强骨宝方含药血清对糖尿病模型鼠体外培养成骨细胞的影响

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间质干细胞在宠物临床应用的研究进展

60 中国兽医杂志2021年(第57卷)第2期
明显差异。 1.2.2神经损伤神经损伤的自我修复能力往往有限，因MSCs具有多分化潜能的优点，为神经修复带来良好前景&刘玉梅等［13］通过MTT法筛选褪黑激素！Melatonin,MT)促AD-MSCs增殖至最佳浓度, 结果显示,50 nmol/L MT联合AD-MSCs治疗组的犬脊髓神经参数良好，表明MT预处理AD-MSCs显著提高了犬坐骨神经损伤的修复效果& 1-3皮肤疾病意外创伤、部分内分泌疾病和免疫系统疾病造成的皮肤损伤难以愈合，而免疫抑制药物存在不良反应的风险，干细胞或许是新的治疗方法&犬临床研究表明，MSCs具有促进皮创伤愈合的趋势，可减少炎症反应，增强mRNA表达，促进细胞增殖和血管形成［14-16］ & Nam等［17］通过静脉和肝实质注射AD-MSCs治疗1例犬肝病导致的浅表性坏死性皮炎，治疗初期整体状态改善，皮肤病灶缩小甚至消失,但后来由于肝病进展性恶化，患犬死亡& Han等［18］对1例类固醇难治性落叶型天胞疮使用AD-MSCs进行治疗,发现皮肤改善，泼尼松龙使用剂量减少& 1. 4炎症性肠病炎症性肠病！ InUammatom bowel disexse, IBD) —般是通过排除法诊断，是犬猫常见疾病，易复发,需要长期的药物治疗和饮食调理& Perez-MeTnv等(19鸟0)对静脉给予同源异体AD-MSCs 治疗犬IPD进行研究，结果表明，组织学病变得到改善，临床评分除了 C-反应蛋白没有下降,其他评分均有所改善& Webb等［21］对慢性肠下垂超过3个月的猫进行同源异体AD-MSCs治疗研究，试验组临床得分改善,71%猫临床症状明显改善甚至消失& 不过，该研究缺乏白蛋白、维生素＞12、叶酸试验数据&尽管如此,MSCs对肠道绒毛的再生有着显著作用，有助肠道修复& 1-5干燥性角膜结膜炎干燥性角膜结膜炎(Keratoconjunctivitis sicca, KCS)又称干眼症，是泪腺功能异常导致泪液分泌失衡的疾病&常用治疗药物为抗生素、人工泪液和免疫抑制药物，但容易反复发作，且部分药物昂贵,MSCs或许可以成为替代治疗& Vikatom等(22〕探究对KCS犬第三眼睑泪腺附近和围绕第三眼睑腺体注射不同剂量同源异体ADMSCs的疗效，结果显示，所有测定结果均改善，病程没有恶化& Bittencoue等［23］在主泪腺和第三眼睑腺体注射同源异体AD-MSCs治疗犬KCS,研究结果显示,MSCs比免疫抑制药物的治疗效果好,有效持续时间长& 1.6肛周痿犬肛周痿是肛周组织发生溃疡和成

血清饥饿对人白血病细胞株THP-1细胞增殖、细胞死亡和细胞自噬的影响

血清饥饿对人白血病细胞株THP-1细胞增殖、细胞死亡和细胞自噬的影响高雪;郑晓琦;刘为忠;刘德胜;张静;潘效红【摘要】Objective To investigate the effects of serum deprivation on cell proliferation,cell death and autophagy in human monocytic leukemia cell line THP-1.Methods Experiments were divided into four groups:0％ FBS group,1％ FBS group,5％ FBS and 10％ FBS group(control group),and cells were starved for 24 h and 48 h.Cell proliferation was performed by MTT assay.Cell death was tested by trypan blue exclusion assay.Fluorescence intensity of acridine orange(AO) was examined by a flowcytometer.Western blot was performed for investigating the expression of autophagy-related genes at the protein level.Results The serum deprivation significantly inhibited cell proliferation in a concentration-dependent and time-dependent manner after FBS treatment(P ＜0.05).And serum deprivation significantly increased cell death and the fluorescence intensity of acid autolysosome (P ＜ 0.05).Serum deprivation significantly increased the expression of Atg5,Atg7 and LC3 Ⅱ (P ＜ O.05).Conclusion Serum deprivation can inhibit the cell proliferation,induce cell death and autophagy of THP-1 cells.%目的本实验通过血清饥饿处理人急性单核细胞白血病细胞株THP-1,探究血清饥饿对细胞增殖、细胞死亡和细胞自噬的影响及其机制. 方法实验分为4组:0％ FBS组、1％FBS组、5％ FBS组和10％ FBS组(对照组),血清饥饿时长为24h和48 h.通过MTT法检测细胞增殖,台盼蓝拒染法检测细胞死亡,流式细胞术测定吖啶橙(AO)的荧光强度,免疫印迹法检测自噬相关蛋白Atg5、Atg7和LC3Ⅱ表达. 结果与对照组相比,不同程度血清饥饿处理24h和48h均可以显著抑制THP-1细胞增殖(P＜0.05),细胞增殖呈现一定的血清浓度依赖性和饥饿时间依赖性.血清饥饿处理24h和48 h可以显著增加细胞死亡率(P＜0.05),并增加细胞内酸性自噬体囊泡的形成.免疫印迹显示,血清饥饿显著性增强自噬相关蛋白Atg5,Atg7和LC3Ⅱ的表达(P＜0.05). 结论血清饥饿可降低THP-1细胞增殖,增加细胞死亡率和自噬.【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2017(048)010【总页数】5页(P1003-1007)【关键词】THP-1细胞;血清饥饿;细胞增殖;细胞死亡;细胞自噬【作者】高雪;郑晓琦;刘为忠;刘德胜;张静;潘效红【作者单位】滨州医学院药学院细胞工程研究室,烟台264003;滨州医学院药学院细胞工程研究室,烟台264003;滨州医学院药学院细胞工程研究室,烟台264003;滨州医学院药学院细胞工程研究室,烟台264003;滨州医学院药学院细胞工程研究室,烟台264003;滨州医学院药学院细胞工程研究室,烟台264003【正文语种】中文【中图分类】Q279细胞自噬是一种高度保守的细胞降解过程,可将部分胞质和细胞器隔离在自噬溶酶体中进行分解,将分解得到的大分子进行回收利用。

中药血清药理方法学的研究概况

中药血清药理方法学的研究概况柯玮;朱建华【摘要】中药血清药理学是指将中药、中药复方以及不明成分的药物给动物灌服一定时间后,采集动物血清,用此含药成分的血清进行体外实验的一种实验方法学.本文就该方法学在动物选择、给药方案、含药血清的处理等方面的研究进展进行综述,阐明了血清药理学在中药药效研究的重要性.【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2011(009)006【总页数】2页(P24-25)【关键词】血清药理学;给药方案;血清处理;采血时间【作者】柯玮;朱建华【作者单位】皖南医学院医学三系,安徽芜湖241002;皖南医学院医学三系,安徽芜湖241002【正文语种】中文【中图分类】R285由于中药粗制剂中含有大量杂质，另外，中药作用人体后发挥作用的具体成分不详，若直接加入体外反应系统，其pH、鞣质、无机盐等许多非特异性理化因素，都会干扰实验，产生假阳性或假阴性结果；另外，中药口服后其有机成分在胃肠内会受到消化液和肠道菌微生态转化，特别是苷类化合物，其糖基使之不易从肠道吸收，肠道菌使苷分解，释放的苷元易被肠道吸收而成为真正产生药效的物质。

所以中药直接用于体外实验因其科学性较差，难以得到认可。

而血清药理学的实验方法克服了这些问题。

血清药理学是指将中药、中药复方以及不明成分的药物给动物灌服一定时间后，采集动物血清，用此含药成分的血清作为药物源加入离体反应系统中研究其药理作用的实验方法[1]。

血清药理学是日本学者Hiroko Iwama在1984年第一届和汉医学会上首次提出的，近年来，我国越来越多的中药专家应用此法来研究中药药理作用。

从而避免了中药体外用药的干扰，直接反映中药及其代谢产物的药理作用。

本文就关于血清药理实验的报道加以综述。

1 实验动物的选择常用实验动物为小鼠、大鼠，也可用兔、豚鼠等。

不同种属的动物血清成分不同，所以应尽量选用与人类生物学特性近似的物种[2]，从而缩小动物血清和人类血清在生理、生化等状态下的差异，减少因种属差异而造成的免疫反应，提高实验结果的可靠性[3]。

糖尿病动物模型建立

目录目录I型糖尿病模型建立 (1)链脲佐菌素 (4)四氧嘧啶 (5)II型糖尿病模型建立 (6)建模方法 (6)胰岛素抵抗动物模型 (7)参考文献 (8)糖尿病动物模型建立摘要:本文通过收集相关文献总结糖尿病模型的建立方法。

关键词:糖尿病模型，鼠前言:在生物医学研究的进展过程中常常依赖于使用动物模型作为实验假说和临床假说两者的试验基础，主要有以下几个优点：1.避免了在人身上进行试验所带来的风险，包括伦理学上的相关问题2.可以严格控制实验条件，增强实验材料的可比性4.可以简化实验操作和样品收集。

从实用性出发，本文重点介绍大鼠诱发性糖尿病模型的建立。

科技前沿：日本东京大学的研究人员在新研究中发现一种名为AdipoRon化合物，它能够减轻吃高脂肪食物的小鼠和遗传性肥胖小鼠的胰岛素抗性和葡萄糖耐受不良[8]。

中科院：发现了2型糖尿病重要的早期生物标记物[9]，也有学者认为可以用果蝇制作人体糖尿病模型，不过相关报道较少[11], 乌克坦(Yucatan)［14］小型猪(亦称墨西哥无毛猪)也是糖尿病研究中一个很好的动物模型，只需一次静脉注射水合阿脲(alloxan monohydrate)200 mg/kg体重，就可以产生典型的急性糖尿病。

其临床体征包括高血糖、剧渴、多尿和酮尿等。

[12]灵长类动物猕猴，主要用于病因学、遗传学、神经系统、细胞生化及药物鉴定等方面研究，这样的动物模型，研究人类糖尿病会更接近自然，结果也比较理想，但因价格昂贵，难以得到，国内较少使用。

[13]Ⅰ型糖尿病模型建立1.1手术切除胰腺手术切除胰腺后，动物缺乏胰岛素而出现高血糖。

全部切除胰腺,可制成无胰性糖尿病动物模型,需补充外源性胰酶。

全部切除胰腺,除可引起高血糖外，并可致酮症酸中毒和死亡，故一般主张切除75%~90%的胰。

1.2病毒诱导胸心肌炎病毒D变异体和M变异体均致糖尿病肾病的作用，对其敏感的的动物品系有DBA及DBA/2小鼠，其作用机制与其感染动物后破坏胰岛β细胞有关。

药学论文实验总结范文

题目：中药提取物对糖尿病小鼠模型的降糖作用研究一、实验目的本研究旨在探讨中药提取物对糖尿病小鼠模型的降糖作用，为糖尿病的治疗提供新的思路和依据。

二、实验方法1. 实验动物：选取40只清洁级雄性C57BL/6小鼠，随机分为5组，每组8只。

2. 实验分组：对照组、模型组、中药提取物低剂量组、中药提取物中剂量组、中药提取物高剂量组。

3. 实验药物：中药提取物（由某中药学院提供）。

4. 实验过程：（1）造模：模型组小鼠给予高糖高脂饲料喂养，对照组给予普通饲料喂养，连续喂养8周。

（2）给药：实验第9周开始，各组小鼠分别给予相应药物干预，连续给药4周。

（3）检测指标：分别在实验第9周、第12周和第16周对各组小鼠进行血糖、血脂、胰岛素水平检测。

三、实验结果1. 血糖水平：与对照组相比，模型组小鼠血糖水平显著升高（P<0.01）；与模型组相比，中药提取物低、中、高剂量组小鼠血糖水平均显著降低（P<0.01）。

2. 血脂水平：与对照组相比，模型组小鼠血脂水平显著升高（P<0.01）；与模型组相比，中药提取物低、中、高剂量组小鼠血脂水平均显著降低（P<0.01）。

3. 胰岛素水平：与对照组相比，模型组小鼠胰岛素水平显著降低（P<0.01）；与模型组相比，中药提取物低、中、高剂量组小鼠胰岛素水平均显著升高（P<0.01）。

四、实验结论1. 中药提取物对糖尿病小鼠模型具有明显的降糖作用。

2. 中药提取物对糖尿病小鼠模型的降糖作用可能与调节血脂、提高胰岛素水平有关。

五、实验讨论本研究结果表明，中药提取物对糖尿病小鼠模型具有明显的降糖作用，为糖尿病的治疗提供了新的思路。

然而，本研究仅针对糖尿病小鼠模型，尚需进一步研究中药提取物对糖尿病患者的临床应用价值。

六、实验展望1. 深入研究中药提取物的降糖机制。

2. 开展中药提取物对糖尿病患者的临床研究。

3. 探索中药提取物与其他治疗方法的联合应用。

2型糖尿病人骨髓间充质干细胞生物学特性及体外示踪的开题报告

2型糖尿病人骨髓间充质干细胞生物学特性及体外示踪的开
题报告
研究背景
2型糖尿病（type 2 diabetes，T2D）是一种常见的代谢性疾病，其主要特征为
胰岛素抵抗和胰岛素分泌不足。

近年来，越来越多的证据表明，骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）具有治疗T2D的潜力。

其原因是BMSCs具有良好的自我更新和分化能力，能够分化为多种细胞类型，并释放一系列细
胞因子、生长因子和免疫调节分子，在组织修复和免疫调节方面发挥重要作用。

但是，目前对于T2D患者BMSCs的生物学特性和体外示踪方面还缺乏深入的研究。

研究目的
本研究旨在探讨2型糖尿病患者BMSCs的生物学特性和体外示踪方法，为进一
步研究其应用于治疗T2D提供理论和实验基础。

研究内容
1.2型糖尿病患者BMSCs的生物学特性研究
通过对来自T2D患者的BMSCs进行体外培养、鉴定和分析其生长特性、克隆形成能力、细胞表型、多向分化潜能和分泌因子等生物学特性，探讨T2D患者BMSCs与正常人BMSCs的差异。

2.2型糖尿病患者BMSCs体外示踪方法的比较研究
比较研究几种常见的BMSCs体外示踪方法，包括荧光探针、放射性同位素、重
组蛋白等，评估其在T2D患者BMSCs中的适用性和安全性。

研究意义
该研究有望为更好地了解T2D患者BMSCs的生物学特性和体外示踪方法提供新的思路和方法，为进一步研究其在T2D治疗中的应用提供实验基础。

同时，该研究还可为BMSCs在其他代谢性疾病中的应用提供参考。

巴戟天多糖含药血清对体外培养成骨细胞凋亡的保护作用观察

・基础研究・巴戟天多糖含药血清对体外培养成骨细胞凋亡的保护作用观察李楠１，王和鸣１，郭素华２，林旭３，郑良朴４，王力１（１．福建中医学院骨伤系，福建福州３５０１０８；２．福建中医学院药学系；３．福建医科大学分子医学中心；４．福建中医学院中西医结合研究院）【摘要】目的：通过体外培养成骨细胞（ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ，ＯＢ），观察巴戟天多糖对细胞凋亡的保护作用，探讨巴戟天促进成骨细胞活性的机制。

方法：取巴戟天多糖和巴戟天水提液制备含药血清，用含药血清进行细胞培养。

取２４ｈ内新生ＳＤ大鼠头盖骨成骨细胞，取２代培养的成骨细胞，分为对照组（培养过程中仅加入大鼠血清）、诱导凋亡组（对照组中加入全反式维甲酸）、巴戟天水提物组（诱导凋亡组中加入巴戟天水提物药物血清）、巴戟天多糖组（诱导凋亡组中加入巴戟天多糖药物血清），通过荧光显微镜观察，流式细胞术检测细胞凋亡，ＲＴ－ＰＣＲ检测Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ基因表达，对巴戟天多糖在细胞凋亡过程中的作用进行评价。

结果：诱导凋亡组１２ｈ诱导的ＯＢ出现凋亡，细胞核或细胞质内可见致密的黄绿染色，染色质形成明亮的凝聚块，２４ｈ单个凋亡细胞与周围的细胞分离，细胞皱缩呈圆形或卵圆形，细胞变小，胞浆致密，细胞器相互靠近，染色质浓缩，形成不同形状和大小的块状。

巴戟天水提物组、巴戟天多糖组凋亡率显著低于诱导凋亡组（Ｐ＜０．０１），且巴戟天多糖组低于巴戟天水提物组（Ｐ＜０．０５）。

凋亡细胞Ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达水平：对照组＞巴戟天多糖组＞巴戟天水提物组＞诱导凋亡组。

ＢａｘｍＲＮＡ表达水平：诱导凋亡组＞巴戟天水提物组＞对照组＞巴戟天多糖组（Ｐ＜０．０１）。

Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ：对照组＞巴戟天多糖组＞巴戟天水提物组＞诱导凋亡组（Ｐ＜０．０１）。

结论：巴戟天在一定程度上可抑制全反式维甲酸诱导的成骨细胞凋亡，且巴戟天多糖的这种作用显著优于巴戟天水提物，说明巴戟天多糖是巴戟天抑制成骨细胞凋亡的主要成分之一。

【关键词】巴戟天多糖；成骨细胞；细胞凋亡；Ｂｃｌ－２；ＢａｘＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｖｉｔｒｏｂｙＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅＬＩＮａｎ＊，ＷＡＮＧＨｅｍｉｎｇ，ＧＵＯＳｕ－ｈｕａ，ＬＩＮＸｕ，ＺＨＥＮＧＬｉａｎｇ－ｐｕ，ＷＡＮＧＬｉ．＊ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓａｎｄＴｒａｕｍａｔｏｌｏｇｙ，ＦｕｊｉａｎＣｏｌｌｅｇｅｏｆＴＣＭ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０１０８，Ｆｕｊｉａｎ，ＣｈｉｎａＡＢＳＴＲＡＣＴＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｐｒｏｍｏｔｉｎｇｔｈｅｃｙｔｏａｃｔｉｖｅｏｆｏｓ－ｔｅｏｂｌａｓｔｂｙＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｄｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｎｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＰｒｅｐａｒｅｄｂｌｏｏｄｓｅｒｕｍｗｉｔｈＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅａｎｄＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｄＯｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｎｖｉｔｒｏｗｉｔｈｉｔ．Ｔｈｅｓｅｃｏｎｄｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓｉｎｖｉｔｒｏｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｃｒａｎｉｕｍｏｆ２４－ｈｏｕｒｓｎｅｗｂｏｒｎＳＤｒａｔ，ｗｈｉｃｈｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（ａｄｄｉｎｇｏｎｌｙｒａｔｓｅｒｕｍｄｕｒｉｎｇｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ），ｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓｇｒｏｕｐ（ａｄｄｉｎｇｔｒａｎｓｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｉｎｃｏｎ－ｔｒｏｌｇｒｏｕｐ），ＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｇｒｏｕｐ（ａｄｄｉｎｇｓｅｒｕｍｐｒｅｐａｒｅｄｂｙＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｉｎｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓｇｒｏｕｐ）ａｎｄＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｇｒｏｕｐ（ａｄｄｉｎｇｓｅｒｕｍｐｒｅｐａｒｅｄｂｙＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎｉｎｄｕｃ－ｔｉｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓｇｒｏｕｐ）．Ａｄｏｐｔｉｎｇｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙａｎｄｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢｃｌ－２ａｎｄＢａｘｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＲＴ－ＰＣＲ，ｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｏｎｔｈｅｃｏｕｒｓｅｏｆｏｓｔｅｏｂｌａｓｔａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅａｐｏｐｔｏｔｉｃｒａｔｅｏｆＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｇｒｏｕｐａｎｄＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ－ｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）．ＴｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｉｏｏｆＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｇｒｏｕｐｗａｓｌｏｗ－ｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＢｃｌ－２ｍＲＮＡｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｃｅｌｌ：ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ＞ＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｇｒｏｕｐ＞ＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｇｒｏｕｐ＞ｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）．Ｅｘ－ｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＢａｘｍＲＮＡ：ｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓｇｒｏｕｐ＞ＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｇｒｏｕｐ＞ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ＞ＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）．Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ：ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ＞ＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｇｒｏｕｐ＞ＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔａｑｕｅｏｕｓｅｘ－ｔｒａｃｔｇｒｏｕｐ＞ｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔｃａｎｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｎｄｕｃｅｄ基金项目：国家自然科学基金（编号：３０２７１６３０）及福建省青年科技人才创新项目资助（编号：２００３Ｊ０３９）通讯作者：李楠Ｔｅｌ：０５９１２２８６１１３７Ｅｍａｉｌ：ＭＲ．ＬＩＮＡＮ＠１２６．ｃｏｍｂｙｔｒａｎｓ－ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｉｎｓｏｍｅｅｘｔｅｎｔ．ＴｈｅａｂｏｖｅｒｏｌｅｏｆＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｂｅｔｔｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆＭｏｒｉｎ－ｄａＲｏｏｔａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔ．ＩｔｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｅｓｓｅｎｔｉａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｏｓ－ｔｅｏｂｌａｓｔａｐｏｔｏｓｉｓ．ＫｅｙｗｏｒｄＭｏｒｉｎｄａＲｏｏｔＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；Ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ；Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；Ｂｃｌ－２；ＢａｘＺｈｏｎｇｇｕｏＧｕｓｈａｎｇ／ＣｈｉｎａＪＯｒｔｈｏｐ＆Ｔｒａｕｍａ，２００８，２１（１）：３９－４１ｗｗｗ．ｚｇｇｓｚｚ．ｃｏｍ南药巴戟天（Ｍｏｒｉｎｄａｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓｈｏｗ）具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的作用，临床上以巴戟天为主药治疗肾阳不足、肝血亏虚型骨质疏松症效果明显，具有显著缓解临床症状和体征等功能。

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生命科学仪器 2023年第21卷/第6期研究报告69作者简介:田晓晨(1986.8-)男,汉族,硕士,主治医师,籍贯:吉林省江源县,研究方向:脊柱关节疾病㊁骨质疏松症治疗等㊂*通讯作者:田晓晨,主治医师;568150541@q q.c o m 基金项目:河北省医学科学研究重点课题编号:20191466,20191507.B M P -2/S m a d s /O s t e r i x 信号在氟化钠诱导大鼠成骨细胞增殖分化中的作用研究田晓晨1* 蔡纪平2 范金鹏1 王娜3 王喜1 李晓华1 李云1(1.石家庄市人民医院骨科,河北石家庄050000;2.石家庄医学高等专科学校中药教研室,河北石家庄0500623.河北省中医药科学院皮肤科,河北石家庄050031)摘要目的探讨氟化钠对大鼠颅骨成骨细胞增殖分化的影响,并进一步研究B M P -2/S m a d s /O s t e r i x 信号的调控机制㊂方法选择新生S D 大鼠(24h 以内)颅骨,分离大鼠颅骨中的成骨细胞,进行体外原代培养㊂分别用不同浓度的氟化钠作用于成骨细胞,用噻唑蓝(M T T )㊁碱性磷酸酶观察氟化钠对大鼠成骨细胞的影响,并用蛋白印迹法测定B M P -2蛋白㊁S m a d 1/5/9蛋白㊁O s t e r i x 蛋白的表达㊂结果与对照组相比,低剂量的氟化钠(0.25m m o l /L ㊁0.50m m o l /L )暴露于成骨细胞,成骨细胞增殖明显㊁碱性磷酸酶活性增强,而当高剂量的氟化钠(2.00m m o l /L ㊁4.00m m o l /L )刺激成骨细胞,成骨细胞的增殖明显受到抑制㊁碱性磷酸酶活性降低;与对照组比较,低剂量氟化钠浓度为0.50m m o l /L 时,B M P -2蛋白㊁S m a d 1/5/9蛋白㊁O s t e r i x 蛋白的表达水平显著升高,差异有统计学意义(P <0.05)㊂结论低浓度氟化钠可通过B M P -2/S m a d s /O s t e r i x 信号促进大鼠成骨细胞的增殖和分化,高浓度氟化钠则抑制成骨细胞的增殖分化㊂关键词成骨细胞;增殖分化;B M P -2/S m a d s /O s t e r i x 信号E f f e c t o f B M P -2/S m a d s /O s t e r i x s i g n a l o n p r o l i f e r a t i o n a n d d i f f e r e n t i a t i o n o f r a t o s t e o b l a s t s i n d u c e d b ys o d i u m f l u o r i d e T I A N X i a o c h e n 1*,C A I J i p i n g 2,F A N J i n p e n g 1,W A N G N a 3,W A N G X i 1,L I X i a o h u a 1,L I Y u n 1(1.D e p a r t m e n t o f O r t h o p e d i c s ,S h i j i a z h u a n g P e o p l e 's H o s p i t a l ,S h i j i a z h u a n g 050000,C h i n a 2.D e p a r t m e n t o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e ,S h i j i a z h u a n g M e d i c a l C o l l e g e ,S h i j i a z h u a n g 050062,C h i n a 3.D e p a r t m e n t o f D e r m a t o l o g y ,H e b e i A c a d e m y o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e ,S h i j i a z h u a n g 050031,C h i n a )*C o r r e s p o n d i n g a u t h o r :T I A N X i a o c h e n ,A t t e n d i n g p h y s i c i a n ;E -m a i l :568150541@q q .c o m ʌA b s t r a c t ɔO b je c t i v e :T o i n v e s t i g a t e t h e ef f e c t o f s o d i u m f l u o r i d e o n t h e p r o l i f e r a t i o n a n d d i f f e r e n t i a t i o n o f c r a n i a l o s t e o b l a s t s i n r a t s ,a n d t o f u r t h e r s t u d y t h e r eg u l a t o r y m e ch a ni s m o f B M P -2/S m a d s /O s t e r i x s i g n a l i n g.M e t h o d s :O s t e o b l a s t s w e r e i -s o l a t e d f r o m t h e s k u l l o f n e o n a t a l S D r a t s (w i t h i n 24h )a n d c u l t u r e d i n v i t r o .T h e o s t e o b l a s t s w e r e t r e a t e d w i t h d i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o n s o f s od i u m f l u o r i de ,a n d t h e ef f e c t s o f s o d i u m f l u o r i d e o n o s t e o b l a s t s w e r e o b s e r v e d w i t h M T T a n d a l k a l i n ep h o s p h a t a s e .T h e e x p r e s s i o n s o f B M P -2p r o t e i n ,S m a d 1/5/9p r o t e i n a n d O s t e r i x p r o t e i n w e r e d e t e r m i n e d b y we s t e r n b l o t .R e s u l t s :C o m p a r e d w i t h t h e c o n t r o l g r o u p ,o s t e o b l a s t s p r o l if e r a t e s ig n i f i c a n t l y a n d a l k a l i n e ph o s p h a t a s e a c ti v i t yi s e n -h a n c e d w h e n e x p o s e d t o l o w d o s e s o f s o d i u m f l u o r i d e (0.25m m o l /L ,0.50m m o l /L ),w h i l e o s t e o b l a s t s a r e s t i m u l a t e d b yh i g h d o s e s o f s o d i u m f l u o r i d e (2.00m m o l /L ,4.00m m o l /L ).T h e p r o l i f e r a t i o n o f o s t e o b l a s t s w a s s i g n i f i c a n t l yi n h i b i t e d a n d t h e a c t i v i t y o f a l k a l i n e p h o s p h a t a s e w a s d e c r e a s e d .C o m p a r e d w i t h t h e c o n t r o l g r o u p ,t h e e x pr e s s i o n l e v e l s o f B M P -2p r o t e i n ,S m a d 1/5/9p r o t e i n a n d O s t e r i x p r o t e i n w e r e s i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e d w h e n t h e c o n c e n t r a t i o n o f l o w d o s e s o d i u m f l u o r i d e w a s 0.50m m o l /L ,w i t h s t a t i s t i c a l s i gn i f i c a n c e (P <0.05).C o n c l u s i o n :L o w c o n c e n t r a t i o n s o d i u m f l u o r i d e c a n p r o m o t e t h e p r o l i f e r a t i o n a n d d i f f e r e n t i a t i o n o f o s t e o b l a s t s t h r o u g h B M P -2/S m a d s /O s t e r i x s i g n a l ,w h i l e h i gh c o n c e n t r a -t i o n s o d i u m f l u o r i d e c a n i n h i b i t t h e p r o l i f e r a t i o n a n d d i f f e r e n t i a t i o n o f o s t e o b l a s t s .ʌK e y wo r d s ɔo s t e o b l a s t ;P r o l i f e r a t i o n a n d d i f f e r e n t i a t i o n ;B M P -2/S m a d s /O s t e r i x s i g n a l 中图分类号:R 249 文献标识码:A D O I :10.11967/2023211214氟是自然界中广泛存在的一种亲骨性元素,可促进机体对钙㊁磷的吸收,临床上常给予适量氟制剂,促进骨折愈合[1]㊂氟元素进入人体后,首选的蓄积部位是骨组织㊂有研究表明成骨细胞是氟元素作用的主要靶细胞[2],在骨的生长㊁修复㊁重建及代谢过程中起到关键作用㊂除此之外,有相关研究报道显示,若机体摄入大量氟元素,会明显增加全身性慢性疾病发生概率,较为常见的有氟骨症及氟斑牙㊂由此可见,氟的剂量决定了其对机体的作用㊂研究显示,在骨细胞外基质的分泌㊁骨细胞外基质的合成以及成骨细胞的分化中,B M P-2/S m a d s /O s t e r i x 信号均扮演着重要角色[3]㊂然而,研究报告生命科学仪器 2023年第21卷/第6期70鲜有文献研究此信号在氟化钠(N a F)诱导大鼠成骨细胞增殖分化中的机制㊂本研究利用大鼠乳鼠的颅盖骨分离成骨细胞培养技术,在细胞水平上观察单一影响因素的直接效应;以B M P -2/S m a d s /O s -t e r i x 信号为切入点,旨在探究不同浓度的N a F 对大鼠乳鼠成骨细胞增殖分化的影响,并探讨B M P -2/S m a d s /O s t e r i x 信号的调控机制,为其临床研究提供分子理论基础㊂1 材料和方法1.1 实验动物向河北省实验动物中心购买8只S D 大鼠(24h 内),合格证编号:1803244㊂1.2 实验仪器二氧化碳培养箱(上海力康公司),D M 500型生物显微镜(德国L e i c a 公司),向美国L i -C O R 公司购买的O d y s s e y 9120双色红外激光成像仪,向德国E p p e n d o r f 公司购买的B i o P h o -t o m e t e r p l u s 核酸蛋白定量仪㊂1.3 实验主要试剂 N a F(天津博迪化工股份有限公司);Ⅱ型胶原酶(s i gm a 公司);D M E M 培养基㊁胰蛋白酶(S o l a r b i o 公司);向南京建成生物试剂公司购买的碱性磷酸酶试剂盒(批号:20170312);兔抗鼠B M P -2抗体㊁兔抗鼠S m a d 1/5/9抗体㊁兔抗鼠O s -t e r i x 抗体㊁兔抗鼠G A P D H 抗体㊁羊抗兔二抗(均购自A f f i n i t y Bi o s c i e n c e s ,美国)等㊂1.4 成骨细胞的分离㊁培养和鉴定于30m i n 灭活的含10%小牛血清(F C S )的D M E M 培养基中,严格无菌条件下分离S D 级大鼠乳鼠(24h 以内)颅骨,调整温度37ħ,湿度为5%C O 2饱和湿度,选择对数生长期细胞㊂通过碱性磷酸酶细胞化学染色鉴定为成骨细胞,纯度超过90%㊂1.5 建立细胞模型用无血清的D M E M 培养基将N a F 储备液逐级稀释成0.25,0.50,1.00,2.00,4.00m m o l /L ,选择对数生长期细胞进行培养,时间持续48h ,阴性对照组选择无血清D M E M 培养基㊂1.6 成骨细胞增殖实验在96孔板中接种对数生长期纯化成骨细胞,确认细胞贴壁汇合后,培养24h 后更换为含0,0.25,0.50,1.00,2.00,4.00m m o l /L 浓度的N a F 无血清D M E M 培养基㊂培养48h ,用噻唑蓝(M T T )法测定细胞的增值情况㊂1.7 成骨细胞碱性磷酸酶活性实验将成骨细胞接种于两个24孔培养板中,培养24h 后弃去原培养基,换加含0,0.25,0.50,1.00,2.00,4.00m m o l /L浓度的N a F 无血清D M E M 培养基,实施培养,时间持续48h ㊂将培养基取出,采取P B S 进行清洗,每孔加入0.1%T r i t o nˑ100溶液250μL ㊂在细胞裂解持续10m i n 后,对裂解液进行收集,对碱性磷酸酶测试盒说明书进行认真阅读,严格按照说明书内容开展实验㊂1.8 W e s t e r n B l o t 实验将对数生长期的成骨细胞接种于6孔板,培养24h 后,弃去培养基,换加含0,0.25,0.50,1.00m m o l /l 浓度的N a F 无血清D ME M 培养基㊂培养48h 后收集细胞,提取蛋白,加入不同倍数稀释的一抗兔抗鼠B M P -2(1:500)㊁兔抗鼠S m a d 1/5/9(1:600)㊁兔抗鼠O s t e r i x 抗体(1:1000),进行免疫蛋白印记实验㊂1.9 统计学方法数据处理用S P S S 21.0软件,计量资料以(x ʃs )表示,多组间比较行单因素方差分析(A N O V A ),以P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结果2.1 成骨细胞鉴定在倒置显微镜辅助下进行观察,培养20h 后,大鼠成骨细胞大多处于贴壁生长状态,同时细胞形态呈多边形及三角形㊂培养时间不断延长的同时,可观察到长梭形及条索形等多样化细胞形态㊂培养72h 后,大鼠成骨细胞形态呈卵圆形㊂经过碱性磷酸酶染色后,可见成骨细胞细胞质颜色为深蓝色的A L P 颗粒,其细胞核为浅蓝色,而胞浆则为棕黑色,细胞染色率约为90%㊂2.2 M T T 法测定N a F 对S D 大鼠乳鼠成骨细胞的增殖作用与对照组相比,0.25m m o l /L ㊁0.50m m o l /L 浓度的N a F 可明显促进成骨细胞的增殖,差异有统计学意义(P<0.05);当N a F 浓度为4.00m m o l /L 时,成骨细胞的增殖受到了明显的抑制作用,差异有统计学意义(P <0.05),见图1㊂图1 N a F 对成骨细胞的影响注:与对照组比较,*P <0.052.3 成骨细胞碱性磷酸酶的活性实验与对照组相比,当N a F 浓度为0.25m m o l /L ㊁0.50m m o l /L时,碱性磷酸酶活性明显升高,差异有统计学意义(P <0.05);当N a F 浓度为0.50m m o l /L 时,A L P活性达到峰值(P<0.05);在N a F 浓度达到2.00m m o l /L ㊁4.00m m o l /L 时,A L P 活性低于N a F浓度0.50m m o l /L 时,差异有统计学意义(P<0.05)见图2㊂2.4 B M P-2/S m a d s /O s t e r i x 信号蛋白表达与对照组相比,0.25m m o l /L ㊁0.50m m o l /L 浓度的N a F 处理成骨细胞48h 后,B M P -2㊁S m a d 1/5/9㊁O s t e r i x 蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P生命科学仪器 2023年第21卷/第6期研究报告71<0.05);当N a F 浓度为1.00m m o l /L 时,B M P -2㊁S m a d 1/5/9㊁O s t e r i x 蛋白表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P >0.05)㊂见图3㊂图2 N a F 对成骨细胞A L P 活性的影响注:与对照组比较,*P <0.05图3 W e s t e r n B l o t 法检测N a F 对B M P -2㊁S m a d 1/5/9㊁O s t e r i x 蛋白表达的影响注:与对照组比较,*P <0.053 讨论正常机体对氟的需求量为1.0~1.5m g/d ,适量氟可有效促进骨形成;但是,如果机体每日的氟摄入量超过4m g,则引起包括氟骨症在内的多种代谢性骨病㊂骨骼重建是一个达到成年年龄的正常人的主要骨骼代谢方式,主要包括2个过程,骨吸收及骨形成㊂二者协同来维持骨代谢的平衡㊂成骨细胞不仅对骨骼结构的维持发挥着重要作用,并且能够对骨骼微环境稳态实施有效调节,而B M P /S m a d s 信号通路除了与骨形态的维持有密切关系外,还对骨祖细胞向成骨细胞分化发挥着一定促进作用[4]㊂本实验通过研究不同氟元素暴露对大鼠成骨细胞的影响,以B M P -2/S m a d s /O s t e r i x 信号为切入点,探究其调控机制,为避免氟元素的过度摄入造成的骨相损害提供分子生物学依据[5-6]㊂本研究结果表明,不同浓度的N a F 刺激成骨细胞,0.25m m o l /L ㊁0.50m m o l /L 的N a F 可明显促进成骨细胞的增殖,以0.50m m o l /L 时作用最为显著,但是当N a F 暴露浓度逐渐升高,成骨细胞的增殖又受到了明显的抑制作用[7-8]㊂可见氟化钠对成骨细胞的增殖呈双重调节作用,低浓度促进,高浓度抑制[9]㊂本研究结果显示,0.25m m o l /L ㊁0.50m m o l /L浓度N a F 处理成骨细胞后,B M P -2㊁S m a d 1/5/9㊁O s t e r i x 蛋白表达水平均随着染氟浓度的增加而升高,表明B M P -2/S m a d s /O s t e r i x 信号参与了低浓度的N a F (0.25m m o l /L ㊁0.50m m o l /L)促进成骨细胞增值分化的过程㊂综上所述,低剂量的N a F (0.25m m o l /L ㊁0.50m m o l /L )可以促进成骨细胞的增殖和分化作用,B M P -2/S m a d s /O s t e r i x 信号参与了N a F 促进成骨细胞增殖分化的过程;高剂量的N a F (2.00m m o l/L ㊁4.00m m o l /L)抑制成骨细胞的增殖分化,该作用与N a F 剂量有关㊂本实验的研究为正确利用氟盐促进骨骼生长,治疗骨质疏松等疾病提供新的分子理论依据㊂本实验也存在一些局限性,由于实验场所条件㊁时间的限制,本研究只对S D 大鼠成骨细胞进行了体外的原代培养,做了初步性的探索[10]㊂研究N a F 对成骨细胞生物活性影响的具体作用机制,探究B M P -2/S m a d s /O s t e r i x 信号的调控机制,阐明氟元素的双重调节作用,揭示氟骨症等代谢性骨病的分子发生机制,需要进行深入研究㊂参考文献[1]杨东靕.氟加钙疗法治疗大鼠骨质疏松的疗效观察[J ].中国地方病防治杂志,2015,030(003):206.[2]S A M A L P ,J E N A D ,M A H A P A T R A A ,e t a l .F l u o r o s i s :a n e pi -d e m i c h a z a r d a n d i t s c o n s e q u e n c e s o n l i v e s t o c k p o p u l a t i o n [J ].I n -d i a n F a r m e r ,2016,3(3):180-184.[3]S c a r f ì,S o n i a .U s e o f b o n e m o r p h o g e n e t i c p r o t e i n s i n m e s e n c h y-m a l s t e m c e l l s t i m u l a t i o n o f c a r t i l a g e a n d b o n e r e pa i r [J ].W o r l d J o u r n a l o f S t e m C e l l s ,2016,8(1).[4]Y u e G ,L i a n J M ,L e i S ,e t a l .m i R-155i n h i b i t s m o u s e o s t e o b l a s td i f fe r e n t i a t i o n b y s u p p r e s s i n g S M A D 5e x pr e s s i o n [J ].B i o m e d R e s I n t ,2017;2017:1893520.[5]代佑罡,陈宣好,杨璐珲,张华,韦艳.氟化钠饮水染毒6个月对大鼠骨组织成骨活性标志的影响[J ].环境与职业医学,2019,36(08):725-730.[6]张静如,逢丹丹,戴生明成骨细胞分化及调节过程,中华风湿病学杂志[J ],2016,20:486-488.[7]何欢,平静,姜晨辉.氟化钠对成骨细胞M C 3T 3-E 1分化及W n t 信号转导通路的影响[J ].中国临床药理学杂志,2019,035(004):355-357.[8]L I R ,L I U J ,L I Q ,e t a l .m i R -29a s u p pr e s s e s g r o w t h a n d m e -t a s t a s i s i n p a p i l l a r y t h y r o i d c a r c i n o m a b y t a r g e t i n g AK T 3.T u m o r B i o l .2016;37:3987-3996.[9]Z H A N G Y E .M e c h a n i s t i c i n s i g h t i n t o c o n t e x t u a l T G F-βs i gn a -l i n g .C u r r O pi n C e l l B i o l .2018;51:1-7.[10]X i a o y u S ,P a n p a n D ,Y i x i n M ,e t a l .A c r u c i a l r o l e f o r u p-s t r e a m r e g u l a t o r s o f t h e b o n e m o r p h o g e n e t i c p r o t e i n (B M P )s i g-n a l i n gi n o s t e o b l a s t d i f f e r e n t i a t i o n [J ].B o n e ,2016:219-219.。

不同糖浓度对体外培养小鼠成纤维细胞增殖、分化的影响

不同糖浓度对体外培养小鼠成纤维细胞增殖、分化的影响【摘要】【关键词】创伤愈合成纤维细胞血糖应激反应Glucose concentration on fibroblast proliferationLI Sheng,SHI Han ping,SUN Guan qing,et al.（Department of Gastrointestinal and Pancreatic Surgery,First Affiliated Hospital of Sun Yat SenUniversity,Guangzhou 510080,China）Abstract： Objective To find the relationship between glucose concentration and the proliferation of fibroblast.Methods The proliferation of mouse fibroblast was tested in different concentration of glucose at 12h,24h,48h with CCK kit.The amount of the out cell type I collagen fibers was tested by the mouse type I collagen Elisa kit,and the expression of αsmooth muscle actin(αSMA) tested by immunochemistry.Results We found that under the medium of low concentration,the proliferation was much more than that in the high concentration groups after 12h,24h and 48h(P<0.01),namely the concentration was negatively correlated with the proliferation.We tested the out cell type I collagen fibers using the mouse type I collagen Elisa kit,but there was no difference between eachgroup(P>0.05).About the expression of mouse αSMA,positive correlation was found between the glucose concentration and the expression of the mouse αSMA.Conclusion At the original augmentation of the blood glucose,the proliferation of fibroblast is not different.But when it gets over a level,the proliferation will be depressed,which can lead to the delay of the healing of raw surface；the concentration of glucose has nothing to do with the out celltype I collagen fibers；the concentration of glucose is a factor which enhances the variation from fibroblast to myofibroblast,and the concentration of glucose is positively correlated with the tendency of the variation.Key words：wound healing;fibroblast;blood glucose;stress reaction在外科危重患者中常常遇到高血糖，其中主要是存在许多糖尿病患者，糖尿病损伤修复时，损伤组织的高糖环境对成纤维细胞的生长有着很大影响，使得创面愈合这一过程变得更为复杂。

《南京中医药大学学报》征订

［Ｏ黄志祥，１］许继德，卢冬艳，．等雄黄对哮喘豚鼠嗜酸细
［］３宋姚屏，李昆，吴孟旭，．等方剂量效关联的现代研究方法概述［］辽宁中医杂志，０，３１）１５ —１５．Ｊ．２６３（０：２６２７０［］４张尊如，由艳红，陈利欣．金匮要略》《橘皮竹茹汤药量及功效治证考［］四川中医，０６２（）３ —３．Ｊ．２０，４５：０１［］５王绍印．仲景方细辛用量探讨［］国医论坛，０５２Ｊ．２０，０
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量效关系［］中西医结合肝病杂志，０２１（）８ —９．Ｊ，２０，２２：９１
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Ｎｎｎｎｅｉｈｅｅｅｉｎ，Ｎｎｎｆｎｓ，１０６ＣｉａｊｇＵｉｒｔ０ｉｓＭｄｉｉｖｓｙ厂Ｃｎｃｅａｉｌｇｕ２０４，ｈａ）ｊｇ，ａｎ
ＡＴＢＳＲＡＣＴ：ｈｒｓａｃｏｅｃｎｅｔｎｂｔｅｅｄｓｇｎｆｃｆＣｉｅｅｄｕｒｓｒｔｎ，ｗｉｈｃｍｒｅｈｉｏ — Ｔｅｅｉｌｓｏｎｃｏｅｉｗｅｎｔｏａｅａｄｅｅｔｏｈｎｓｒｇｐｃｐｉｓｈｃｏｐｓｓｔｅｍａｃｎｈｅｉｏｉｎｔｎｓｉｅｓｄｆｒｓｒｔｎｎｒｇ．ＴｅａｔｏｓｃｒｉｄｏｔｔｄｔｉｋｎｉｅｐｓｒｔｎｃｒｅｄｃｌｒａｅｔｎｔｔｙｏｐｅｃｉｉｓａｄｄｕｓｈｕｈｒａｒｕｓｕｙｏｈｓｉｄｗｔｔｒｃｐｉｓｒｏｄｄｉＭｅｉｅ一ｈｕｐｏｅａｆｈｈｅｉｏｅｎａＴ

骨科新型医用可降解植入材料JDBM镁合金的生物毒性、髓内针及植入物感染细菌生物膜的基础研究

骨科新型医用可降解植入材料JDBM镁合金的生物毒性、髓内针及植入物感染细菌生物膜的基础研究第一部分新型医用可吸收镁合金JDBM的生物毒性目的：交大镁合金系列（Jiao Da bio-magnesium series, JDBM）是上海交通大学轻合金精密成型国家工程研究中心设计开发的生物相容性好、强度和塑韧性相匹配、腐蚀行为近乎均匀的新型高性能生物医用Mg-Nd-Zn-Zr (平衡-3-0.2-0.4wt.%)基合金系列，分为2类，JDBM1具有高强度和中等塑性，应用于骨科；JDBM2具有高塑性和中等强度，应用于血管支架。

该合金体系添加了少量细胞毒性轻微的轻稀土元素Nd 作为低合金化元素，Nd的加入可以保证镁合金具有良好的时效析出强化和固溶强化效果，并可大幅度提高合金基体的电极电位，减小基体与第二相的电偶腐蚀电位差，从而提高镁合金的耐均匀腐蚀性能。

Zn是人体生理需要的微量元素，微量加入可提高合金强度及塑性加工能力；微量Zr作为晶粒细化剂可提高合金的强韧性和耐蚀性，其在镁合金中的生物相容性已经证实。

JDBM的强度、柔韧性、耐蚀性能和生物相容性全面超越已经在欧洲进入临床实验的WE43镁合金。

相比于商业性的WE43和AZ31镁合金，JDBM具有更好的生物相容性。

JDBM 在体内90天时基本完好，在180天时降解少于40%。

本实验的目的，即通过研究含轻稀土Nd元素的JDBM镁合金及单纯的Nd对体外培养的小鼠胚胎成骨细胞株MC3T3-E1的毒性，分析JDBM镁合金中稀土元素Nd的体外成骨细胞毒性，体内实验部分通过研究Nd对昆明小鼠骨及周围组织的生理病理影响，以及其在小鼠各器官组织中的分布，来研究Nd的生物安全性及其动物体内分布情况。

方法：按标准方法用aMEM培养基制作Nd的浸提液，并稀释为1/2、1/4、1/8几个不同的浓度梯度，同时制作Ti合金、WE43镁合金、JDBM 镁合金及CaP涂层JDBM镁合金的浸提液，以正常培养组做空白对照，以Ti合金浸提液组做阴性对照，以0.64%苯酚组做阳性对照，用含10%澳洲胎牛血清的aMEM 培养基对MC3T3-E1成骨细胞进行培养，观察其不同时间的形态变化及增殖情况，并以CCK8法检测其不同时间的细胞增殖活性，以Annexin V PI双染色流式细胞术检测不同时间的细胞凋亡情况。

rhIGF1对成骨细胞和破骨细胞相互作用的调节作用

rhIGFl对成骨细胞和破骨细胞相互作用的调节作用天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的在成骨细胞(ostelblast, 0B)及破骨细胞(Osteoclast, 0C)的表面均表达有胰岛素样生长因子1 (insulin like growth factor 1,IGF・I)的受体，IGFJ对这两种细胞也都具有激活作用。

IGF・1在调节骨代谢平衡中具有重要作用，被认为是存在于RANKL/OPG系统之上，调节成骨细胞与破骨细胞相互作用的核心分子。

为此，本文拟探讨不同浓度的rhIGF-I对成骨细胞和破骨细胞的直接作用，及对成骨细胞和破骨细胞相互作用的调节。

方法1.利用50ng/ml的RANKL诱导小鼠破骨前体细胞系分化为成熟破骨细胞。

TRAP (抗酒石酸酸性磷酸酶染色)鉴定。

2.以50ng/ml rhIGF-I分别干预成细胞以及分化成熟的破骨细胞汗预时间分别为：6min、20min、60min； Western-blotting 检测rhIGF-lR 活化情况。

3.分别加入0、2、4、6ug/ml的兔抗rhIGF・I IgG中和培养基中的rhIGF-I, 利用Western.blotting进行抗体中和浓度的筛选。

4.重新接种成骨细胞和破骨细胞，用0、10、50. 100ng/ml的rhIGF-1分别干预成骨细胞、破骨细胞，12小时后终止培养并收集培基，之后实验分为三组: A组：rhIGF-1直接干预组。

B组：条件培养基交互培养组：破骨细胞经rhIGF-1 干预后的条件培养基(OC conditioned medium after rhlGF-1 treatment, OCCM)；成骨细胞经rhIGF-1干预后的条件培养基(OB conditioned medium after rhIGF-1 treatment, OBCM).滤过OCCM、OBCM后两细胞培基互换交互培养12h° C 组:rhIGF・l中和后交互培养组：OCCMxOBCM中加入4ug/ml的抗rhIGF-1 IgG, 中和后再用于交互培养12h»(1)ELISA检测各组OB上清液中RANKL、OPG及BGP含量。

三种方式注射乳腺癌细胞构建的乳腺癌骨转移动物模型对比观察

三种方式注射乳腺癌细胞构建的乳腺癌骨转移动物模型对比观察毛昀1，蔡亚芳2，3，褚雪镭3，薛鹏3，曹文1，朱世杰3，仇永妹41 湖南中医药大学第二附属医院肿瘤血液科，长沙410005；2 北京中医药大学研究生院；3 中国中医科学院望京医院肿瘤科；4 湖南中医药大学第二附属医院互联网医院摘要：目的　对比观察经左心室、胫骨骨髓腔和尾动脉注射乳腺癌细胞构建的乳腺癌骨转移动物模型。

方法取BALC /c 裸小鼠24只，随机分为左心室注射组、胫骨注射组、尾动脉注射组各8只，使用人源性乳腺癌细胞MDA -MB -231-luc 分别进行左心室注射、胫骨骨髓腔注射、尾动脉注射构建乳腺癌骨转移模型；取BALC /c 普通小鼠16只，随机分为胫骨注射组、尾动脉注射组各8只，使用鼠源性乳腺癌细胞4T1-luc 分别进行胫骨骨髓腔注射、尾动脉注射构建乳腺癌骨转移模型。

采用小动物活体成像技术观察模型建立和骨转移发生情况；取肿瘤组织，采用HE 染色法观察病理形态学改变。

结果　①MDA -MB -231-luc 细胞左心室注射组小鼠死亡1只，其他造模方式小鼠全部存活。

小动物活体成像及HE 染色显示，左心室注射组造模成功率60%左右，裸鼠造模后第20天显示荧光信号散在分布于小鼠全身，少量肿瘤细胞浸入骨组织、骨质破坏较少；胫骨注射组可见双侧胫骨荧光信号，骨质破坏明显、肿瘤细胞呈团状生长；尾动脉注射组显示荧光信号在双侧肺部，未见明显骨转移病灶。

②4T1-luc 细胞注射后小鼠全部存活，造模后第10天活体成像显示两组荧光信号均较强，尾动脉注射组肿瘤细胞定植于双侧股骨以及尾背部，肿瘤细胞包绕骨组织生长，持续侵蚀骨质；胫骨注射组荧光信号显像在双侧胫骨，胫骨浸润大量乳腺癌细胞，并呈外向型生长，形态异常、细胞排列紧密，肿瘤灶可见少量片状骨组织。

结论　采用MDA -MB -231-luc 细胞、4T1-luc 细胞左心室注射、胫骨骨髓腔注射和尾动脉注射造模均能够形成骨转移，但造模成功率、病理状态具有一定差异；胫骨骨髓腔注射法成功率最高，左心室注射法、尾动脉注射法能够早期模拟骨转移过程。

抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响宋永周;刘会玲;马维;童九辉;李飞;孙淑芹【期刊名称】《河北中医》【年(卷),期】2016(038)008【摘要】目的探讨抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化及骨保护蛋白(OPG)和核因子-κB受体活化子配体(RANKL)蛋白表达的影响.方法采用中药血清药理学方法制备含抗骨增生胶囊大鼠血清.取乳鼠颅骨,利用复合胶原蛋白酶反复消化,离心,体外培养成骨细胞.加入不同浓度的抗骨增生胶囊含药血清进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测中药血清对成骨细胞增殖的影响,测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Western Blot检测OPG和RANKL蛋白表达.结果成骨细胞经抗骨增生胶囊含药血清作用后,细胞的生长呈现不同程度的增殖,中、高剂量中药组在24、48、72 h均有明显的促进作用(P＜0.01),且呈剂量依赖性.低剂量中药组在24、48 h时与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),72 h时作用较强(P＜0.05).除低剂量组培养24 h外,低、中、高剂量中药组培养24、48、72 h后,ALP分泌均呈不同程度增加,均有明显的促进作用(P＜0.01).成骨细胞经过抗骨增生胶囊含药血清低、中、高剂量作用72 h后,对比值进行统计分析,与空白对照组比较,OPG表达明显升高(P＜0.01),RANKL表达明显降低(P＜0.01).结论抗骨增生胶囊含药血清可以促进成骨细胞的增值、分化,从而促进骨形成.【总页数】5页(P1187-1190,1194)【作者】宋永周;刘会玲;马维;童九辉;李飞;孙淑芹【作者单位】河北医科大学第二医院骨科,河北石家庄050000;河北医科大学第二医院骨科,河北石家庄050000;河北医科大学第二医院骨科,河北石家庄050000;河北医科大学第二医院骨科,河北石家庄050000;河北省定州市人民医院CT核磁科,河北定州073000;河北省定州市人民医院CT核磁科,河北定州073000【正文语种】中文【中图分类】R-332;RR285.5;R329.24;R329.28;R681.053.1【相关文献】1.刺老苞根皮含药血清对原代成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响 [J], 依香叫;王松月;李金诚;燕梦云;裴凌鹏2.淫羊藿苷含药血清对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖与分化的影响 [J], 程国政;李志锋;翟远坤;陈克明3.羌活鱼含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响 [J], 谢兴文;许伟;李宁4.锁阳含药血清对MC3T3-E1成骨细胞增殖分化及矿化的影响 [J], 武海燕[1];张灵莉[1];冯雪梅[1]5.壮骨止痛胶囊含药血清对大鼠成骨样细胞增殖分化影响的实验研究 [J], 雷晓明;田松因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

强骨口服液对成骨细胞成骨能力的影响

强骨口服液对成骨细胞成骨能力的影响
包慧敏;许惠琴;狄留庆
【期刊名称】《南京中医药大学学报》
【年(卷),期】2007(023)003
【摘要】强骨口服液（药物组成：仙灵脾、骨碎补、何首乌、杜仲等），由江苏
先声药物研究有限公司提供，批号：20031205；NaF，上海三爱思试剂有限公司。

【总页数】2页(P201-202)
【作者】包慧敏;许惠琴;狄留庆
【作者单位】南京中医药大学药学院,江苏,南京,210046;南京中医药大学药学院,江苏,南京,210046;南京中医药大学药学院,江苏,南京,210046
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
【相关文献】
1.阿胶强骨口服液含药血清对大鼠成骨细胞的影响 [J], 武嘉林
2.强骨宝方载药血清灭活与否对成骨细胞增殖功能的影响 [J], 陈智能;苏友新;杨连梓;郑良朴;林久茂;王培清
3.胎鼠成骨细胞骨保护素及其配体mRNA表达与阿胶强骨口服液含药血清的影响[J], 沈霖;武嘉林;夏远军;李蕾;高兰;谢晶;周丕琪;杨艳萍
4.糖尿病模型大鼠强骨宝方含药血清对成骨细胞培养上清液IL-6、TNF-α及AGEs 的影响 [J], 苏友新;郑良朴;陈智能;杨连梓
5.强骨宝方糖尿病模型鼠不同时效与量效的含药血清对成骨细胞增殖的影响 [J],
苏友新;陈智能;郑良朴;杨连梓
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补泻兼施防治糖尿病骨质疏松症的可行性探讨

补泻兼施防治糖尿病骨质疏松症的可行性探讨曹灵修;张林【摘要】糖尿病骨质疏松症是因糖尿病日久而发的骨质疏松症。

因其具有较高的致残、致死率受到医学界的广泛关注。

中医药在对其治疗方面的应用也受到中外医家的青睐，且疗效甚佳。

因此，笔者通过分析糖尿病骨质疏松症的病机及近年来中医药治疗此病方面的应用，得出可用“补泻兼施”法来组方立药以治疗此病。

“虚以补之”“实以泻之”，针对糖尿病骨质疏松虚实夹杂之证，以采取相应的治法对其病证加以治疗。

【期刊名称】《江西中医药》【年(卷),期】2016(047)009【总页数】3页(P15-16,17)【关键词】糖尿病骨质疏松;中医病机;补虚泻实法【作者】曹灵修;张林【作者单位】辽宁中医药大学方剂教研室沈阳 110847;辽宁中医药大学方剂教研室沈阳 110847【正文语种】中文【中图分类】R255.06糖尿病骨质疏松症根据临床表现和病理认识，可纳入中医学“消渴”“骨痿”“骨痹”范畴。

《内经》曰:“肾脆，善病消瘅”。

《医宗必读》亦云:“消渴此病在肾”。

可知，肾在消渴病发生发展中所占的重要地位。

“肾生骨髓”“其充在骨”也说明了肾与骨骼系统疾病的密切联系。

况肾虚日久而生瘀，肾虚血瘀相互作用，久之则筋脉不通，气血不得灌溉而发骨质疏松。

在通过观察糖尿病临床表现中可知，小便味甘皆因脾气虚不能传输水谷精微，水谷精微下走从小便出。

且由于脾气虚衰水谷精微不能充四肢百骸，日久而发骨痿。

由此可知，糖尿病骨质疏松其病位在骨，为虚实夹杂之证。

故可用“补泻兼施”之法来治疗，且可针对骨痛的“不荣则痛”“不通则痛”两方面加以施治。

“补虚”以益肾填精健脾、滋阴养血为主，使骨骼得养；“泻实”以活血祛瘀、化痰通络为主，使骨之络脉得畅，为供骨之精微营养扫清障碍。

“养有源、路得畅”乃为“补泻兼施”之概要，亦为糖尿病骨质疏松之治疗宗旨。

今就中医治疗糖尿病骨质疏松的理论研究及实践应用两方面来对“补泻兼施”法治疗糖尿病骨质疏松症的可行性进行分析。

科学研究中人类疾病动物模型的应用及特点

综上所述，动物模型在科研中具有重要作用和独特优势。虽然尚有微生物、细胞、组织或器官等生物模型的建立，但以哺乳动物为主的动物模型仍是最基本和最常用的，具有其它模型无法替代的作用，为人类健康做出了重大贡献。
参考文献 ) 123432 (5& 6327$89%:;:37 :8 ;03 392%< 0:7;$2< $= %9>$29;$2< 98:?9%
$ 人类疾病动物模型的种类
人类疾病动物模型主要有两种，一种是将发育异常或缺陷而表现出病态的动物直接用做疾病模型，称为自发模型（)*+,-.,/+0) 1+2/3）。例如中国地
韩旭华，女，$%&% 年生，讲师，从事方剂教学和实验研究工作
鼠通过近亲繁殖自发产生遗传性糖尿病模型，并已有发病规律的总结报道 ’4(。一种是用正常动物制作人类疾病动物模型，即人为地用损伤因子（机械、物理、化学、生物等因子）造成动物细胞、组织、器官或全身一定的损害，出现类似人类疾病的改变，此模型称为人为模型（.5-67686.3 1+2/3）。例如大鼠每日灌胃给予维甲酸 9"1: ; <:，!= 后形成骨质疏松症模型；冠状动脉阻塞法诱发心源性休克动物模型等。
其后陆续有学者用血管内皮损伤血液动力学变化血液粘度改变高密度脂蛋白受体缺陷等方法制作该病动物模型从而讲座与综述扶正培本治则防治肿瘤应深入研究扶正培本治则是中医防治肿瘤的基本法则之一
讲座与综述
山西中医学院学报
!""! 年第 # 卷第 $ 期
# 扶正培本治则防治肿瘤应深入研究
扶正培本治则是中医防治肿瘤的基本法则之一。在病人初诊时，由于病邪盛实，以消灭肿瘤为主，在术前或术后均应以扶正培本保护机体的正气，使手术顺利进行。在应用放化疗时亦应配合扶正培本方药，增强体质，保证放化疗顺利进行。当术后或放化疗出现体质下降，毒副反应明显时，及时应用扶正培本方药，扶助正气，促进骨髓和免疫功能恢复。经