

耳静脉注入
供试品溶液图
然后每隔30 min按前法测其体温 1次，共测6次，以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该家兔体温的升高度数。
计算机测出家兔体温曲线升高值
家兔体温测温装置
试验用的注射器、针头及一切和供试品接触
的器皿，应置烘箱中用250℃加热30 min
家兔体温检查确实
实验器具的准备
注射器、针头等和供试品接触的器皿，应250℃加热30 min，或其他适宜的方法除去热原。
选择适用的家兔3只作为一组
检查法
给每组家兔编号图
给设定的每组输入供试品资料
给设定的每组输入注射时间
测定其正常体温后15 min内，自耳静脉缓缓注入规定剂量(参见表51,5-2.5-3)并温热至约38℃的供试品溶液
测体温
(30 mi/次，8次 38.0～39.6℃ 体温差<0.4℃)
家兔的准备
饲养环境要求
热原试验检查前准备
家兔处同一环境，实验室（图）和饲养室（图）温差不得大于 5℃，实验室温度在 17 ～ 25℃，实验全过程中，室温变化不得大于3℃，应避免噪音干扰家兔正常体温在 38.0℃～ 39.6℃，各兔间正常体温之差不得超过1℃。肛温计插入深度和时间各兔相同 ( 一般约 6 cm) ，时间不得少于 1min ， 30min 测次，一般测 2 次，两次体温之差不得超过 0.2℃，以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。
第五章
药品有害物质检查技术
第二节药品的热原检查
热原检查的方法
《中国药典》热原检查方法是采用家兔升温法进行检查。
本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。

YBB60232012热原检查法

YBB60232012热原检查法Reyuan JianchafaTests for Pyrogen本法系将供试液经静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。

供试用家兔应符合热原检查法（中国药典2010年版二部附录ⅪD）中供试用家兔的要求。

试验前的准备应符合热原检查法（中国药典2010年版二部附录ⅪD）中试验前的准备要求。

供试品溶液的制备制备过程应按无菌操作法进行。

将供试品用纯化水冲洗干净后，用滤纸吸干，切成约0.5cm×3cm条状，置浸提容器内。

除另有规定外，供试品置高压蒸汽灭菌器内，在115℃保持30分钟，再按表1规定加入浸提液，使浸提液浸没供试品，按表2条件浸提，即得。

供试液应在制备后2小时内使用。

表1 供试品表面积或重量与浸提液的比例供试品厚度（mm）表面积或重量与浸提液体积的比例≤0.5 6cm2/ml＞0.5~1.0 3cm2/ml＞1.0 1.25cm2/ml不规则形状0.2g/ml表2 浸提条件浸提温度（℃）浸提时间（小时）37±1 24±237±1 72±250±2 72±270±2 24±2检查法取适用的家兔3只，测定其正常体温符合要求后15分钟以内，自耳静脉缓缓注入温热至约38℃的供试品溶液，注射剂量为10ml/kg，然后每隔30分钟按前法测量其体温1次，共测6次，以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度（℃）。

如3只家兔中有1只温度升高0.6℃或高于0.6℃，或3只家兔体温升高的总和达1.3℃或高于1.3℃，应另取5只家兔复试，检查方法同上。

结果判断在初试的3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总和低于1.3℃；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或高于0.6℃的家兔不超过1只，并且初试、复试合并8只家兔的体温升高总和为3.5℃或低于3.5℃，均判定供试品的热原检查符合规定。

热原检查法

第3讲
修订背景
? ３、增加了升温达0.6 ℃的家兔应休息2 周以上新要求。（防止假阳性）
? 4、实验环境要求更加严格：实验室与饲养室温度相差由不大于 5 ℃改为3 ℃
? 5、强调同组各家兔间温差不大于1 ℃，对家兔固定方式：宽松。
第3讲
修订背景
? 6、判定标准更加严格：初试的 3只家兔体温升高总和低于 1.4 ℃改为低于 1.3 ℃。
3、 ____*
2005版体重1.7~3.0kg
——
每一家兔的使用次数，用于一般药品的检查，不应超过10次。
*三部仍规定，对血液制品、抗毒素和其他同一过敏原的供试品在5天内可重复使用1次。
第3讲
2010 版与2005版区别
2010版
2005版
4、在做热原检查前1-2日在作热原检查前1-2日
第3讲
热原检查法
程春雷山东省药品检验所
第3讲
主要内容
? 热原检查法的简介 ? 具体的修订内容 ? 修订的背景 ? 热原检查的适用性研究 ? 体外热原检查法
第3讲
热原检查法的简介 The term derives f-r1om the greek
? 热原（Pyrogen）w的ord含“义pyros”(fire) and was
第3讲
热原物质及发热机理
第3讲
热原检查法简介-4
20世纪20年代Seibert采用家兔动物模型，通过系列实验证明了引起注射发热的物质来源于细菌，其对热稳定，并可通过滤器。之后， Seibert和其同事共同建立了用于检测药品终产品质量的热原试验
第3讲
热原检查法简介-5
? 1941年《美国药典》修订委员会首次组织了对热原的协作研究，有 FDA、NIH和14个药厂参加，使用253只家兔进行了 3300次实验，研究结果于1943年发表，并促使 1942年USP第12版首次正式收载家兔热原实验方法，为注射用药提供了一个有效和可靠的热原检测手段

热原检查法操作规程

GMP管理文件一、引用标准：中华人民共和国S药典（2005年版）一部。

二、目的：本标准规定了热原检查法标准操作规程。

三、适用范围：适用于热原的检查。

四、责任者：质检人员。

正文：1、简述本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家冤体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。

供试用家兔供试用的家兔应健康合格，体重1.7～3.0㎏，雌兔应无孕。

预测体温前7日即应同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。

未曾用于热原检查的家兔；或供试品判定为符合规定，但组内升温达0.6℃的家兔；或3周内未曾使用的家兔，均应在检查供试品前3～7日内预测体温，进行挑选。

挑选试验的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30分钟测量体温1次，共测8次，8次体温均在38.0～39.6℃的范围内，且最高与最低体温相差不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。

用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可再供热原检查用。

如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔有再使用。

每一家兔的使用次数，用于一般药品的检查，不应超过10次。

试验前的准备在做热原检查前1～2日，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，实验室和饲养室的温度相差不得大于5℃，实验室的温度应在17～25℃，在试验全部过程中，应注意室温变化不得大于3℃，防止动物并避免噪声干扰。

家兔在试验前至少1小时开始停止给食并置于探头或肛温计入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约6㎝，时间不得少于体温的平均值作为该兔的正常体温1次，一般测量2次，两次体温之差不得超过0.2℃，，以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。

当日使用的家兔，正常体温应在38.0～39.6℃，的范围内，且各兔间正常体温之差不得超过1℃，。

试验用的注射器、针头及一切与供试品溶液接触的器皿，应置烘箱中用250℃加热30分钟，也可用其它适宜的方法除去热原。

热原检查法

※热原检查法药检文摘日期:2004-8-11热原检查法1绪言热原也称为发热性物质（日本药局方）''英文叫做Pyrogen，即能够引起恒温动物体温异常升高的物质总称。

与注射剂有关的发热性物质研究可追溯到16世纪。

直到18世纪丹麦生理学家panum的研究中断定，“发热物质是一种对热稳定，溶于水，不溶于乙醇，由活的细菌中来的一类物质，而且微量静注后就能引起高热反应”。

1923年，Seibert肯定地证实了所有注射剂的发热原因是通过革兰氏阴性菌所产生的一种可滤过的高热稳定的热原污染结果。

随后Rademaker进一步证实了Seibert的发现，并进一步强调避免细菌污染的重要性。

之后的共同研究确立了使用家兔检测注射剂及水中致热物质的方法。

这个结果导致了官方的重视，20年后，美国药典于1942年USP12）进行了收载''其后，各国药典相继收载，CHP→1953年''BP→1953年''JP→1951年第6版药局方''半个多世纪来，热原检查法在保证注射剂的安全用药方面发挥了重要作用。

2热原与热原反应热原即发热性物质，目前普遍认为是由革兰氏阴性菌所产生的内毒素（脂多糖），广义说，是所有引起恒温动物体温异常升高物质的总称。

除内毒素引起发热外，还包括病毒，干扰素以及其它种种发热物质。

热原反应是指临床输液反应，如果将携带超量热原物质的注射液静脉输入人体，通常在05-2h 内引起机体严重的临床反应。

表现为：机体外周皮肤血管收缩，停止排汗，散热减少，发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、呕吐，严重时可出现昏迷、休克、死亡等一系列临床症状，体温通常可上升至40℃左右。

3热原的本质在自然界，热原分布很广，可以说无处不在，无处不有，关于热原本质的研究，目前在世界范围内，主要存在二种观点。

一种观点是：热原的本质就是革兰氏阴性-菌所产生的细菌内毒素，就注射剂来讲，其输液反应主要来源于细菌内毒素。

热原检查法的检查方法

热原检查法的检查方法
热原检查法？嘿，这可有点意思。

先准备好实验材料，就像要去打一场仗，装备得齐全呀。

然后把样品弄好，小心操作，可不能马虎。

接着进行实验，哇，这就像开启一场神秘之旅。

注意啥呢？操作得规范呀，不然结果能准吗？就像做饭不按菜谱来，能好吃吗？环境也得干净，不然有干扰咋办？
安全不？只要你严格按照步骤来，一般没啥问题。

就像走在平路上，只要小心点就不会摔倒。

稳定性嘛，只要条件控制好，结果就比较可靠。

就像盖房子，基础打好了就不会轻易塌。

啥时候用热原检查法？检查药品、医疗器械的时候呗。

优势可不少呢，能保证产品安全，就像给产品上了一道保险。

我见过人家做热原检查法，那叫一个认真。

结果准确，让人放心。

就像有个超级侦探，把问题都找出来了。

热原检查法很重要，好好用它。

你还等啥呢？赶紧行动吧！。

热原检测实验报告

一、实验目的1. 了解热原的概念及危害。

2. 掌握热原检测的方法和原理。

3. 学会使用热原检测仪进行实验操作。

4. 提高实验操作技能和数据分析能力。

二、实验原理热原是微生物的代谢产物，具有耐热性，可引起人体发热、寒战、头痛、呕吐等症状。

本实验采用凝胶分散法检测热原，原理为：热原在一定的温度、pH值和离子强度条件下，与凝胶介质中的高分子化合物发生凝集反应，形成肉眼可见的凝胶颗粒，从而检测热原的存在。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 药物样品- 蒸馏水- 生理盐水- 热原标准品- 凝胶分散剂- 凝胶介质2. 实验仪器：- 热原检测仪- 移液器- 电子天平- 烧杯- 恒温水浴箱- 移液管四、实验步骤1. 样品制备：- 将药物样品用蒸馏水溶解，配制成一定浓度的溶液。

- 将生理盐水配制成一定浓度的溶液。

2. 标准曲线绘制：- 将热原标准品用蒸馏水配制成一系列不同浓度的溶液。

- 将标准溶液分别加入凝胶介质中，在热原检测仪上检测，记录凝胶颗粒形成时间。

- 以凝胶颗粒形成时间为纵坐标，热原浓度为横坐标，绘制标准曲线。

3. 样品检测：- 将制备好的样品溶液分别加入凝胶介质中，在热原检测仪上检测，记录凝胶颗粒形成时间。

- 将样品检测数据代入标准曲线，计算出样品中的热原含量。

4. 结果分析：- 比较样品检测数据与标准曲线，确定样品中热原的含量是否符合规定。

五、实验结果1. 标准曲线绘制：- 标准曲线线性良好，相关系数R²=0.99。

2. 样品检测：- 样品溶液在热原检测仪上检测，凝胶颗粒形成时间为（XX±X X）min。

3. 结果分析：- 根据标准曲线，样品中热原含量为XX IU/ml，符合规定。

六、实验讨论1. 本实验采用凝胶分散法检测热原，具有操作简便、灵敏度高、准确性好等优点。

2. 在实验过程中，应注意以下几点：- 严格掌握实验操作步骤，避免误差。

- 控制实验条件，确保实验结果的准确性。

药典规定的检测热原质的方法。

热原质实验是确定销售的药品中微生物含量的一个重要方面，其主要目的是评估药品中微生物的热、化学或抗菌性的能力，筛选出有毒的性异构体以及其他有害菌种。

热原质实验属于微生物病原体及产品中细菌计数的一种重要方法。

它是按照《中国药典》、《中国药典》（第四部）、《英国药典》或国际常用方法规定实施时，测定药品中热原质的一种常用实验方法。

热原质实验分为低热原测定和高热原测定两部分。

低热原测定针对的是细菌或霉菌，其目的是测定未接触化学或其他热原体的药物中的活细菌或霉菌的数量及其活力的有效性，同时测定药物中热原菌的耐热性及产生毒性物质的能力，为有效控制药品生物污染提供数据支持。

高热原测定是对活性物质或有毒性物质（如抗生素活性物质）的稳定性进行检测，以确定此类物质在特定温度、湿度、pH在环境下的稳定性，从而提高和保证药品的质量标准。

热原质实验的实施步骤以及检测方法，最常用的是单磷酸盐方法，具有简便快捷的特点，并且检测结果的准确性多数值在允许范围内，是检测药物中热原质使用较广泛的一种方法。

单磷酸盐试验根据热原质严重程度的不同，可分为轻度、中度、重度三个范围，根据样品中总热原数量的变化，比较待测样品和正常样品之间的热原数量，评估样品中微生物的活性及产生物质（如有毒性物质）的表现。

单磷酸盐试验实验的具体步骤是，以样品为主，加入一定浓度的磷酸钠溶液（单磷酸盐），然后将反应管置入蒸汽滤管锅中，经120℃蒸汽灭菌20分钟，反应管中的菌落数量，计算每伏尔消失的菌落数量，即为所测的热原数量。

另外，全抗性灭菌实验也是用于评定药物中热原质的一种常用方法，相比单磷酸盐实验，全抗性灭菌法更注重抗菌性研究，可提供抗菌药物中热原质的稳定性及活性检测参数，而且可以快速筛选出由应用类药品引起的抗性现象，具有灵敏性较好的特点。

以上就是《中国药典》、《中国药典》（第四部）、《英国药典》及国际常用方法规定的检测热原质的方法，有助于检验药品中热原质的重要性及影响程度，有效控制和限制微生物污染，保证药品的质量标准。

执业中药师药剂学辅导：检查热原的方法

1.家兔发热试验
将一定量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定的方法。

具体工作、环境、家兔的条件及操作方法，应严格按《中国药典》1995年版热原检查项下规定执行。

2.鲎试验法
本法利用一种低温海洋动物-鲎的血细胞（变形细胞）溶解物（又称鲎试剂）与微量细菌内毒素或热原发生凝胶反应，从而检测微量的内毒素或热原的一种实验技术。

该法实质上是一种酶反应，因为鲎血细胞中含有一种高分子量的凝固酶原和一种可凝固蛋白原，前者经内毒素（即热原）激活转化成具有活性的凝固酶，通过酶解作用，使凝固蛋白原转变成凝固蛋白，凝固蛋白又经过交联酶的作用相互聚合形成凝胶。

胶凝的速度与内毒素浓度成正比。

已知反应的最适温度为36℃～38℃，最适pH值为6～7.5.
本法虽具有操作简便、迅速、灵敏度高（比兔法高10倍左右）等优点，但若操作不当，会出现一定数量的假阳性反应，且尚未法定，一般多作预测和筛选试验之用，对革兰阴性杆菌以外的内毒素不敏感。

药剂学实验指导——热原检查

实验十四热原检查实验目的●掌握注射剂热原检查的操作方法及要点。

●掌握注射剂热原检查结果的判定方法。

●理解注射剂热原检查试验前的准备工作。

实验器材药品注射剂供试品。

器材家兔、无菌无热原的注射器及针头、肛温计。

实训指导1．方法步骤（1）供试用家兔的选择供试用的家兔应健康合格，体重1.7～3.0kg，雌兔应无孕。

预测体温前7日即应用同一饲料饲养,在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。

挑选试验的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30min测量体温1次，共测8次，8次体温均在38.0～39.6℃的范围内,且最高与最低体温的差不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。

（2）试验前的准备在作热原检查前1～2日，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，实验室和饲养室的温度相差不得大于5℃，实验室的温度应在17～25℃,在试验全部过程中，应注意室温变化不得大于3℃，防止动物骚动并避免噪音干扰。

家兔在试验前至少1h开始停止给食并置于适宜的装置中,直至试验完毕。

肛温计（精密度为±0.1℃）插入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约6cm，时间不得少于1.5min，每隔30min测量体温1次，测量2次，两次体温之差不得超过0.2℃,以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。

当日使用的家兔，正常体温应在38.0～39.6℃的范围内，且各兔间正常体温之差不得超过1℃。

（3）检查法取适用家兔3只,测定其正常体温后15min内，自耳静脉缓缓注入规定剂量并温热至约38℃的供试品溶液，每隔30min测体温1次,共测6次,以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度(℃) 。

如3只家兔中有1只体温升高0.6℃或0.6℃以上,或3只家兔体温升高均低于0.6℃，但体温升高的总和达1.4℃或1.4℃以上，应另取5只家兔复试，检查方法同上。

（家兔升温为负值时，均以0℃计）（4）结果判断在初试3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，且3只家兔体温升高总和低于1.4℃；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔不超过1只，且初试、复试合并8只家兔的体温升高总和为3.5℃或3.5℃以下,均判为供试品的热原检查符合规定。

执业药师考试药剂学辅导：热原检查法

执业药师考试药剂学辅导:热原检查法 (⼀)家兔发热试验法热原检查⽬前各国药典法定的⽅法仍为家兔发热试验法，属限度试验。

它是将⼀定量的供试品，由静脉注⼊家兔体内，在规定时间内观察体温的变化情况，如家兔体温升⾼的度数超过规定限度即认为有热原反应。

具体试验⽅法和结果判断标准见《中国药典》(2000年版)⼆部附录。

本法结果准确，但费时较长、操作繁琐，不利于连续⽣产。

(⼆)鲎试验法本法操作简单、结果迅速可得、灵敏度⾼。

但本法对⾰兰⽒阴性以外的内毒素不敏感，故还不能完全代替家兔发热试验法。

常⽤于某些不能⽤家兔进⾏热原检测的品种，如放射性药剂等;也适⽤于⽣产注射药品时，检测中间产品是否污染热原。

原理是利⽤动物鲎的变形细胞溶解物与引起热原反应的细菌内毒素之间可产⽣的凝胶反应，从⽽定性或定量地测定此内毒素。

测定⽅法：取4⽀⽆菌、⽆热原带塞玻璃试管放于37℃⽔浴中，向每⽀试管中加⼊0.2ml鲎试剂。

向第1⽀试管内加⼊0.9%nacl液0.2ml，作阴性对照管，此管应⽆凝胶⽣成(因⽆热原不应有凝胶⽣成);向第2⽀试管内加⼊0.9%nacl与0.05µg/ml标准内毒素混合液0.2ml，作阳性对照管，30分钟应出现稳定的凝胶(试管倒转180度，凝胶固定不变)，说明鲎试剂有效;向第3⽀试管内加样品溶液与0.05µg/ml标准内毒素混合液0.2ml作假阳性对照管，30分钟应出现稳固的凝胶，说明供试品内不致有⼲扰物质存在;向第4⽀试管内加⼊检品溶液0.2ml，30分钟后若⽆凝胶⽣成，证明检品中⽆热原存在。

操作时⼀般可将试管倾斜45度观察，如含有热原，多在20分钟就出现阳性反应，同时还须注意如温度、ph值及沉淀剂等对鲎试剂的⼲扰作⽤。

热原检查法

热原检查法第一篇：热原检查法【关键词】热原检查法细菌内毒素检查法热原热原是微生物的代谢产物，系能引起恒温动物和人体体温异常升高的至热性物质。

当注入人体含有热原的量达0.01微克/千克以上的输液时，即可产生热原反应。

《中华人民共和国药典》同时收载了热原检查法（家兔法）和细菌内毒素检查法(鲎试剂法）对输液进行热原检查。

我们对我院临床使用的哈尔滨三精艾富西药业有限公司生产的10个批次0.9%氯化钠注射液液，进行了两种方法联合应用的尝试，收到了良好效果。

1资料与方法1.1研究对象哈尔滨三精艾富西药业有限公司生产的规格为500 ml0.9%氯化钠注射液，批号为:50307A、50411C、50513A、50716A、50910A、50910C、51008A、51116A、51128C、51215C。

1.2试验材料细菌内毒素国家标准品：批号为20056（100EU/支）,厂家为中国药品生物制品鉴定所。

鲎试剂：批号为0507250（0.25EU/ml），厂家为湛江安度斯生物公司。

健康合格家兔（雌兔无孕），1 ml刻度吸管，5 ml试管，20 ml玻璃注射器，肛温计，250 ℃电热恒温烤箱，漩涡混合器、电热恒温水浴箱。

(见表1) 表10.9%氯化钠注射液检查结果（略）1.3方法与结果将上述10批次哈尔滨三精艾富西药业有限公司的0.9%氯化钠注射液，分别按照《中华人民共和国药典》（2000版）附录规定的热原检查法（家兔法）和细菌内毒素检查法（鲎试剂法）的标准进行检查，结果见表1。

2讨论从以上检查结果不难看出，两种方法对同批次的产品进行检查，结果出现了偏差，通过临床跟踪调查，上述批次产品用于临床均未发生热原反应。

内毒素检查法（鲎试剂法）检查热原可靠性强，且操作简便，成本低，省时，省力，是热原检查的发展方向。

相比之下相对古老的热原检查法（家兔法）就显得操作繁琐，成本高，即费时又费力，家兔容易受周围环境、温度、噪声等干扰而影响检查结果。